目的通过建立氧糖剥夺-缺氧复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型模拟心肌缺血再灌注损伤,探讨海藻糖对OGD/R大鼠H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H9C2细胞分为对照组、OGD/R组、海藻糖组(OGD/R+海藻...目的通过建立氧糖剥夺-缺氧复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型模拟心肌缺血再灌注损伤,探讨海藻糖对OGD/R大鼠H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H9C2细胞分为对照组、OGD/R组、海藻糖组(OGD/R+海藻糖)、联合组(OGD/R+海藻糖+ML385)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖能力,并通过检测乳酸脱氢酶及Hoechst/丙啶碘化物染色检测细胞膜受损情况。Western blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)及其下游相关蛋白表达;活性氧、线粒体膜电位检测氧化应激水平;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果与对照组比较,OGD/R组细胞活力明显降低。与OGD/R组比较,不同浓度海藻糖干预能显著提升细胞活力,与海藻糖浓度呈正相关(P<0.01);与OGD/R组比较,海藻糖组线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Nrf2、血红素加氧酶1和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化还原酶1、Bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达明显增高,活性氧、丙二醛、应答元素结合蛋白1、Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与海藻糖组比较,联合组活性氧、丙二醛及肿瘤坏死因子α、白细胞介素(interleukin,IL)1βmRNA、IL-6 mRNA表达明显增高,MMP、GSH水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联合组Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显高于海藻糖组(1.77±0.08 vs 1.20±0.20,3.41±1.45 vs 0.99±0.15,4.10±1.05 vs 1.79±0.52,P<0.01),Bcl-2、Caspase-3表达明显低于海藻糖组(0.58±0.21 vs 1.23±0.25,0.87±0.25 vs 1.45±0.31,P<0.01)。结论海藻糖可以被视为一种Nrf2激活剂,通过激活Nrf2抑制氧化应激和凋亡,改善OGD/R诱导的心肌细胞损伤。展开更多
为了筛选有机溶剂DMSO与DMF对H9C2心肌细胞毒性作用的最低浓度,探讨DMSO与DMF对心肌细胞信号转导与转录因子3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3)信号通路的影响,通过四氮唑盐比色分析法(MTT法)试验,检测DMSO和...为了筛选有机溶剂DMSO与DMF对H9C2心肌细胞毒性作用的最低浓度,探讨DMSO与DMF对心肌细胞信号转导与转录因子3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3)信号通路的影响,通过四氮唑盐比色分析法(MTT法)试验,检测DMSO和DMF在体积分数为0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%、1%、2%、3%时作用24、48、72h心肌细胞的存活率变化;Westernblot法检测STAT3和Bcl-2蛋白,对比DMSO和DMF分别在0%、0.2%、0.3%、0.5%体积分数下STAT3蛋白表达量的差异性。结果表明,同一DMSO和DMF体积分数条件下,随着时间增加,细胞存活率下降,在同一时间随着DMSO和DMF体积分数的增加,心肌细胞存活率减小,Bcl-2和STAT3蛋白含量减少,DMSO体积分数为0.3%和0.5%时,细胞存活率有统计学意义(P<0.05),STAT3和Bcl-2蛋白水平比对照组低(P<0.01),但DMSO体积分数为0.2%,细胞存活率与STAT3、Bcl-2表达对比对照组,均无统计学意义(P>0.05);当DMF体积分数为0.3%和0.5%时,细胞存活率有统计学意义(P<0.05),STAT3和Bcl-2蛋白水平比对照组低(P<0.01),当DMF体积分数为0.2%时,细胞存活率无统计学意义(P>0.05),STAT3蛋白表达对比对照组,具有统计学意义(P<0.01)。与对照组(不含DMSO和DMF)比较,DMSO和DMF对H9C2心肌细胞具有毒性作用,随浓度增加,细胞存活率降低,Bcl-2蛋白含量降低,可能与STAT3蛋白下调相关,MTT法检测结果与Westernblot试验结果不完全一致,MTT法具有不稳定性。展开更多
文摘目的通过建立氧糖剥夺-缺氧复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型模拟心肌缺血再灌注损伤,探讨海藻糖对OGD/R大鼠H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H9C2细胞分为对照组、OGD/R组、海藻糖组(OGD/R+海藻糖)、联合组(OGD/R+海藻糖+ML385)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖能力,并通过检测乳酸脱氢酶及Hoechst/丙啶碘化物染色检测细胞膜受损情况。Western blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)及其下游相关蛋白表达;活性氧、线粒体膜电位检测氧化应激水平;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果与对照组比较,OGD/R组细胞活力明显降低。与OGD/R组比较,不同浓度海藻糖干预能显著提升细胞活力,与海藻糖浓度呈正相关(P<0.01);与OGD/R组比较,海藻糖组线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Nrf2、血红素加氧酶1和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化还原酶1、Bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达明显增高,活性氧、丙二醛、应答元素结合蛋白1、Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与海藻糖组比较,联合组活性氧、丙二醛及肿瘤坏死因子α、白细胞介素(interleukin,IL)1βmRNA、IL-6 mRNA表达明显增高,MMP、GSH水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联合组Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显高于海藻糖组(1.77±0.08 vs 1.20±0.20,3.41±1.45 vs 0.99±0.15,4.10±1.05 vs 1.79±0.52,P<0.01),Bcl-2、Caspase-3表达明显低于海藻糖组(0.58±0.21 vs 1.23±0.25,0.87±0.25 vs 1.45±0.31,P<0.01)。结论海藻糖可以被视为一种Nrf2激活剂,通过激活Nrf2抑制氧化应激和凋亡,改善OGD/R诱导的心肌细胞损伤。
文摘目的 探究单宁酸对缺氧诱导的H9c2心肌细胞的保护作用及机制。方法 体外培养大鼠H9c2细胞,利用条件培养基和缺氧小室建立缺氧诱导的H9c2细胞损伤模型,分为对照组、缺氧1组、低剂量单宁酸组(0.2μmol单宁酸)和高剂量单宁酸组(0.8μmol单宁酸)。利用鱼藤酮进行功能回复实验,分为缺氧2组、缺氧+鱼藤酮抑制剂组(50 nmol鱼藤酮)、缺氧+鱼藤酮抑制剂+高剂量单宁酸组(50 nmol鱼藤酮+0.8μmol单宁酸)、缺氧+高剂量单宁酸组(0.8μmol单宁酸)。细胞计数试剂盒8法和乳酸脱氢酶(LDH)评估细胞损伤;化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体ROS;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白表达;酶联免疫吸附测定IL-1β分泌。结果 与对照组比较,缺氧1组H9c2细胞密度降低,贴壁不牢,细胞存活率显著降低,LDH活性、细胞凋亡率、NLRP3、裂解的(Cleaved)Caspases-1、Cleaved-GSDMD和Cleaved-IL-1β蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与缺氧组1比较,低剂量单宁酸组、高剂量单宁酸组细胞存活率显著升高,LDH活性、细胞凋亡率、NLRP3、Cleaved-Caspases-1、Cleaved-GSDMD和Cleaved-IL-1β蛋白表达水平、分泌的IL-1β水平显著降低(P<0.05)。与缺氧2组比较,缺氧+鱼藤酮抑制剂组线粒体ROS、NLRP3、Cleaved-IL-1β蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与缺氧+高剂量单宁酸组比较,缺氧+鱼藤酮抑制剂+高剂量单宁酸组的线粒体ROS(0.85±0.02 vs 0.40±0.03)、NLRP3(0.61±0.03 vs 0.47±0.05)、Cleaved-IL-1β蛋白表达水平(0.70±0.06 vs 0.48±0.09)显著升高(P<0.05)。结论 单宁酸可通过抑制ROS/NLRP3通路介导的焦亡,减轻缺氧诱导的H9c2细胞损伤。
文摘为了筛选有机溶剂DMSO与DMF对H9C2心肌细胞毒性作用的最低浓度,探讨DMSO与DMF对心肌细胞信号转导与转录因子3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3)信号通路的影响,通过四氮唑盐比色分析法(MTT法)试验,检测DMSO和DMF在体积分数为0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%、1%、2%、3%时作用24、48、72h心肌细胞的存活率变化;Westernblot法检测STAT3和Bcl-2蛋白,对比DMSO和DMF分别在0%、0.2%、0.3%、0.5%体积分数下STAT3蛋白表达量的差异性。结果表明,同一DMSO和DMF体积分数条件下,随着时间增加,细胞存活率下降,在同一时间随着DMSO和DMF体积分数的增加,心肌细胞存活率减小,Bcl-2和STAT3蛋白含量减少,DMSO体积分数为0.3%和0.5%时,细胞存活率有统计学意义(P<0.05),STAT3和Bcl-2蛋白水平比对照组低(P<0.01),但DMSO体积分数为0.2%,细胞存活率与STAT3、Bcl-2表达对比对照组,均无统计学意义(P>0.05);当DMF体积分数为0.3%和0.5%时,细胞存活率有统计学意义(P<0.05),STAT3和Bcl-2蛋白水平比对照组低(P<0.01),当DMF体积分数为0.2%时,细胞存活率无统计学意义(P>0.05),STAT3蛋白表达对比对照组,具有统计学意义(P<0.01)。与对照组(不含DMSO和DMF)比较,DMSO和DMF对H9C2心肌细胞具有毒性作用,随浓度增加,细胞存活率降低,Bcl-2蛋白含量降低,可能与STAT3蛋白下调相关,MTT法检测结果与Westernblot试验结果不完全一致,MTT法具有不稳定性。
