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子房滴注法将GUS基因表达框转入大豆的研究
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作者 刘建凤 苏乔 +1 位作者 安利佳 冉学忠 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期191-194,共4页
为了验证大豆子房滴注转化方法的可重复性与遗传稳定性,将由报告基因GUS、表达调控序列(35S启动子,NOS终止子)和T-DNA边界序列3部分组成的基因表达框转入大豆。对T0代转化材料进行GUS组织化学染色分析和PCR检测。结果表明:在检测的340... 为了验证大豆子房滴注转化方法的可重复性与遗传稳定性,将由报告基因GUS、表达调控序列(35S启动子,NOS终止子)和T-DNA边界序列3部分组成的基因表达框转入大豆。对T0代转化材料进行GUS组织化学染色分析和PCR检测。结果表明:在检测的340个幼胚中有12个呈GUS阳性,且在180个转化植株中有6个呈PCR阳性同时其叶片也呈GUS阳性,转化率分别为3.53%和3.33%。Southern杂交表明外源GUS基因表达框以低拷贝的形式整合到大豆基因组中。对转基因后代叶片GUS染色、PCR分析及Northern blot检测结果表明外源基因已遗传给了后代,其中S2株系符合孟德尔分离规律。 展开更多
关键词 大豆 无载体 无选择标记 gus基因表达 子房滴注 转化
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利用GUS基因的瞬时表达优化大豆根癌农杆菌介导的遗传转化 被引量:6
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作者 杨明明 高海京 +5 位作者 马啸燕 孙英楠 邵宇鹏 包格格 李文滨 王志坤 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期353-359,共7页
高转化效率是分子育种的重要前提,根癌农杆菌介导的遗传转化由于其有较高的遗传效率和较低的拷贝数成为目前优选方法。为优化大豆遗传转化体系,以本实验室已有转化体系为基础,利用pCAMBIA3301中35S∶GUS基因瞬时表达体系,从萌发时间、... 高转化效率是分子育种的重要前提,根癌农杆菌介导的遗传转化由于其有较高的遗传效率和较低的拷贝数成为目前优选方法。为优化大豆遗传转化体系,以本实验室已有转化体系为基础,利用pCAMBIA3301中35S∶GUS基因瞬时表达体系,从萌发时间、切豆方法、侵染时间、共培养方式以及共培养时间等方面对东农47、垦农18和B12088大豆栽培品种的遗传转化体系进行优化。结果表明:东农47萌发1 d,侵染30 min;垦农18和B12088萌发12 h,侵染30 min,GUS基因瞬时表达率最高。在其它的处理上,3个品种表现结果一致,即蘸取菌液切豆,共培养中子叶伤口朝下摆放,黑暗条件下共培养3~5 d,GUS基因瞬时表达最高。3个品种在最适条件下,GUS染色效率均达到90%以上,垦农18遗传转化效率较高。本研究为大豆农杆菌介导子叶节转化方法提供了一个改进的方案,并且为拓宽可利用于大豆遗传转化的种质资源奠定基础。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 大豆遗传转化 转化率 gus基因瞬时表达
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农杆菌敏感小麦基因型的筛选研究 被引量:24
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作者 王艳丽 叶兴国 +2 位作者 刘艳鹏 杜丽璞 徐惠君 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期6-10,共5页
基因型是影响农杆菌转化植物的主要因素之一,筛选对农杆菌敏感的小麦基因型对于进一步提高小麦转化效率具有重要意义.利用c58C1农杆菌菌系(含GUS基因)感染不同小麦品种的幼穗和幼胚,共培养后进行X-Gluc组织化学染色检测,以筛选对农杆菌... 基因型是影响农杆菌转化植物的主要因素之一,筛选对农杆菌敏感的小麦基因型对于进一步提高小麦转化效率具有重要意义.利用c58C1农杆菌菌系(含GUS基因)感染不同小麦品种的幼穗和幼胚,共培养后进行X-Gluc组织化学染色检测,以筛选对农杆菌敏感的小麦基因型.结果表明,83个小麦基因型的幼穗经农杆菌感染后,GUS基因表达率66.7%~82.8%,CA9924、北农49、西农2611、京冬11等基因型对农杆菌感染比较敏感,多数基因型对农杆菌感染不敏感.80个小麦基因型的幼胚经农杆菌感染后,GUS基因表达率在10.0%以上的基因型仅占3.8%,没有GUS基因表达的基因型多达71.3%,绝大多数基因型对农杆菌感染不敏感;当幼胚与农杆菌的共培养在滤纸上进行时,97H2169、轮选208、兰考906、扬麦6号等基因型对农杆菌感染非常敏感,GUS基因表达率达到50.0%~93.3%,没有GUS基因表达的基因型下降到36.8%.表明不同小麦基因型以及相同基因型的不同外植体对农杆菌的敏感性存在着显著差异,兰考906、扬麦6号、西农2611、京冬11等基因型是农杆菌转化小麦较为理想的受体材料;滤纸上共培养方式更有利于农杆菌对小麦外植体的侵染,GUS基因表达率平均比固体培养基共培养方式高16.6个百分点. 展开更多
关键词 小麦 农杆菌 幼胚 幼穗 gus基因瞬时表达
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高等植物ACC氧化酶基因启动子研究进展 被引量:2
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作者 吴健 侯和胜 《天津农业科学》 CAS 2014年第4期14-16,共3页
启动子是控制植物基因表达的重要DNA序列结构,本文从高等植物ACO基因启动子克隆、顺式作用元件分析及GUS基因表达等方面着眼,综述该领域的研究进展。
关键词 乙烯 ACO启动子 顺式作用元件 gus基因表达
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基因枪转化玉米愈伤组织参数的优化 被引量:9
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作者 贾炜珑 杨丽莉 +2 位作者 周小梅 王景雪 孙毅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期77-80,共4页
以玉米愈伤组织为受体 ,借助GUS基因的短暂表达 ,优化了PDS 10 0 0 /He型基因枪和自制基因枪的基因枪转化参数。PDS 10 0 0 /He型基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为 135 0psi压力 ,2 5In·Hg真空度 ,6cm射击距离。自制基因枪... 以玉米愈伤组织为受体 ,借助GUS基因的短暂表达 ,优化了PDS 10 0 0 /He型基因枪和自制基因枪的基因枪转化参数。PDS 10 0 0 /He型基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为 135 0psi压力 ,2 5In·Hg真空度 ,6cm射击距离。自制基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为0 6MPa 。 展开更多
关键词 玉米 愈伤组织 基因 gus基因短暂表达 gus基因短暂表达单位 轰击参数 优化
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启动子陷阱技术在橡胶树中的应用研究 被引量:2
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作者 华玉伟 杨加伟 +2 位作者 黄天带 李季 黄华孙 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第8期1473-1477,共5页
启动子陷阱技术是克隆未知基因启动子的有效途径。首先用反向无启动子的GUSA替换pCAMBIA-2301载体上的GUSA及启动子序列,构建橡胶树启动子陷阱载体pCAMBIA2301:GUS-NOS,然后转化橡胶树。结果表明:获得了GUS染色阳性胚状体6个,再生后获得... 启动子陷阱技术是克隆未知基因启动子的有效途径。首先用反向无启动子的GUSA替换pCAMBIA-2301载体上的GUSA及启动子序列,构建橡胶树启动子陷阱载体pCAMBIA2301:GUS-NOS,然后转化橡胶树。结果表明:获得了GUS染色阳性胚状体6个,再生后获得2个转基因株系。其中1个株系在胚状体、叶片和根中能检测到GUS基因的强烈表达,另1个株系仅在根中检测到微弱的GUS基因表达,说明获得的转基因植株为不同启动子启动GUS基因的株系。因此通过橡胶树启动子陷阱载体的构建及其在橡胶树中的表达,能够发现和克隆橡胶树内源基因的启动子。 展开更多
关键词 橡胶树 启动子 启动子陷阱 遗传转化 gus基因表达
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烟草NtGCN2启动子的克隆及功能研究 被引量:2
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作者 翟春贺 王浩 +4 位作者 李怡博 苏梦迪 郭豪 杨永霞 张松涛 《中国烟草学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期122-130,共9页
【目的】探究烟草蛋白激酶NtGCN2启动子驱动GUS基因在ABA、SA、AZA和MeJA四种处理下的表达模式。【方法】克隆烟草NtGCN2上游2000 bp的启动子序列,并采用Plant CARE和PLACE数据库进行顺式作用元件预测。构建NtGCN2启动子驱动β-葡萄糖... 【目的】探究烟草蛋白激酶NtGCN2启动子驱动GUS基因在ABA、SA、AZA和MeJA四种处理下的表达模式。【方法】克隆烟草NtGCN2上游2000 bp的启动子序列,并采用Plant CARE和PLACE数据库进行顺式作用元件预测。构建NtGCN2启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)的融合表达载体并转化烟草K326。利用获得NtGCN2-Nsy-pro2000::GUS的转基因植株,探究NtGCN2启动子驱动的GUS报告基因在ABA、SA、AZA和MeJA四种激素处理下的表达模式。【结果】顺式作用元件预测结果发现,在NtGCN2-Nsy-pro2000上存在多种顺式作用元件,如脱落酸应答元件(ABRE)、茉莉酸甲酯应答元件(TGACG-motif)等。ABA、SA和AZA处理下NtGCN2启动子驱动的GUS基因表达和酶活性均显著增加,而MeJA处理下NtGCN2启动子驱动的GUS基因表达及酶活性下降。【结论】NtGCN2上游2000 bp序列具有启动子活性,NtGCN2-Nsy-pro2000驱动GUS基因在不同激素处理下呈现不同的响应模式。ABA、SA和AZA激活NtGCN2-Nsy-pro2000驱动的GUS基因表达,而MeJA抑制NtGCN2-Nsy-pro2000驱动的GUS基因表达。 展开更多
关键词 GCN2 启动子 激素处理 gus基因表达
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甜玉米愈伤组织遗传转化条件优化研究
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作者 杨子龙 钟旎 胡建广 《广东农业科学》 CAS CSCD 2008年第S1期24-26,共3页
利用gus基因瞬时表达技术比较了根癌农杆菌和基因枪两种转化方法,在不同的条件下对甜玉米愈伤组织遗传转化率影响。结果表明,根癌农杆菌培养浓度OD_(600)值达到1.164、稀释浸染浓度OD_(600)值为0.30时,gus基因的瞬时表达率最高,为57.69... 利用gus基因瞬时表达技术比较了根癌农杆菌和基因枪两种转化方法,在不同的条件下对甜玉米愈伤组织遗传转化率影响。结果表明,根癌农杆菌培养浓度OD_(600)值达到1.164、稀释浸染浓度OD_(600)值为0.30时,gus基因的瞬时表达率最高,为57.692%;农杆菌侵染愈伤组织过程中,在真空度为-10 mMPa下处理5 min,转化率略有提高。在基因枪转化中,氦气压力与射程对转化率有较大影响,在压力为1100 psi、射程为6 cm时,gus基因的瞬时表达率最高,转化率为58.333%。 展开更多
关键词 甜玉米 根癌农杆菌 基因 gus基因瞬时表达
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