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CPA-核酸试纸条快速检测霍乱弧菌方法的建立与优化 被引量:7
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作者 秦强 朱金玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期167-171,共5页
用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)和核酸试纸条检测方法(Nucleic acid test strip detection methord)快速检测霍乱弧菌。根据霍乱弧菌的MDH基因序列设计特异性的引物和探针,通过对反应体系与反应条件进行优化... 用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)和核酸试纸条检测方法(Nucleic acid test strip detection methord)快速检测霍乱弧菌。根据霍乱弧菌的MDH基因序列设计特异性的引物和探针,通过对反应体系与反应条件进行优化,确立最佳反应体系,并将CPA方法与PCR法进行比较与评价。对霍乱弧菌的检测具有高度特异性,对霍乱弧菌的检出极限达到了6×102CFU/mL,高于PCR,而且具有较好的稳定性。交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)-核酸试纸条检测方法(Nucleic acid test strip detection methord)是一种特异、灵敏、快速、简便的霍乱弧菌的检测方法。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 交叉引物恒温扩增技术 核酸试纸条检测方法
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交叉引物恒温扩增法检测甲型H1N1流感病毒及临床应用 被引量:10
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作者 白志军 胡林 +4 位作者 李魁彪 钟华燕 陈艺韵 鲁恩洁 狄飚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期208-211,215,共5页
目的建立交叉引物恒温扩增(Cross Priming Amplification,CPA)技术对甲型H1N1流感病毒进行检测的方法,并对该方法通过临床标本进行评价。方法根据甲型H1N1流感病毒的保守序列设计特异性引物,并在同一温度下实现RNA的逆转录和DNA扩增,... 目的建立交叉引物恒温扩增(Cross Priming Amplification,CPA)技术对甲型H1N1流感病毒进行检测的方法,并对该方法通过临床标本进行评价。方法根据甲型H1N1流感病毒的保守序列设计特异性引物,并在同一温度下实现RNA的逆转录和DNA扩增,该扩增产物可通过全封闭式核酸检测装置进行检测。14份健康人咽拭子标本、7个其他呼吸道病毒和6个虫媒病毒株被用来检测CPA反应的特异性;已知病毒滴度的甲型H1N1毒株进行对照梯度稀释,以测试CPA的敏感性;102份甲型H1N1临床咽拭子标本为检测对象,评估其临床的检测的可行性。结果 CPA反应未出现对健康样本以及其他病毒产生交叉反应;对已知滴度的病毒进行梯度稀释检测,证明CPA的敏感性为10拷贝/μL。对甲型H1N1流感临床病例发病1~3d临床标本新建检测方法的检出率为100%,4~6d临床标本检出率为79.31%,≥7d临床标本检出率为9.09%。讨论CPA具有较高的敏感性、特异性,对设备要求低,适合基层医疗单位对甲型H1N1流感发病早期诊断使用。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 交叉引物恒温扩增技术 临床应用
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交叉引物恒温扩增技术检测创伤弧菌的应用研究 被引量:4
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作者 张晶 吴新伟 +3 位作者 陈惠玲 陈佳璇 狄飚 白志军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期711-714,共4页
目的建立一种快速检测创伤弧菌( Vibrio vulnificus )的交叉引物恒温扩增(cross priming amplification,CPA)技术。方法 针对创伤弧菌vvhA基因序列保守区域设计CPA引物和探针,并优化反应体系和反应条件,同时验证方法的灵敏度和特异性。... 目的建立一种快速检测创伤弧菌( Vibrio vulnificus )的交叉引物恒温扩增(cross priming amplification,CPA)技术。方法 针对创伤弧菌vvhA基因序列保守区域设计CPA引物和探针,并优化反应体系和反应条件,同时验证方法的灵敏度和特异性。结果 对创伤弧菌的检测具有高度特异性;对创伤弧菌菌液检测的灵敏度达到了1.28×10^3 CFU /mL,此法 40~60 min 内即可完成检测。利用CPA法针对本实验室前期研究的CB型、EA型、CAB型、CA型和EB型等亚型创伤弧菌毒株计算特异性和敏感性,5种亚型中除了CB亚型特异性和敏感性为95.65%和100%,其余亚型特异性和敏感性均为100%。结论 本研究建立的CPA法具有较高的特异性和灵敏性,可有效缩短检验时间提高检验效率。 展开更多
关键词 创伤弧菌 交叉引物恒温扩增 vvhA基因
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交叉引物扩增法快速检测牛病毒性腹泻病毒 被引量:1
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作者 贺泂杰 《中国乳业》 2023年第7期30-34,39,共6页
[目的]牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是一种可以引起牛腹泻的病原体,在中国分布广泛,给养牛业造成了巨大损失。快速发现和准确鉴定BVDV对后续管理和流行病学调查至关重要。[方法]本研究以5'UTR基因为靶点,应用交叉引物扩增(CPA)与免疫层... [目的]牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是一种可以引起牛腹泻的病原体,在中国分布广泛,给养牛业造成了巨大损失。快速发现和准确鉴定BVDV对后续管理和流行病学调查至关重要。[方法]本研究以5'UTR基因为靶点,应用交叉引物扩增(CPA)与免疫层析试纸相结合的检测方法对BVDV进行检测。[结果]CPA检测限为每次反应640 fg,温度为62℃,反应时间为60 min。未观察到与牛感染的其他病原体发生交叉反应。此外,使用CPA测定法对100份感染BVDV的现场样本进行准确评估。将CPA与常规PCR检测结果进行比较,结果显示,CPA比常规PCR具有更高的检出率。[结论]CPA检测是一种实用、有效的BVDV诊断工具。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 交叉引物扩增(cpa) 免疫层析 诊断
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