枇杷HD-ZipⅠ转录因子家族全基因组鉴定及表达模式分析 被引量：1

1

作者 赵双 朱静雯 +4 位作者 陈甜甜 王鹏凯 郄红丽 王化坤 尤伟忠 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期2025-2037,共13页

【目的】同源结构域-亮氨酸拉链(HD-Zip)转录因子参与多种植物的非生物胁迫响应过程。然而,在枇杷中,HD-ZipⅠ基因家族尚未被鉴定。【方法】利用生物信息学方法对全基因组范围内枇杷HD-ZipⅠ基因家族成员进行鉴定和综合分析,通过qRT-PC... 【目的】同源结构域-亮氨酸拉链(HD-Zip)转录因子参与多种植物的非生物胁迫响应过程。然而,在枇杷中,HD-ZipⅠ基因家族尚未被鉴定。【方法】利用生物信息学方法对全基因组范围内枇杷HD-ZipⅠ基因家族成员进行鉴定和综合分析,通过qRT-PCR法分析基因家族成员在枇杷不同组织和干旱胁迫下的表达特征。【结果】在枇杷基因组中筛选出20个HD-ZipⅠ家族成员。共线性分析结果发现了3对串联复制序列和22对片段复制序列,表明串联复制和片段复制可能促进了枇杷HD-ZipⅠ基因家族的扩张。蛋白序列比对分析表明,所有的HD-ZipⅠ家族成员均具有高度保守的HD和Zip结构域。系统发育分析表明,枇杷HD-ZipⅠ家族可以分为7个分支。HD-ZipⅠ各基因在枇杷不同组织中的表达模式有所差异。启动子序列分析表明,HD-ZipⅠ家族成员的启动子上含有多个与干旱胁迫和胁迫相关激素信号响应的顺式作用元件。干旱处理能够诱导EjHB9、EjHB10、EjHB17、EjHB18和EjHB20在叶片中的表达显著上调,预示着这些基因参与枇杷对干旱胁迫的响应。【结论】鉴定出5个受干旱胁迫显著诱导表达的枇杷HD-ZipⅠ基因,为进一步研究HD-ZipⅠ基因在响应枇杷干旱胁迫中的分子功能提供理论依据。 展开更多

关键词 枇杷 hd-zipⅰ转录因子 全基因组鉴定 表达分析

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苹果果实HD-ZipⅠ转录因子亚家族基因鉴定及表达分析 被引量：5

2

作者 亢键 姜永华 +2 位作者 王豪杰 杨艳青 任小林 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期160-165,共6页

转录因子在调控苹果果实成熟衰老过程中起到至关重要的作用。利用生物信息学方法从苹果基因组数据库筛选出22个HD-ZipⅠ转录因子家族成员并进行分类。通过对不同组织基因表达特异性分析,筛选出6个在成熟果实中表达的基因,进一步分析其... 转录因子在调控苹果果实成熟衰老过程中起到至关重要的作用。利用生物信息学方法从苹果基因组数据库筛选出22个HD-ZipⅠ转录因子家族成员并进行分类。通过对不同组织基因表达特异性分析,筛选出6个在成熟果实中表达的基因,进一步分析其在果实成熟贮藏过程中的表达差异。实时荧光定量PCR分析结果表明,在‘富士’果实采后贮藏过程中,有3个家族成员的表达与乙烯存在不同程度的联系,其中MdHZ 6在果实常温贮藏中的表达与内源乙烯含量变化有较高的相关性,且均在35d达到峰值;MdHZ 15和MdHZ 17在内源乙烯高峰之前有显著上调,预测三者与苹果的成熟衰老相关。 展开更多

关键词 苹果 hd-zipⅰ 转录因子 表达分析

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植物HD-Zip转录因子的生物学功能 被引量：27

3

作者 王宏 李刚波 +4 位作者 张大勇 蔺经 盛宝龙 韩金龙 常有宏 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1179-1188,共10页

HD-Zip转录因子属于Homeobox蛋白家族,是植物特异转录因子,由高度保守的HD(Homeodomain)结构域和Leu zipper(Zip)元件组成,前者与DNA特异结合,后者介导蛋白二聚体的形成。HD-Zip转录因子家族包括4个亚家族(HD-ZipⅠ-Ⅳ),其成员通过与其... HD-Zip转录因子属于Homeobox蛋白家族,是植物特异转录因子,由高度保守的HD(Homeodomain)结构域和Leu zipper(Zip)元件组成,前者与DNA特异结合,后者介导蛋白二聚体的形成。HD-Zip转录因子家族包括4个亚家族(HD-ZipⅠ-Ⅳ),其成员通过与其他蛋白互作、参与激素介导的信号途径,从而调控植物生长发育、光形态建成、花发育、果实发育和植物对逆境应答等生物学过程。文章对近几年关于植物HD-Zip转录因子参与上述生物学功能方面的研究进行了综述,以期对新功能基因的挖掘和应用研究以及HD-Zip调控机制的阐明奠定基础。 展开更多

关键词 hd-zip转录因子 生物学功能 基因表达 蛋白互作 激素途径

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小黑杨HD-Zip转录因子家族生物信息学及应答盐胁迫分析 被引量：5

4

作者 张雪梅 姚文静 +2 位作者 赵凯 姜廷波 周博如 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期715-721,共7页

HD-Zip转录因子基因是植物中特有的一类蛋白家族,在植物生长发育和逆境应答胁迫过程中发挥重要作用。HD-Zip转录因子基因是由高度保守的同源异型结构域(HD)和亮氨酸拉链域(LZ)结构域构成的特殊结构模型。杨树HD-Zip转录因子家族共有63... HD-Zip转录因子基因是植物中特有的一类蛋白家族,在植物生长发育和逆境应答胁迫过程中发挥重要作用。HD-Zip转录因子基因是由高度保守的同源异型结构域(HD)和亮氨酸拉链域(LZ)结构域构成的特殊结构模型。杨树HD-Zip转录因子家族共有63个基因,可被分为HD-ZipⅠ、HD-ZipⅡ、HD-ZipⅢ和HD-ZipⅣ四个亚家族。本文利用RNA-Seq分析了盐胁迫条件下HD-Zip基因家族在小黑杨根、茎、叶等不同组织的基因表达差异,从转录组水平揭示其应答胁迫环境的分子机制,结果表明,盐胁迫下在叶中有25个HD-Zip基因下调表达,21个基因上调表达;茎中有42个基因下调表达,11个基因上调表达;根中有26个基因下调表达,24个基因上调表达。另外,本文根据拟南芥HD-Zip转录因子家族基因的已知功能,预测了杨树HD-Zip转录因子同源基因的功能,并利用生物信息学方法分析了杨树HD-Zip转录因子蛋白序列的保守结构域、氨基酸组成和理化性质等,为进一步研究杨树HD-Zip转录因子基因功能提供参考。 展开更多

关键词 hd-zip转录因子 非生物胁迫 生长发育 小黑杨 生物信息学

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苜蓿HD-Zip转录因子基因Mfhb-1的生物信息学分析

5

作者 周岩 魏琦超 何男男 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第16期124-126,共3页

采用生物信息学方法对苜蓿Mfhb-1基因的功能、一般理化性质、疏水性、二级结构和亚细胞定位进行分析,并进行同源建模。结果表明,该基因包含一个861 bp的ORF,编码长度为286个氨基酸残基的HD-Zip转录因子。该转录因子为一个亲水性的蛋白,... 采用生物信息学方法对苜蓿Mfhb-1基因的功能、一般理化性质、疏水性、二级结构和亚细胞定位进行分析,并进行同源建模。结果表明,该基因包含一个861 bp的ORF,编码长度为286个氨基酸残基的HD-Zip转录因子。该转录因子为一个亲水性的蛋白,具有α-螺旋、无规则卷曲等二级结构元件,定位于细胞核中。 展开更多

关键词 苜蓿 hd-zip转录因子 Mfhb-1基因 生物信息学分析

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PEG-6000模拟干旱胁迫下菊芋HD-Zip基因家族的鉴定及表达分析

6

作者 赵孟良 任延靖 刘颖 《江苏农业科学》 北大核心 2025年第15期37-44,共8页

通过对PEG-6000(聚乙二醇-6000)模拟干旱胁迫下的菊芋转录组数据进行分析处理,筛选出与响应干旱胁迫密切相关的HD-Zip转录因子,利用在线工具ExPASy-ProtParam tool、MEME 3.0、DNAMAN 9.0、MEGA X软件,对菊芋HD-Zip基因家族成员的蛋白... 通过对PEG-6000(聚乙二醇-6000)模拟干旱胁迫下的菊芋转录组数据进行分析处理,筛选出与响应干旱胁迫密切相关的HD-Zip转录因子,利用在线工具ExPASy-ProtParam tool、MEME 3.0、DNAMAN 9.0、MEGA X软件,对菊芋HD-Zip基因家族成员的蛋白质理化性质、保守基序、家族进化关系以及与模式植物拟南芥的系统进化关系进行系统分析,并采用qRT-PCR方法对干旱胁迫下菊芋叶片中HD-Zip基因家族成员的转录水平进行检测。结果表明,ExPASy-ProtParam tool分析显示,菊芋中HD-Zip基因的序列长度为330~1956 bp,平均序列长度为856 bp;能编码氨基酸的数量为109~651个,平均为284个;分子量为27 284.81~161 890.14 u,平均为70 269.39 u;等电点为4.94~5.30;HtHD-Zip基因含有保守的Motif基序的长度为15~50个碱基。进化分析结果显示,HD-Zip基因分为了六大类。qRT-PCR结果分析显示,在PEG-6000模拟干旱胁迫18 h时,HtHD-Zip4、HtHD-Zip7、HtHD-Zip17、HtHD-Zip23、HtHD-Zip25、HtHD-Zip26、HtHD-Zip30、HtHD-Zip34这8个基因明显受到干旱胁迫的诱导表达,其表达量显著上升;其中HtHD-Zip34表达量的涨幅最为显著,上升了11.9倍。研究结果表明,HtHD-Zip基因参与菊芋抵御干旱胁迫的过程。 展开更多

关键词 菊芋 hd-zip基因 转录因子 鉴定分析 干旱胁迫

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植物转录因子HD-Zip基因家族参与逆境胁迫的研究进展 被引量：7

7

作者 罗少 唐翠明 +4 位作者 戴凡炜 王振江 冀宪领 吴福安 罗国庆 《南方农业》 2021年第35期173-175,共3页

HD-Zip基因家族是近年来发现的一类在植物的生长发育过程中起到重要调节作用的转录因子,该基因家族是植物中特有的。所有HD-Zip转录因子都包含同源异型盒和亮氨酸拉链2个结构域,根据基因结构和功能可分为4个亚家族。该家族基因具有多种... HD-Zip基因家族是近年来发现的一类在植物的生长发育过程中起到重要调节作用的转录因子,该基因家族是植物中特有的。所有HD-Zip转录因子都包含同源异型盒和亮氨酸拉链2个结构域,根据基因结构和功能可分为4个亚家族。该家族基因具有多种生物学功能。基于此,结合HD-Zip转录因子的结构和亚家族分类,综述近年来HD-Zip转录因子参与植物逆境胁迫响应的相关研究进展。 展开更多

关键词 hd-zip 转录因子 逆境胁迫 抗旱 抗盐 抗低温

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β3肾上腺素受体调节肝细胞核因子活性促进肝细胞载脂蛋白A-Ⅰ基因的转录

8

作者 曹晓菁 李艳芳 金泽宁 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2019年第9期971-975,共5页

目的探讨β3肾上腺素受体(β3-AR)对肝细胞载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)基因转录的调控作用。方法不同浓度(10^-5~10^-10 mol/L)β3-AR激动剂(BRL37344)和拮抗剂(SR59230A)分别孵育HepG2细胞,CCK8检测细胞活性。将HepG2细胞分为对照组、激动剂... 目的探讨β3肾上腺素受体(β3-AR)对肝细胞载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)基因转录的调控作用。方法不同浓度(10^-5~10^-10 mol/L)β3-AR激动剂(BRL37344)和拮抗剂(SR59230A)分别孵育HepG2细胞,CCK8检测细胞活性。将HepG2细胞分为对照组、激动剂组(10^-6 mol/L的BRL37344)和拮抗剂组(10^-7 mol/L的SR59230A),孵育6 h;RT-qPCR检测apoA-ⅠmRNA表达;ELISA检测细胞外基质apoA-Ⅰ分泌水平;染色质免疫共沉淀联合RT-PCR检测肝细胞核因子(HNF)-4和HNF-3及早期生长反应蛋白1(EGR-1)。结果HepG2细胞在10^-6~10^-8 mol/L的BRL37344和SR59230A区间内生长增殖良好,孵育6 h和24 h时细胞呈现较高活性。与对照组比较,激动剂组肝细胞apoA-ⅠmRNA和细胞外基质apoA-Ⅰ分泌水平上调[2.9±0.5 vs 1.0±0.2,(590.1±54.6)μg/ml vs(395.5±23.4)μg/ml,P<0.01],且HNF-4和HNF-3结合活性显著升高(90.4±13.4 vs 17.2±1.2,78.3±20.6 vs 19.7±2.5,P<0.01)。3组肝细胞EGR-1结合活性比较,无统计学差异(P>0.05)。结论激活β3-AR使肝细胞HNF-4和HNF-3活性增高,可能是β3-AR上调肝脏apoA-Ⅰ转录水平的分子机制之一。 展开更多

关键词 载脂蛋白A-ⅰ 受体 肾上腺素能β3 转录因子

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TGFβ1对肺成纤维细胞中转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4活性的影响 被引量：9

9

作者 李杨 王德文 +3 位作者 宋良文 彭瑞云 高亚兵 马俊杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期679-682,共4页

目的:检测转化生长因子β1(TGFβ1)对大鼠肺成纤维细胞(RLF)中转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4活性的影响并探讨其意义。方法:进行大鼠肺成纤维细胞的原代分离培养,应用10μg/L TGFβ1进行处理,通过凝胶阻滞电泳(EMSA)、免疫印迹和免疫... 目的:检测转化生长因子β1(TGFβ1)对大鼠肺成纤维细胞(RLF)中转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4活性的影响并探讨其意义。方法:进行大鼠肺成纤维细胞的原代分离培养,应用10μg/L TGFβ1进行处理,通过凝胶阻滞电泳(EMSA)、免疫印迹和免疫组化染色等方法,检测照射后转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4活性的变化及Ⅰ型胶原和Ⅰ型组织纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibi-torⅠ,PAI-1)表达的变化。结果:正常RLF中AP1和Smad3-Smad4形成弱阻滞条带,SP1无阻滞条带形成。以10μg/LTGFβ1处理后,3种转录因子所形成的阻滞条带明显增强,PAI-1和Ⅰ型胶原的表达增多。结论:一定浓度的TGFβ1可促进RLF中转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4的活化,并进而增加PAI-1和Ⅰ型胶原的表达。 展开更多

关键词 TGFΒ1 转录因子 ⅰ型胶原 肺成纤维细胞

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人皮肤成纤维细胞中α1(Ⅰ)前胶原基因转录调控研究 被引量：5

10

作者 高春芳 王皓 +2 位作者 徐玲玲 赵文静 孔宪涛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期293-298,共6页

为寻找纤维化形成中调控人Ⅰ型前胶原基因高水平转录的启动序列及其DNA结合蛋白 ,以人皮肤成纤维细胞α1(Ⅰ )前胶原基因转录起始点上游 - 2 5kb至 + 4 2bp的片段为靶序列 ,采用PCR、基因重组、报告基因测活、细胞基因转染技术比较不... 为寻找纤维化形成中调控人Ⅰ型前胶原基因高水平转录的启动序列及其DNA结合蛋白 ,以人皮肤成纤维细胞α1(Ⅰ )前胶原基因转录起始点上游 - 2 5kb至 + 4 2bp的片段为靶序列 ,采用PCR、基因重组、报告基因测活、细胞基因转染技术比较不同长短启动子活性 .凝胶滞留实验 (EM SA)研究高启动活性片段相应的DNA结合蛋白 .基因转染高活性转录因子识别序列至靶细胞 ,探讨前胶原基因激活阻断的新手段 .结果表明 ,- 2 4 83～ + 4 2bp、 - 2 6 8～ + 4 2bp序列具有强启动调控活性 ,而 - 10 5～ + 4 2bp片段启动活性最低 .EMSA对高启动活性小片段DNA结合蛋白的分析提示 ,- 2 6 8～ + 4 2bp序列中存在转录因子Ap 1、Sp 1、NF 1的特异结合位点 .转染高活性转录因子识别序列Ap 1、Sp 1至靶细胞可竞争性阻断胶原基因启动转录激活 .研究提示 ,人α1(Ⅰ )前胶原基因 - 2 4 83～ + 4 2bp、 - 2 6 8～ + 4 2bp片段有高启动活性 .转录因子Ap 1、Sp 1、NF 1与 - 2 6 8～ + 4 2bp序列中相应识别序列的结合与其基础高转录活性有关 .转染高活性转录因子识别序列Ap 1、Sp 展开更多

关键词 人皮肤成纤维细胞 α1(ⅰ)前胶原 基因转录 调控 启动子 转录因子 纤维化 炎症性损伤

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桃树PpGL2转录因子基因克隆及生物信息学分析 被引量：2

11

作者 赵丽 潘彩霞 +3 位作者 庞可勤 郭君洁 李伟 李鸿雁 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1901-1908,共8页

【目的】克隆桃树同源异型—亮氨酸拉链(HD-ZIP)基因(PpGL2),并对其进行生物信息学分析,为研究HD-ZIP转录因子在植物生长发育过程中的调控机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR从桃树品种春喜中克隆PpGL2基因的开放阅读框(ORF)全长,对... 【目的】克隆桃树同源异型—亮氨酸拉链(HD-ZIP)基因(PpGL2),并对其进行生物信息学分析,为研究HD-ZIP转录因子在植物生长发育过程中的调控机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR从桃树品种春喜中克隆PpGL2基因的开放阅读框(ORF)全长,对其进行序列分析,并构建其亚细胞定位表达载体,通过基因枪法转化洋葱表皮细胞后在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的分布情况;同时利用酵母单杂交方法检测其转录活性和DNA结合位点及活性。【结果】从桃树幼叶中克隆获得PpGL2基因,其ORF全长为2253 bp,编码750个氨基酸,以碱性氨基酸较多,含典型的START结构域,属于HD-ZIP转录因子家族的Ⅳ亚族,是一种核定位蛋白。PpGL2转录因子与核桃、可可、苹果等HD-ZIP转录因子的氨基酸序列同源性均在84.60%以上,其中与苹果HD-ZIP转录因子(XP_008384034.1)的同源性最高,为92.41%,表明不同物种的HD-ZIP转录因子氨基酸序列高度保守。PpGL2在酵母细胞中具有转录活性和DNA结合活性,可特异性结合回文序列CAATAATTG。【结论】PpGL2转录因子属于HD-ZIP转录因子家族的IV亚族,定位于细胞核,与DNA的结合位点是回文结构CAAT(A/T)ATTG,可能参与调节桃树的生长、发育及抗逆性等重要生理过程。 展开更多

关键词 桃树 hd-zip转录因子 亚细胞定位 酵母单杂交 转录活性 DNA结合位点

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鸡卵白蛋白上游启动子转录因子对胚眼发育的调控作用 被引量：2

12

作者 杜亚茹 于靖 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期751-754,共4页

鸡卵白蛋白上游启动子转录因子（COUP-TFs）是类固醇/甲状腺激素受体超家族中的一类孤核受体,包括COUP-TF Ⅰ和COUP-TFⅡ2个亚型.COUP-TFs在胚胎发育、器官形成、神经系统形成和细胞分化中起着至关重要的作用.许多研究表明COUP-TFs也参... 鸡卵白蛋白上游启动子转录因子（COUP-TFs）是类固醇/甲状腺激素受体超家族中的一类孤核受体,包括COUP-TF Ⅰ和COUP-TFⅡ2个亚型.COUP-TFs在胚胎发育、器官形成、神经系统形成和细胞分化中起着至关重要的作用.许多研究表明COUP-TFs也参与胚眼的发育,COUP-TFs基因突变由于可导致眼组织缺损、小眼球、视神经萎缩、眼发育迟缓、斜视、弱视等表型形成而备受关注.然而COUP-TFs对胚眼发育的调控机制目前尚不明确.就COUP-TFs的来源、分子结构、分类和生物学功能、COUP-TFs调控靶基因转录的作用机制以及对胚眼发育的影响及其作用机制进行综述. 展开更多

关键词 鸡卵白蛋白上游启动子转录因子ⅰ 鸡卵白蛋白上游启动子转录因子Ⅱ 胚眼发育 视网 膜发育

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转录因子基因Mfhb-1的表达对苜蓿体细胞胚胎发生过程中营养元素含量的影响

13

作者 周岩 何男男 +3 位作者 魏琦超 张胜利 薛晓锋 赵俊杰 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第6期1165-1170,共6页

Mfhb-1基因是在苜蓿体细胞胚胎发生诱导早期经扣除杂交得到的HD-ZipⅠ类转录因子基因,相关研究表明,Mfhb-1基因在苜蓿体细胞胚胎发生诱导的早期可能发挥重要作用。为了进一步探讨Mfhb-1基因的生物学功能与营养元素吸收的关系,试验以经2,... Mfhb-1基因是在苜蓿体细胞胚胎发生诱导早期经扣除杂交得到的HD-ZipⅠ类转录因子基因,相关研究表明,Mfhb-1基因在苜蓿体细胞胚胎发生诱导的早期可能发挥重要作用。为了进一步探讨Mfhb-1基因的生物学功能与营养元素吸收的关系,试验以经2,4-D诱导的苜蓿幼嫩叶片的叶肉细胞为材料,利用电感耦合等离子体发射光谱技术,对Mfhb-1基因的正义、反义转化植株体细胞胚胎发生发育过程中的10种营养元素含量进行了测定。结果显示,Mfhb-1基因的表达可能在苜蓿体细胞胚胎发生诱导初期促进了对Na元素的吸收,同时抑制了对Mg、Zn元素的吸收;Cu、K、Fe、Mn等元素的含量变化可能受Mfhb-1基因表达的影响较小。不过Mfhb-1基因表达与营养元素吸收的关系,以及进而如何影响苜蓿体细胞胚胎发生的详细分子作用机理等有待于进一步研究。 展开更多

关键词 苜蓿 Mfhb-1基因 hd-zip转录因子 体细胞胚胎 营养元素 电感耦合等离子体发射光谱技术

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苹果转录因子MdHB1的原核表达与多克隆抗体制备 被引量：3

14

作者 戴杰雨 姜永华 +4 位作者 张玉洁 王豪杰 刘潇然 刘翠华 任小林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第8期69-76,共8页

HD-Zip转录因子在植物生长发育过程中具有重要作用,蛋白水平的研究有助于进一步阐释其功能。将苹果转录因子基因Md HB1分别连接到p GEX-6p-1和p ET-28a(+)表达载体,热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),随后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷... HD-Zip转录因子在植物生长发育过程中具有重要作用,蛋白水平的研究有助于进一步阐释其功能。将苹果转录因子基因Md HB1分别连接到p GEX-6p-1和p ET-28a(+)表达载体,热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),随后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导培养,分别得到了带有GST和6×His标签的Md HB1融合蛋白(分别命名为Md HB1-GST和Md HB1-His_6)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,在18、28℃和37℃3个温度诱导条件下都是沉淀中Md HB1-GST融合蛋白的量较多,37℃尤为明显,较低的诱导温度(18℃和28℃)能够提高融合蛋白Md HB1-GST可溶性形式存在的比例;28℃条件下50 mg/L IPTG诱导的总蛋白量在8 h左右达到最大,且受IPTG质量浓度(10、50、100 mg/L)的影响不大。以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白Md HB1-His_6为抗原,成年兔免疫以制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测结果表明,所得抗体效价较高。蛋白质免疫印迹实验结果说明,所制备多克隆抗体特异性良好,能够从菌体和苹果幼叶总蛋白中成功检测Md HB1蛋白。综上所述,本实验所得多克隆抗体能够用于深入研究Md HB1在植物体内的功能。 展开更多

关键词 苹果 转录因子 hd-zip MdHB1 原核表达 多克隆抗体

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水稻中两个同源异型结构域转录因子的亚细胞定位

15

作者 李政龙 申奥 栾维江 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第3期62-65,共4页

为了对水稻同源异型结构域转录因子HD-ZipⅢ家族中的HDZ1和HDZ2进行亚细胞定位,利用RT-PCR技术从水稻cDNA中扩增HDZ1和HDZ2的编码区(去除终止密码子序列),与绿色荧光蛋白GFP编码框融合,构建2个转录因子的瞬时表达载体,采用农杆菌介导的... 为了对水稻同源异型结构域转录因子HD-ZipⅢ家族中的HDZ1和HDZ2进行亚细胞定位,利用RT-PCR技术从水稻cDNA中扩增HDZ1和HDZ2的编码区(去除终止密码子序列),与绿色荧光蛋白GFP编码框融合,构建2个转录因子的瞬时表达载体,采用农杆菌介导的转化方法转化至烟草中进行瞬时表达分析.结果表明:PCR扩增所得为目的基因片段HDZ1和HDZ2;二者与载体质粒pCAMBIA35S-GFP连接获得的融合表达载体成功移至烟草中并表达;确定HDZ1主要定位于烟草叶片的气孔中,而HDZ2定位于烟草表皮细胞的细胞膜上.二者在亚细胞中的定位不同,可能在水稻生长发育中所起的作用也不相同. 展开更多

关键词 水稻 同源异型结构域hd-zipⅢ 转录因子 绿色荧光蛋白 亚细胞定位

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转录因子Tbx18对升主动脉平滑肌细胞的重编程作用

16

作者 王凤媛 唐艳红 +3 位作者 王晞 赵庆彦 王腾 黄从新 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期1309-1313,共5页

目的探讨转录因子Tbx18腺病毒载体在体外转染升主动脉平滑肌细胞的重编程作用。方法采用组织块贴壁法培养升主动脉平滑肌细胞,4~7d后在光学显微镜下观察细胞形态,细胞传代后随机分为空白组、绿色荧光蛋白(GFP)组、Tbx18组,Tbx18组转染携... 目的探讨转录因子Tbx18腺病毒载体在体外转染升主动脉平滑肌细胞的重编程作用。方法采用组织块贴壁法培养升主动脉平滑肌细胞,4~7d后在光学显微镜下观察细胞形态,细胞传代后随机分为空白组、绿色荧光蛋白(GFP)组、Tbx18组,Tbx18组转染携带Tbx18和GFP腺病毒,GFP组转染等量GFP腺病毒,空白组不转染病毒。转染4d后通过RT-qPCR和Western blotting检测3组相关转录因子环核苷酸门控离子通道蛋白亚型4(HCN4)、Tbx3、NKx2.5和心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)表达;通过免疫荧光技术检测Tbx18组及GFP组HCN4蛋白表达。结果与GFP组和空白组比较,Tbx18组HCN4、Tbx3和cTnⅠ mRNA和蛋白表达明显上调,NKx2.5蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(0.135±0.033 vs 0.291±0.104、0.344±0.067,P<0.05)。免疫荧光结果显示,倒置荧光显微镜下Tbx18组HCN4蛋白发出红色荧光,并且与细胞转染的绿色荧光和细胞核蓝色荧光大致重合,而GFP组几乎无红色荧光发出。结论 Tbx18腺病毒载体在体外能够将升主动脉平滑肌细胞重编程为起搏样细胞。 展开更多

关键词 转录因子 腺病毒科 主动脉 肌细胞 平滑肌 转染 肌钙蛋白ⅰ

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山楂提取物基于调控TBX21、GATA-3因子对血脂异常小鼠Th1、Th2细胞亚群的影响 被引量：1

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作者 黄昊枭 杨莺 刘宁 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第12期40-46,共7页

目的探究山楂提取物通过调控T-box转录因子21(TBX21)、GATA结合蛋白3(GATA-3)调节血脂异常小鼠Ⅰ型辅助性T细胞(Th1)、Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)细胞亚群防治血脂异常机制研究。方法60只C57BL/6J小鼠,随机分为6组,即正常组、高脂饮食组(High... 目的探究山楂提取物通过调控T-box转录因子21(TBX21)、GATA结合蛋白3(GATA-3)调节血脂异常小鼠Ⅰ型辅助性T细胞(Th1)、Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)细胞亚群防治血脂异常机制研究。方法60只C57BL/6J小鼠,随机分为6组,即正常组、高脂饮食组(High Fat Diet,HFD)、HFD+高剂量山楂提取物组、HFD+中剂量山楂提取物组、HFD+低剂量山楂提取物组、HFD+阿托伐他汀组,每组10只。HFD小鼠高脂饲料喂养8周,建立血脂异常模型。高、中、低山楂提取物组小鼠在高脂饲养4周后给予山楂提取物进行灌胃,阿托伐他汀组小鼠在高脂饲养4周给予阿托伐他汀进行灌胃。对照组和HFD组同时间口服灌胃等量生理盐水。4周后通过全自动生物化学分析仪检测血浆中甘油三酯(Triglyceride,TG),总胆固醇(Total Cholesterol,TC),高密度脂蛋白胆固醇(High Density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)的含量;实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time-Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)检测各组小鼠脾脏组织Tbx21、Gata3mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组小鼠脾脏组织Tbx21、Gata3蛋白表达;流式细胞术检测小鼠脾脏组织Th1、Th2细胞比例。结果相较于正常组,高脂饮食能明显提高血清总胆固醇,甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量,小鼠脾脏Tbx21mRNA及蛋白表达水平显著升高,Gata3mRNA及蛋白表达水平显著降低,小鼠脾脏组织Th1细胞百分比显著上调,Th2细胞百分比显著下调;与HFD组相比,经山楂提取物及阿托伐他汀干预的血脂异常小鼠血清血脂得以改善,总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平显著下降,高密度脂蛋白胆固醇水平显著上升,小鼠脾脏Tbx21mRNA及蛋白表达水平显著降低,Ga-ta3mRNA及蛋白表达水平显著提高,小鼠脾脏组织Th1细胞百分比显著下降,Th2细胞百分比显著上升,中药高剂量组与西药组调节相关因子的作用效果明显优于中药中、低剂量组,且对于HDL-C、LDL-C、Th1细胞比例、Tbx21、Gata3mRNA及蛋白等指标的作用效果接近于西药组。结论山楂提取物可以通过调控Tbx21、Gata3因子,进而影响Th1、Th2细胞分化过程,减轻脂质沉积,从而有效地防治血脂异常。 展开更多

关键词 山楂提取物 血脂异常 ⅰ型辅助性T细胞 Ⅱ型辅助性T细胞 T-box转录因子21 GATA结合蛋白3

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转录活性蛋白1在实验性近视眼豚鼠巩膜重塑中对Ⅰ型胶原表达的调控作用 被引量：2

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作者 朱子诚 展欣 +4 位作者 张楚 刘夏薇 应充慧 孙思勤 柯根杰 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第5期415-418,共4页

目的研究近视巩膜重塑中转录活性蛋白1(specificity protein 1,Sp1)作为转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)下游信号转录因子的表达情况和调节I型胶原(CollagenⅠ)表达的作用。方法出生7 d的有色豚鼠75只,随机选... 目的研究近视巩膜重塑中转录活性蛋白1(specificity protein 1,Sp1)作为转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)下游信号转录因子的表达情况和调节I型胶原(CollagenⅠ)表达的作用。方法出生7 d的有色豚鼠75只,随机选取50只左眼使用6号无色半透明乳胶气球作为头套诱导形觉剥夺性近视(form deprivation myopia,FDM)动物模型为FDM组,右眼作为自身对照组,另外25只不作处理为正常组。记录各组豚鼠屈光度及眼轴长度变化。Western blot和RT-PCR检测正常组和FDM组豚鼠遮盖后0周(遮盖前)、2周、4周、6周及遮盖4周去遮盖1周(4/-1周)时巩膜中Sp1和CollagenⅠ蛋白和mRNA的表达变化,并分析两者的关系。结果 FDM组豚鼠眼随着遮盖时间延长,由遮盖前远视状态逐渐变为近视状态,眼轴长度也逐渐增长。与正常组相比,FDM组巩膜内Sp1和CollagenⅠ的蛋白和mRNA表达均下调,且随遮盖时间的延长,其表达不断减弱。正常组及FDM组遮盖后0周、2周、4周、4/-1周、6周,Sp1蛋白相对表达量分别为1.864±0.014、1.856±0.016、1.215±0.016、0.752±0.013、0.945±0.017、0.518±0.012;CollagenⅠ蛋白相对表达量分别为2.922±0.005、2.836±0.001、2.336±0.002、1.500±0.003、1.754±0.006、1.082±0.001;Sp1 mRNA:0.599±0.025、0.557±0.024、0.510±0.013、0.349±0.013、0.457±0.009、0.168±0.012;CollagenⅠmRNA:1.071±0.014、1.010±0.021、0.947±0.006、0.626±0.010、0.770±0.020、0.331±0.004。遮盖2周后各时间点与正常组相比,Sp1和CollagenⅠ蛋白和mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Sp1与CollagenⅠ的蛋白和mRNA表达均呈明显正相关(均为r=1.00,P<0.05)。结论 Sp1作为TGF-β1的下游信号转录因子可能参与了近视巩膜重塑中CollagenⅠ的调控,提示Sp1信号转录因子可能通过TGF-β1-Sp1-CollagenⅠ信号通路在近视巩膜重塑中发挥重要作用。 展开更多

关键词 巩膜重塑 实验性近视 转化生长因子-Β1 ⅰ型胶原 转录活性蛋白1

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猪POU1F1基因第三内含子Msp Ⅰ酶切片段多态特征的研究 被引量：4

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作者 滕勇 经荣斌 宋成义 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期175-178,共4页

采用PCR-RFLPs技术,以Msp I为内切酶,检测猪POU1F1基因中片段为2.1 kb的第三内含子中的多态位点:1.68 kb(C等位基因)和0.85/0.83 kb(D等位基因),分析各多态位点在长白猪、杜洛克猪、小梅山猪、香猪、姜曲海猪5个品种群中的分布,并通过X... 采用PCR-RFLPs技术,以Msp I为内切酶,检测猪POU1F1基因中片段为2.1 kb的第三内含子中的多态位点:1.68 kb(C等位基因)和0.85/0.83 kb(D等位基因),分析各多态位点在长白猪、杜洛克猪、小梅山猪、香猪、姜曲海猪5个品种群中的分布,并通过X2检验比较这5个猪种间的基因型差异。X2适合性检验结果表明:Msp I酶切突变位点的3种基因型在5个品种中分布差异均极显著(P<0.01)。中国地方品种小梅山猪、姜曲海猪等位基因C的比例很高,中国地方品种香猪等位基因C的比例则比较高,国外品种长白猪、杜洛克猪等位基因C的比例很低。 展开更多

关键词 猪 POU1F1基因 第三内含子Mspⅰ 多态性 PCR-RFLPS 垂体转录因子

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戊二酸尿症Ⅰ型基因敲除大鼠模型的构建和鉴定 被引量：2

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作者 田凤艳 李艳云 +1 位作者 甄诚 顾朝辉 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2020年第6期801-805,共5页

目的:构建戊二酰辅酶A脱氢酶(GCDH)基因敲除大鼠,为进一步研究戊二酸尿症Ⅰ型发病机制和治疗方法提供动物模型。方法:利用转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)技术制备GCDH基因敲除大鼠,设计GCDH基因打靶位点,构建载体,体外转录mRNA,显... 目的:构建戊二酰辅酶A脱氢酶(GCDH)基因敲除大鼠,为进一步研究戊二酸尿症Ⅰ型发病机制和治疗方法提供动物模型。方法:利用转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)技术制备GCDH基因敲除大鼠,设计GCDH基因打靶位点,构建载体,体外转录mRNA,显微注射入SD大鼠受精卵,鉴定F0代大鼠。经饲养、配种、繁殖后,剪尾、PCR及电泳检测子代大鼠基因型,观察并统计GCDH基因敲除幼鼠出生及存活情况。高赖氨酸饮食诱导GCDH-/-大鼠发病,HE染色观察大鼠脑组织的病理变化。结果:经基因检测及测序验证,成功制备GCDH-/-大鼠,子代大鼠基因型符合孟德尔遗传定律并可稳定繁殖。8周龄GCDH-/-大鼠给予高赖氨酸饲料喂养4周,5只中存活4只;同等条件的5只野生大鼠全部存活率。与野生型相比,高赖氨酸饮食GCDH-/-大鼠脑出现细胞水肿、排列紊乱和空泡样变性。结论:成功建立GCDH-/-大鼠模型。 展开更多

关键词 戊二酸尿症ⅰ型 转录激活因子样效应物核酸酶技术 基因敲除 戊二酰辅酶A脱氢酶基因 大鼠

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