HIV-1抗体不确定和阴性者WB条带及病毒载量分析 被引量：8

1

作者 张之 卢静 +3 位作者 徐晓琴 周莹 胡海洋 傅更锋 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第2期131-135,共5页

目的 目前针对病毒载量检测在I型艾滋病病毒(HIV-1)抗体不确定及阴性个体中诊断意义的报道较少。文中旨在通过分析HIV-1抗体不确定和HIV抗体阴性病例的蛋白印迹试验(WB)带型及随访情况,探索病毒载量检测在鉴别HIV-1抗体不确定不同带型和... 目的 目前针对病毒载量检测在I型艾滋病病毒(HIV-1)抗体不确定及阴性个体中诊断意义的报道较少。文中旨在通过分析HIV-1抗体不确定和HIV抗体阴性病例的蛋白印迹试验(WB)带型及随访情况,探索病毒载量检测在鉴别HIV-1抗体不确定不同带型和HIV抗体阴性个案中的作用,评价核酸检测对于WB中HIV-1抗体不确定或HIV抗体阴性个体早诊断的意义。方法 选取2015年至2020年江苏省艾滋病确证中心实验室WB判定为HIV-1抗体不确定和HIV-1抗体阴性的151份样品。分析HIV-1抗体不确定样本WB带型经随访后的阳转情况;分析不同WB带型病毒载量的检测水平;分析不同水平的病毒载量样本经随访后WB条带阳转的情况;分析失访样本中WB带型及检测出病毒载量的分布,评估失访样本的传播风险;探索WB条带为阴性的样本中病毒载量检测率及阳转率。结果 WB带型分析显示,共127份HIV-1抗体不确定和24份HIV抗体阴性,HIV-1抗体不确定共出现9种带型。84份(80.0%)阳转,16份(15.2%)仍为HIV-1抗体不确定,5份(4.8%)为阴性。其中,env+gag区同时出现条带的阳转率最高[71例(95.9%)],gp160+p24+p17带型的阳转率为100%。HIV-1抗体不确定带型与病毒载量的关系结果显示,env+gag区条带的病例病毒载量检出率最高[78例(95.1%)],其中>5000拷贝/mL73份(89.0%),>10 000拷贝/mL72份(87.8%)。不同病毒载量的HIV-1抗体不确定病例的转归情况显示,126份HIV-1抗体不确定样本中进行了核酸检测,94(74.6%)份样本检测出病毒载量,其中86(91.5%)份样本病毒载量>10 000拷贝/mL,32(25.4%)份样本未检出病毒载量。失访样本病毒载量结果分析显示,22份失访样本中,env区条带共17份(77.3%);env+gag区同时出现条带共9份,6(66.7%)例检出病毒载量。结论 核酸检测病毒载量水平作为补充试验能够有效鉴别WB方法判定的不确定结果及阴性结果个体的感染状况,缩短了HIV感染诊断时间,尤其对急性感染期和晚期的HIV感染者的早发现有重要作用,为早发现早治疗提供技术支撑。 展开更多

关键词 hiv-1抗体不确定 HIV抗体阴性 蛋白印迹试验 病毒载量

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HIV-1抗体阳性者WB带型及其在不同临床分期中的特征分析 被引量：17

2

作者 欧阳霖 张铁军 +4 位作者 张颖华 王小光 陈国强 汪静 朱焕章 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期664-667,共4页

目的分析HIV-1抗体阳性者血清中病毒蛋白的变化,探讨不同临床分期HIV-1抗体阳性者Western blot(WB)带型特点。方法应用WB检测HIV-1感染者体内特异性抗体,流式细胞仪检测CD4+T淋巴细胞计数。结果 208例HIV-1抗体阳性者中,男性193例(92.79... 目的分析HIV-1抗体阳性者血清中病毒蛋白的变化,探讨不同临床分期HIV-1抗体阳性者Western blot(WB)带型特点。方法应用WB检测HIV-1感染者体内特异性抗体,流式细胞仪检测CD4+T淋巴细胞计数。结果 208例HIV-1抗体阳性者中,男性193例(92.79%),同性性接触感染163例(78.37%)。WB特异性条带gp160、gp120、gp41、p66、p51、p31、p24维持较高的抗体阳性率,在不同临床分期间差异无统计学意义;异性性行为感染者gag基因编码蛋白的抗体p55条带的出现率高于同性性行为感染者(P<0.05);全带型(1)、次全带型(2)(缺失p55)、次全带型(3)(缺失p39)、次全带型(4)(缺失p55和p39)、次全带型(5)(缺失p55、p39和p17)5种带型为常见带型,全带型出现率最高(44.2%)。结论 HIV-1抗体阳性者的CD4+T淋巴细胞计数有助于判断机体免疫状态、确定疾病分期及监测疾病进展。闵行区艾滋病的防治重点为外来流动人员及男男性行为人群。 展开更多

关键词 hiv-1抗体 WB带型 CD4+T淋巴细胞 临床分期

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HIV-1病毒Nef基因克隆、表达、纯化及其抗体的制备 被引量：4

3

作者 杨凡 刘朝奇 +2 位作者 柳发勇 张伟 王磊黎 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期703-705,共3页

目的:运用基因工程方法制备HIV-1 Nef重组蛋白及其抗体。方法:用PCR技术从HIV-1H×B2质粒中扩增HIV-1 Nef基因,将测序鉴定过的HIV-1 Nef基因克隆到原核表达载体pET28a(+)上,应用酶切鉴定、测序、SDS-PAGE及Western blot等方法鉴定... 目的:运用基因工程方法制备HIV-1 Nef重组蛋白及其抗体。方法:用PCR技术从HIV-1H×B2质粒中扩增HIV-1 Nef基因,将测序鉴定过的HIV-1 Nef基因克隆到原核表达载体pET28a(+)上,应用酶切鉴定、测序、SDS-PAGE及Western blot等方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。纯化的重组蛋白免疫兔3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。用其制备的多克隆抗体通过免疫组织化学方法测定表达Nef基因的内皮细胞。结果:成功地构建了Nef基因的原核表达质粒,测序证明HIV-1Nef基因全长为621bp,编码206个氨基酸。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白为包涵体的形式。HIV-1 Nef蛋白N端融合6×His标签便于纯化及鉴定。获得的高纯度HIV-1 Nef融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1∶10000)。将转染Nef基因的内皮细胞,应用免疫组化的方法证明其抗体有高度的特异性。结论:构建了高表达HIV-1 Nef蛋白的原核表达系统,制备的Nef重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Nef基因的生物学活性提供了实验材料和依据。 展开更多

关键词 hiv-1 NEF 基因表达 抗体 病毒

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抗HIV-1外膜蛋白单链抗体基因的酵母表达和生物活性分析 被引量：4

4

作者 李昌 金宁一 +4 位作者 王宏伟 刘玉生 于芳 佟敬山 胡宁宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1144-1146,共3页

目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性。方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应... 目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性。方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应位点,构建重组酵母表达质粒pPIC9-scFv。BglⅡ线性化后,电转化入受体酵母菌GS115中,筛选阳性重组子,进行甲醇诱导表达,并用RT-PCR、SDS-PAGE、双抗体夹心Dot-ELISA法分析目的蛋白表达情况。结果:通过表型筛选、PCR鉴定获得阳性重组酵母工程菌,RT-PCR、SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到很好表达,表达量可占培养液上清总蛋白量的18%,双抗体夹心Dot-ELISA法检测,表达产物能够特异识别重组HIV-1gp120抗原蛋白并与之发生特异性免疫反应,证明表达的重组scFv具有良好的抗体活性。结论:成功地实现了scFv基因的分泌性表达,为抗AIDS靶向治疗及进一步研究其抗HIV活性提供了依据。 展开更多

关键词 hiv-1 外膜蛋白 单链抗体 酵母分泌表达

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抗HIV-1核心抗原p24单克隆抗体的制备及特性的初步鉴定 被引量：4

5

作者 侯俊 胡燕 +4 位作者 朱雷 沈宏辉 杨健洋 洪世雯 貌盼勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期699-701,共3页

目的 :建立分泌抗HIV 1p2 4单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株 ,并对其特性进行初步鉴定。方法 :以纯化的基因工程制备的p2 4抗原免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 /0骨髓瘤细胞融合 ,经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后 ... 目的 :建立分泌抗HIV 1p2 4单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株 ,并对其特性进行初步鉴定。方法 :以纯化的基因工程制备的p2 4抗原免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 /0骨髓瘤细胞融合 ,经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后 ,用间接ELISA法及Dotblot对其进行筛选和特性鉴定。结果 :筛选到 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,其腹水效价为 1×10 -5,亲和力为 1.7× 10 4～ 1.8×10 4mol/L ,mAb的Ig亚类均为IgG1。两株mAb与HBcAg、HCVRNA阳性血清及HIVgp4 1等均无交叉反应 ,只与HIV 1p2 4抗原阳性血清产生特异反应。结论 :成功地建立了 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,为进一步研制HIV 1p2 展开更多

关键词 hiv-1 P24抗原 单克隆抗体 杂交瘤

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抗HIV-1 p24单克隆抗体的制备、特性鉴定及初步应用 被引量：3

6

作者 张红中 王润田 +3 位作者 王蕙芬 张坤娟 王从印 王丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期646-647,共2页

目的:制备抗HIV1p24单克隆抗体(mAb)及特性鉴定。方法:采用细胞融合技术制备可稳定分泌抗HIV1p24mAb的杂交瘤细胞。选择高效价、识别不同抗原表位的mAb纯化后,分别包被ELISA板及作为酶标记mAb,建立双mAb夹心ELISA法,检测400份正常人血浆... 目的:制备抗HIV1p24单克隆抗体(mAb)及特性鉴定。方法:采用细胞融合技术制备可稳定分泌抗HIV1p24mAb的杂交瘤细胞。选择高效价、识别不同抗原表位的mAb纯化后,分别包被ELISA板及作为酶标记mAb,建立双mAb夹心ELISA法,检测400份正常人血浆,20份抗HIV抗体阳性(p24抗原阴性)的血浆,20份HIV1感染的细胞培养上清及HIV1p24抗原国家参考品,并同时用进口p24抗原检测试剂盒进行对比检测。结果:经细胞融合、筛选、克隆化,共获得10株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选A值≥2.50的2株mAb建立的双mAb夹心ELISA法,敏感性可达2.5ng/L,且与进口试剂盒检测结果的一致性良好。结论:建立了具有高度敏感性和特异性的双mAb夹心ELISA法,为研制可用于检测HIV1p24抗原的试剂盒奠定了基础。 展开更多

关键词 hiv-1 P24 单克隆抗体 ELISA

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HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：4

7

作者 楚鹰 宫祥丹 +5 位作者 高建伟 苏艾荣 陈德燕 宋红勇 吴喜林 吴稚伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期540-545,共6页

目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠... 目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒1型(hiv-1) gp120可变区1/2 单克隆抗体 真核蛋白表达 疫苗

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尿液HIV-1抗体检测及其临床意义 被引量：6

8

作者 郭婧婧 徐丹 +2 位作者 王敏 谢巍巍 刘文恩 《中国感染控制杂志》 CAS 2010年第1期22-24,共3页

目的探讨尿液标本中人免疫缺陷病毒(HIV)-1抗体检测的临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对59例经疾病预防控制中心(CDC)确诊的HIV感染者及30例健康体检者血液和尿液标本同时进行HIV-1抗体检测;以确认结果为准,计算尿液HIV-1抗... 目的探讨尿液标本中人免疫缺陷病毒(HIV)-1抗体检测的临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对59例经疾病预防控制中心(CDC)确诊的HIV感染者及30例健康体检者血液和尿液标本同时进行HIV-1抗体检测;以确认结果为准,计算尿液HIV-1抗体检测的敏感度、特异度。结果 59例经CDC确诊的HHIV感染者血清HIV-1抗体全部阳性,相应尿液中HIV-1抗体阳性53例,阴性6例;对照组30例的血清HIV-1抗体全部阴性,相应尿液1例HIV-1抗体阳性,经血清ELISA法及胶体硒法对该样本进行HIV-1抗体检测均阴性。以确认结果为准,尿液HIV-1抗体检测阳性敏感度为89.83%,特异度为96.67%。结论在采集血液标本不便的情况下,可通过检测尿液HIV-1抗体对高危人群进行HIV感染筛查。 展开更多

关键词 人免疫缺陷病毒 艾滋病 尿液 hiv-1抗体 实验室技术和方法

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抗HIV-1 gp120单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控型表达载体构建及表达 被引量：2

9

作者 王宏 金宁一 +4 位作者 金洪涛 张立树 江文正 徐一鸣 连海 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第11期38-41,共4页

人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因，将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT，并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—S... 人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因，将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT，并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—SL120，经条件优化，pBV—120和pBV—SL120分别在E．coli BL21(DE3)plys中44℃诱导6h、42℃诱导7h获得最佳表达，表达量分别占菌体总蛋白的27．673％和32．519％。目的蛋白经包涵体洗脱、分子筛层析折叠复性后可与HIV—1抗原条发生良好的结合反应。 展开更多

关键词 GP120 原核 单链抗体 HIV—1 抗hiv-1 基因 BV 密码子 表达载体构建 融合蛋白

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抗HIV-1 Tat蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定 被引量：1

10

作者 许晶 王媛 +3 位作者 于澜 史梦远 黎志东 徐志凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期491-492,共2页

目的:制备抗HIV-1Tat蛋白的单克隆抗体(mAb),并对其进行初步鉴定。方法:通过动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗Tat蛋白的mAb,并用ELISA法对所得mAb的特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。结果:获得了3株抗Tat蛋白的mAb,这3... 目的:制备抗HIV-1Tat蛋白的单克隆抗体(mAb),并对其进行初步鉴定。方法:通过动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗Tat蛋白的mAb,并用ELISA法对所得mAb的特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。结果:获得了3株抗Tat蛋白的mAb,这3株mAb均能特异识别Tat蛋白。结论:获得了3株杂交瘤细胞系,均可以稳定分泌抗HIV-1Tat蛋白的mAb,有望为HIV早期检测及HIV抗病毒治疗提供有用工具。 展开更多

关键词 hiv-1 TAT 单克隆抗体

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HIV-1囊膜糖蛋白gp41三聚体结构域基因的表达及其单克隆抗体的制备 被引量：1

11

作者 陈峥 徐志凯 +2 位作者 黄庆生 黎志东 姜世勃 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期487-489,共3页

目的 :表达HIV 1囊膜糖蛋白gp4 1三聚体结构域基因N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并制备针对该融合蛋白的单克隆抗体 (mAb) ,为筛选抗HIV多肽及分析gp4 1表位的免疫原提供抗体工具。方法 :在BL2 1(DE3)中诱导表达N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,经mAb... 目的 :表达HIV 1囊膜糖蛋白gp4 1三聚体结构域基因N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并制备针对该融合蛋白的单克隆抗体 (mAb) ,为筛选抗HIV多肽及分析gp4 1表位的免疫原提供抗体工具。方法 :在BL2 1(DE3)中诱导表达N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,经mAbNC 1鉴定后 ,采用小鼠腹股沟皮下NC膜免疫的方法免疫小鼠 ,并进行细胞融合、克隆化制备抗N5 1(L6 )C4 6mAb ,用ELISA法初步鉴定其特异性位点。结果 :获得了高表达的N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并能与识别特异性空间构象的mAbNC 1反应。用该融合蛋白免疫小鼠后 ,获得了 6株抗N5 1(L6 )C4 6的mAb ,这 6株mAb均特异识别兔抗N36 (L6 )C34抗体捕获的融合蛋白 ,但不与N36或C34多肽片段反应。结论 :得到高效表达融合蛋白N5 1(L6 )C4 6 ,并呈现gp4 1核心结构空间构象。用此蛋白免疫小鼠得到 6株特异结合gp4 展开更多

关键词 hiv-1 GP41 原核表达 单克隆抗体

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HIV-1广谱中和性单克隆抗体的研究进展 被引量：1

12

作者 罗文 张庆燕 张吉翔 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1220-1222,共3页

从HIV感染患者血清中分离的针对HIV-1包膜上保守表位的中和性单克隆抗体(mAb)很多,识别的表位分别是HIV-1gp120上CD4结合位点(CD4bs),gp41的跨膜前域MPER,gp120表面包膜的高甘露聚糖,gp120上V2/V3环,这些抗体对HIV-1疫苗免疫原的研究设... 从HIV感染患者血清中分离的针对HIV-1包膜上保守表位的中和性单克隆抗体(mAb)很多,识别的表位分别是HIV-1gp120上CD4结合位点(CD4bs),gp41的跨膜前域MPER,gp120表面包膜的高甘露聚糖,gp120上V2/V3环,这些抗体对HIV-1疫苗免疫原的研究设计至关重要。本文主要综述了各中和性单克隆抗体的结构特征,识别的表位,抗体与病毒包膜之间的相互作用。 展开更多

关键词 hiv-1疫苗 单克隆抗体 GP120 广谱 保守表位 感染患者 结合位点 GP41

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抗HIV-1gp41合成多肽gp41-5单克隆抗体的制备及初步鉴定 被引量：1

13

作者 于澜 徐志凯 +4 位作者 王海涛 张芳琳 白文涛 司瑞 胡刚 《科学技术与工程》 2006年第2期127-130,共4页

制备抗HIV-1gp41合成多肽gp41-5的单克隆抗体(mAb),为筛选抗HIV-1多肽及分析gp41的抗原表位提供有用工具。常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗gp41-5多肽mAb,并用ELISA法对其特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。获得了... 制备抗HIV-1gp41合成多肽gp41-5的单克隆抗体(mAb),为筛选抗HIV-1多肽及分析gp41的抗原表位提供有用工具。常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗gp41-5多肽mAb,并用ELISA法对其特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。获得了4株抗gp41-5多肽的mAb,这4株mAb均特异识别gp41-5多肽,但不与gp41的N36或C34多肽片段反应。得到的4株mAb能特异结合gp41核心结构的空间构象。 展开更多

关键词 hiv-1 GP41 gp41-5单克隆抗体

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人源性抗HIV-1 V3环噬菌体抗体的基因克隆与序列分析

14

作者 毛春生 李季枝 +3 位作者 宋宏彬 于长明 杜桂鑫 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期178-181,共4页

以HIV1gp120V3环的合成环肽为抗原,从人的噬菌体抗体组合文库中,筛选出与HIV1V3肽具有结合活性的人源性噬菌体抗体(Fab段)。用ELISA测定其活性,竞争抑制实验证实了该噬菌体抗体的特异性。序列分析表明,重链基因为IgG1亚类,可变区属VHI亚... 以HIV1gp120V3环的合成环肽为抗原,从人的噬菌体抗体组合文库中,筛选出与HIV1V3肽具有结合活性的人源性噬菌体抗体(Fab段)。用ELISA测定其活性,竞争抑制实验证实了该噬菌体抗体的特异性。序列分析表明,重链基因为IgG1亚类,可变区属VHI亚组,与胚系基因DP88的同源性最高,D区为D33,J区为JH5;轻链为κ亚型,可变区属VLIV亚群,D区为DPK22,J链为JK4胚系。 展开更多

关键词 噬菌体抗体 hiv-1 V3环 核苷酸序列 基因克隆

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HIV-1 Gag多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的抗体制备

15

作者 柳发勇 韩莉 +3 位作者 刘朝奇 覃晓琳 杨凡 余枫华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期146-149,160,共5页

旨在通过构建Gag的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV诊断及可能的疫苗制备提供试验基础。选定HIV-1 Gag基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基... 旨在通过构建Gag的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV诊断及可能的疫苗制备提供试验基础。选定HIV-1 Gag基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western blotting测定融合蛋白的表达,并免疫动物制备相应抗体。结果显示,构建的HIV-1 Gag多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长576bp。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为27kD,以包涵体的形式存在。纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体IgG。ELISA和免疫荧光方法检测显示制备的多克隆抗体能具有特异性反应。成功构建和高表达了HIV-1 Gag多表位融合蛋白,纯化蛋白制备的抗体与HIV-1Gag有特异性结合。为进一步研究HIV-1奠定了试验基础。 展开更多

关键词 hiv-1 Gag嵌合基因 蛋白表达 抗体 免疫原性

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抗HIV-1gp120单克隆抗体的制备及其初步应用 被引量：3

16

作者 安庆军 王润田 +3 位作者 张坤娟 郝林娟 张红中 王蕙芬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期743-744,共2页

目的: 制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体(mAb),并建立一种可用于检测gp120的ELISA法.方法: 采用基因工程抗原HIV-1 gp120免疫BALB/c小鼠, 通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1 gp120的mAb.用ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、效价及特异性.用饱和硫酸铵(... 目的: 制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体(mAb),并建立一种可用于检测gp120的ELISA法.方法: 采用基因工程抗原HIV-1 gp120免疫BALB/c小鼠, 通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1 gp120的mAb.用ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、效价及特异性.用饱和硫酸铵(SAS)纯化mAb,并用HRP标记后建立双mAb夹心ELISA法.结果: 筛选出10株稳定分泌抗HIV-1 gp120 mAb的杂交瘤细胞株,9株为IgG,其中4株的腹水效价为32×10-4～256×10-4.所得mAb与HIV-1 gp41、HIV-1 p24及HIV-2 gp36 Ag均无交叉反应,仅与HIV-1 gp120产生特异性反应.用 mAb 6H9和9H12建立了双夹心ELISA法, 检测gp120抗原的灵敏度是10 μg/L.结论: 获得10株特异性强、效价高的抗HIV-1 gp120的mAb, 并建立了灵敏度良好的双mAb夹心ELISA法. 展开更多

关键词 hiv-1 GP120 单克隆抗体 杂交瘤

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HIV-1可溶性单链抗体b12-scFv的表达与活性分析 被引量：2

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作者 杨雄 刘秀侠 +2 位作者 南昊 许晓东 陈红英 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第5期205-210,216,共7页

【目的】合成并克隆HIV-1单克隆抗体b12的单链抗体基因,在大肠杆菌中诱导表达,并分析表达产物的活性。【方法】以单抗b12的重链和轻链全基因为模板,分别扩增其可变区基因片段后,用重叠PCR的方法将二者拼接起来,形成scFv-VL-Linker-VH结... 【目的】合成并克隆HIV-1单克隆抗体b12的单链抗体基因,在大肠杆菌中诱导表达,并分析表达产物的活性。【方法】以单抗b12的重链和轻链全基因为模板,分别扩增其可变区基因片段后,用重叠PCR的方法将二者拼接起来,形成scFv-VL-Linker-VH结构,并将其插入pET28a载体,构建原核表达载体pETb12-scFv。将pETb12-scFv转入大肠杆菌BL21StarTM(DE3),经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析;用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达产物进行分离纯化,用酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测纯化蛋白与HIV-1gp120的结合活性。【结果】得到了b12的单链抗体基因b12-scFv,长度为768bp;SDS-PAGE电泳结果显示,b12-scFv表达量较高,蛋白质分子质量约为29ku,主要以可溶性蛋白的形式存在,但也有部分形成不溶的包涵体;纯化后蛋白的产量约为2mg/L;活性检测结果表明,b12-scFv对分泌表达和锚定在细胞膜表面的HIV-1gp120都具有良好的特异性结合活性。【结论】单链抗体b12-scFv可以用于HIV-1受体结合位点的表位检测。 展开更多

关键词 hiv-1 单链抗体 B12 载体构建 亲和纯化 抗原结合活性

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抗HIV-1 gp41多肽单克隆抗体的研究 被引量：1

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作者 范涛 貌盼勇 +3 位作者 洪世雯 梁勇 冯传前 何红霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期54-55,共2页

抗ＨＩＶ－１ｇｐ４１多肽单克隆抗体的研究范涛貌盼勇洪世雯梁勇冯传前何红霞（解放军３０２医院病毒研究室，北京１０００３９）爱滋病（ＡＩＤＳ）是人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染所致一种严重传染性疾病，目前对其感染还没有安全... 抗ＨＩＶ－１ｇｐ４１多肽单克隆抗体的研究范涛貌盼勇洪世雯梁勇冯传前何红霞（解放军３０２医院病毒研究室，北京１０００３９）爱滋病（ＡＩＤＳ）是人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染所致一种严重传染性疾病，目前对其感染还没有安全、有效的治疗方法和疫苗。１９８４年... 展开更多

关键词 单克隆抗体 抗hiv-1 多肽 鉴定

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HIV-1疫苗诱导与自然感染产生抗体鉴别诊断试纸研制及评价

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作者 袁作为 王永红 +1 位作者 黄俊 叶杨敏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期678-683,共6页

目的研制区分HIV-1自然感染与HIV-1疫苗诱导产生抗体的鉴别诊断试纸条,并对其诊断性能进行评价。方法将前期利用原核表达获取的HIV-1包膜蛋白gp41和鉴别融合肽段SK1-SK2-SK3分别包被NC膜,结合胶体金标记抗人蛋白A,研制新型HIV-1抗体鉴... 目的研制区分HIV-1自然感染与HIV-1疫苗诱导产生抗体的鉴别诊断试纸条,并对其诊断性能进行评价。方法将前期利用原核表达获取的HIV-1包膜蛋白gp41和鉴别融合肽段SK1-SK2-SK3分别包被NC膜,结合胶体金标记抗人蛋白A,研制新型HIV-1抗体鉴别诊断试纸条;采用新型试纸条检测评价HIV-1阳性血清、HIV阴性血清、HIV血清盘、HIV天坛疫苗血清及其他交叉反应血清,并与ELISA结果进行对比。结果成功研制了HIV-1疫苗诱导与自然感染产生抗体的鉴别诊断试纸条,SK1-SK2-SK3检测灵敏度为93.5%,检测特异性为100.0%,联合gp41后的HIV-1检出灵敏度可达100.0%;试纸条检测结果与ELISA检测结果一致(P>0.05);采用该试纸条检测天坛疫苗血清,SK1-SK2-SK3检测带均为阴性,避免了gp41条带检出的假阳性结果。结论该新型HIV-1抗体诊断试纸条能够有效区分HIV-1自然感染与HIV-1疫苗接种后产生的抗体,避免目前市售试剂盒的假阳性诊断。 展开更多

关键词 hiv-1 自然感染 疫苗 抗体 鉴别诊断 诊断试剂盒

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HIV-1 p24抗原检测的应用研究 被引量：5

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作者 尹红章 李秀华 +2 位作者 孟淑芳 宋爱京 李德富 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期151-152,154,共3页

目的 :用抗HIV 1p2 4单克隆抗体和多克隆抗体构建的间接ELISA试剂 ,检测HIV 1抗体阳性及其它样品 ,探讨应用的可行性。方法 :采用单克隆抗体固相、兔抗HIV 1p2 4抗体夹心 ,羊抗兔HRP结合物的间接ELISA法。结果 :显示试剂盒HIV 1p2 4抗... 目的 :用抗HIV 1p2 4单克隆抗体和多克隆抗体构建的间接ELISA试剂 ,检测HIV 1抗体阳性及其它样品 ,探讨应用的可行性。方法 :采用单克隆抗体固相、兔抗HIV 1p2 4抗体夹心 ,羊抗兔HRP结合物的间接ELISA法。结果 :显示试剂盒HIV 1p2 4抗原检出灵敏度为 5 0pg/ml(基因工程抗原 ) ;特异性 99 46 % ;HIV抗体阳性血样阳性率 3 2 % ;抗体阴性的特殊人群血样阳性率 3 9% ;抗体不确定血样阳性率为 15 4% ,明显高于抗体阳性和阴性组血样。病毒培养 1d ,抗原效价 1∶80 ,第 3天可达1∶5 12 0。结论 :该间接夹心HIV 1p2 4抗原检测试剂灵敏度高、特异性好 ,可应用于HIV感染的辅助检测及病毒的基础研究。 展开更多

关键词 hiv-1p24 ELISA 单克隆抗体 艾滋病

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