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替米沙坦对尿酸盐刺激下HK-2肾小管上皮细胞干预研究 被引量：2
1
作者 张继波 龙利 +4 位作者 覃慧群 金晟 余建峰 徐敏 刘浩 《医药导报》 CAS 北大核心 2021年第10期1330-1336,共7页
目的基于过氧化物酶增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)途径探讨替米沙坦对尿酸盐刺激下HK-2肾小管上皮细胞的干预作用。方法培养HK-2肾小管上皮细胞,随机分为7组,分别为对照组(NC组)、模型组(UM组)、替米沙坦组(UT组)、罗格列酮组(UR组)、GW9... 目的基于过氧化物酶增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)途径探讨替米沙坦对尿酸盐刺激下HK-2肾小管上皮细胞的干预作用。方法培养HK-2肾小管上皮细胞,随机分为7组,分别为对照组(NC组)、模型组(UM组)、替米沙坦组(UT组)、罗格列酮组(UR组)、GW9662组(UG组)、替米沙坦+GW9662组(UTG组)和罗格列酮+GW9662组(URG组),除NC组应用培养液外,其余6组在NC组基础上均加入600μmol·L-1尿酸盐溶液培养。培养48 h。流式细胞仪检测HK-2细胞hUAT、PPAR-γ蛋白表达及细胞凋亡率;Q-PCR及Western blotting检测HK-2细胞人生电型尿酸盐转运蛋白(hUAT)、PPAR-γ、转化生长因子-β1(TGF-β1)、环氧合酶2(COX-2)、单核巨噬细胞因子-1(MCP-1)基因及蛋白表达。结果与NC组比较,尿酸盐刺激后UM组细胞凋亡率增加,hUAT及PPAR-γ蛋白阳性细胞率减少(P<0.05);与UM组比较,替米沙坦、罗格列酮均能减少细胞凋亡率及上调hUAT及PPAR-γ蛋白阳性细胞率(P<0.05),PPAR-γ抑制剂后联合替米沙坦、罗格列酮治疗,与UT组、UR组比较,细胞凋亡率增加,hUAT及PPAR-γ蛋白阳性细胞率减少(P<0.05);UTG组与URG组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与UC组比较,UM组hUAT、PPAR-γmRNA及蛋白表达下降,TGF-β1、COX-2、MCP-1 mRNA及蛋白表达增高(P<0.05);与UM组比较,替米沙坦、罗格列酮能上调hUAT、PPAR-γmRNA及蛋白表达,下调TGF-β1、COX-2、MCP-1 mRNA及蛋白表达(P<0.05);PPAR-γ抑制剂后联合替米沙坦治疗,与UT组、UR组比较,hUAT、PPAR-γmRNA及蛋白表达降低,TGF-β1、COX-2、MCP-1 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);UTG组与URG组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论替米沙坦具有类似罗格列酮激活PPAR-γ受体机制,可通过PPAR-γ途径调节小管细胞凋亡、减少氧化应激及改善间质纤维化而发挥肾脏保护作用。 展开更多
关键词 替米沙坦 罗格列酮 过氧化物酶增殖物受体-γ hk-2肾小管上皮细胞
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沉默FABP4通过调节Nrf2/GPX4轴减轻缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞铁死亡
2
作者 白冰 谭州科 +2 位作者 石彬 蒲涛 杨亦彬 《器官移植》 北大核心 2025年第5期718-727,共10页
目的 探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)对缺氧/复氧(H/R)处理的人肾小管上皮细胞(HK-2)铁死亡的影响及作用机制。方法 体外培养HK-2细胞,经缺氧处理24 h后再复氧不同时间(1、3、6 h),实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各时间点HK-... 目的 探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)对缺氧/复氧(H/R)处理的人肾小管上皮细胞(HK-2)铁死亡的影响及作用机制。方法 体外培养HK-2细胞,经缺氧处理24 h后再复氧不同时间(1、3、6 h),实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各时间点HK-2细胞中脂肪酸结合蛋白4(FABP4)信使RNA(mRNA)和蛋白水平。采用小干扰RNA技术沉默HK-2细胞中FABP4基因表达,再进行H/R(缺氧24 h复氧6 h)处理,或联合Nrf2抑制剂ML385处理。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测各组细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验检测乳酸脱氢酶(LDH)水平,生化法检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和亚铁离子(Fe^(2+))水平,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测活性氧簇(ROS)水平,蛋白质印迹法检测FABP4、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达水平。结果 随着复氧时间的延长,HK-2细胞中FABP4 mRNA和蛋白水平均升高(均为P<0.05)。H/R处理可降低细胞增殖活性,升高细胞上清液中LDH水平,同时升高HK-2细胞中MDA、Fe~(2+)及ROS水平,降低GSH水平,降低Nrf2、HO-1、GPX4、SLC7A11蛋白水平(均为P<0.05)。沉默FABP4可升高H/R处理的HK-2细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞中MDA、Fe~(2+)及ROS水平,升高GSH水平,同时升高Nrf2、HO-1、GPX4、SLC7A11蛋白水平(均为P<0.05)。而联合ML385处理后可逆转FABP4基因沉默对H/R处理的HK-2细胞铁死亡的改善作用。结论 沉默FABP4可减轻H/R诱导的HK-2细胞铁死亡,其机制可能与激活Nrf2/GPX4轴有关。 展开更多
关键词 脂肪酸结合蛋白4 核因子E2相关因子2/谷胱甘肽过氧化物酶4轴 缺氧/复氧 肾小管上皮细胞 铁死亡 细胞增殖活性 活性氧簇 急性肾损伤
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真武汤对脂多糖诱导的肾小球上皮细胞炎症、氧化应激及凋亡的影响
3
作者 王曼非 柴希 +4 位作者 高夏夏 储开博 张育敏 田岳凤 何丽清 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第5期985-993,共9页
目的基于Nrf2/HO-1信号通路探讨真武汤对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的人肾小球上皮细胞(human glomerular epithelial cells,HGEC)炎症、氧化应激和凋亡的影响及作用机制。方法用LPS(1.0 mg·L^(-1))处理HGEC 24 h构建氧... 目的基于Nrf2/HO-1信号通路探讨真武汤对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的人肾小球上皮细胞(human glomerular epithelial cells,HGEC)炎症、氧化应激和凋亡的影响及作用机制。方法用LPS(1.0 mg·L^(-1))处理HGEC 24 h构建氧化损伤模型,在此基础上加入2.5%、5%、10%真武汤含药血清联合处理为真武汤低、中、高剂量组,并设正常组;采用MTT法和LDH法检测细胞活性的变化;采用ELISA法检测各组细胞中TNF-α、IL-6、IL-10、SOD、CAT、GSH-Px、ROS和MDA的含量;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;分别采用RT-qPCR和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9及Nrf2/HO-1通路的mRNA和蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组HGEC炎性因子含量升高,氧化应激反应和细胞凋亡加重;经真武汤各剂量组干预后,HGEC炎性水平降低,氧化应激和细胞凋亡得到有效改善,同时上调了Nrf2/HO-1信号通路的mRNA和蛋白表达水平。结论真武汤能够保护HGEC减缓LPS诱导的炎症和氧化损伤,改善细胞凋亡,其作用机制可能与其激活Nrf2/HO-1信号通路有关。 展开更多
关键词 真武汤 肾小球上皮细胞 脂多糖 炎症 氧化应激 凋亡 Nrf2/HO-1信号通路
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环泊酚通过上调应激诱导蛋白2表达减轻肾脏细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤
4
作者 刘美言 宋涛 +3 位作者 闵洁煜 应流念 刘磊 钟毅 《临床麻醉学杂志》 北大核心 2025年第7期748-754,共7页
目的探究环泊酚调控应激诱导蛋白2(SESN2)表达量及其在氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的HK-2细胞铁死亡中的作用。方法选择野生型及SESN2基因敲低的人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞株),将所选细胞分为五组:正常培养组(C组)、OGD/R组(O... 目的探究环泊酚调控应激诱导蛋白2(SESN2)表达量及其在氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的HK-2细胞铁死亡中的作用。方法选择野生型及SESN2基因敲低的人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞株),将所选细胞分为五组:正常培养组(C组)、OGD/R组(O组)、OGD/R+环泊酚50μmol/L组(OC组)、SESN2基因敲低+OGD/R组(SO组)和SESN2敲低+OGD/R+环泊酚50μmol/L组(SOC组)。其中O组、OC组、SO组和SOC组建立OGD/R细胞损伤模型。采用CCK-8法检测细胞存活率,荧光酶标仪检测ROS荧光强度。收集细胞,采用微板法检测丙二醛(MDA)含量,采用比色法检测谷胱甘肽(GSH)、半胱氨酸(Cys)含量;收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、乳酸脱氢酶(LDH)浓度。提取细胞蛋白和细胞RNA,分别采用Western blot和qRT-PCR法检测SESN2、GPX4、FSP1蛋白含量和mRNA表达量。结果与C组比较,O组、OC组、SO组和SOC组细胞存活率、GSH、Cys含量、GPX4、FSP1蛋白含量和mRNA表达量明显降低(P<0.05),ROS水平、MDA含量、细胞培养上清液IL-6、TNF-α、LDH浓度、SESN2蛋白含量和mRNA表达量明显升高(P<0.05)。与O组比较,OC组细胞存活率、GSH、Cys含量、SESN2、GPX4、FSP1蛋白含量和mRNA表达量明显升高(P<0.05),ROS水平、MDA含量、细胞培养上清液IL-6、TNF-α、LDH浓度明显降低(P<0.05);SO组细胞存活率、GSH、Cys含量、SESN2、GPX4、FSP1蛋白含量和mRNA表达量明显降低(P<0.05),ROS水平、MDA含量、细胞培养上清液IL-6、TNF-α、LDH浓度明显升高(P<0.05)。与OC组比较,SOC组细胞存活率、GSH、Cys含量、SESN2、GPX4、FSP1蛋白含量和mRNA表达量明显降低(P<0.05),ROS水平、MDA含量、细胞培养上清液IL-6、TNF-α、LDH浓度明显升高(P<0.05)。与SO组比较,SOC组细胞存活率、GSH、Cys含量、SESN2、GPX4、FSP1蛋白含量和mRNA表达量明显升高(P<0.05),ROS水平、MDA含量、细胞培养上清液IL-6、TNF-α、LDH浓度明显降低(P<0.05)。结论环泊酚可以减轻HK-2细胞OGD/R损伤,降低铁死亡水平和细胞氧化应激反应,可能与上调SESN2表达量有关。 展开更多
关键词 应激诱导蛋白2 人类 铁死亡 人肾皮质近曲小管上皮细胞 氧糖剥夺/复糖复氧 环泊酚
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敲低RIP3对缺氧/复氧诱导人肾小管上皮HK2细胞自噬、细胞焦亡和铁死亡的影响 被引量：1
5
作者 何国斌 王焕 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1644-1653,共10页
目的:探讨敲低受体相互作用蛋白激酶3(RIP3)对缺氧复氧(H/R)诱导下人肾小管上皮HK2细胞自噬、焦亡和铁死亡的影响。方法:将慢病毒干扰载体质粒shRIP3和阴性对照慢病毒干扰载体质粒shNC分别转染至HK2细胞中,分为shRIP3组和shNC组,另以正... 目的:探讨敲低受体相互作用蛋白激酶3(RIP3)对缺氧复氧(H/R)诱导下人肾小管上皮HK2细胞自噬、焦亡和铁死亡的影响。方法:将慢病毒干扰载体质粒shRIP3和阴性对照慢病毒干扰载体质粒shNC分别转染至HK2细胞中,分为shRIP3组和shNC组,另以正常培养未转染的HK2细胞作为空白组,转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法验证慢病毒转染效果。将HK2细胞分为对照组、H/R组、shNC+H/R组和shRIP3+H/R组。CCK-8法检测各组HK2细胞存活率,免疫荧光染色法检测各组细胞中微管结合蛋白1轻链(LC)3B和含核苷酸结合结构域富亮氨酸重复序列(NLR)家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)蛋白荧光强度,Western blotting法检测各组HK2细胞中LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、膜穿孔蛋白D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-1β和IL^(-1)8蛋白表达水平,试剂盒检测各组细胞中铁离子(Fe^(2+))水平。结果:与空白组和shNC组比较,shRIP3组HK2细胞中RIP3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。CCK-8法检测,与对照组比较,H/R组HK2细胞存活率明显降低(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞存活率明显升高(P<0.05)。免疫荧光染色法检测,与对照组比较,H/R组HK2细胞中LC3B蛋白荧光强度明显降低(P<0.05),NLRP3蛋白荧光强度明显升高(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中LC3B蛋白荧光强度明显升高(P<0.05),NLRP3蛋白荧光强度明显降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,H/R组HK2细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与对照组比较,H/R组HK2细胞中Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL^(-1)8蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL^(-1)8蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,H/R组HK2细胞中GPX4和SLC7A11蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中GPX4和SLC7A11蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与对照组比较,H/R组HK2中细胞Fe^(2+)水平明显升高(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中Fe^(2+)水平明显降低(P<0.05)。结论:靶向敲低RIP3可诱导H/R诱导人肾小管上皮HK2细胞自噬,抑制细胞焦亡和减轻铁死亡。 展开更多
关键词 人肾小管上皮HK2细胞 缺氧/复氧 受体相互作用蛋白激酶3 自噬 焦亡 铁死亡
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Clusterin抑制人肾近曲小管上皮HK-2细胞的凋亡 被引量：2
6
作者 刘芳 秦晓新 朱绪辉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期833-838,共6页
Clusterin是一种硫酸糖蛋白.最近研究发现,clusterin具有抗凋亡作用,同时对肾细胞具有保护作用,但抗凋亡的具体机制仍不清楚.为研究clusterin及其不同功能区域在人肾近曲小管上皮HK-2细胞中的抗凋亡作用,构建了含有全长及缺失前导序列的... Clusterin是一种硫酸糖蛋白.最近研究发现,clusterin具有抗凋亡作用,同时对肾细胞具有保护作用,但抗凋亡的具体机制仍不清楚.为研究clusterin及其不同功能区域在人肾近曲小管上皮HK-2细胞中的抗凋亡作用,构建了含有全长及缺失前导序列的clusterin重组质粒(分别命名为pIRES2-EGFP/cluac和pIRES2-EGFP/clubc).将重组质粒转染人肾近曲小管上皮HK-2细胞后,检测转染细胞中clusterin的表达及其抗Na2SeO3(10μmol/L)诱导的凋亡作用.Western印迹显示,转染pIRES2-EGFP/cluac的HK-2细胞培养上清及细胞裂解液中均可检测到clusterin蛋白表达,但转染pIRES2-EGFP/clubc的HK-2细胞仅在裂解液中检测到clusterin,在培养上清液中未检测到该蛋白表达.流式细胞术检验显示,HK-2/clubc细胞实验组出现明显凋亡峰,而HK-2/cluac细胞组则未见凋亡;两组的凋亡百分率之间也存在显著性差异(P<0.05).以Cy3标记的Annexin V染色后于荧光显微镜下观察细胞凋亡情况与FCM检测结果基本一致.上述结果证明,clusterin有明显的抑制人肾近曲小管上皮HK-2细胞凋亡的作用;clusterin前导序列是其发挥抗凋亡作用的必需功能区域,提示clusterin抗凋亡作用是通过细胞外途径产生的. 展开更多
关键词 CLUSTERIN 肾小管 hk-2细胞 凋亡
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右美托咪定通过激活Nrf2/HO-1/GPX4通路抑制肾小管上皮细胞的铁死亡 被引量：5
7
作者 张方圆 刘刚 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1135-1140,共6页
目的 探讨右美托咪定(DEX)对Erastin诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)铁死亡的保护作用及其机制。方法 构建Erastin诱导的HK-2细胞铁死亡模型。将HK-2细胞分为对照组、Erastin模型组、Erastin+2.5μmol/L DEX组、Erastin+5μmol/L DEX组、E... 目的 探讨右美托咪定(DEX)对Erastin诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)铁死亡的保护作用及其机制。方法 构建Erastin诱导的HK-2细胞铁死亡模型。将HK-2细胞分为对照组、Erastin模型组、Erastin+2.5μmol/L DEX组、Erastin+5μmol/L DEX组、Erastin+10μmol/L DEX组,采用CCK-8法检测细胞的存活率。将HK-2细胞分为对照组、Erastin模型组、Erastin+10μmol/L DEX组、Erastin+10μmol/L DEX+ML385(Nrf2抑制剂)组。采用CCK-8法检测细胞的存活率;使用细胞亚铁比色法测试盒检测细胞内Fe^(2+)水平的变化;应用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的含量;使用丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测细胞中MDA及GSH含量;Western blotting检测细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白的表达。结果 与对照组相比,Erastin组的细胞存活率显著被抑制(P<0.001),同时细胞中GSH含量降低(P<0.001),Fe^(2+)、ROS以及MDA含量升高(P<0.001);与Erastin组相比,Erastin+10μmol/L DEX组的细胞存活率明显升高(P<0.001),10μmol/L DEX显著升高细胞中GSH含量(P<0.001),显著降低Fe^(2+)、ROS以及MDA含量(P<0.001),并且显著上调细胞中Nrf2、HO-1和GPX4蛋白的表达(P<0.001)。使用ML385后,Nrf2/HO-1/GPX4通路被抑制(P<0.001),细胞存活率降低(P<0.001),GSH含量降低(P<0.001),而Fe^(2+)、ROS以及MDA含量升高(P<0.05)。结论 DEX对Erastin诱导的HK-2细胞铁死亡具有保护作用,其机制可能是通过激活Nrf2/HO-1/GPX4通路实现抗氧化应激从而抑制铁死亡。 展开更多
关键词 右美托咪定 Erastin 人肾小管上皮细胞 铁死亡 Nrf2/HO-1/GPX4
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miR-16-5p靶向抑制CXCL10表达减轻脂多糖诱导的HK-2人肾小管上皮细胞损伤 被引量：1
8
作者 程创 石中全 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期218-223,共6页
目的探讨微小RNA-16-5p(miR-16-5p)对脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞损伤和CXC趋化因子配体10(CXCL10)表达的影响。方法体外培养HK-2人肾小管上皮细胞,采用LPS诱导模拟急性肾损伤,细胞分为对照组、LPS组、LPS联合miR-NC组和LPS联合miR... 目的探讨微小RNA-16-5p(miR-16-5p)对脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞损伤和CXC趋化因子配体10(CXCL10)表达的影响。方法体外培养HK-2人肾小管上皮细胞,采用LPS诱导模拟急性肾损伤,细胞分为对照组、LPS组、LPS联合miR-NC组和LPS联合miR-16-5p组。实时荧光定量PCR分析miR-16-5p的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测HK-2细胞的相对存活率,ELISA检测培养细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-12的含量,二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平,试剂盒检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测CXCL10以及凋亡相关胱天蛋白酶3(caspase-3)和caspase-9的蛋白表达水平。生物信息学预测miR-16-5p和CXCL10相互作用靶点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-16-5p和CXCL10的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组HK-2细胞miR-16-5p表达、相对细胞存活率和SOD含量均明显降低,而ROS水平、MDA、TNF-α、IL-6和IL-12的含量以及细胞凋亡率、CXCL10、caspase-3和caspase-9的蛋白表达均明显升高;与LPS组相比,过表达miR-16-5p逆转以上各指标变化。miR-16-5p能够靶向调控CXCL10的表达。结论过表达miR-16-5p靶向抑制CXCL10的表达减轻LPS诱导的HK-2肾小管上皮细胞损伤。 展开更多
关键词 miR-16-5p hk-2细胞 肾小管上皮细胞 CXC趋化因子配体10(CXCL10) 急性肾损伤
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高糖通过激活活性氧介导的NF-κB信号通路诱导HK-2人肾小管上皮细胞转分化 被引量：9
9
作者 张磊 金华 +2 位作者 王亿平 王东 李卓娅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期313-319,共7页
目的基于活性氧/核因子κB(ROS/NF-κB)信号通路探讨高糖诱导的人肾小管上皮细胞转分化机制。方法 HK-2正常人近端肾小管上皮细胞随机分为空白对照组、渗透压对照组、高糖组、吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组。用相差显微镜观察细胞形态、... 目的基于活性氧/核因子κB(ROS/NF-κB)信号通路探讨高糖诱导的人肾小管上皮细胞转分化机制。方法 HK-2正常人近端肾小管上皮细胞随机分为空白对照组、渗透压对照组、高糖组、吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组。用相差显微镜观察细胞形态、噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞内ROS含量, ELISA检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot法检测细胞NF-κBp65、磷酸化的NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)和IκB激酶α(IKKα)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的蛋白水平;免疫细胞化学法检测细胞NF-κBp65、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果高糖组细胞变成长梭形或不规则形,边缘可呈现放射状,细胞间隙变大,折光度下降,排列不整齐。同时细胞活性随处理时间的延长不断下降, PDTC组细胞活性较高糖组高。与空白对照组相比,高糖组ROS及MDA含量增加、SOD活性下降, PDTC组ROS及MDA含量较高糖组减少、SOD活性较高糖组增强。与空白组比较,高糖组NF-κBp65、p-IκBα、IKKα、MCP-1、ICAM-1蛋白水平增加;与高糖组比较PDTC组以上蛋白水平降低。与空白组比较,高糖组NF-κBp65及α-SMA的阳性细胞所占比率升高、E-cadherin的阳性细胞所占比率降低;与高糖组比较, PDTC组NF-κBp65及α-SMA的阳性细胞所占比率降低、E-cadherin的阳性细胞比率升高。结论高糖可以诱导HK-2细胞发生上皮间质转化, ROS介导的NF-κB信号通路的激活参与以上进程, PDTC可阻断该过程。 展开更多
关键词 hk-2细胞 上皮间质转化 核因子κB(NF-κB) 活性氧(ROS)
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中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白对肾小管上皮HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制 被引量：3
10
作者 张吟眉 张捷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1297-1300,1305,共5页
目的观察中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在HK-2肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤中的作用以及对自噬的调控作用。方法设计并合成3组NGAL基因的特异性短发夹RNA(shRNA)序列并转入HK-2细胞,实时定量PCR检测HK-2细胞中NGAL mRNA水平、... 目的观察中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在HK-2肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤中的作用以及对自噬的调控作用。方法设计并合成3组NGAL基因的特异性短发夹RNA(shRNA)序列并转入HK-2细胞,实时定量PCR检测HK-2细胞中NGAL mRNA水平、Western blot法检测NGAL蛋白水平,筛选抑制效率最佳的一组用于后续实验。对NGAL敲减的HK-2细胞进行缺氧/复氧处理,检测微管相关蛋白1轻链3(LC-3)Ⅱ和beclin-1表达水平,并用Cell Titer-Blue细胞活性检测系统和CCK-8法检测细胞活力。结果成功构建3组NGAL基因沉默shRNA质粒,转染HK-2细胞后NGAL mRNA和蛋白水平表达均低于空白载体对照;缺氧/复氧处理后,NGAL敲减的HK-2细胞LC-3Ⅱ和beclin-1表达水平低于空白载体对照,而外加400 ng/m L NGAL的HK-2细胞LC-3Ⅱ及beclin-1水平高于缺氧/复氧对照;用Cell Titer-Blue和CCK-8法检测NGAL敲减组的细胞活力均低于空白载体对照组。结论 NGAL在HK-2肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤起一定保护作用,可能与增强自噬相关。 展开更多
关键词 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 自噬 肾小管上皮hk-2细胞 缺氧/复氧损伤
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雷公藤甲素诱导自噬促进人肾小管上皮HK-2细胞凋亡 被引量：4
11
作者 王春强 云阳 +1 位作者 梁马丹 梁泰刚 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2133-2140,共8页
目的研究自噬在雷公藤甲素(triptolide,TP)诱导人肾近端小管上皮HK-2细胞凋亡中的作用。方法以HK-2细胞为研究对象,CCK-8法检测细胞存活率;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位MMP变化;激光扫描共... 目的研究自噬在雷公藤甲素(triptolide,TP)诱导人肾近端小管上皮HK-2细胞凋亡中的作用。方法以HK-2细胞为研究对象,CCK-8法检测细胞存活率;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位MMP变化;激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内LC3荧光强度变化;Western blot检测细胞凋亡及自噬相关蛋白cleaved caspase 9、caspase 9、Bax、Bcl-2、LC3、p62和Beclin 1的表达;采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)研究自噬对TP诱导HK-2细胞凋亡的影响。结果TP降低HK-2细胞存活率,诱导细胞凋亡和自噬,降低MMP水平,增加胞内LC3Ⅱ荧光强度,上调Beclin 1表达,下调p62表达,升高cleaved caspase 9/caspase 9、Bax/Bcl-2和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。此外,与TP组相比,3-MA+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值降低,p62表达上升,细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用减弱。相反,与TP组相比,Rap+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值上升、p62表达下降,细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用增强。结论TP能够诱导HK-2细胞发生自噬和线粒体途径介导的细胞凋亡,抑制HK-2细胞自噬可降低TP诱导细胞凋亡的发生,因此抑制自噬可能是减轻TP肾毒性的有效干预策略。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 hk-2细胞 凋亡 自噬 肾毒性 3-甲基腺嘌呤 雷帕霉素
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杨桃根DMDD对高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2内质网应激IRE1α通路及炎症反应的抑制作用 被引量：4
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作者 王誉湘 谢静晓 +6 位作者 张晓萍 庞川皓 王璐 陈秋燕 陈林倩 黄仁彬 韦晓洁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1270-1275,共6页
目的研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2内质网应激及炎症反应的抑制作用。方法体外培养HK-2细胞,并分为正常组、高糖组、内质网应激抑制剂4-PBA组(5 mmoL·L^(-1))和... 目的研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2内质网应激及炎症反应的抑制作用。方法体外培养HK-2细胞,并分为正常组、高糖组、内质网应激抑制剂4-PBA组(5 mmoL·L^(-1))和DMDD高、中、低浓度组(8、4、2μmol·L^(-1))。各组细胞培养结束后,采用CCK-8法检测细胞存活率;ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-6的水平;AO/EB染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平、内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP的表达水平以及IRE1α通路相关蛋白(IRE1α、JNK)的磷酸化水平。结果与高糖组比较,DMDD各浓度组细胞存活率明显升高;TNF-α、IL-6水平,Bax/Bcl-2、GRP78、CHOP蛋白表达水平和IRE1α、JNK蛋白磷酸化水平均明显降低,细胞中橙红色荧光明显减少。结论DMDD可能部分通过抑制内质网应激及IRE1α通路相关蛋白的表达,减少炎症反应,达到HK-2细胞的保护作用。 展开更多
关键词 2-十二烷基-6-甲氧基-2 5-二烯-1 4-环己二酮 糖尿病肾病 肾小管上皮细胞 内质网应激 凋亡 IRE1α通路
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T-2毒素对人肾小管上皮细胞HK-2体外增殖和凋亡的影响
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作者 鲜婷婷 韩小敏 +4 位作者 韩春卉 李凤琴 徐文静 张宏元 屠康 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期86-92,共7页
探讨T-2毒素对人肾小管上皮细胞HK-2体外增殖和凋亡的影响。将体外培养的HK-2细胞,经不同浓度的T-2毒素作用72 h后,分别测定T-2毒素对HK-2细胞增殖抑制率、细胞形态、DNA片段化、细胞凋亡率、细胞周期分布和caspase-3活性的影响。结果表... 探讨T-2毒素对人肾小管上皮细胞HK-2体外增殖和凋亡的影响。将体外培养的HK-2细胞,经不同浓度的T-2毒素作用72 h后,分别测定T-2毒素对HK-2细胞增殖抑制率、细胞形态、DNA片段化、细胞凋亡率、细胞周期分布和caspase-3活性的影响。结果表明,T-2 毒素对HK-2细胞具有增殖抑制作用,抑制率随浓度升高而增大,IC 50 值为49.34 nmol/L。T-2毒素在10~40 nmol/L可剂量依赖性的诱导HK-2细胞凋亡,且20 nmol/L下HK-2细胞即可出现染色质固缩等凋亡细胞的典型特征。同时,10~40 nmol/L,T-2毒素可通过引起G 2 /M期阻滞影响细胞的周期分布。此外,T-2毒素在10~40 nmol/L下可引起caspase-3活性剂量依赖性增强,与对照组相比,最大可提高1.93倍( P <0.05)。因此,该研究为阐明T-2毒素的肾脏毒性作用机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 T-2毒素 人肾小管上皮细胞hk-2 体外细胞增殖 细胞凋亡
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人环状RNA_0114428对脂多糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用及其机制 被引量：2
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作者 王亚静 贾宝辉 +4 位作者 韩方方 韩迎东 赵兰兰 石莹 张华 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期101-109,共9页
目的:探讨人环状RNA_0114428(circ_0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ_0114428通过调节微小RNA-139-5p(miR-139-5p)/转化生长因子β受体2(TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法:体外培养H... 目的:探讨人环状RNA_0114428(circ_0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ_0114428通过调节微小RNA-139-5p(miR-139-5p)/转化生长因子β受体2(TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法:体外培养HK-2细胞,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2的靶向调控关系,CCK-8法筛选合适的LPS干预浓度和时间。给予10 mg·L^(-1) LPS干预12 h构建HK-2细胞损伤模型,HK-2细胞分为对照组、LPS组、LPS+circ_0114428沉默对照(LPS+si-NC)组、LPS+circ_0114428沉默(LPS+si-circ_0114428)组、LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂对照(LPS+si-circ_0114428+in-NC)组和LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂(LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p)组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中circ_0114428、miR-139-5p和TGFBR2 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中TGFBR2、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL^(-1)β)水平。结果:双荧光素酶报告基因实验,miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2存在靶向调控关系(t=10.171,P<0.05;t=7.682,P<0.05)。CCK-8法检测LPS干预的最佳浓度为10 mg·L^(-1),最佳干预时间为12 h。与对照组比较,LPS组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-circ_0114428组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显降低(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与LPS+si-circ_0114428+in-NC组比较,LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:circ_0114428能减轻LPS诱导的HK-2细胞损伤,其作用机制可能与调节miR-139-5p/TGFBR2轴有关。 展开更多
关键词 环状RNA_0114428 miR-139-5p 转化生长因子β受体2 脂多糖 人肾小管上皮细胞
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硫化氢对TGF-β1诱导的HK-2细胞上皮间充质转化的抑制作用 被引量：3
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作者 曹慧霞 牛福坤 +3 位作者 尤冠巧 阎磊 朱清 邵凤民 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2012年第5期654-657,共4页
目的:观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分别用10μg/LTGF-β1、100μmol/LNaHS(H2S的供体)及2者联合作用进行干... 目的:观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分别用10μg/LTGF-β1、100μmol/LNaHS(H2S的供体)及2者联合作用进行干预,以正常培养的细胞作正常对照。孵育0、15、30及60min后,Westernblot检测4组细胞磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad2蛋白的表达;孵育48h后,观察细胞形态变化,Westernblot检测4组细胞E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,TGF-β1组细胞发生梭形变,E-cadherin蛋白表达下降(F=1262.535,P<0.001),α-SMA蛋白表达上调(F=1456.030,P<0.001);NaHS+TGF-β1组细胞发生梭形变的程度较TGF-β1组明显减轻,E-cadherin蛋白表达增加(F=65.330,P<0.001),α-SMA蛋白表达下降(F=288.300,P<0.001)。TGF-β1组细胞在15、30及60min时p-Smad2/3表达均较正常对照组增加,而NaHS+TGF-β1组细胞p-Smad2/3的表达较TGF-β1组降低(P<0.05)。结论:H2S可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化,该作用可能部分通过影响Smad2/3磷酸化程度来完成。 展开更多
关键词 硫化氢 肾小管上皮细胞 TGF-Β1 上皮间充质转化 hk-2细胞
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Wnt/β-catenin通路在肾衰康灌肠液抑制HK-2细胞缺氧/复氧损伤的作用 被引量：7
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作者 邓荣荣 罗芯怡 +3 位作者 叶乃菁 吴新萍 王意君 李明权 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1036-1042,共7页
目的观察肾衰康灌肠液(大黄、丹参、红花、黄芪)含药血清对缺氧/复氧损伤人肾小管上皮细胞的保护作用,并探讨其对Wnt/β-catenin通路的影响。方法将新西兰大白兔随机分为对照组、肾衰康高剂量组、PBS组,分别予相应药物灌肠3 d后取血清... 目的观察肾衰康灌肠液(大黄、丹参、红花、黄芪)含药血清对缺氧/复氧损伤人肾小管上皮细胞的保护作用,并探讨其对Wnt/β-catenin通路的影响。方法将新西兰大白兔随机分为对照组、肾衰康高剂量组、PBS组,分别予相应药物灌肠3 d后取血清。以对照组、PBS组、肾衰康高剂量组、肾衰康中剂量组、肾衰康低剂量组兔血清分别处理缺氧/复氧HK-2细胞。以ROS荧光探针检测H/R损伤发生。CFSE/PI法、流式细胞分析联合Annexin V-FITC/PI法分析细胞的损伤/凋亡情况。荧光定量PCR技术考察药物对Wnt4、β-catenin mRNA表达的影响。结果与造模前相比,造模后细胞内ROS表达的荧光强度明显增高。CFSE/PI双染显示,与对照组和PBS组相比,肾衰康高、中、低剂量组细胞死亡率明显降低,且以肾衰康高剂量组死亡率最低。Annexin V-FITC/PI联合流式细胞术检测显示,与对照组[12 h,(45.6±2.2)%]和PBS组[12 h,(41.6±0.7)%]相比,肾衰康低、中、高剂量组均有明显的凋亡/死亡抑制[12 h,低剂量组(14.8±0.3)%,中剂量组(10.3±0.6)%,高剂量组(12.9±0.9)%]。荧光定量PCR结果显示,肾衰康灌肠液含药血清对Wnt4 mRNA表达有显著上调作用,对β-caterin mRNA表达有显著双向调节作用(P<0.05)。结论肾衰康灌肠液含药血清对缺氧/复氧损伤HK-2细胞的凋亡/死亡有明显的抑制效果,其作用可能与激活Wnt/β-catenin通路有关。 展开更多
关键词 肾衰康灌肠液 缺氧/复氧 H/R hk-2细胞 WNT/Β-CATENIN
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肾衰康灌肠液含药血清对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的预防作用 被引量：6
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作者 邓荣荣 罗芯怡 +3 位作者 叶乃菁 吴新萍 谢灯飘 李明权 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期431-436,共6页
目的考察肾衰康灌肠液含药血清对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧损伤的预防作用。方法家兔灌肠给药后采血,离心取血清,分为空白组、PBS组及含药血清高、中、低剂量组。各组血清预培养HK-2细胞24 h后,将细胞随机分为对照组、PBS组及含... 目的考察肾衰康灌肠液含药血清对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧损伤的预防作用。方法家兔灌肠给药后采血,离心取血清,分为空白组、PBS组及含药血清高、中、低剂量组。各组血清预培养HK-2细胞24 h后,将细胞随机分为对照组、PBS组及含药血清高、中、低剂量组,二氯化钴(Co Cl2)进行缺氧/复氧造模,CFSE/PI染色、Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞分析检测造模后细胞凋亡/死亡率,ROS荧光探针检测观察含药血清对空白组、模型组、预防组细胞ROS水平的影响,PCR技术测定PBS组、含药血清组细胞AKT、NF-κB、MAPK mRNA表达。结果与对照组、PBS组比较,含药血清组细胞死亡率明显降低,以高剂量组最显著,并表现出明显的凋亡/死亡率抑制作用。造模后,预防组细胞ROS升高水平明显低于模型组,而且恢复至正常水平时间明显缩短。含药血清组AKT、NF-κB、MAPK mRNA表达先下降(0～4 h)再逐渐上升(4～12 h),并对NF-κB、MAPK mRNA表达呈现一定剂量依赖性,与PBS组比较有显著差异(P<0. 05)。结论肾衰康灌肠液含药血清可预防HK-2细胞缺氧/复氧损伤,其机制可能与抑制细胞氧化应激、减少细胞ROS过量聚积有关。 展开更多
关键词 肾衰康灌肠液 含药血清 缺氧/复氧损伤 hk-2细胞
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彩色多普勒超声照射对中孕胎鼠肾小管上皮细胞bcl-2蛋白表达的影响 被引量：4
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作者 周海燕 段云友 +4 位作者 杨继庆 贾化平 曹铁生 赵柏山 吕发勤 《中国医学影像技术》 CSCD 2004年第5期683-685,共3页
目的　探讨彩色多普勒超声照射对中孕期胎鼠肾小管上皮细胞bcl 2蛋白表达的影响。方法　 3 2只孕 14天SD大鼠按彩超辐照时间不同随机等分为四组 ,Ⅰ组 (对照组 )、Ⅱ组 (照射 10min组 )、Ⅲ组 (照射 2 0min组 )、Ⅳ组 (照射 3 0min组 ) ... 目的　探讨彩色多普勒超声照射对中孕期胎鼠肾小管上皮细胞bcl 2蛋白表达的影响。方法　 3 2只孕 14天SD大鼠按彩超辐照时间不同随机等分为四组 ,Ⅰ组 (对照组 )、Ⅱ组 (照射 10min组 )、Ⅲ组 (照射 2 0min组 )、Ⅳ组 (照射 3 0min组 ) ,仪器采用Acuson公司Sequoia 5 12型彩色电脑声像仪 ,照射条件 :4V1探头 ,二维频率 3 .0MHz ,彩色频率 3 .0MHz ,Tis =1.8,MI =1.6。照射后 2 4h剖宫取胎鼠肾脏标本 ,HE染色光镜观察组织结构 ;免疫组化ABC法检测肾脏bcl 2蛋白的表达 ,采用LeicaQ 5 0 0MC型图像分析仪进行图像分析。结果　Ⅰ～Ⅳ组光镜下观察肾脏组织结构均未见异常 ;免疫组化法检测 ,各组胎鼠肾小管上皮内可见均匀散在的棕黄色淡染的bcl 2蛋白阳性表达 ,图像分析统计结果显示 :Ⅱ组及Ⅲ组胎鼠肾小管上皮bcl 2蛋白阳性表达强度与Ⅰ组无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;Ⅳ组表达强度与Ⅰ组有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　彩色多普勒超声照射中孕期大鼠超过 3 0min可引起胎鼠肾小管上皮细胞bcl 2蛋白表达减少。 展开更多
关键词 超声检查 副作用 bcl-2 肾小管 上皮细胞 实验 动物
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PAX2在肾小管上皮细胞转分化中的作用 被引量：6
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作者 耿文茂 易著文 +4 位作者 何小解 何庆南 党西强 曹艳 莫双红 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期284-287,共4页
目的揭示核转录因子(PAX2)在肾小管上皮细胞转分化过程中的可能作用。方法38例病例组肾组织按间质病变程度分为轻、中、重3组,其中轻度病变15例,中度病变11例,重度病变12例;对照组为5例外伤后肾切除组织。采用免疫组化法评定肾组织PAX2... 目的揭示核转录因子(PAX2)在肾小管上皮细胞转分化过程中的可能作用。方法38例病例组肾组织按间质病变程度分为轻、中、重3组,其中轻度病变15例,中度病变11例,重度病变12例;对照组为5例外伤后肾切除组织。采用免疫组化法评定肾组织PAX2的表达率和肾小管上皮细胞转分化率。对肾间质病变轻、中、重3组组内肾小管上皮细胞转分化率、PAX2表达率作方差分析,对PAX2表达量与肾小管上皮细胞转分化率作相关分析。结果正常对照组肾小管上皮细胞只表达角蛋白(CK),不表达平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及PAX2。病例组肾间质病变轻、中、重3组肾小管上皮细胞均不同程度表达α-SMA及PAX2;不同肾间质病变组,肾小管上皮细胞转分化率及PAX2表达量差异均有统计学意义。相关分析表明,PAX2表达量和肾小管上皮细胞转分化率呈正相关(r=0.886,P<0.05)。结论PAX2回归表达可能导致肾小管上皮细胞转分化。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 转分化 角蛋白 平滑肌肌动蛋白 PAX2
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WNT4基因沉默对PAX2诱导肾小管上皮细胞间充质转分化的影响 被引量：5
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作者 李里 南晓娟 吴玉斌 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期720-725,I0002,I0003,共8页
目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。... 目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。细胞分为稳定转染PAX2组、空载组和对照组。Western blotting法和实时荧光定量(Real-time)PCR法检测各组细胞WNT4和β-catenin表达。应用靶向WNT4基因的siRNA沉默稳定转染PAX2细胞的WNT4,应用荧光显微镜观察转染效率,进行沉默鉴定筛选出最佳干扰链。将最佳干扰链WNT4siRNA转染至稳定转染PAX2细胞。在沉默24、48、72和96h应用Westernblotting法和Real-time PCR法检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达,同时筛选出沉默最佳时间点。应用免疫组织化学染色法检测沉默最佳时间点组E-cadherin和α-SMA蛋白表达。结果:Western blotting和Real-time PCR检测,稳定转染PAX2细胞组WNT4和β-catenin蛋白及mRNA表达水平较空载组和对照组明显增加(P<0.05)。阴性siRNA转染入稳定转染PAX2细胞24h后荧光显微镜观察,转染效率为47.46%±4.48%。3条WNT4干扰链分别转染至稳定转染PAX2细胞,Real-time PCR和Western blotting结果显示第3干扰链沉默效果最佳,WNT4mRNA表达抑制率为66.9%±3.8%(P<0.05);WNT4蛋白表达抑制率为63.7%±2.5%(P<0.05)。将最佳干扰链转染至稳定转染PAX2细胞,干扰24、48、72和96h后,各时间点细胞中的β-catenin mRNA及蛋白表达水平较对照组下调,72h组下调明显(P<0.05);各时间点细胞中E-cadherin mRNA及蛋白表达水平较对照组明显上调,72h组上调明显(P<0.05);各时间点细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平较对照组明显下调,72h下调明显(P<0.05)。结论:PAX2转染至肾小管上皮细胞后激活了WNT4通路,PAX2在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化可能是通过WNT4/β-catenin通路完成。 展开更多
关键词 WNT4 配对盒基因2 肾小管上皮细胞 转分化 RNA干扰
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