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枸杞液泡膜H^+-转运焦磷酸酶基因LbVP1克隆及表达分析
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作者 杨亚珺 石晶 +3 位作者 郑国宝 王丽娟 梁文裕 巩檑 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期444-450,共7页
液泡膜H^+-转运焦磷酸酶在调节植物生长发育和逆境胁迫应答中发挥重要作用。本研究在已构建的枸杞本地数据库中先进行VP基因电子克隆,然后结合RT-PCR方法克隆到一个枸杞液泡膜H^+-转运焦磷酸酶编码基因LbVP1,并对其序列结构、时空表达... 液泡膜H^+-转运焦磷酸酶在调节植物生长发育和逆境胁迫应答中发挥重要作用。本研究在已构建的枸杞本地数据库中先进行VP基因电子克隆,然后结合RT-PCR方法克隆到一个枸杞液泡膜H^+-转运焦磷酸酶编码基因LbVP1,并对其序列结构、时空表达模式进行了初步分析。LbVP1开放阅读框全长2301 bp,编码766氨基酸残基。多序列比对显示该基因与拟南芥AVP基因相似性达87.9%,序列结构生物信息学预测和亚细胞定位实验表明,该基因具有液泡膜H^+-转运焦磷酸酶的保守结构域和跨膜区,可能在液泡膜发挥作用。荧光定量PCR结果显示,LbVP1在花、叶和不同发育阶段果实中存在时空表达差异,干旱胁迫处理下叶片和果实中该基因表达量与对照存在(极)显著差异(P<0.01,P <0.05)。研究结果将为阐明该基因在枸杞抗旱分子调控机制中的作用提供基础理论依据。 展开更多
关键词 枸杞 液泡膜H+-转运焦磷酸 LbVP1 表达模式
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杜仲2-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合酶基因全长cDNA克隆与序列分析
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作者 刘攀峰 乌云塔娜 +3 位作者 杜兰英 吴敏 黄海燕 杜红岩 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期410-416,共7页
2-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合酶(MDS)基因曾被认为是调控植物2-甲基-D-赤藓糖醇4-磷酸(MEP)途径的一个关键节点.为解析杜仲MDS基因序列信息和预测基因功能,以叶片cDNA为模板,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)及cDNA末端快... 2-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合酶(MDS)基因曾被认为是调控植物2-甲基-D-赤藓糖醇4-磷酸(MEP)途径的一个关键节点.为解析杜仲MDS基因序列信息和预测基因功能,以叶片cDNA为模板,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)及cDNA末端快速扩增(RACE)技术分离出杜仲MDS基因的cDNA克隆,并通过一系列生物信息学方法进行序列分析.结果表明:EuMDS基因cDNA全长976 bp,5'端非编码区长119 bp,3'端非编码区长146bp,编码236个氨基酸.推导EuMDS氨基酸序列中包含转运肽序列(A1~A56)以及多个植物MDS蛋白保守的功能位点(A84,A87,A89,A121,A213,A217,A221,A223,A228).推导EuMDS蛋白二级结构中α-螺旋占40.3%,β-折叠占13.6%,螺环结构占46.2%.推导EuMDS蛋白三级结构由3个亚单位组成,并相互围绕形成1个分子内腔.系统进化分析表明EuMDS蛋白与啤酒花MDS蛋白亲缘关系最为接近.预测所克隆的EuMDS基因在杜仲萜类生物合成中发挥重要功能. 展开更多
关键词 林木育种学 杜仲 2-甲基-D-赤藓醇-2 4-焦磷酸(MDS) 基因 序列分析
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急性淋巴细胞白血病患儿维持治疗期肌酐三磷酸焦磷酸酶活性与6-巯基嘌呤毒性的关系 被引量:1
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作者 吐尔逊娜依·玉山 刘玉 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期412-416,共5页
目的预测肌酐三磷酸焦磷酸酶(ITPA)活性与6-巯基嘌呤(6-MP)维持治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)不良反应发生。方法选取于2002年3月至2012年9月就诊,采用6-MP和甲氨蝶呤维持治疗的54例ALL患儿作为研究对象。回顾性分析患儿ITPA浓度与... 目的预测肌酐三磷酸焦磷酸酶(ITPA)活性与6-巯基嘌呤(6-MP)维持治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)不良反应发生。方法选取于2002年3月至2012年9月就诊,采用6-MP和甲氨蝶呤维持治疗的54例ALL患儿作为研究对象。回顾性分析患儿ITPA浓度与治疗期间白细胞减少和肝毒性等不良反应发生,检测患儿ITPA以及6-巯嘌呤基转移酶等位基因突变体(TPMT)的基因型。结果 54例患儿的ITPA活性在2.2-343μmol/(h.gHb)之间。18例为ITPA 94C>A突变杂合子,2例为纯合子。6-MP不良反应发生率为70.4%,其中白细胞减少发生率为35.8%,肝毒性发生率为58.2%。有肝毒性患儿的ITPA活性低于无肝毒性患儿,差异有统计学意义(P=0.01)。20例ITPA活性<126μmol/(h.gHb)患儿中有10例(50.0%)因肝毒性而不得不降低6-MP治疗浓度者,而34例ITPA活性≥126μmol/(h.gHb)患儿中无一降低治疗浓度,差异有统计学意义(P=0.01);ITPA活性<126μmol/(h.gHb)患儿的6-MP治疗浓度低于ITPA活性≥126μmol/(h.gHb)的患儿,差异有统计学意义(P=0.01)。结论 ALL患儿维持治疗期ITPA活性与6-MP不良反应发生有关。 展开更多
关键词 急性淋巴细胞白血病 肌酐三磷酸焦磷酸 6-巯基嘌呤 不良反应
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葡萄糖焦磷酸酶基因与巨胚基因聚合创建营养功能稻 被引量:9
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作者 张光恒 曾大力 +5 位作者 郭龙彪 刘慧娟 胡江 高振宇 华志华 钱前 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期567-572,共6页
以利用农杆菌介导glgC-TM基因而获得的水稻优质晚粳品种中超123Ts代纯系作为葡萄糖焦磷酸酶(ADP—glucose pyrophosphorylase,AGP)基因的供体亲本,与营养功能粳稻品种巨胚1号为酽基因供体亲本进行杂交。通过单株稻米籽粒胚性状的形... 以利用农杆菌介导glgC-TM基因而获得的水稻优质晚粳品种中超123Ts代纯系作为葡萄糖焦磷酸酶(ADP—glucose pyrophosphorylase,AGP)基因的供体亲本,与营养功能粳稻品种巨胚1号为酽基因供体亲本进行杂交。通过单株稻米籽粒胚性状的形态观察并结合分子标记检测,在64个F4代候选株系中共筛选到16个同时带有glgC-TM/ge双基因的聚合株系。对其中综合性状较好、籽粒大的5个株系种子分别进行胚重、米质理化指标和γ-氨基丁酸(GABA)含量的测定。与AGP基因的供体亲本中超123相比,5个含glgC-TM/ge双基因聚合株系稻米的百粒胚重最小增幅为70.2%,最大增幅为119.0%,达极显著水平;GABA含量的增加幅度为102.93%~194.14%。所选株系的千粒重均超过巨胚1号,差异达极显著水平;而稻米的胶稠度、碱消值和直链淀粉含量等品质指标的变化不很明显。偏籼型的glgC-TM/ge聚合株系直链淀粉含量均显著高于双亲中超123和巨胚1号;而偏粳型的glgC-TM/ge聚合株系与双亲没有显著差异。研究结果表明,glgC-TM和驴基因在聚合株系稻米籽粒总淀粉的合成和胚的形成中都得到充分表达,增加了稻谷千粒重和米胚大小,但对直链淀粉的合成影响不大。认为利用生物技术与传统技术相结合的分子设计育种来调整稻米的营养功能结构和产量是一条行之有效的途径。 展开更多
关键词 基因聚合 葡萄糖焦磷酸基因 巨胚基因 Γ-氨基丁酸 稻米品质 营养功能稻
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马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的调控 被引量:3
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作者 马彦军 王蒂 《中国马铃薯》 2002年第6期353-355,共3页
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶是淀粉合成过程中一个限速酶 ,其表达受到转录、温度、底物等多种因素调控。在 2 5℃其活性最强。 3 磷酸甘油和焦磷酸分别是其最有效的激活剂和抑制剂 ,其它物质如BSA、半胱氨酸、 2 巯基乙醇和谷胱甘肽都... 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶是淀粉合成过程中一个限速酶 ,其表达受到转录、温度、底物等多种因素调控。在 2 5℃其活性最强。 3 磷酸甘油和焦磷酸分别是其最有效的激活剂和抑制剂 ,其它物质如BSA、半胱氨酸、 2 巯基乙醇和谷胱甘肽都能使腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的活性有所提高 ;NADP +、ADP、AMP等轻微地抑制腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性。 展开更多
关键词 马铃薯 腺苷二磷酸 葡萄糖 焦磷酸 温度 3-磷酸甘油 基因工程
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莱茵衣藻腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的相互作用蛋白组分析 被引量:1
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作者 纪超凡 曹旭鹏 +1 位作者 薛松 修志龙 《北京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第9期985-990,共6页
微藻利用光能和CO2合成淀粉作为藻细胞的储能物质,是以燃料乙醇为代表的液体生物燃料的可持续原料来源.理解微藻淀粉代谢关键酶的催化机制和调控方式是基因工程操作以提高藻细胞淀粉积累能力的前提.基于此,以莱茵衣藻淀粉合成代谢中的... 微藻利用光能和CO2合成淀粉作为藻细胞的储能物质,是以燃料乙醇为代表的液体生物燃料的可持续原料来源.理解微藻淀粉代谢关键酶的催化机制和调控方式是基因工程操作以提高藻细胞淀粉积累能力的前提.基于此,以莱茵衣藻淀粉合成代谢中的关键酶腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)催化亚基为探针蛋白,获取该酶的GST融合蛋白后使用GST沉降分析实验结合HPLC-MS/MS的蛋白质检测技术及生物信息学分析方法获得一组与AGPase催化亚基存在相互作用蛋白质,主要包含分子伴侣蛋白、光合作用相关蛋白和信号蛋白分子等.通过综合分析上述蛋白组的生理功能及亚细胞定位,揭示了它们通过与AGPase相互作用在淀粉合成代谢中的生物学意义. 展开更多
关键词 莱茵衣藻 淀粉 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸 蛋白质-蛋白质相互作用
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赤霉素生物合成酶基因GhCPS和GhKS参与甲哌鎓对棉花幼苗叶片生长的控制 被引量:3
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作者 王丽 张明才 +2 位作者 杜明伟 田晓莉 李召虎 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1350-1355,共6页
室内盆栽欣抗4,在棉花幼苗第3片真叶完全展平时(第4叶未展开)鎓叶面喷施甲哌(DPC),研究DPC对棉花幼苗叶片生长的控制与赤霉素(GA)合成早期关键酶柯巴基焦磷酸合酶(CPS)和内根-贝壳杉烯合酶(KS)基因表达的关系。结果表明, DPC... 室内盆栽欣抗4,在棉花幼苗第3片真叶完全展平时(第4叶未展开)鎓叶面喷施甲哌(DPC),研究DPC对棉花幼苗叶片生长的控制与赤霉素(GA)合成早期关键酶柯巴基焦磷酸合酶(CPS)和内根-贝壳杉烯合酶(KS)基因表达的关系。结果表明, DPC处理显著减小棉花幼苗第3和第4叶的叶面积,第4叶叶面积受控制程度较第3叶大;80 mg L^-1 DPC处理的棉花幼苗第3和第4叶中GA4含量分别于处理后4 d和4~6 d显著低于对照;与对照相比,80 mg L^-1 DPC处理的棉花幼苗第3叶中GhCPS和GhKS表达在处理后1~4 d显著降低,而第4叶中GhCPS和GhKS的表达在处理后1~6 d显著降低。由此可见, DPC通过影响GhCPS和GhKS的表达,降低内源活性GA4的含量,控制棉花幼苗叶片生长,且较幼嫩叶片对DPC较敏感。 展开更多
关键词 棉花 柯巴基焦磷酸 内根-贝壳杉烯合 叶面积
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保加利亚乳杆菌产酸关键酶的研究 被引量:4
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作者 孙懿琳 方伟 +1 位作者 田辉 霍贵成 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期187-191,共5页
以四株德氏乳杆菌保加利亚亚种为出发菌株,详细比较了四株菌产酸关键酶酶活的差异,从而找出菌株KLDS1.1006和KLDS1.1011后酸化较弱的主要原因及控制其产酸的关键酶。结果表明,H^+-ATPase可以控制菌株的能量代谢,是产酸关键酶;β-半乳糖... 以四株德氏乳杆菌保加利亚亚种为出发菌株,详细比较了四株菌产酸关键酶酶活的差异,从而找出菌株KLDS1.1006和KLDS1.1011后酸化较弱的主要原因及控制其产酸的关键酶。结果表明,H^+-ATPase可以控制菌株的能量代谢,是产酸关键酶;β-半乳糖苷酶对于分解乳糖产酸的贡献非常大,是乳糖代谢关键酶;乳酸脱氢酶和蛋白酶与后发酵产酸过程并没有必然联系;H^+-ATPase和β-半乳糖苷酶酶活性较弱是引起菌株KLDS1.1006和KLDS1.1011后酸化程度弱的根本原因。 展开更多
关键词 德氏乳杆菌保加利亚亚种 H^+-ATPASE Β-半乳糖苷 乳酸脱氢 蛋白
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咪唑[4,5-b]并吡啶类化合物的合成 被引量:3
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作者 张军忍 陈国华 +2 位作者 龙绪江 魏宝康 路国荣 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期280-282,共3页
AIM:To search for new inhibitors with excellent activity and stability to (H ++K +)ATPase.METHOD:Beginning with 2-amino-6-chloro-3-nitropyridine,the title compounds were obtained by substitutioin,cyclization and oxida... AIM:To search for new inhibitors with excellent activity and stability to (H ++K +)ATPase.METHOD:Beginning with 2-amino-6-chloro-3-nitropyridine,the title compounds were obtained by substitutioin,cyclization and oxidation.RESULT:Five new compounds were synthesized and the structure of the title compounds was identified by IR, 1HNMR and ESI-MS.Activity and stability of the five new compounds are on searching. 展开更多
关键词 H^+/K^+-ATP抑制剂 2-氨基-6--3-硝基吡啶 合成
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柴胡皂苷合成途径中三个关键酶基因片段的克隆与序列分析 被引量:17
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作者 董乐萌 刘玉军 魏建和 《世界科学技术-中医药现代化》 2008年第5期56-60,15,共6页
本文以北柴胡幼嫩根的总RNA为模板,通过RT-PCR方法,克隆出3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)、异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IPPI)和法尼基焦磷酸合酶(... 本文以北柴胡幼嫩根的总RNA为模板,通过RT-PCR方法,克隆出3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)、异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IPPI)和法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的cDNA片断,大小分别为470bp、532bp、466bp,分别编码157、177、155个氨基酸多肽。提交到Gen- Bank上,得到登陆号分别为:HMGR(EU400217)、IPPI(EU400218)、FPS(EU400219)。NCBI在线blast结果表明,推断的北柴胡HMGR、IPPI和FPS基因的氨基酸序列分别与杜仲、三岛柴胡和雷公藤的一致性最高,分别为93%、99%、97%。对HMGR基因和FPS基因进行特征性保守域分析,结果显示,推断的HMGR氨基酸序列存在两个NADPH结合基序,FPS存在三个特征性保守序列:DDIMD、GQMID和KL。构建的植物IPPI的分子进化树表明,北柴胡IPPI基因与伞形科植物(胡萝卜和三岛柴胡)亲缘关系最近,与单子叶植物(玉米和水稻)亲缘关系较远。本文首次分离报道了北柴胡柴胡皂苷合成途径中三个关键酶基因(HMGR、IPPI和FPS)cDNA的克隆,新获得的基因片段序列为进一步克隆全序列和了解调控柴胡皂苷的生物合成奠定了基础。 展开更多
关键词 北柴胡 柴胡皂苷 3-羟基-3甲基戊二酰辅A还原(HMGR) 异戊烯基焦磷酸异构(IPPI) 法尼基焦磷酸(FPS)
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PjFPS和Pjβ-AS双基因协同作用对珠子参皂苷生物合成的影响 被引量:1
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作者 陈勤 刘美佳 +3 位作者 刘迪秋 曲媛 崔秀明 葛锋 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期428-436,共9页
法尼基焦磷酸合酶(PjFPS)和β-香树脂醇合酶(Pjβ-AS)是珠子参皂苷(Panax japonicus saponins,PJS)生物合成途径中可能的关键酶。通过在珠子参(P.japonicus)细胞中同时过表达PjFPS和Pjβ-AS基因,探讨PjFPS和Pjβ-AS对PJS生物合成的协同... 法尼基焦磷酸合酶(PjFPS)和β-香树脂醇合酶(Pjβ-AS)是珠子参皂苷(Panax japonicus saponins,PJS)生物合成途径中可能的关键酶。通过在珠子参(P.japonicus)细胞中同时过表达PjFPS和Pjβ-AS基因,探讨PjFPS和Pjβ-AS对PJS生物合成的协同作用。结果表明,PjFPS和Pjβ-AS是PJS生物合成途径中的关键酶基因,对珠子参皂苷的生物合成具有调节作用。过表达PjFPS和Pjβ-AS的细胞系中,PJS合成途径相关的多个关键酶基因的表达水平有不同程度的提高,且PJS的含量最高为普通细胞系的2.4倍。虽然单独过表达PjFPS也可增加PJS的合成,但双基因(PjFPS和Pjβ-AS)协同调控PJS合成的效果更好。 展开更多
关键词 三萜皂苷 生物合成 珠子参 法尼基焦磷酸 β-香树脂醇合
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ZxNHX1-VP1-1和ZxABCG11转基因紫花苜蓿在田间条件下的生长发育及饲用品质分析 被引量:1
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作者 刘林波 林杉 +5 位作者 高鲤 邓育轩 赵一颖 马春莲 包爱科 王锁民 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期339-345,共7页
为探究霸王(Zygophyllum xanthoxylum)液泡膜Na^(+)区域化功能基因ZxNHX1和H^(+)-焦磷酸酶(H^(+)-pyrophosphatase)编码基因ZxVP1-1及角质层蜡质转运基因ZxABCG11对“新疆大叶”紫花苜蓿(Medicago sativa)生长发育及饲用品质的影响,测... 为探究霸王(Zygophyllum xanthoxylum)液泡膜Na^(+)区域化功能基因ZxNHX1和H^(+)-焦磷酸酶(H^(+)-pyrophosphatase)编码基因ZxVP1-1及角质层蜡质转运基因ZxABCG11对“新疆大叶”紫花苜蓿(Medicago sativa)生长发育及饲用品质的影响,测定野生型及ZxNHX1-VP1-1和ZxABCG11转基因紫花苜蓿在田间条件下的生长发育和饲用品质相关指标.结果表明,ZxNHX1-VP1-1转基因苜蓿的叶面积和干草产量分别比野生型高56.4%和74.5%,净光合速率和水分利用率均显著高于野生型(P<0.05),花期比野生型延长19d;ZxABCG11转基因苜蓿的叶面积和茎粗均显著大于野生型(P<0.05),净光合速率和水分利用率分别比野生型高81.7%和80.5%,花期比野生型延长38d;ZxNHX1-VP1-1转基因苜蓿的中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和酸性洗涤木质素含量显著低于野生型(P<0.05),相对饲用价值比野生型提高了35.4%.霸王ZxNHX1和ZxVP1-1的超表达提高了紫花苜蓿的生物量和饲用品质,并延长了开花时间;ZxABCG11的超表达对紫花苜蓿叶面积、茎粗和光合能力产生了影响,花期相比野生型有所延长. 展开更多
关键词 Na^(+)区域化 H^(+)-焦磷酸 角质层蜡质 转基因紫花苜蓿 相对饲用价值
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冷胁迫对水稻幼苗根系液泡膜质子泵的伤害及钙的调节作用 被引量:9
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作者 赵利辉 刘友良 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期5-8,共4页
选用耐冷性不同的两个水稻品种 ,研究了在低温下幼苗根系活力、液泡膜质子泵活性的变化及外源钙的调节作用。结果表明 ,8℃低温处理的水稻幼苗根系活力降低 ,随着胁迫时间的延长 ,伤害进一步发展 ,抗冷性弱的汕优 6 3比抗冷性强的武育... 选用耐冷性不同的两个水稻品种 ,研究了在低温下幼苗根系活力、液泡膜质子泵活性的变化及外源钙的调节作用。结果表明 ,8℃低温处理的水稻幼苗根系活力降低 ,随着胁迫时间的延长 ,伤害进一步发展 ,抗冷性弱的汕优 6 3比抗冷性强的武育粳 3号伤害严重。 8℃处理 7d内 ,两品种根系V ATPase (液泡膜H+ ATP酶 )和汕优 6 3V PPase (液泡膜H+ 焦磷酸酶 )活性持续下降 ,而武育粳 3号V PPase在前 3d内活性上升 ,5d后才呈下降态势。根系在低温下维持较高的V PPase活性 ,可能是水稻耐冷的原因之一。 8℃低温处理外加 2 0~ 40mmol/LCa (NO3) 2 展开更多
关键词 水稻 冷害 液泡膜 H^(+)-ATP H^(+)-焦磷酸 Ca^(2+)
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茉莉酸甲酯诱导大戟三萜类代谢的研究 被引量:15
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作者 张文娟 曹小迎 蒋继宏 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期590-596,共7页
京大戟是多年生草本药用植物,人药部分是其干燥根,但可人药的京大戟资源由于生长缓慢以及环境污染的加剧而越发匮乏,因此解决大戟资源日益紧张的问题是当今药用植物资源开发与利用方向的重要课题。京大戟含有三萜类、二萜类、黄酮类等... 京大戟是多年生草本药用植物,人药部分是其干燥根,但可人药的京大戟资源由于生长缓慢以及环境污染的加剧而越发匮乏,因此解决大戟资源日益紧张的问题是当今药用植物资源开发与利用方向的重要课题。京大戟含有三萜类、二萜类、黄酮类等丰富的活性成分,一些常见药用植物的有效成分是三萜类化合物,其在抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等方面具有很好的活性。对植物萜类物质代谢起重要作用的关键酶,如3羟基,3甲基戊二酰辅酶A还原酶(hmgr)、鲨烯合酶(sqs)、法尼基焦磷酸合酶(fps)的基因克隆及活性研究取得了进展和突破,但通过调控萜类物质代谢途径中关键酶基因的表达来诱导终产物合成的研究鲜有报道。通过研究大戟萜类物质代谢途径进而利用基因工程手段提升目的物质的产量来解决京大戟药源短缺问题具有重要意义。该研究以大戟愈伤组织为材料,使用茉莉酸甲酯分别按时间梯度和浓度梯度进行诱导,将诱导后的愈伤组织分为两部分:一部分提取其总RNA,以actin为内参基因进行反转录,实时定量RT-PCR分析大戟三萜类代谢途径中hmgr、sqs与fps基因的相对表达差异;另一部分用于提取其总三萜并使用分光光度法进行含量测定。实时定量RT-PCR分析结果表明,茉莉酸甲酯可诱导3个基因的表达,但其表达模式不一样。相应的京大戟愈伤组织中总三萜的含量明显提高,最高可较未处理样品增加27%。研究结果可为茉莉酸甲酯促进药用植物大戟三萜类物质积累的分子机制研究提供参考。 展开更多
关键词 京大戟 茉莉酸甲酯 3-羟基-3-甲基戊二酰辅A还原 鲨烯合 法尼基焦磷酸 实时定量PCR 总三萜
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一个丙环唑诱导的水稻基因cDNA片段的分离与分析 被引量:1
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作者 殷得所 王世全 +3 位作者 邓其明 李双成 王玲霞 李平 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期572-576,共5页
采用差异显示技术,以丙环唑作为诱导剂,对水稻幼苗进行筛选,得到一个化学诱导表达增强的差异片段。生物信息学分析表明,此片段可在水稻EST库中找到多个同源序列,其氨基酸序列与水稻、拟南芥等植物的GMPase基因高度同源,位于水稻第1染色... 采用差异显示技术,以丙环唑作为诱导剂,对水稻幼苗进行筛选,得到一个化学诱导表达增强的差异片段。生物信息学分析表明,此片段可在水稻EST库中找到多个同源序列,其氨基酸序列与水稻、拟南芥等植物的GMPase基因高度同源,位于水稻第1染色体,是抗坏血酸合成途径中的关键酶。RT-PCR实验表明此基因在丙环唑诱导后表达增强。 展开更多
关键词 水稻 化学诱导 MRNA差异显示 鸟苷-甘露糖焦磷酸基因 丙环唑
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苹果GMP、GME和GGP基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 夏惠 张敏 马锋旺 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第3期191-196,共6页
【目的】克隆苹果GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GMP)、GDP-甘露糖-3′,5′-表异构酶(GDP-mannose-3′,5′-epimerase,GME)和GDP-1-半乳糖磷酸酶(GDP-L-galactose-1-phosphate phosphorylase,GGP)的基因序列并分... 【目的】克隆苹果GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GMP)、GDP-甘露糖-3′,5′-表异构酶(GDP-mannose-3′,5′-epimerase,GME)和GDP-1-半乳糖磷酸酶(GDP-L-galactose-1-phosphate phosphorylase,GGP)的基因序列并分析其表达特性,探讨GMP、GME和GGP基因在抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA)合成过程中的作用。【方法】以‘嘎啦’苹果幼果为材料,分别运用RT-PCR和PCR法克隆GMP、GME和GGP基因的cDNA和gDNA全长序列,对其序列及编码产物进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR,分析以上基因在苹果不同组织(幼叶、成熟叶、衰老叶、花、幼果、成熟果和根)中的表达情况。【结果】RT-PCR法克隆及序列分析显示,GMP基因的cDNA全长为1 280bp,编码361个氨基酸,gDNA序列中含有3个内含子;GME基因的cDNA全长为1 323bp,编码376个氨基酸,gDNA序列中含有5个内含子;GGP基因的cDNA全长为1 677bp,编码446个氨基酸,gDNA序列中含有6个内含子。基因表达的实时荧光定量PCR分析表明,GMP、GME和GGP在苹果不同组织中均有表达,在叶片中的表达量高于其他组织,且表达量随着叶片的生长逐渐升高;在花、幼果和成熟果中,GMP、GME和GGP的表达量差异不明显。【结论】克隆获得了苹果的GMP、GME和GGP基因,其在苹果不同组织的生长过程中有不同的表达特性,但GME的表达水平远远低于GMP和GGP,这在一定程度上表明,在苹果AsA的生物合成过程中,GMP、GGP较GME有更重要的作用。 展开更多
关键词 苹果 GDP-甘露糖焦磷酸 GDP-甘露糖-3′ 5′-表异构 GDP-1-半乳糖磷酸 抗坏血酸
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过量表达马蔺VP基因增强烟草抗旱耐盐性研究 被引量:2
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作者 李杉杉 郭静雅 +3 位作者 郭强 毛培春 田小霞 孟林 《草学》 2017年第2期21-27,32,共8页
干旱与土壤盐渍化已成为限制植物生长的重要影响因素。液泡膜H^+焦磷酸酶(V-H^+-PPase)具有质子泵功能,在植物抗旱耐盐中起重要作用。本研究将课题组得到的转马蔺IlVP(V-H^+-PPase)基因烟草植株(T3和T18)进行不同浓度NaCl处理和干旱胁迫... 干旱与土壤盐渍化已成为限制植物生长的重要影响因素。液泡膜H^+焦磷酸酶(V-H^+-PPase)具有质子泵功能,在植物抗旱耐盐中起重要作用。本研究将课题组得到的转马蔺IlVP(V-H^+-PPase)基因烟草植株(T3和T18)进行不同浓度NaCl处理和干旱胁迫,并以野生型烟草W38(WT)为对照,通过对其生长和生理指标的测定分析,结果显示,在NaCl或干旱处理下,转基因烟草T3和T18植株干重、叶面积、叶片相对含水量和水分利用效率均高于野生型WT植株,其中200mmol·L^(-1) NaCl处理下T18干重、叶面积、叶片相对含水量和水分利用效率分别是W38的2.46、1.69、1.08和3.84倍,干旱处理下T18的各项指标分别是野生型的1.52、1.17、1.07和1.41倍。转基因和野生型植株的叶片质膜透性均随NaCl浓度增加或干旱处理而有所升高,但转基因植株的增量明显低于野生型。转基因及野生型植株根、茎、叶中的Na^+含量均随NaCl浓度升高或干旱处理而增加,而K^+含量呈逐渐降低趋势,但转基因T3和T18烟草根、茎、叶中的Na^+和K^+含量均高于野生型WT。这说明NaCl和干旱胁迫下过量表达IlVP可增强烟草的液泡离子区域的能力,降低Na^+对细胞质的毒害,进而保护膜的完整性,提高烟草的抗旱性和耐盐性。 展开更多
关键词 马蔺 液泡膜H^+焦磷酸 抗旱性 耐盐性
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棉花基因组数据库中CPS&KS基因的查找与分析
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作者 赵亮 狄佳春 陈旭升 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期27-33,共7页
为了探究赤霉素合成关键酶CPS&KS类基因在棉花中的分布情况,分析了已发表的拟南芥CPS&KS基因编码的蛋白质氨基酸序列,发现该类基因存在2个保守结构域,Terpene_synth和Terpene_synth_C,其在Pfam数据库中的种子文件分别为PF01397... 为了探究赤霉素合成关键酶CPS&KS类基因在棉花中的分布情况,分析了已发表的拟南芥CPS&KS基因编码的蛋白质氨基酸序列,发现该类基因存在2个保守结构域,Terpene_synth和Terpene_synth_C,其在Pfam数据库中的种子文件分别为PF01397和PF03936。利用软件HMMER中的Hmmsearch程序在雷蒙德氏棉蛋白质数据库中调取72条序列,通过与拟南芥中的CPS&KS基因序列进行比对,最终在雷蒙德氏棉基因组中筛选到5个CPS&KS候选基因,这5个基因与四倍体棉花TM-1基因组At和Dt亚组的10个基因具有同源关系。通过对赤霉素敏感的棉花超矮杆突变体赤霉素处理前后转录组数据库分析比对,最终确定2个KS候选基因在转录组中表现为上调作用。 展开更多
关键词 棉花 赤霉素合成 柯巴基焦磷酸(CPS) 内根-贝壳杉烯合(KS)
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用启动子融合GUS的方法分析OsUgp1基因的表达模式 被引量:2
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作者 苏珍霞 欧广亮 +1 位作者 李奕恒 穆虹 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期57-61,共5页
克隆水稻尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(OsUgp1)的启动子,并与大肠杆菌β-葡萄糖苷酸酶(β-glucu-ron idase,GUS)报告基因连接后转化水稻,采用GUS组织化学染色检测启动子驱动GUS基因在水稻转化植株中的表达情况,发现在水稻的根、... 克隆水稻尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(OsUgp1)的启动子,并与大肠杆菌β-葡萄糖苷酸酶(β-glucu-ron idase,GUS)报告基因连接后转化水稻,采用GUS组织化学染色检测启动子驱动GUS基因在水稻转化植株中的表达情况,发现在水稻的根、茎、叶、内外稃、子房、柱头等组织,以及减数分裂时期的花药及不同发育时期的胚乳和胚中均有表达.通过与水稻中另一同源基因(OsUgp2)的启动子GUS融合基因在种子发育过程的表达进行比较,发现两者有明显的差异:OsUgp1基因在开花后5-20 d的胚乳和胚中表达量都比较高,而OsUgp2基因几乎不表达.进一步通过对OsUgp1基因和OsUgp2基因启动子区有关胚乳特异表达相关顺式调控元件在数量和分布位置上的差异分析,探讨了该2个同源基因在种子发育中趋异表达可能的分子机制. 展开更多
关键词 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸 启动子 β-葡萄糖苷酸(GUS)
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GmVP1基因克隆与转GmVP1/GmNHX1双价基因的大豆发状根耐盐性分析 被引量:3
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作者 赵甜甜 范会芬 +3 位作者 孙天杰 肖付明 张洁 王冬梅 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期19-25,33,共8页
将Na^+外排和区隔化作用的Na^+/H^+逆向转运蛋白(NHX)的基因和能够为其提供跨液泡膜H^+梯度驱动力的液泡膜H^+-焦磷酸酶(VP)的基因共转化能够提高植物耐盐性。本研究从抗盐大豆品种‘冀豆7号’中克隆得到液泡膜H^+-焦磷酸酶基因GmVP1,... 将Na^+外排和区隔化作用的Na^+/H^+逆向转运蛋白(NHX)的基因和能够为其提供跨液泡膜H^+梯度驱动力的液泡膜H^+-焦磷酸酶(VP)的基因共转化能够提高植物耐盐性。本研究从抗盐大豆品种‘冀豆7号’中克隆得到液泡膜H^+-焦磷酸酶基因GmVP1,构建了GmVP1单价以及GmVP1与GmNHX1双价转化载体,利用发根农杆菌介导的大豆子叶转化体系验证其功能。结果表明,GmVP1在转录水平响应盐胁迫,GmVP1基因在一定条件下可以提高转基因大豆发状根对NaCl的耐受性,GmVP1/GmNHX1双价基因过表达比GmVP1单基因过表达更能提高大豆发状根相对生长量及其耐盐性。 展开更多
关键词 大豆 耐盐性 液泡膜H^+-焦磷酸基因 GmNHX1 双价基因载体构建
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