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GST-CML28融合蛋白的表达和纯化及多克隆抗体制备: 1; 作者毛霞张冰 +2 位作者白雪玲刘龙龙张东华《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1302-1306,共5页; 本研究探讨GST-CML28融合蛋白的表达及抗体制备。CML28-pGEX-3X重组质粒转化BL21大肠杆菌,提取细菌蛋白后用GSTrap FF纯化柱进行纯化。将纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备CML28抗血清;免疫血清用CNBr-activated Sepharose 4B层析柱进行纯... 展开更多; 关键词 CML28 gst-cml28融合蛋白多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

PTD-Calbindin D28K融合蛋白的表达、纯化及其穿膜功能的鉴定被引量：2: 2; 作者樊永峰吕传真 +1 位作者乔健任惠民《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期231-234,F002,共5页; 目的　构建融合蛋白PTD CalbindinD2 8K(CaBP2 8)的表达质粒 ,并进行诱导表达、纯化 ,在体外初步鉴定其跨膜转运功能。方法　提取大鼠脑组织总RNA ,反转录后用聚合酶链反应 (PCR)法扩增编码CaBP2 8的全长cD NA序列 ,重组入 pET 32a及含... 展开更多; 关键词 PTD-Calbindin D28K融合蛋白表达纯化穿膜功能鉴定蛋白质治疗神经系统疾病; 在线阅读下载PDF 职称材料

VP28和Hsp70融合蛋白对凡纳滨对虾抗WSSV感染的免疫保护效果被引量：5: 3; 作者何晓东刘庆慧黄倢《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期17-23,共7页; 分别克隆凡纳滨对虾Hsp70的C端结构域基因与对虾白斑综合征病毒(WSSV)VP28基因,构建融合基因并在大肠埃希菌中表达,用纯化融合蛋白免疫对虾,研究其对对虾的免疫保护作用和体内免疫相关基因表达的影响。结果表明,接种融合蛋白7d后,试验... 展开更多; 关键词 VP28 HSP70 融合蛋白凡纳滨对虾对虾白斑综合征病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

pET28a-TAT-LacZ重组子的构建被引量：3: 4; 作者严世荣龚坚 +1 位作者严洁邱云城《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期141-144,共4页; 为了构建高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,观察表达的融合蛋白TAT-β-Gal能否穿过生物膜,使用人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a组氨酸编码区后再连接lacZ基因,组成pET28a-TAT-LacZ重组表达子,转化大肠杆菌,利用组氨酸亲... 展开更多; 关键词 pET28a质粒 TAT蛋白转导区 TAT-β-Gal融合蛋白平滑肌细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定被引量：1: 5; 作者赵征文玲英 +2 位作者金岩杨曦轩东英《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期166-170,共5页; 目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28... 展开更多; 关键词 adam28基因融合蛋白多克隆抗体免疫印迹; 在线阅读下载PDF 职称材料

TrkA膜外域各结构域重组蛋白的制备和活性测定: 6; 作者郭超阎志勇 +4 位作者由振东张勇曹莉路长林何成《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期853-855,共3页; 目的 :制备有活性的 Trk A膜外域各结构域重组蛋白。方法 :用 PCR法克隆 Trk A膜外域各结构域 (分别命名为CL C、Ig1和 Ig2 )的 c DNA片段 ,然后插入融合表达载体 p ET- 2 8a(+)中 ,经测序证实后 ,转入大肠杆菌 BL2 1中表达 ,并用亲和... 展开更多; 关键词 TrkA膜外域结构域重组蛋白制备活性测定融合表达载体 pET-28a(+); 在线阅读下载PDF 职称材料

GAPB基因原核表达载体的构建: 7; 作者田霞代其林 +4 位作者龚元亚孙英坤谢琳杨娟王劲《南方农业》 2011年第3期1-4,共4页; 以拟南芥cDNA为模板,用PCR扩增出GAPB的基因全长,然后将GAPB基因片段连接到PET28a(+)载体上,构建重组质粒并转化大肠杆菌DH5α,经菌落PCR和酶切鉴定筛选出阳性克隆,测序正确后,再将阳性克隆的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。结果表明:成功... 展开更多; 关键词 GAPB 大肠杆菌BL21 PET28a(+) 融合蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名GST-CML28融合蛋白的表达和纯化及多克隆抗体制备: 1; 作者毛霞张冰白雪玲刘龙龙张东华; 机构华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科武警河南总队洛阳市支队卫生队; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1302-1306,共5页; 文摘本研究探讨GST-CML28融合蛋白的表达及抗体制备。CML28-pGEX-3X重组质粒转化BL21大肠杆菌,提取细菌蛋白后用GSTrap FF纯化柱进行纯化。将纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备CML28抗血清;免疫血清用CNBr-activated Sepharose 4B层析柱进行纯化,获得多克隆抗体。结果表明,获得的抗体能够满足针对CML28的ELISA、Western blot、免疫组织化学和量子点荧光检测的实验要求。结论:成功制备了高特异性,高效价的抗人CML28多克隆抗体,为今后深入研究其生物学功能提供了有用的实验工具。; 关键词 CML28 gst-cml28融合蛋白多克隆抗体; Keywords CML28 gst-cml28 fusion protein polyclonal antibody; 分类号 R733.71 [医药卫生—肿瘤] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PTD-Calbindin D28K融合蛋白的表达、纯化及其穿膜功能的鉴定被引量：2: 2; 作者樊永峰吕传真乔健任惠民; 机构复旦大学上海医学院神经病学系-华山医院神经科; 出处《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期231-234,F002,共5页; 文摘目的　构建融合蛋白PTD CalbindinD2 8K(CaBP2 8)的表达质粒 ,并进行诱导表达、纯化 ,在体外初步鉴定其跨膜转运功能。方法　提取大鼠脑组织总RNA ,反转录后用聚合酶链反应 (PCR)法扩增编码CaBP2 8的全长cD NA序列 ,重组入 pET 32a及含有PTD的pTransVector表达载体中 ,测序鉴定后转化大肠埃希菌BL2 1(DE3) ,构建重组体的表达菌株。IPTG诱导表达后 ,以NTA Ni亲和层析柱进行分离纯化 ,SDS PAGE以及Westernblot鉴定。纯化的CaBP2 8及PTD CaBP2 8用FITC标记 ,分别以一定的浓度孵育体外培养的cos7细胞 ,最后荧光显微镜下观察两者在细胞中的分布情况 ,并用流式细胞仪 (FCM)做定量分析。结果　成功地构建了含有及不含有PTD的CaBP2 8表达载体 ,插入片断 783bp ,表达产物相对分子质量分别约 30 0 0 0、5 0 0 0 0 ,经Weternblot鉴定 ,与抗CaBPD2 8K抗体均有特异性反应。孵育培养的cos7细胞后 ,CaBP2 8 FITC仅少量吸附于细胞膜表面 ,而PTD CaBP2 8 FITC则分布于胞质内 ;FCM定量分析发现 ,细胞荧光强度随着目的蛋白的孵育浓度或孵育时间增加而增加 ,并且孵育时间为 1h时荧光达到最强。结论　重组PTD CaBP2; 关键词 PTD-Calbindin D28K融合蛋白表达纯化穿膜功能鉴定蛋白质治疗神经系统疾病; Keywords Biological membranes Brain Cloning DNA Living systems studies Patient monitoring Proteins RNA; 分类号 R743.3 [医药卫生—神经病学与精神病学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名VP28和Hsp70融合蛋白对凡纳滨对虾抗WSSV感染的免疫保护效果被引量：5: 3; 作者何晓东刘庆慧黄倢; 机构上海海洋大学中国水产科学研究院黄海水产研究所; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期17-23,共7页; 基金对虾行业专项(201103034) 泰山学者"建设工程专项经费"资助; 文摘分别克隆凡纳滨对虾Hsp70的C端结构域基因与对虾白斑综合征病毒(WSSV)VP28基因,构建融合基因并在大肠埃希菌中表达,用纯化融合蛋白免疫对虾,研究其对对虾的免疫保护作用和体内免疫相关基因表达的影响。结果表明,接种融合蛋白7d后,试验组对虾超氧化物歧化酶、溶菌酶、过氧化氢酶和STAT基因的表达量比对照组有显著提高,WSSV感染试验表明,该融合蛋白延缓了对虾的死亡。; 关键词 VP28 HSP70 融合蛋白凡纳滨对虾对虾白斑综合征病毒; Keywords VP28 Hsp70 fusion protein Litopenaeus vannamei WSSV; 分类号 S852.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名pET28a-TAT-LacZ重组子的构建被引量：3: 4; 作者严世荣龚坚严洁邱云城; 机构郧阳医学院附属十堰市人民医院检验部郧阳医学院生物化学教研室郧阳医学院附属太和医院神经内科; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期141-144,共4页; 基金湖北省教育厅青年基金(2000A43006)资助; 文摘为了构建高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,观察表达的融合蛋白TAT-β-Gal能否穿过生物膜,使用人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a组氨酸编码区后再连接lacZ基因,组成pET28a-TAT-LacZ重组表达子,转化大肠杆菌,利用组氨酸亲和层析柱纯化TAT-β-Gal融合蛋白,将融合蛋白加入培养的平滑肌细胞。得到高度纯化的、有活性的TAT-β-Gal融合蛋白,TAT-β-Gal在短时间内进入体外培养平滑肌细胞,成功地构建了高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,并在体外培养的细胞中证实TAT-β-Gal融合蛋白穿透生物膜的能力,为肽类、生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供了理论基础。; 关键词 pET28a质粒 TAT蛋白转导区 TAT-β-Gal融合蛋白平滑肌细胞; Keywords pET28a phage TAT protein transduction domain3 TAT-β-Gal fusion protein Vascular smooth muscle cells; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定被引量：1: 5; 作者赵征文玲英金岩杨曦轩东英; 机构西安第四军医大学口腔医学院儿童口腔科西安第四军医大学组织工程研发中心西安第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室; 出处《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期166-170,共5页; 基金国家自然科学基金资助课题(30572046); 文摘目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体。结果成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体。Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1∶16000。结论成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础。; 关键词 adam28基因融合蛋白多克隆抗体免疫印迹; Keywords adam28 gene Fusion protein Polyclonal antibody Western blot; 分类号 R78 [医药卫生—口腔医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名TrkA膜外域各结构域重组蛋白的制备和活性测定: 6; 作者郭超阎志勇由振东张勇曹莉路长林何成; 机构第二军医大学基础医学部神经生物学教研室; 出处《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期853-855,共3页; 基金上海市科技发展基金 ( 0 1JC14 0 0 4) 全军医药卫生科研基金 ( 0 1J0 11) 上海市曙光计划项目 ( 2 0 0 0 ); 文摘目的 :制备有活性的 Trk A膜外域各结构域重组蛋白。方法 :用 PCR法克隆 Trk A膜外域各结构域 (分别命名为CL C、Ig1和 Ig2 )的 c DNA片段 ,然后插入融合表达载体 p ET- 2 8a(+)中 ,经测序证实后 ,转入大肠杆菌 BL2 1中表达 ,并用亲和层析法进行纯化 ,用神经生长因子 (NGF)诱导 PC12细胞株测定 Trk A与配体结合的关键结构域 (CL C、Ig1和 Ig2 )活性。结果 :成功地用大肠杆菌制备了纯度达 90 %以上的 Trk A膜外域各结构域重组蛋白 ;NGF+Ig2组 PC12细胞突起生长率明显低于 NGF组 (P<0 .0 5 ) ,NGF+CL C、NGF+Ig1组与 NGF组相比没有显著差异。结论 :Ig2能抑制经 NGF诱导的 PC12细胞的分化 ,CL C和 Ig1不能抑制; 关键词 TrkA膜外域结构域重组蛋白制备活性测定融合表达载体 pET-28a(+); Keywords nerve growth factor TrkA extracellular domains; 分类号 Q784 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名GAPB基因原核表达载体的构建: 7; 作者田霞代其林龚元亚孙英坤谢琳杨娟王劲; 机构西南科技大学植物生物技术研究中心中国农业科学院生物技术研究所; 出处《南方农业》 2011年第3期1-4,共4页; 基金国家转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08009-091B) 国家自然科学基金(30871555) +1 种基金四川省教育厅科技项目(09ZA034); 文摘以拟南芥cDNA为模板,用PCR扩增出GAPB的基因全长,然后将GAPB基因片段连接到PET28a(+)载体上,构建重组质粒并转化大肠杆菌DH5α,经菌落PCR和酶切鉴定筛选出阳性克隆,测序正确后,再将阳性克隆的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。结果表明:成功构建了原核表达载体PET28a(+)-GAPB,为后续的GAPB融合蛋白的表达以及纯化奠定了基础。; 关键词 GAPB 大肠杆菌BL21 PET28a(+) 融合蛋白; Keywords GAPB E.coli BL21 PET28a（＋） The fusion protein; 分类号 Q946 [生物学—植物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	GST-CML28融合蛋白的表达和纯化及多克隆抗体制备	毛霞张冰白雪玲刘龙龙张东华	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	PTD-Calbindin D28K融合蛋白的表达、纯化及其穿膜功能的鉴定	樊永峰吕传真乔健任惠民	《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2004	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	VP28和Hsp70融合蛋白对凡纳滨对虾抗WSSV感染的免疫保护效果	何晓东刘庆慧黄倢	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2014	5	在线阅读下载PDF 职称材料
4	pET28a-TAT-LacZ重组子的构建	严世荣龚坚严洁邱云城	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2003	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定	赵征文玲英金岩杨曦轩东英	《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2006	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	TrkA膜外域各结构域重组蛋白的制备和活性测定	郭超阎志勇由振东张勇曹莉路长林何成	《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2003	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	GAPB基因原核表达载体的构建	田霞代其林龚元亚孙英坤谢琳杨娟王劲	《南方农业》	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料