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HLA-A*0201转基因小鼠侵袭性肺曲霉病模型的建立与鉴定 被引量:1
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作者 赵作涛 孙铮 +3 位作者 李丽丽 万喆 朱平 李若瑜 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期116-121,共6页
【目的】建立HLA-A*0201转基因小鼠侵袭性肺曲霉病模型,并进行实验室鉴定。【方法】在真菌孢子感染前,给予HLA-A*0201转基因小鼠腹腔注射环磷酰胺。乙醚麻醉后,小鼠经鼻腔吸入3组不同浓度的(3×106、3×107、3×108mL-1)烟... 【目的】建立HLA-A*0201转基因小鼠侵袭性肺曲霉病模型,并进行实验室鉴定。【方法】在真菌孢子感染前,给予HLA-A*0201转基因小鼠腹腔注射环磷酰胺。乙醚麻醉后,小鼠经鼻腔吸入3组不同浓度的(3×106、3×107、3×108mL-1)烟曲霉孢子悬液。阴性对照组小鼠吸入PBS。感染后36 h,处死各组小鼠,取肺组织病理行HE、PAS以及GMS染色分析,以验证感染是否成功并计算肺侵袭性肺烟曲霉感染小鼠模型成模率。肺组织研磨涂皿后行菌落计数,分析小鼠肺烟曲霉负载量。【结果】小鼠肺组织病理检查显示,正常肺组织结构遭到显著破坏,大量菌丝生长并可见菌丝侵犯血管现象,证实侵袭性肺曲霉病模型造模成功。在免疫抑制的方法和条件恒定时,3种孢子浓度由低到高成模率分别为36.7%、76.7%、96.7%。各实验组成模小鼠肺组织研磨液在PDA培养基上均有大量烟曲霉菌落生长,未感染小鼠组未见烟曲霉菌落生长。【结论】成功建立HLA-A*0201转基因小鼠侵袭性肺曲霉病模型,在免疫抑制的方法和条件恒定时,模型成模率与接种孢子悬液的浓度成正比,采用高浓度的孢子悬液(3×108mL-1)时,可以达到较高的成模率。 展开更多
关键词 烟曲霉 侵袭性肺曲霉病 hla-a 0201转基因 环磷酰胺
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HLA-A*0201/Kb及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用 被引量:1
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作者 宋淑霞 闫彩珍 +3 位作者 郑龙 尤红煜 王俊霞 刘福英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期679-682,共4页
目的:为了用HLA-A2·1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利... 目的:为了用HLA-A2·1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、流式细胞术(FCM)和Westernblot检测了HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和提呈。结果:RT-PCR、FCM和Westernblot检测到HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论:MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。 展开更多
关键词 hla-a2.1转基因鼠 疫苗评价 肿瘤动物模型 基因共转染 MAGE-3 PIRES
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HLA-A0201/K^b及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用
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作者 宋淑霞 郑龙 +4 位作者 冯旭 尤红煜 张艳 刘春燕 刘福英 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期I0015-I0015,共1页
目的用HLA-A2.1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法采用基因共转染的方法,将HLA-A0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、细... 目的用HLA-A2.1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法采用基因共转染的方法,将HLA-A0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测了HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和递呈。结果RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测到HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。 展开更多
关键词 hla-a2.1转基因鼠 疫苗评价 模型 动物 基因共转染 MAGE-3 PIRES
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对携带HCC表位的HBc病毒样颗粒负载的DC疫苗的免疫评价 被引量:1
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作者 张艳 郑龙 +2 位作者 王俊霞 刘福英 宋淑霞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期679-683,共5页
目的:探讨携带肝细胞癌(HCC)表位的嵌合蛋白颗粒HBc-VLPs负载小鼠BMDCs制备的DC疫苗,免疫小鼠后诱导抗原特异的细胞免疫应答和抗肿瘤效应。方法:制备HLA-A2转基因小鼠来源的BMDCs,将三种带有高表达于HCC的HLA-A2限制的CTL表位的HBc-VLP... 目的:探讨携带肝细胞癌(HCC)表位的嵌合蛋白颗粒HBc-VLPs负载小鼠BMDCs制备的DC疫苗,免疫小鼠后诱导抗原特异的细胞免疫应答和抗肿瘤效应。方法:制备HLA-A2转基因小鼠来源的BMDCs,将三种带有高表达于HCC的HLA-A2限制的CTL表位的HBc-VLPs、三种抗原表位肽和不含HCC表位野生HBc-VLPs分别负载HLA-A2转基因小鼠BMDCs制备成DC疫苗,阴性对照组用PBS替代。将HLA-A2转基因小鼠分为四组,分别免疫上述DC疫苗并对其免疫效果进行评价:体外检测抗原特异性淋巴细胞内IFN-γ的产生和CTL细胞活性并观察不同方法处理的DCs对肿瘤生长的抑制情况。结果:与其他组相比,HBc-VLPs负载的DCs免疫小鼠后第8天,流式细胞仪即可检测到分泌IFN-γ的CD8+T细胞存在;用LDH法检测到较强的抗原特异性CTL活性;在肿瘤接种后的20天之前均未见到明显的肿瘤块,具有显著抗肿瘤作用。结论:利用携带HCC抗原表位的HBc-VLPs负载DCs后得到可强烈诱导免疫活性和明显抗肿瘤作用的DC疫苗,为DC疫苗的优化和评价提供了实验方法,也为进一步深入研究新型肝细胞癌治疗性疫苗的功能和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 HCC抗原表位 HBc病毒样颗粒 DC疫苗 hla-a2转基因 肿瘤模型
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