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油菜农杆菌转基因体系的建立及转PEP反义基因油菜的获得 被引量:43
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作者 郎春秀 胡张华 +2 位作者 刘智宏 黄锐之 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 1999年第2期55-58,共4页
本研究建立了油菜农杆菌转基因技术体系,用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法将PEP反义基因导入甘蓝型油菜(BrasicanapusL.)主栽品种浙油758和浙优油1号,获得高含油量... 本研究建立了油菜农杆菌转基因技术体系,用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法将PEP反义基因导入甘蓝型油菜(BrasicanapusL.)主栽品种浙油758和浙优油1号,获得高含油量的油菜植株。实验所用外植体为培养8~10d的无菌苗下胚轴;农杆菌为EHA101(含AntiPEP/PIG121),外植体经农杆菌感染后共培养2d,转入含500mg/L羧青霉素的MS培养基上,1周后转入含羧青霉素及潮霉素的培养基上,以后每2周继代一次至出现抗性芽,转化频率为275%(浙优油1号);分化的茎芽在含相同抗生素的生根培养基中生根并长成完整小植株,转入土壤成为正常植株。经GUS组织化学染色及PCR扩增检测,证明外源基因已插入油菜基因组并得到表达。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 油菜 基因 PEP反义基因
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油菜PEP基因的克隆及PEP反义基因的构建 被引量:14
2
作者 陈锦清 黄锐之 +2 位作者 郎春秀 胡张华 刘智宏 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期365-367,共3页
丙酮酸羧化酶( P E P)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶⒚本研究用 P C R 法扩增出了 P E P 基因片段,并将其 克隆到 p B S S K+ 的 Sm a Ⅰ位点⒚ D N A 序列分析表 明克隆片段 的长度为 53... 丙酮酸羧化酶( P E P)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶⒚本研究用 P C R 法扩增出了 P E P 基因片段,并将其 克隆到 p B S S K+ 的 Sm a Ⅰ位点⒚ D N A 序列分析表 明克隆片段 的长度为 530bp,其序列与报道序列相同⒚将该 P E P基因 片段反向插入 p I G121 质粒,构建了带 P E P 反义基因的超级双元载体并进行油菜的转化。 展开更多
关键词 丙酮酸羧化酶 反义基因 基因克隆 油菜
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由ACC合成酶反义基因转化所得枣树其RNA表达量的测定 被引量:7
3
作者 何业华 林顺权 +2 位作者 林良斌 熊兴华 今石浩正 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期112-114,共3页
利用real timeRT PCR对转基因枣树中的anti ACSG的RNA表达量进行了定量测定.样品扩增产物荧光量随着扩增循环数的增加而呈现"S"形增加;经熔解曲线分析,其扩增产物中未检出非特异性产物和引物二聚体;扩增产物的CT值和模板cDNA... 利用real timeRT PCR对转基因枣树中的anti ACSG的RNA表达量进行了定量测定.样品扩增产物荧光量随着扩增循环数的增加而呈现"S"形增加;经熔解曲线分析,其扩增产物中未检出非特异性产物和引物二聚体;扩增产物的CT值和模板cDNA起始浓度两者之间呈线性相关(R2=0.9929);转化体中anti ACSGRNA表达量约为4500~10300拷贝/g组织. 展开更多
关键词 REAL-TIMEPCR RT-PCR 反义-ACSG RNA 定量分析 枣树 ACC合成酶 反义基因
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转Aclnv反义基因马铃薯品系的生理特性及POD同工酶变化分析
4
作者 崔文娟 张金文 +2 位作者 孟亚雄 王旺田 俞丽娟 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第4期55-58,共4页
对转Aclnv反义基因马铃薯品系的相对电导率、丙二醛含量(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性进行检测.结果表明:转基因"大西洋"品系的相对电导率显著低于受体品种,且C2代的MDA含量显著低于受体水平;转基因"台湾红皮"品... 对转Aclnv反义基因马铃薯品系的相对电导率、丙二醛含量(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性进行检测.结果表明:转基因"大西洋"品系的相对电导率显著低于受体品种,且C2代的MDA含量显著低于受体水平;转基因"台湾红皮"品系相对电导率和MDA含量与受体品种无显著差异;Aclnv反义基因的导入对"大西洋"和"台湾红皮"两个马铃薯品系的SOD含量影响不大.对转Aclnv反义基因马铃薯品系过氧化物酶同工酶谱带分析表明,转Aclnv反义基因马铃薯品系与受体亲本存在明显的变异. 展开更多
关键词 马铃薯 Aclnv反义基因 相对电导率 丙二醛 超氧化物酶
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EBV-LMP1反义基因真核表达载体的构建及序列鉴定
5
作者 谭学方 汤郡 张雪雁 《广州医学院学报》 2000年第3期4-6,共3页
目的 :构建EB病毒LMP1反义基因的真核表达载体。方法 :通过PCR方法 ,扩增EBV LMP1基因的第一外显子片段 ,使之反向克隆到质粒pcDNA3.1的多克隆位点中。经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体。结果 :酶切产物和PCR产物的凝胶电泳显示... 目的 :构建EB病毒LMP1反义基因的真核表达载体。方法 :通过PCR方法 ,扩增EBV LMP1基因的第一外显子片段 ,使之反向克隆到质粒pcDNA3.1的多克隆位点中。经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体。结果 :酶切产物和PCR产物的凝胶电泳显示 4 0 0bp左右的目的基因片段 ,测序结果显示与已知LMP1基因序列一致。结论 :成功构建了LMP1反义基因的真核表达载体。 展开更多
关键词 LMP1 反义基因 表达载体
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内蒙古绒山羊Hox基因家族成员在毛囊中表达的研究 被引量:17
6
作者 张燕军 李金泉 +3 位作者 尹俊 高爱琴 张文广 赵艳红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期128-130,共3页
Hox基因作为一类重要的转录因子,在胚胎发育组织分化过程中有重要作用。为了探索Hox基因在绒山羊毛囊发育中的作用机制,本研究采用原位杂交技术,检测Hox基因家族成员Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因在绒山羊毛囊的表达模式。结果显示,Hoxa4、Ho... Hox基因作为一类重要的转录因子,在胚胎发育组织分化过程中有重要作用。为了探索Hox基因在绒山羊毛囊发育中的作用机制,本研究采用原位杂交技术,检测Hox基因家族成员Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因在绒山羊毛囊的表达模式。结果显示,Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因分别在绒山羊胚胎期和兴盛期毛囊的不同部位表达,说明Hox基因在绒山羊毛囊生长发育过程中扮演着重要的角色。 展开更多
关键词 绒山羊 hox基因 毛囊 表达
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根癌农杆菌介导反义ACC合成酶基因对枣树的转化 被引量:18
7
作者 何业华 熊兴华 +4 位作者 林顺权 吴会桃 林良斌 何钢 陈建华 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期33-36,共4页
以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产... 以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产生不定芽,将抗Km不定芽先后在15mg/LKm的生长、增殖和生根培养基上继续选择,诱导成完整植株.经PCR检测从抗Km植株中选择到7株阳性植株,进一步经Southern杂交证实有6株外源基因已整合到了枣树基因组中.Real timePCR定量检测表明,ACC合成酶反义基因在5株转基因植株中得到表达. 展开更多
关键词 枣树 ACC合成酶反义基因 转化
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金川多肋牦牛Hoxa6和Hoxa10基因甲基化与mRNA差异表达研究 被引量:4
8
作者 熊显荣 张雁 +4 位作者 兰道亮 李键 字向东 李善蓉 杨建梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1532-1539,共8页
本研究旨在通过检测金川多肋牦牛与普通牦牛中Hoxa6和Hoxa10基因的转录水平和启动子区甲基化状态,为揭示Hox基因在金川多肋牦牛多1对肋骨性状形成中的转录调控机制奠定基础。通过实时荧光定量PCR技术检测Hoxa6和Hoxa10基因在多肋牦牛和... 本研究旨在通过检测金川多肋牦牛与普通牦牛中Hoxa6和Hoxa10基因的转录水平和启动子区甲基化状态,为揭示Hox基因在金川多肋牦牛多1对肋骨性状形成中的转录调控机制奠定基础。通过实时荧光定量PCR技术检测Hoxa6和Hoxa10基因在多肋牦牛和普通牦牛中的mRNA表达水平,同时采用重亚硫酸盐测序PCR(Bisulfite-sequencing PCR,BSP)法对Hoxa6和Hoxa10启动子区进行甲基化修饰与克隆测序,分析甲基化状态。结果显示,多肋牦牛中Hoxa6基因表达量显著高于普通牦牛(P<0.05),而Hoxa10基因表达量显著低于普通牦牛(P<0.05)。Hoxa6启动子区域的CpG2,在普通牦牛中的DNA甲基化显著高于多肋牦牛(P<0.05),尤其是第3、4、8、20和21位CpG位点;Hoxa10启动子区域的CpG1在普通牦牛中的DNA甲基化状态显著低于多肋牦牛(P<0.05),普通牦牛的第9和12位CpG位点几乎未甲基化。多肋牦牛中Hoxa10高甲基化在一定程度上抑制了Hoxa10基因的表达,Hoxa6低甲基化水平促进了Hoxa6基因的表达。启动子区域的甲基化在一定程度上影响Hox基因的转录调控,且与多肋性状的形成可能存在一定的联系。 展开更多
关键词 牦牛 hox基因 甲基化 表达
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(鱼央)属4种鱼SRY、SOX和HOX基因同源序列的PCR扩增分析 被引量:3
9
作者 付元帅 龙华 +2 位作者 陈建武 张燕 汪登强 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2007年第1期19-23,共5页
选用根据人类SRY基因HMG保守区序列、HMG-box序列以及HOX基因保守序列设计的3对引物,分别对白缘(Liobagrus marginatus)、大拟缘(Liobagrus marginatoidesW u(b ig))、小拟缘(Liobagrus margina-toidesW u(sm all))、黑尾(Liobagrus nig... 选用根据人类SRY基因HMG保守区序列、HMG-box序列以及HOX基因保守序列设计的3对引物,分别对白缘(Liobagrus marginatus)、大拟缘(Liobagrus marginatoidesW u(b ig))、小拟缘(Liobagrus margina-toidesW u(sm all))、黑尾(Liobagrus nigricauda)4种鱼的雌雄基因组进行了PCR扩增。结果在4种鱼的雌雄基因组中发现1个1 200 bp左右的SRY基因同源序列片段,3个分别为200 bp、500 bp和1 200 bp左右的SOX基因同源序列片段,2个分别为150 bp和200 bp左右的HOX基因同源序列片段。对结果进行分析显示:SRY、SOX和HOX基因同源序列在4种雌雄个体间和种间无性别特异性和种属特异性,并且在SRY和SOX基因同源序列中可能含有内含子。 展开更多
关键词 [鱼央]属(Leiobagru shilgendorf) 性别决定 SRY基因 SOX基因 hox基因 PCR
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蝴蝶兰ACC合成酶基因片段的克隆及其反义表达载体的构建 被引量:2
10
作者 崔波 蒋素华 +2 位作者 马杰 张仙云 叶永忠 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第34期16781-16782,16785,共3页
[目的]克隆蝴蝶兰ACC合成酶cDNA片段,构建其反义表达载体。[方法]根据已报道的蝴蝶兰ACC合成酶的基因序列,设计并合成了1对引物,通过RT-PCR以蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC合成酶的cDNA片段,将其连接到MD19-T质粒载体上进行测序。用XbaⅠ和Sa... [目的]克隆蝴蝶兰ACC合成酶cDNA片段,构建其反义表达载体。[方法]根据已报道的蝴蝶兰ACC合成酶的基因序列,设计并合成了1对引物,通过RT-PCR以蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC合成酶的cDNA片段,将其连接到MD19-T质粒载体上进行测序。用XbaⅠ和SacⅠ对重组质粒和pBI221酶切后连接,构建蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因表达载体。[结果]获得了蝴蝶兰ACC合成酶的cD-NA片段,测序结果显示,该片段与参考的已报道序列具有98.92%和76.36%的同源性。通过引入XbaⅠ和SacⅠ酶切位点,进行载体构建,构建了蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因表达载体。[结论]成功构建了蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因植物表达载体,为进一步研究其对蝴蝶兰花期和生长的影响打下了基础。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 ACC合成酶 基因克隆 反义基因 植物表达载体构建
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HOX基因与小儿白血病的关系研究进展 被引量:3
11
作者 陈军红 刘文君 《中国小儿血液与肿瘤杂志》 CAS 2007年第3期142-144,共3页
关键词 hox基因 小儿白血病 同源盒基因 空间结构 相关基因 功能异常 蛋白结构 转录调节
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反义技术及其在植物基因工程中的应用
12
作者 关淑艳 王丕武 +3 位作者 刘广娜 刘慧婧 赵丽娜 郭树成 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第26期12411-12413,12417,共4页
概述了反义技术的作用机制及其在现代植物研究中的应用。反义技术在调控植物淀粉的合成与果实成熟、改良作物品质、改变植物花色、增强植物抗病性和研究未知基因的功能等方面具有重要作用,并对反义基因技术的应用进行了展望。
关键词 反义基因 作用原理 基因调控 应用研究
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乙烯受体基因LeETR1在番茄Epi和VFN8中的表达及反义表达载体构建(英文)
13
作者 郑铁松 应铁进 +1 位作者 曾广文 何国庆 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期156-160,共5页
采用 RPA方法对番茄乙烯过表达单基因突变体 Epi和野生型 VFN8中 L e ETR2 m RNA的表达特征进行了研究 .结果表明 ,在所有被检组织中 Le ETR2 m RNA均表达 ,其表达丰度在叶组织中呈发育调节模式 ,但不受内源乙烯含量的影响 ;而在果实成... 采用 RPA方法对番茄乙烯过表达单基因突变体 Epi和野生型 VFN8中 L e ETR2 m RNA的表达特征进行了研究 .结果表明 ,在所有被检组织中 Le ETR2 m RNA均表达 ,其表达丰度在叶组织中呈发育调节模式 ,但不受内源乙烯含量的影响 ;而在果实成熟后期受乙烯的轻微诱导 . Le ETR2的这种表达模式明显有别于其他乙烯受体基因 .为了进一步研究 Le ETR2的功能 ,构建了 Le 展开更多
关键词 乙烯受体 LeETR2 反义基因 核酸酶保护分析 番茄 表达载体系统
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HOX基因参与造血调控的研究进展
14
作者 冉伶 刘文君 《中国小儿血液》 2005年第1期37-39,共3页
同源盒(Homeobox,Hox)基因编码一类转录因子,参与造血细胞的发育调控,其结构与功能的改变影响着造血细胞的增殖分化,本文就此综述如下.
关键词 造血调控 造血细胞 研究进展 hox基因 改变 基因编码 转录因子 结构与功能 发育调控 增殖分化
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Hox基因家族及其对动物脊椎形成的影响 被引量:2
15
作者 李桃桃 金美林 +4 位作者 费晓娟 王慧华 陆健 狄冉 魏彩虹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期999-1009,共11页
Hox基因编码保守的转录因子,它们控制发育过程中胚胎的骨骼模式。它们在受限的区域表达,并调节特定椎骨的形态。从最初在果蝇中发现该基因家族至今已有四十多年的历史。不断更新的研究使人们对Hox基因在脊椎动物中轴骨骼模式化中的作用... Hox基因编码保守的转录因子,它们控制发育过程中胚胎的骨骼模式。它们在受限的区域表达,并调节特定椎骨的形态。从最初在果蝇中发现该基因家族至今已有四十多年的历史。不断更新的研究使人们对Hox基因在脊椎动物中轴骨骼模式化中的作用有了新见解。本文综述了Hox基因在建立轴向形态中的遗传学和胚胎学发现,以及这些综合结果如何影响目前对脊椎动物Hox调控的理解。便于今后对动物的脊椎形态及数量变异进行研究。 展开更多
关键词 hox基因 胚胎 中轴骨骼 脊椎形态
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反义VEGF基因转染对视网膜母细胞瘤细胞VEGF表达的影响 被引量:2
16
作者 罗丹 方玉华 彭洁 《眼科新进展》 CAS 2005年第4期338-340,共3页
目的研究以腺相关病毒载体的反义血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因转染对视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞中VEGF表达的影响,探讨基因治疗RB的新方法。方法将一定量的反义VEGF基因转染到RB细胞系H... 目的研究以腺相关病毒载体的反义血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因转染对视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞中VEGF表达的影响,探讨基因治疗RB的新方法。方法将一定量的反义VEGF基因转染到RB细胞系HXORb44细胞,分别采用免疫组化图像分析和半定量RTPCR方法,检测转染前后HXORb44细胞中VEGF表达的变化。结果免疫组化显示VEGF蛋白在反义VEGF基因转染后的HXORb44细胞胞浆中的染色强度明显减弱,转染前的VEGF蛋白的灰度值为172.86±15.56,转染后的灰度值为243.41±18.62(灰度值与免疫染色强度成反比),差异有显著性意义(P=0.007)。半定量RTPCR表明VEGFmRNA在转染后的HXORb44细胞中的相对表达量为0.428±0.05,和转染前的表达量0.952±0.02相比,差异有显著性意义(P=0.000)。结论反义VEGF基因能显著抑制HXORb44细胞中VEGF的表达,为进一步的动物实验提供了实验依据。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤 血管内皮细胞生长因子 反义基因 细胞培养
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HOX基因与白血病关系研究进展 被引量:1
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作者 卢田甜 刘文君 《中国小儿血液与肿瘤杂志》 CAS 2013年第3期142-144,99,共4页
同源盒基因(homeobox gene,HOX)广泛存在于线虫、果蝇、老鼠和人类等物种,编码的蛋白质为转录因子,通过与其转录协同因子(如PBX和Meis等)的相互作用来调节转录,进而在造血过程中发挥重要作用。近年大量文献报道,
关键词 hox基因 白血病 转录协同因子 转录因子 同源盒基因 GENE 相互作用 蛋白质
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转基因抗穗发芽小麦的获得 被引量:4
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作者 尹钧 任江萍 +4 位作者 李志岗 李磊 周苏玫 卫丽 宋丽 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期67-71,85,共6页
以易穗发芽小麦幼胚为受体,用基因枪法对TrxS反义基因(目的基因)和Bar基因(标记基因)进行了共转化;通过对轰击后的小麦幼胚进行愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化和生根培养,获得再生植株;经分子检测证实在3个受体材料上获得转基因再生植... 以易穗发芽小麦幼胚为受体,用基因枪法对TrxS反义基因(目的基因)和Bar基因(标记基因)进行了共转化;通过对轰击后的小麦幼胚进行愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化和生根培养,获得再生植株;经分子检测证实在3个受体材料上获得转基因再生植株和可遗传的转基因后代.通过培养皿籽粒发芽试验、离体整穗保湿发芽试验和温室模拟降雨穗发芽试验,均证明转基因后代材料具有延缓籽粒发芽和抗穗发芽的特性. 展开更多
关键词 小麦穗发芽 基因枪转化 TrxS反义基因 基因小麦
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肺癌的基因治疗 被引量:2
19
作者 孟龙 《山东医药》 CAS 北大核心 1999年第18期48-48,共1页
关键词 肺肿瘤 基因治疗 抑癌基因 反义基因
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Anti-SAD基因植物表达载体的构建
20
作者 黄锐之 刘智宏 +2 位作者 郎春秀 胡张华 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 2001年第5期272-275,共4页
硬脂酰 ACP脱饱和酶 (SAD ;EC 1.14.99.)是植物中广泛存在的酶系 ,在脂肪酸合成途径中脱饱和的起始阶段中起催化作用 ,在脂肪酸饱和度调控中起着关键作用。本研究通过对已克隆的硬脂酰 ACP脱饱和酶基因分析 ,合成了SAD基因保守区域基... 硬脂酰 ACP脱饱和酶 (SAD ;EC 1.14.99.)是植物中广泛存在的酶系 ,在脂肪酸合成途径中脱饱和的起始阶段中起催化作用 ,在脂肪酸饱和度调控中起着关键作用。本研究通过对已克隆的硬脂酰 ACP脱饱和酶基因分析 ,合成了SAD基因保守区域基因片段 ,并将该片段插入载体pIG12 1的SacI位点 ,构建了Anti SAD植物表达双元载体 ,为进一步开展植物脂肪酸成份基因工程调控研究提供了基础。 展开更多
关键词 硬脂酰-ACP脱饱和酶 植物表达双元载体 反义基因 重组质粒 Anti-SAD基因 植物油料 脂肪酸成分
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