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H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化
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作者 屈小天 王雅楠 +4 位作者 许倩茹 李雪洋 张申立 张二芹 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第3期125-132,共8页
为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将... 为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 hA蛋白 水稻胚乳表达 蛋白质纯化
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雏鸭感染鹅源H5N1亚型禽流感病毒后免疫器官T细胞免疫功能及IL-2 mRNA转录变化 被引量:4
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作者 于学武 吕晓萍 +4 位作者 刘超男 高雪丽 石霖 刘明 郑世民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1497-1504,共8页
为探讨T细胞及白细胞介素(IL)-2在禽流感免疫、发病机制中的作用,利用细胞培养技术、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测法、组织石蜡切片及α-醋酸萘酯酶染色法和实时荧光PCR技术,对雏鸭感染H5N1亚型禽流感病毒(AIV)后,其免疫器官T淋巴细胞增殖... 为探讨T细胞及白细胞介素(IL)-2在禽流感免疫、发病机制中的作用,利用细胞培养技术、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测法、组织石蜡切片及α-醋酸萘酯酶染色法和实时荧光PCR技术,对雏鸭感染H5N1亚型禽流感病毒(AIV)后,其免疫器官T淋巴细胞增殖功能及数量和IL-2mRNA转录的动态变化进行全面系统的研究。结果发现,H5N1亚型AIV感染21日龄雏鸭后,其免疫器官IL-2mRNA转录、T淋巴细胞数量及其对刀豆蛋白A(ConA)的增殖功能在感染的急性期均显著低于对照雏鸭,表明AIV感染雏鸭免疫器官细胞因子的免疫调节功能降低,免疫活性细胞,特别是T淋巴细胞活化、增殖受阻,是导致机体细胞免疫功能低下的主要原因,也可能是雏鸭在感染早期发生死亡的重要因素。 展开更多
关键词 雏鸭 h5n1亚型禽流感病毒 免疫器官 细胞免疫 IL-2
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鹅源H5N1亚型禽流感病毒对SPF雏鸡血液免疫功能的影响 被引量:3
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作者 郑世民 王滨坤 +3 位作者 高雪丽 刘超男 刘明 吕晓萍 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期69-73,共5页
以21日龄SPF雏鸡为实验动物,应用细胞培养和免疫酶技术,通过外周血液免疫球蛋白(Igs)含量、T和B淋巴细胞数量及其增殖功能的检测,较全面系统的研究了鹅源H5N1亚型中强毒禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其外周血液上述被检指标的动态变化... 以21日龄SPF雏鸡为实验动物,应用细胞培养和免疫酶技术,通过外周血液免疫球蛋白(Igs)含量、T和B淋巴细胞数量及其增殖功能的检测,较全面系统的研究了鹅源H5N1亚型中强毒禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其外周血液上述被检指标的动态变化。结果表明,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染SPF雏鸡后,其血清IgG和IgA含量在1~4 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01),并分别于8~21 d和5~8 d显著高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);而IgM在病毒感染后4 d开始升高,5~8 d明显高于对照雏鸡。血液T淋巴细胞数量于病毒感染后1~14 d显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01),B淋巴细胞在3~14 d明显降低(P<0.05或P<0.01);T、B淋巴细胞对ConA或PMA的增殖反应分别于3~14 d、3~8 d明显低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明AIV感染21日龄SPF雏鸡后的早期,其外周血液无论是细胞免疫还是体液免疫功能均降低。 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 SPF雏鸡 血液 T B淋巴细胞数量及其功能 免疫球蛋白含量
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两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒的序列分析及致病性研究 被引量:4
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作者 王明芳 邓国华 +5 位作者 杨孝朴 施建忠 丁晴微 罗维玉 张文亮 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期854-858,共5页
本研究对2010年在湖北活禽市场监测分离到的两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)(HuB/495/10和HuB/513/10)进行了序列分析和致病性试验研究,以了解湖北地区H5N1亚型AIV的生物学特性差异。序列分析显示:2株病毒全基因组核苷酸同源性在97.3%... 本研究对2010年在湖北活禽市场监测分离到的两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)(HuB/495/10和HuB/513/10)进行了序列分析和致病性试验研究,以了解湖北地区H5N1亚型AIV的生物学特性差异。序列分析显示:2株病毒全基因组核苷酸同源性在97.3%~98.6%,2株病毒的8个节段基因均与青海和香港分离的野鸟源病毒A/great crested-grebe/Qinghai/1/2009(H5N1)和A/black-crowned night heron/Hong Kong/659/2008(H5N1)的核苷酸高度同源,HA蛋白裂解位点序列基序为341RRRKR345,呈现典型的高致病力分子特征。以105EID50/100μL病毒剂量感染4周龄SPF鸭发现:HuB/495/10和HuB/513/10对鸭的致死率分别为100%和20%,病毒在鸭体内呈全身性复制并可通过呼吸道和消化道向外排毒;不同滴度的病毒感染6周龄BALB/c小鼠,HuB/495/10和HuB/513/10的MLD50分别为1.38 log10EID50和1.68 log10EID50,对小鼠表现为高致病力,均在肺脏中高拷贝复制。 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 序列分析 致病性
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H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠肺组织蛋白质组分析 被引量:3
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作者 梁立滨 赵东明 +4 位作者 李俊平 李雁冰 施建忠 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期261-264,共4页
为鉴定禽流感病毒(AIV)感染状态下的差异表达蛋白,本研究将H5N1亚型AIV感染组与对照组小鼠肺组织蛋白样品分别进行双向电泳分离,并采用ImageMaster 2D Platinum 6.0软件进行分析。在AIV感染72h后,共有9个表达差异显著的蛋白点(ratio>... 为鉴定禽流感病毒(AIV)感染状态下的差异表达蛋白,本研究将H5N1亚型AIV感染组与对照组小鼠肺组织蛋白样品分别进行双向电泳分离,并采用ImageMaster 2D Platinum 6.0软件进行分析。在AIV感染72h后,共有9个表达差异显著的蛋白点(ratio>2,p<0.05),而且该蛋白在感染组均呈上调表达。将差异蛋白进行串联质谱分析,并对其中7个蛋白进行鉴定,包括:interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 3(IFIT-3)、ATP依赖的干扰素反应蛋白1(ADIR1)、γ干扰素诱导的p47鸟苷三磷酸酶(IRG)、T细胞受体a TA27、气味受体S86、胞苷单磷酸激酶2(Cmpk2)和肌球蛋白。将前3个蛋白基因采用荧光定量PCR方法进行mRNA水平的验证,所获得的结果与双向电泳结果一致。本研究为在蛋白质组水平进一步分析H5N1亚型AIV与宿主相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 双向凝胶电泳 蛋白质组 病原宿主相互作用
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对麻鸭不同致病力H5N1亚型禽流感病毒的鉴定 被引量:3
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作者 唐应华 吴培培 +3 位作者 彭大新 张评浒 龙进学 刘秀梵 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期12-13,共2页
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 致病力 野生水禽 鉴定 麻鸭 VIRUS AIV 相对稳定
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雏鸭感染鹅源H5N1亚型禽流感病毒后免疫器官淋巴细胞增殖功能变化 被引量:4
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作者 于学武 郑世民 刘明 《中国家禽》 北大核心 2012年第22期12-15,共4页
以21日龄雏鸭为研究对象,应用细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)检测法,对鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染雏鸭胸腺、法氏囊和脾脏的T或/和B淋巴细胞增殖功能变化进行了较全面系统的动态检测。结果发现,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染雏鸭... 以21日龄雏鸭为研究对象,应用细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)检测法,对鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染雏鸭胸腺、法氏囊和脾脏的T或/和B淋巴细胞增殖功能变化进行了较全面系统的动态检测。结果发现,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染雏鸭后,其上述免疫器官T或/和B淋巴细胞对ConA或LPS的增殖反应均不同程度地低于相应对照雏鸭,表明AIV感染雏鸭后,其免疫器官的细胞免疫和体液免疫功能明显受抑制,上述免疫病理改变可能是导致感染雏鸭免疫抑制的主要原因之一。 展开更多
关键词 雏鸭 鹅源h5n1亚型禽流感病毒 免疫器官 淋巴细胞增殖功能
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H5N1亚型禽流感病毒对鹌鹑的致病性及接触传播能力研究 被引量:1
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作者 李倩倩 曾显营 +6 位作者 白洁 邓国华 李雁冰 刘丽玲 施建忠 陈化兰 田国彬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期94-97,共4页
为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)对鹌鹑的致病性及其接触传播能力,本研究选择2009年-2012年分离的3株Clade2.3.2病毒株DK/GD/1322/10、DK/GZ/4102/10、GCG/QH/1/09和1株Clade7.2病毒株CK/NX/2/12,以10^5EID50的剂量... 为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)对鹌鹑的致病性及其接触传播能力,本研究选择2009年-2012年分离的3株Clade2.3.2病毒株DK/GD/1322/10、DK/GZ/4102/10、GCG/QH/1/09和1株Clade7.2病毒株CK/NX/2/12,以10^5EID50的剂量,人工感染4周龄鹌鹑,并于感染后24h放入同居鹌鹑,检测其发病死亡、排毒、脏器病毒复制、血清抗体转阳情况及其病理组织学变化。结果显示,4株病毒株感染鹌鹑均100%发病和死亡,对鹌鹑的平均致死时间依次为48h、48h、67h和98h,病毒在体内各脏器均能够复制,产生明显的病理组织学变化,并且均能够通过喉头和泄殖腔排毒;DK/GD/1322/10、DK/GZ/4102/10和GCG/QH/1/093株病毒感染组同居鹌鹑分别在6d、4d和3d内全部发病死亡,而CK/NX/2/12病毒株同居组鹌鹑全部存活,血清抗体2/5转阳。以上结果表明,3株Clade2.3.2病毒和1株Clade7.2病毒对鹌鹑均具有高度致死性,但接触传播能力存在一定差异。 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 致病性 接触传播能力
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H5N1亚型禽流感病毒感染SPF雏鸡的外周血液免疫病理变化 被引量:1
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作者 郑世民 王滨坤 +2 位作者 刘超男 高雪丽 吕晓萍 《中国家禽》 北大核心 2011年第14期25-28,共4页
以7日龄SPF雏鸡为试验动物,应用细胞培养和免疫酶技术,通过对外周血液免疫球蛋白含量、T和B淋巴细胞数量及其功能的检测,较全面系统地研究了鹅源H5N1亚型中强毒禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其外周血液上述指标的动态变化。结果发现,... 以7日龄SPF雏鸡为试验动物,应用细胞培养和免疫酶技术,通过对外周血液免疫球蛋白含量、T和B淋巴细胞数量及其功能的检测,较全面系统地研究了鹅源H5N1亚型中强毒禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其外周血液上述指标的动态变化。结果发现,SPF雏鸡感染鹅源H5N1亚型AIV后,血清IgG和IgA含量在1~4d显著或极显著低于对照雏鸡(P〈0.05或P〈0.01),而IgM在病毒感染早期未见显著性差异,随后3种免疫球蛋白含量逐渐回升;血液T淋巴细胞数量显著低于对照雏鸡(P〈0.05或P〈0.01),而B淋巴细胞在1~5d明显降低(P〈0.05或P〈0.01);T、B淋巴细胞对ConA或PMA的增殖反应分别于1~8d、1~4d明显低于对照雏鸡(P〈0.05或P〈0.01)。上述结果表明,AIV感染SPF雏鸡外周血液无论是细胞免疫还是体液免疫功能均呈现一定抑制。 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 SPF雏鸡 外周血液 淋巴细胞数量及增殖能力 免疫球蛋白含量
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金丝桃素蛋白络合物体外抗H5N1亚型禽流感病毒的活性研究 被引量:18
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作者 赵晓虹 梁剑平 +5 位作者 祝艳华 尚若锋 王雯慧 崔颖 罗永江 王学江 《中兽医医药杂志》 2006年第3期13-15,共3页
用鸡胚法进行了金丝桃素蛋白络合物抗H5N1亚型禽流感病毒活性研究。分别采用了感染病毒同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药三种方式,通过测定鸡胚尿囊液的血凝效价和计算药物对感染鸡胚的保护率,观察金丝桃素蛋白络合物的抗H5N... 用鸡胚法进行了金丝桃素蛋白络合物抗H5N1亚型禽流感病毒活性研究。分别采用了感染病毒同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药三种方式,通过测定鸡胚尿囊液的血凝效价和计算药物对感染鸡胚的保护率,观察金丝桃素蛋白络合物的抗H5N1亚型禽流感病毒活性。实验结果表明,①药物在体外与病毒作用一段时间后再将其混悬液接种鸡胚,药物浓度在0.5mg/ml以上时,对感染鸡胚的保护率达100%,同时给药组的血凝效价显著降低,与对照组相比差异极显著;②在感染病毒前给药,药物浓度在2mg/ml以上时,对感染鸡胚的保护率达100%,药物组的血凝效价显著降低,与对照组相比差异极显著;③先感染病毒后给药,药物浓度在2mg/ml以上时,对感染鸡胚的保护率达88.9%,血凝效价明显降低,与对照组相比差异显著。同时,在此种方式下,药物对病毒的抑制作用与药物浓度有一定依赖性,适当提高药物浓度,可以增强其抗病毒活性。 展开更多
关键词 金丝桃素蛋白络合物 h5n1亚型禽流感病毒 血凝效价 保护率
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H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状及应用前景 被引量:7
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作者 冯书营 董仕桢 张树逍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期208-213,共6页
H5N1亚型禽流感病毒是目前发现的禽流感病毒中感染性最强、致死率最高、流行最广的一类病毒,该病毒已在世界上多个国家发生流行,给禽类养殖业带来了巨大的经济损失。当前针对该病尚无高效特异的治疗方法,进行疫苗的接种是目前最为有效... H5N1亚型禽流感病毒是目前发现的禽流感病毒中感染性最强、致死率最高、流行最广的一类病毒,该病毒已在世界上多个国家发生流行,给禽类养殖业带来了巨大的经济损失。当前针对该病尚无高效特异的治疗方法,进行疫苗的接种是目前最为有效的预防措施和关键环节。因此,研制安全、高效、廉价的新型疫苗成为当前禽流感防制工作的热点之一,且取得了大量的研究成果。作者从禽流感病毒灭活疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗和RNAi技术应用等方面对H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状作一综述,归纳出该领域中存在的问题和不足,并对禽流感疫苗的应用前景作一展望,以期为深入进行禽流感的防制研究提供参考。 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 疫苗 研究现状 前景
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H5N1亚型禽流感病毒NA基因在Sf9昆虫细胞中的表达
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作者 张晓东 陶玲 +1 位作者 王汉中 格日勒图 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第7期28-32,共5页
【目的】在Sf9昆虫细胞中表达H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)神经氨酸酶(NA)基因。【方法】用PCR方法克隆H5N1亚型AIVNA基因,定点插入到转移载体pFastBacHTb中,构建重组转移载体pFastBacHTb-NA。将其转化到含有AcBa... 【目的】在Sf9昆虫细胞中表达H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)神经氨酸酶(NA)基因。【方法】用PCR方法克隆H5N1亚型AIVNA基因,定点插入到转移载体pFastBacHTb中,构建重组转移载体pFastBacHTb-NA。将其转化到含有AcBacmid和helper质粒的E.coliDH10B感受态细胞中,与AcBacmid重组,获得rAcBacmid-NA。提取重组的Bacmid,转染处于对数生长期的昆虫Sf9细胞,获得重组杆状病毒vAc-NA。将vAc-NA重新感染处于对数生长期的昆虫Sf9细胞,3-5 d后收集被感染细胞。取转染细胞、感染细胞、破碎感染细胞上清和破碎感染细胞沉淀进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。【结果】通过PCR成功地克隆了1 352 bp的H5N1亚型AIV不含信号肽序列的NA基因;pFastBacHTb-NA和rAcBacmid-NA构建成功。AIVNA基因在昆虫Sf9细胞内得到有效表达,表达产物分子质量约为52 ku,且具有免疫原性。【结论】H5N1亚型AIVNA基因在昆虫Sf9细胞中表达成功。 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 神经氨酸酶 杆状病毒载体 真核表达
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基于纳米材料的电化学免疫传感器检测H5N1亚型禽流感病毒的研究 被引量:5
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作者 黄娇玲 谢芝勋 +5 位作者 罗思思 谢志勤 谢丽基 刘加波 庞耀珊 范晴 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期911-918,共8页
利用氧化石墨烯(GO)负载H5N1亚型禽流感病毒多克隆抗体(PAb-H5N1)及牛血清白蛋白(BSA)作为信号放大材料,构建一种新型电化学免疫传感器用于检测H5N1亚型禽流感病毒。结果表明:以PAb-H5N1-GO-BSA纳米复合物作为信号放大材料构建的电化学... 利用氧化石墨烯(GO)负载H5N1亚型禽流感病毒多克隆抗体(PAb-H5N1)及牛血清白蛋白(BSA)作为信号放大材料,构建一种新型电化学免疫传感器用于检测H5N1亚型禽流感病毒。结果表明:以PAb-H5N1-GO-BSA纳米复合物作为信号放大材料构建的电化学免疫传感器的灵敏度比不用此纳米复合物作为信号放大的高256倍。以PAb-H5N1-GO-BSA纳米复合物作为信号放大材料构建的电化学免疫传感器对H5N1亚型禽流感病毒的检测限为2-15 HA unit·50μL-1,检测线性范围为2-15~2-8 HA unit·50μL-1。此传感器特异性好,灵敏度高,在病原微生物快速检测领域具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 氧化石墨烯 电化学免疫传感器 金纳米粒子 h5n1亚型禽流感病毒
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鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染SPF雏鸡免疫球蛋白含量的变化研究 被引量:1
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作者 姜南 郗洪生 +2 位作者 封柯宇 张森 郑世民 《中国家禽》 北大核心 2013年第7期20-23,共4页
以7日龄SPF雏鸡为试验动物,采用常规间接酶联免疫吸附试验(IELISA)法,对鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其泪液、气管液、肠液、胆汁的IgA、IgG、IgM含量的动态变化进行了检测。结果发现,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染SPF雏鸡后... 以7日龄SPF雏鸡为试验动物,采用常规间接酶联免疫吸附试验(IELISA)法,对鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其泪液、气管液、肠液、胆汁的IgA、IgG、IgM含量的动态变化进行了检测。结果发现,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染SPF雏鸡后,其泪液、气管液、肠液、胆汁的免疫球蛋白IgA、IgM含量均在1~3d或1~4d显著低于相应对照雏鸡(P<0.05),而感染后第5天,上述被检指标开始升高,并于5~8d或5~14d,病毒感染雏鸡的IgA和IgM显著高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明7日龄SPF雏鸡感染AIV后的早期,其消化道和呼吸道的体液免疫功能降低。 展开更多
关键词 鹅源 h5n1亚型禽流感病毒 SPF雏鸡 免疫球蛋白
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H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析 被引量:16
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作者 南文龙 金宁一 +5 位作者 鲁会军 赵翠青 田明尧 谭磊 张金双 白靓 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期630-633,637,共5页
目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特... 目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特异性。通过BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清,初步鉴定候选表位抗原性。结果:综合多项预测及空间构象模拟结果,我们获得了三条候选Th和B细胞表位,分别为HA141~155、HA206~223、HA302~316。候选表位处于H5N1亚型禽流感HA1蛋白序列上相对保守的区域内,且与目前流行的H5N1亚型禽流感病毒HA相应区域具有较好的一致性。而不同候选表位在BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清反应中显示了不同抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。结论:所筛选的表位具有成为H5N1亚型禽流感病毒HATh和B细胞相关抗原表位的可能。本研究为深入揭示流感病毒感染与免疫机制,H5N1亚型禽流感功能表位认知及表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素 h5n1 抗原表位
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H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的表达及纯化 被引量:9
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作者 李清州 郝惠芳 +5 位作者 王丽 赵绪永 朱礼倩 张丽萍 邓瑞广 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第8期127-130,共4页
利用PCR方法从含禽流感病毒HA基因的质粒T-HA上扩增HA基因,再将其克隆到原核表达载体pET28a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为60... 利用PCR方法从含禽流感病毒HA基因的质粒T-HA上扩增HA基因,再将其克隆到原核表达载体pET28a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为60kD,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理,表达蛋白能与H5亚型AIV阳性血清特异性反应,具有良好的抗原性。ELISA检测结果表明,用此纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV血凝素抗体具有良好的灵敏性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h5n1亚型 血凝素(hA) 原核表达
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2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA及NS基因进化分析 被引量:4
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作者 张如胜 孙边成 +6 位作者 姚栋 叶文 陈静芳 黄政 刘晓蕾 欧新华 陈发明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期85-88,80,共5页
目的分析2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)及非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进化特征。方法从2014年长沙市活禽市场采集501份环... 目的分析2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)及非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进化特征。方法从2014年长沙市活禽市场采集501份环境标本,利用Real-time PCR方法进行A型、H5、H7和H9亚型流感病毒核酸检测,并对单一H5阳性标本进行核苷酸测序,病毒HA、NA和NS基因测序结果进行在线BLAST分析,利用Mega5和Bioedit软件构建核苷酸进化树和氨基酸(Amino acids,aa)比对。结果从501份环境标本中检出A型H5亚型病毒阳性标本177份(检出率35.33%),其中8份标本经核苷酸测序鉴定为H5N1亚型病毒,进化分析表明大部分H5N1病毒HA基因位于2.3.2分支内,聚集形成一个新亚分支,NA及NS基因位于2.3.2.1b亚分支。HA蛋白受体结合位点aa为QSG,表现为禽流感病毒受体特征;NA蛋白未出现H275Y及N295Saa替换,对神经氨酸酶抑制剂敏感;HA、NA及NS蛋白关键分子位点表现为高致病性的分子特征。结论 2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA和NS基因表现为高致病性的分子特征,但不具有对人易感的受体特征,需要进一步监测。 展开更多
关键词 活禽市场 环境 禽流感病毒 h5n1亚型 基因 进化
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一株鸭源H5N1亚型禽流感病毒株部分基因的克隆及序列分析 被引量:4
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作者 李建伟 李曦 +5 位作者 于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 唐秀英 田国彬 邓国华 崔尚金 傅朝阳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期182-183,共2页
禽流感病毒(AIV)属正粘病毒科A型流感病毒属。据其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原性的不同,可分为15个HA亚型和9个NA亚型,其中H5和H7亚型的高致病力毒株可引起高致病性禽流感(HPAI)的发生。到目前为... 禽流感病毒(AIV)属正粘病毒科A型流感病毒属。据其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原性的不同,可分为15个HA亚型和9个NA亚型,其中H5和H7亚型的高致病力毒株可引起高致病性禽流感(HPAI)的发生。到目前为止,HPAI已在全世界发生数次大暴发,每一次大暴发都给当地养禽业造成巨大的经济损失。因此,多年来禽流感一直受到禽病工作者的密切关注。尤其是1997年香港发生了AIV感染人的事件,在全世界引起了轩然大波,世界卫生组织投入了大量的人财物力进行禽流感方面的研究。我国的禽流感研究工作者也付出了艰苦的努力,在禽流感研究方面取得了极大的进展。 我国于 1996年从鹅体内分离到一株对鸡具有高致病力的 AIV-A/Goose/GuangDong/96(H5N1),并进行了基因克隆和测序。今年,又从鸭体内分离到一株AIV,血凝抑制(HI)和神经氨酸酶抑制(NI)实验结果表明是 H5N1亚型。我们对其核蛋白(NP)基因、基质蛋白(M)、聚合酶(PB1、PB2)基因及HA、NA基因分别进行了克隆和测序,结果表明各基因片段长度分别为:HA-1731bp,NA-1371bp,NP-1542bp,M-1020bp,PB1-23? 展开更多
关键词 禽流感病毒 流感病毒 亚型 h5n1 基因
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复方莪术油溶液抗H5N1亚型禽流感病毒的作用研究 被引量:5
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作者 黄亚东 李燕梅 +4 位作者 项琪 苏志坚 王林川 李校堃 黄志峰 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期166-172,共7页
目的:对复方莪术油溶液在流感病毒的MDCK细胞上和在非免疫鸡内抗禽流感H5N1亚型病毒的作用进行了研究。方法:采用细胞病变效应(CPE)抑制试验和MTT测定法,研究复方莪术油溶液及其有效成分莪术醇和金丝桃素在MDCK细胞上对H5N1病毒的灭活作... 目的:对复方莪术油溶液在流感病毒的MDCK细胞上和在非免疫鸡内抗禽流感H5N1亚型病毒的作用进行了研究。方法:采用细胞病变效应(CPE)抑制试验和MTT测定法,研究复方莪术油溶液及其有效成分莪术醇和金丝桃素在MDCK细胞上对H5N1病毒的灭活作用,对病毒感染的阻滞作用,对病毒吸附的抑制作用以及对被病毒入侵的细胞的治疗作用;另外,用复方莪术油溶液对14日龄非免疫试验鸡连续经口喂药1周,采用禽流感病毒H5N1攻击鸡群,攻毒的同时开始给药,观察药物对鸡的保护作用。同时与单方莪术油溶液、贯叶连翘水提取液和阳性对照药奥司他韦以及金刚烷胺进行了比较。结果:在体外实验中,复方莪术油溶液及其有效成分莪术醇和金丝桃素通过灭活病毒,阻滞病毒感染,抑制病毒吸附和治疗病毒引起的损伤而发挥抗H5N1亚型禽流感病毒的作用;在体内实验中它们对染毒鸡具有较好的预防保护作用,可延长染毒鸡的平均存活天数,与病毒对照组比较具有显著性差异(P<0.01),奥司他韦与金刚烷也具有相似的抑制病毒的作用。结论:复方给药的效果优于单方,并且主要在预防病毒感染环节发挥抑制作用。 展开更多
关键词 莪术油 禽流感病毒 MDCK细胞 非免疫鸡 h5n1
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反向遗传操作技术产生全禽源致弱的H5N1亚型禽流感病毒的免疫保护性试验 被引量:7
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作者 石火英 张小荣 +2 位作者 孙学辉 刘慧谋 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2005年第17期11-13,共3页
利用反向遗传操作技术产生致弱的8基因全禽源的H5N1亚型禽流感病毒rgF-H5△N1,经甲醛灭活制成油苗免疫SPF鸡和有母源抗体的商品鸡。比较拯救的重配病毒rgF-H5△N1和野毒H5N1亚型禽流感病毒油苗免疫后的抗体应答水平、攻毒后发病率和死... 利用反向遗传操作技术产生致弱的8基因全禽源的H5N1亚型禽流感病毒rgF-H5△N1,经甲醛灭活制成油苗免疫SPF鸡和有母源抗体的商品鸡。比较拯救的重配病毒rgF-H5△N1和野毒H5N1亚型禽流感病毒油苗免疫后的抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标,评价其免疫和交叉免疫保护作用。结果表明:反向遗传操作技术为构建新型的流感疫苗株提供了更好的方法。 展开更多
关键词 反向遗传操作技术 禽流感病毒 疫苗 免疫保护作用 h5n1亚型 操作技术 反向遗传 保护性试验 致弱 禽源
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