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题名人类3-磷酸甘油醛脱氢酶的原核表达、纯化和鉴定
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作者
李毅
万涛
杨琴
蔡雪飞
张文露
汤华
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机构
重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期102-105,共4页
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基金
国家自然科学基金(30771924)
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文摘
为了研究3-磷酸甘油醛脱氧酶(GAPDH)化生物学功能,以pcDNA3.1-GAPDH质粒为模板,PCR方法扩增GAPDH基因,经BamHI和SalI双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,构建His-GAPDH融合蛋白表达质粒pET32a(+)-GAPDH;转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选,扩增目的质粒;转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导产生融合蛋白,亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE和Western blotting检测GAPDH蛋白表达情况。结果表明,构建的人GAPDH基因表达载体经序列测定证实,与GenBank数据完全一致;双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入pET32a(+)载体;表达质粒pET32a(+)-GAPDH在大肠杆菌BL21中成功地诱导表达了可溶性His-GAPDH融合蛋白,纯化后SDS-PAGE和Western blotting检测证实融合蛋白表达成功。人GAPDH原核表达载体的成功构建,及6His-GAPDH融合蛋白的正确表达,为进一步深入研究GAPDH的生物学功能奠定了基础。
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关键词
三磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh)
原核表达
SDS—PAGE
免疫印迹
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Keywords
glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase（gapdh） prokaryotic expression sds-page immunoblot
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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