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人肿瘤转移相关抗原肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及初步鉴定 被引量:8
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作者 陈婷 万瑛 +5 位作者 汤旭东 房殿春 余松涛 熊震 罗元辉 杨仕明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第22期2120-2123,共4页
目的预测并鉴定肿瘤转移相关抗原肝素酶来源的HLA-A2.1限制性CTL表位。方法采用超基序、量化基序和分子模拟相结合的方法,对肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位进行预测,合成候选表位肽;利用T2细胞的特点,对合成的候选肽与HLA-A2.1分子进行亲... 目的预测并鉴定肿瘤转移相关抗原肝素酶来源的HLA-A2.1限制性CTL表位。方法采用超基序、量化基序和分子模拟相结合的方法,对肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位进行预测,合成候选表位肽;利用T2细胞的特点,对合成的候选肽与HLA-A2.1分子进行亲和力分析,初步验证预测结果;利用标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果在所筛选的5个候选CTL表位中,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)可在体外有效诱导肝素酶特异性CTLs的产生,对肝素酶阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ细胞具有明显的杀伤效应。结论Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)有可能是肿瘤抗原肝素酶HLA-A2.1的限制性CTL表位。 展开更多
关键词 肝素酶 hla-a2.1限制性 分子模拟
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SSX基因家族HLA-A2.1限制性CTL表位预测及其MHC-Ⅰ亲和力分析 被引量:1
2
作者 何仰东 吴玉章 +6 位作者 林治华 贾正才 姜曼 黎万玲 付晓岚 邓一静 倪兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期872-875,共4页
目的 通过对肿瘤基因SSX家族不同成员进行CTL表位预测,并对其与MHC-I亲和力进行分析,为探索基于SSX肿瘤基因家族的免疫治疗奠定基础。方法 利用基于超基序结合量化基序方案开发的HLA-A2.1限制性CTL表位预测软件,对SSX基因家族不同... 目的 通过对肿瘤基因SSX家族不同成员进行CTL表位预测,并对其与MHC-I亲和力进行分析,为探索基于SSX肿瘤基因家族的免疫治疗奠定基础。方法 利用基于超基序结合量化基序方案开发的HLA-A2.1限制性CTL表位预测软件,对SSX基因家族不同成员进行CTL表位预测,然后合成SSX相关待测表位肽P1(AMTKLGFKA)、P4(AMT-KLGFNV)、P5(AMTKLGFKV)和P6(VMTKLGFKV),再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力及其结合物稳定性进行实验分析。结果与实验阳性肽(HBcAg,18~27)相比,除P1外,P4、P5、P6均显示较高的结合亲和力;而结合稳定性实验(DC50)结果显示,P1、P4与阳性对照肽(HBcAg,18~27)DC。均大于8h,而P5和P6的DC50介于2~4h之间。结论 计算机软件预测的CTL表位肽,经过体外亲和力与结合稳定性实验筛选到2条理想的表位肽,为该表位的下一步体内鉴定奠定基础。 展开更多
关键词 SSX肿瘤基因 预测 hla-a2.1限制性 结合亲和力
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抗原NY-BR-1的HLA-A2限制性CTL表位的初步鉴定
3
作者 赵婷婷 吴玉章 +3 位作者 林治华 周伟 贾正才 邹丽云 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期540-543,共4页
目的 :鉴定乳腺癌分化肿瘤抗原NY BR 1的HLA A2限制性CTL表位。方法 :采用量化基序法初步预测NY BR 1的HLA A2限制性CTL表位 ;分子动力学方法进一步筛选量化基序法中评分最高的 3个表位肽 ;HLA A2亲合力鉴定预测的结果。结果 :分子动力... 目的 :鉴定乳腺癌分化肿瘤抗原NY BR 1的HLA A2限制性CTL表位。方法 :采用量化基序法初步预测NY BR 1的HLA A2限制性CTL表位 ;分子动力学方法进一步筛选量化基序法中评分最高的 3个表位肽 ;HLA A2亲合力鉴定预测的结果。结果 :分子动力学和HLA A2亲合力实验均证明 ,在量化基序法预测的 3个候选CTL表位中 ,NY BR 11 0 4 3 1 0 51 与HLA A2亲合力最佳。结论 :NY BR 11 0 4 3 1 0 51 可能为乳腺癌分化抗原NY BR 1的HLA A2限制性CTL表位。 展开更多
关键词 抗原NY-BR-1 hla-a2限制性 CTL 鉴定 乳腺癌
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分子模拟用于HLA-A2.1限制性CTL表位的高通量筛选 被引量:1
4
作者 林治华 全学军 周跃钢 《重庆工学院学报》 2003年第2期6-9,共4页
应用SiliconGraphics图像工作站及InsightⅡ软件,分别建立MART 1的6个CTL预测表位与HLA A2.1结合的三维结构,并进行分子动力学模拟,通过对各结合特征性参数的计算,对各表位肽与HLA A2.1结合稳定性进行了比较。应用Merrifield固相多肽合... 应用SiliconGraphics图像工作站及InsightⅡ软件,分别建立MART 1的6个CTL预测表位与HLA A2.1结合的三维结构,并进行分子动力学模拟,通过对各结合特征性参数的计算,对各表位肽与HLA A2.1结合稳定性进行了比较。应用Merrifield固相多肽合成技术合成上述小肽,通过HLA A2.1与各肽亲和力分析试验,证实分子模拟结果的可靠性。结果发现通过分子模拟手段计算所得6个表位与HLA A2.1结合特性结果,基本与通过实验手段所得结果相符。故计算机分子模拟在CTL表位与MHC Ⅰ类分子的亲合力研究中,具有简单、直观、快速、准确等优点,该方法在筛选MHC Ⅰ类分子高亲合性CTL表位的研究中具有诱人的应用前景。 展开更多
关键词 分子动力学模拟 MART-1 三维结构 CTL hla-a2.1 亲和力 MHC-I类分子 细腻毒性T细腻 肿瘤特异性免疫治疗 抗原
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MART-1HLA-A2限制性CTL表位的预测
5
作者 王莉 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期931-933,共3页
目的 预测黑色素瘤分化抗原MART 1的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)表位。方法 采用超基序与量化基序多项式方案相结合的办法 ,对目的抗原MART 1的HLA A2限制性CTL表位进行预测。结果 预测出了 6个九肽表位。结论 两种方法预... 目的 预测黑色素瘤分化抗原MART 1的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)表位。方法 采用超基序与量化基序多项式方案相结合的办法 ,对目的抗原MART 1的HLA A2限制性CTL表位进行预测。结果 预测出了 6个九肽表位。结论 两种方法预测结果的一致性较好 ,所预测出的 6个MART 1的HLA A2限制性CTL表位经后续实验筛选、鉴定后 ,可望用于新型MART 1肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究 。 展开更多
关键词 MART-1 hla-a2 CTL 疫苗 黑色素瘤
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肿瘤抗原MAGE2HLAA2限制性CTL表位的预测 被引量:6
6
作者 耿淼 贾正才 +2 位作者 万瑛 赵建平 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期934-936,共3页
目的 预测黑色素瘤抗原MAGE 2的HLA A2限制性CTL表位。方法 采用超基序法与量化基序法的联合应用。结果 发现 8个HLA A2限制性CTL表位。
关键词 肿瘤抗原 CTL 预测 MAGE-2 hla-a2
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hTERT多表位肽致敏mDC诱导CTL对HLA-A24^+肿瘤细胞的特异性杀伤作用 被引量:2
7
作者 慎华平 钮柏琳 +2 位作者 杜慧敏 邹利全 龚建平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期626-630,633,共6页
目的:研究人工合成人端粒酶逆转录酶(hTERT)多表位混合肽经髓样树突状细胞(mDC)提呈后,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HLA-A24+肿瘤细胞的免疫杀伤效应。方法:人工合成四分支的树状串联hTERT表位肽(MAPs)及其各单表位多肽。取HLA-A... 目的:研究人工合成人端粒酶逆转录酶(hTERT)多表位混合肽经髓样树突状细胞(mDC)提呈后,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HLA-A24+肿瘤细胞的免疫杀伤效应。方法:人工合成四分支的树状串联hTERT表位肽(MAPs)及其各单表位多肽。取HLA-A24+健康志愿者的外周血,用免疫磁珠分选并培养mDC。用尼龙毛柱纯化T淋巴细胞并培养。以各表位肽致敏mDC后,诱导特异性CTL增殖,并以表达hTERT且以HLA-A24+肿瘤细胞株SMMC-7721及HLA-A24-肿瘤细胞株SKOV3为靶细胞行杀伤实验。用ELISA法检测不同时间点培养基上清液中IL-12、TNF-α的分泌量;用流式细胞术检测CTL对肿瘤细胞的杀伤效应。结果:以源于hTERT的T淋巴细胞表位I540(ILAKFLHWL)、V461(VYGFVRACL)及L766(LTDLQPYMRQFVAHL)合成4分支MAPs多肽及各单表位混合多肽。以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC后,能刺激CTL增殖,并可诱导对HLA-A24+肿瘤细胞株SMMC-7721的特异性杀伤作用,且MAPs多肽较单表位混合多肽的致敏效果更具显著性(P<0.05)。结论:以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC能激活同源淋巴细胞(CTL),可特异性杀伤HLA-A24+的肿瘤细胞,在肿瘤免疫治疗中具有重要的意义。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶 多抗原 髓样树突状细胞 hla-a24+肿瘤细胞 免疫治疗
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TIL识别的HLA-A2限制性人黑色素瘤特异抗原肽的研究
8
作者 葛海良 李美星 +2 位作者 金姝 陈影 张勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期924-927,共4页
目的探讨TIL识别的人黑色素瘤HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽特性。方法通过亲和层析柱从三种肿瘤细胞系(624-Mel、Chap-Mel和JY)中纯化HLA-A2蛋白和结合的多肽分子,经弱酸高温处理和离心超滤后,应用反相-高效液相色谱层析(RT-HPLC)分离各多... 目的探讨TIL识别的人黑色素瘤HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽特性。方法通过亲和层析柱从三种肿瘤细胞系(624-Mel、Chap-Mel和JY)中纯化HLA-A2蛋白和结合的多肽分子,经弱酸高温处理和离心超滤后,应用反相-高效液相色谱层析(RT-HPLC)分离各多肽组份,并将其各组份与T2细胞共同孵育、进行重建TIL识别的人黑色素瘤特异表位试验,鉴定肽分子生物活性,通过质谱分析所获活性肽分子特性,参照活性肽序列,制备人工合成肽加以进一步证实。结果从RT-HPLC层析的624-Mel的肽组份,经特异表位鉴定发现3个活性峰(P19、P25和P31)。其中P31,TIL杀伤率达67%,质谱分析表明肽分子量为948,氨基酸序列为H+Ala Lue Trp Lue Phe Phe Gly Val Lue OH-的9肽分子。经特异表位测定表明人工合成肽具有纯化活性肽的生物活性特征。结论分离鉴定的这一9肽分子是一种TIL识别的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽,为肿瘤防治、合成肽疫苗的研究奠定了可靠的实验基础。 展开更多
关键词 TIL hla-a2限制性 肿瘤抗原 疫苗
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口蹄疫病毒A/GDMM/CHA/2013株结构蛋白VP1 H-2d限制性CTL表位预测 被引量:2
9
作者 尚延丽 冯霞 +3 位作者 靳野 张晓霞 张柳 马军武 《安徽农业科学》 CAS 2015年第16期146-149,共4页
[目的]预测A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的H-2d限制性T细胞表位。[方法]使用多种在线表位预测软件,包括Syfpeithi、IEDB、Net MHC-3.2、IMTECH和BIMAS预测A型口蹄疫病毒VP1上可能有的H-2d限制性T细胞表位,然后用Prot Param软件分析预测出... [目的]预测A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的H-2d限制性T细胞表位。[方法]使用多种在线表位预测软件,包括Syfpeithi、IEDB、Net MHC-3.2、IMTECH和BIMAS预测A型口蹄疫病毒VP1上可能有的H-2d限制性T细胞表位,然后用Prot Param软件分析预测出的候选表位。[结果]综合比较5个表位预测软件的预测结果,遴选出10个候选表位;再结合Prot Param软件分析结果,最后共预测出5个表位:其中H-2Kd限制性表位有第27-35、118-126位,H-2Ld限制性表位有第43-51位,H-2Dd限制性表位有第45-53、146-154位。[结论]预测出5条口蹄疫病毒结构蛋白VP1 H-2d限制性CTL表位,为进一步鉴定口蹄疫病毒CTL表位提供数据和基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 H-2d限制性T细胞 生物信息学
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传染性法氏囊病毒VP2蛋白抗原表位多肽P22的免疫原性及生物学功能鉴定 被引量:8
10
作者 宋幸辉 王睿 +6 位作者 王选年 鲍登克 杨苏珍 卢清侠 王寅彪 赵东 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期692-697,共6页
为鉴定IBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BAL... 为鉴定IBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BALB/c小鼠3只,经3次免疫后得到多抗血清3份。应用ELISA检测了抗P22抗体的特异性,并通过抗P22多肽抗体作为特异性抗体检测了P22多肽结合CEF细胞的特性。结果经鉴定3份多抗血清均与P22多肽特异性反应,效价均达到1∶105,且能特异性检测P22多肽与CEF细胞的特异性结合。本试验成功制备了P22免疫原,获得了效价高、特异性较好的鼠源抗P22多抗血清,并证明P22多肽与CEF细胞能够特异性结合,为进一步研究多肽疫苗的设计或试纸条的研制及表位单抗的制备提供了新的思路和基础。 展开更多
关键词 IBDV VP2蛋白 P22 抗原 免疫
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猪瘟病毒E2糖蛋白抗原表位的预测、多肽合成及特性研究 被引量:10
11
作者 刘思国 马刚 +2 位作者 余兴龙 张茂林 涂长春 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期448-450,453,共4页
目的 :研究CSFVE2蛋白免疫原性肽的生物学特性。方法 :应用计算机分析软件对猪瘟病毒E2糖蛋白的抗原表位进行了预测 ,结合E2基因的变异分析 ,人工合成了两条多肽 (Pep1和Pep2 )序列 ,与抗mE2蛋白的兔血清和抗mE2的 8株单抗进行反应 ,并... 目的 :研究CSFVE2蛋白免疫原性肽的生物学特性。方法 :应用计算机分析软件对猪瘟病毒E2糖蛋白的抗原表位进行了预测 ,结合E2基因的变异分析 ,人工合成了两条多肽 (Pep1和Pep2 )序列 ,与抗mE2蛋白的兔血清和抗mE2的 8株单抗进行反应 ,并将两条多肽分别与载体蛋白 (BSA)进行偶联和免疫家兔。结果 :两条多肽均与兔的抗血清及单抗A11反应 ;多肽Pep2与单抗D5和D8反应。多肽Pep1与BSA载体蛋白偶联 (Pep1 BSA) ,免疫家兔后能够产生针对多肽Pep1的抗体。结论 :两条多肽Pep1和Pep2中 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2糖蛋白 抗原 预测 合成 生物学特性
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猪瘟病毒E2基因噬菌体展示多肽库的构建及表位鉴定 被引量:12
12
作者 徐和敏 王琴 +1 位作者 徐璐 范学政 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期71-76,共6页
本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(... 本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(SM-E2库和HCLV-E2库)。通过生物淘选和噬菌体原位杂交技术,采用7株猪瘟单克隆抗体和1株猪瘟高免血清分别对构建的SM-E2库和HCLV-E2库进行抗原表位筛选。结果共筛选到了5条与E2蛋白高度同源的序列,在E2蛋白上的同源区域分别为TAVSPTTLR、YYEP、TTWKEYSH、GGQ(V)VK和PDGLPHY。结果表明,TAVSPTTLR、YYEP和TTWKEYSH序列与目前已知E2蛋白表位一致,说明它们是E2蛋白上的优势表位;GGQ(V)VK和PDGLPHY序列与预测表位一致,推测是E2蛋白上潜在的抗原表位。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 抗原 噬菌体展示多
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视网膜抗原中MHCⅠ类分子H-2b限制性表位的鉴定
13
作者 王明军 《安徽医科大学学报》 CAS 2002年第4期324-324,共1页
关键词 视网膜抗原 MHC I类 H-2b限制性 鉴定
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一种新Pre-S_(2)合成肽CTL表位糖基化方法
14
作者 周吉军 王祥智 +2 位作者 吴玉章 邹丽云 周伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期965-968,共4页
目的 为研究HBVPre S( 2 ) 上糖基化 (Glycosylation)结构差异 (包括位置、种类、数量和糖链长度差异 )与其生物学活性关系 ,建立一种N 或O 连接糖基化以外的合成肽α 和ε 氨基糖基化方法。方法 用化学方法将单、双和聚糖共价连接在P... 目的 为研究HBVPre S( 2 ) 上糖基化 (Glycosylation)结构差异 (包括位置、种类、数量和糖链长度差异 )与其生物学活性关系 ,建立一种N 或O 连接糖基化以外的合成肽α 和ε 氨基糖基化方法。方法 用化学方法将单、双和聚糖共价连接在Pre S( 2 ) 合成肽上的含α 和ε 氨基的氨基酸残基上 ,即具体连接在肽N端M1的α 氨基和K16的ε 氨基上。此二氨基酸残基位于或接近Pre S( 2 ) 上公认的一个CTL表位 ,氨基酸残基 1~ 15。结果 Pre S( 2 ) 合成肽聚糖 (Mannan)、单糖 (GalNAc)和双糖 (Glc Gal)糖基化的收益率分别为2 4.0 %、2 4.5 %和 2 1.0 %。经还原处理后 ,稳定性显著增加。HPLC图谱显示一包容峰。结论 结果显示此方法具较高的糖基化效率 ,为研究Pre S2 糖肽免疫学活性提供了一种新手段。但存在糖基化的均一性欠佳 。 展开更多
关键词 糖基化 合成 Pre-S(2) CTL 乙型肝炎
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利用噬菌体肽库确定IL-2Rα表位序列
15
作者 刘北一 李一 +7 位作者 王莉 于春雷 杨贵贞 富宁 周长城 齐杰 周慧 李惟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第12期534-536,共3页
 目的:确定IL-2Rα表位,为研制高效特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法:用抗IL-2Rα单克隆抗体5G1对噬菌体六肽库进行筛选,选择出与5G1结合较强的克隆,经DNA序列分析,获得保守序列。对合保守序列...  目的:确定IL-2Rα表位,为研制高效特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法:用抗IL-2Rα单克隆抗体5G1对噬菌体六肽库进行筛选,选择出与5G1结合较强的克隆,经DNA序列分析,获得保守序列。对合保守序列的克隆进行生物学活性鉴定。结果:选择出31个与5G1结合较强的克隆。获得Ser-Ser-Phe和Ser-Ser-Arg两种保守序列。生物学活性鉴定表明:含Ser-Ser-Arg序列克隆较含Ser-Ser-Phe被抑制效果好。结论:Ser-Ser-Arg是IL-2Rα表位的关键序列。以此表位序列合成的小分子肽可作为IL-2Rα的拮抗剂而成为免疫抑制剂。 展开更多
关键词 噬菌体 IL-2R 免疫抑制剂
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溶剂诱导黑色素瘤抗原基因-2特定表位多肽异构的LC/MS研究
16
作者 周伟 吴玉章 +3 位作者 边疆 贾正才 唐艳 邹丽云 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期449-453,共5页
研究乙醇、甲醇两种常用溶剂系统对固相合成的黑色素瘤抗原基因 2 (MAGE 2 )的特定表位多肽 (171 179)异构的影响。分别运用乙醇、甲醇溶剂体系以及极性溶剂二甲基亚砜 (DMSO)作对照预处理固相合成的黑色素瘤抗原特异性MAGE 2表位多肽 ... 研究乙醇、甲醇两种常用溶剂系统对固相合成的黑色素瘤抗原基因 2 (MAGE 2 )的特定表位多肽 (171 179)异构的影响。分别运用乙醇、甲醇溶剂体系以及极性溶剂二甲基亚砜 (DMSO)作对照预处理固相合成的黑色素瘤抗原特异性MAGE 2表位多肽 (171~ 179) ,然后用反相高效液相色谱 /质谱联用技术 (RP HPLC/MS)对合成的表位多肽的m/z进行Q1正离子监测扫描分析 ,观察其在不同溶剂系统预处理下的异构情况 ,以选择合理的预处理条件。结果发现采用乙醇及甲醇溶样时MAGE 2表位多肽有异构体产生 ,极性溶剂DMSO溶样的表位多肽未有异构现象发生 ,采用 5 0 % (体积分数 )的乙醇及 5 0 % (体积分数 )的甲醇时也未监测到异构体产生 ;同时发现将已发生异构的乙醇及甲醇溶样溶液用三氟乙酸酸化处理后 ,异构多肽可发生较大的逆转。 展开更多
关键词 液相色谱/质谱联用 黑色素瘤抗原基因-2 异构体 溶剂诱导 黑色素瘤 免疫治疗
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从噬菌体随机肽库筛选庚型肝炎病毒E2抗原表位 被引量:3
17
作者 柯屾 戚中田 +4 位作者 施明 赵平 王建安 姚志建 沈倍奋 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期838-841,共4页
目的 :筛选能识别庚型肝炎病毒 (HGV) E2区的单克隆抗体和有竞争抑制活性的多肽。方法 :利用抗 HGV E2区的3株单克隆抗体 M6 ,M13,M30作为筛选配基 ,对构象限制性的随机环 9肽库进行亲和筛选 ,并对阳性噬菌体克隆进行功能鉴定。结果 :... 目的 :筛选能识别庚型肝炎病毒 (HGV) E2区的单克隆抗体和有竞争抑制活性的多肽。方法 :利用抗 HGV E2区的3株单克隆抗体 M6 ,M13,M30作为筛选配基 ,对构象限制性的随机环 9肽库进行亲和筛选 ,并对阳性噬菌体克隆进行功能鉴定。结果 :证实亲和筛选具有良好的富集效果后 ,随机挑出 16个噬菌体克隆进行交叉结合实验 ,有 14个克隆与 M6抗体有较强的特异结合 ;其中 10个克隆在竞争抑制实验中抑制率大于 5 0 %。 DNA测序表明 9个克隆具有氨基酸核心序列 GYAPL S,该序列与 HGV E2区第 30 6~ 311位氨基酸有较好的同源性。用合成肽与核心序列相似的噬菌体克隆 P9GC5和 P9GC11进行HGV E2抗原抗体实验 ,显示它们的 IC5 0 分别为 4.5和 7.2 nmol/ L。结论 :从噬菌体随机肽库中筛选到能与 HGV E2抗体特异性结合的 HGV抗原表位 ,并确定与合成了具有活性的核心多肽序列。 展开更多
关键词 噬菌体随机 E2蛋白 抗原 庚型肝炎 HGV
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胰腺癌高表达抗原MUC4 CTL表位肽的体内免疫原性 被引量:1
18
作者 范柳笛 张岩 时冉冉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期441-446,共6页
目的:检测来源于黏蛋白4(MUC4)的人白细胞抗原(HLA)-A2限制性表位肽免疫BALB/c小鼠后产生细胞免疫应答的水平,筛选出体内具有免疫原性的HLA-A2限制性表位肽。方法:将来源于MUC4的候选HLA-A2限制性表位肽、通用性Th表位和弗氏不完全佐剂... 目的:检测来源于黏蛋白4(MUC4)的人白细胞抗原(HLA)-A2限制性表位肽免疫BALB/c小鼠后产生细胞免疫应答的水平,筛选出体内具有免疫原性的HLA-A2限制性表位肽。方法:将来源于MUC4的候选HLA-A2限制性表位肽、通用性Th表位和弗氏不完全佐剂联合应用皮下免疫BALB/c小鼠,用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠脾细胞表位肽特异性细胞免疫应答的水平,体内细胞毒实验活性检测候选肽诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)的能力,并用流式细胞术检测表位肽特异性的CD8+T细胞所占比例。结果:在检测的4个表位肽中,P2004-1Y9V诱导BALB/c小鼠产生的细胞免疫应答最强,细胞毒实验结果显示,P2004和P2004-1Y9V对CAPAN-2细胞均有一定的杀伤作用,且P2004-1Y9V特异性CTLs对CAPAN-2细胞杀伤率高于原肽(P<0.05)。胞内因子染色实验进一步表明P2004-1Y9V免疫后可产生特异性的CD8^+T细胞。结论:在来源于MUC4的HLA-A2限制性表位肽中,P2004-1Y9V具有较强的体内免疫原性,可以作为潜在的肿瘤多肽疫苗应用于临床研究。 展开更多
关键词 黏蛋白4 体内免疫原性 hla-a2限制性表位肽
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含有Th细胞表位的合成PCV2 ORF2 Cap多肽抗原的表达及免疫原性分析 被引量:3
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作者 陈善真 赵焱 +4 位作者 李中圣 罗均 陈克宏 王贵平 李其昌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2273-2281,共9页
拟测定在PCV2ORF2Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性。采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞... 拟测定在PCV2ORF2Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性。采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞表位多肽和3条PCV2特异的含有Th细胞抗原表位的多肽序列,然后将这4条Th细胞多肽氨基酸序列与筛选自ORF2Cap1上的1条B细胞表位多肽序列进行串联组合,密码子优化,插入酶切位点、终止密码子,然后进行密码子适应指数和分布频率分析,预测可以实现高效表达后再进行化学合成。合成的P1多肽抗原连接到pET-30a表达载体,并转化至BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,构建表达工程菌BL21(DE3)pLysS-pET-30a-P1。经IPTG诱导表达后P1可实现高效表达,SDS-PAGE鉴定表达量,Western Blot鉴定其生物活性,然后分别免疫小鼠和猪,测定小鼠免疫后的抗体水平以及猪免疫后P1合成多肽抗原对外周血淋巴细胞的刺激增殖情况。结果表明,设计合成表达的PCV2P1多肽抗原序列,密码子适应性指数为0.89,能够实现高水平表达,目的片段大小约为28.29ku,具有良好的免疫原性;MTT试验结果表明,P1多肽抗原免疫后机体内IFN-γ和IL-4的表达量明显增加,且与对照组差异显著(P<0.05)。这说明P1能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应,为其作为疫苗用抗原的进一步研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 PCV2 Th细胞 CAP蛋白
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多肽序列的结构特征与其MHC限制性 被引量:6
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作者 林治华 吴玉章 +1 位作者 万瑛 倪兵 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第5期826-830,共5页
从多肽序列的一级结构出发,基于多肽序列中氨基酸侧链间距离和氨基酸侧链的电性特征,构建了多肽序列特征矢量,简称ζ矢量,选取文献中主要组织相容性复合物(MHC)中的14个A^d限制性和14个非A^d限制性多肽序列作为训练集建立辅助性T细胞(he... 从多肽序列的一级结构出发,基于多肽序列中氨基酸侧链间距离和氨基酸侧链的电性特征,构建了多肽序列特征矢量,简称ζ矢量,选取文献中主要组织相容性复合物(MHC)中的14个A^d限制性和14个非A^d限制性多肽序列作为训练集建立辅助性T细胞(helper T lymphocytc,Th)表位预测的定量模型,为了检验该预报系统的精确性,进行了随机抽样检验和交互检验。结果表明,该预报系统具有稳定性好、预测能力强的特点,该方法可用于人的MHC Ⅰ和Ⅱ类表位的预测、蛋白质抗原免疫识别、亚单位疫苗分子设计及研制。 展开更多
关键词 序列 结构特征 MHC限制性 拓扑特征 预测 蛋白质抗原 疫苗 TH细胞 免疫反应 设计
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