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棉花GhCOMT1基因原核表达载体构建及蛋白纯化和Western鉴定
被引量：
6
1
作者
李波
倪志勇
+1 位作者
李晓东
范玲
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期1971-1976,共6页
为进一步研究GhCOMT1基因的功能,构建了原核表达载体pET-28a-GhCOMT1,酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.2mmol/L IPTG浓度条件下分别进行不同温度梯度诱导,用蛋白标记亲和层析柱(His TrapTM HP)对重组蛋白进行纯化,并用SD...
为进一步研究GhCOMT1基因的功能,构建了原核表达载体pET-28a-GhCOMT1,酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.2mmol/L IPTG浓度条件下分别进行不同温度梯度诱导,用蛋白标记亲和层析柱(His TrapTM HP)对重组蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达产物。结果表明:16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达,其中16℃诱导12h的蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测目的蛋白相对分子量约为39.748kD;Western blotting分析表明,目的蛋白能与His多克隆抗体起特异性反应。
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关键词
ghcomt1
原核表达
蛋白纯化
WESTERN
BLOTTING
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职称材料
题名
棉花GhCOMT1基因原核表达载体构建及蛋白纯化和Western鉴定
被引量：
6
1
作者
李波
倪志勇
李晓东
范玲
机构
新疆农业科学院核技术生物技术研究所
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期1971-1976,共6页
基金
国家自然科学基金-新疆联合基金项目(U1178305)
新疆自治区高技术研究发展计划项目(201111116)
国家自然科学基金项目(31060173)
文摘
为进一步研究GhCOMT1基因的功能,构建了原核表达载体pET-28a-GhCOMT1,酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.2mmol/L IPTG浓度条件下分别进行不同温度梯度诱导,用蛋白标记亲和层析柱(His TrapTM HP)对重组蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达产物。结果表明:16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达,其中16℃诱导12h的蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测目的蛋白相对分子量约为39.748kD;Western blotting分析表明,目的蛋白能与His多克隆抗体起特异性反应。
关键词
ghcomt1
原核表达
蛋白纯化
WESTERN
BLOTTING
Keywords
ghcomt1
prokaryotic expression
protein purification
Western blotting
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
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被引量
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1
棉花GhCOMT1基因原核表达载体构建及蛋白纯化和Western鉴定
李波
倪志勇
李晓东
范玲
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
6
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