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分选酶A(SrtA)的GST融合表达、纯化及活性测定被引量：4: 1; 作者邓思罗立新《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期121-125,共5页; 构建GST/金黄色葡萄球菌分选酶A(SrtA)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化分选酶,并利用展示在酵母表面的底物检测分选酶的活性。以pMD20-SrtA为模板,PCR扩增得到SrtA△N59基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,连接到原核表达载体pGEX-4T-1... 展开更多; 关键词分选酶A gst融合表达纯化底物活性测定; 在线阅读下载PDF 职称材料

GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定: 2; 作者梁久红梁立敏 +3 位作者董敏韩振格董晨孟继鸿《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期321-323,327,共4页; 目的:以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体(mAb),与代表HEV4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中... 展开更多; 关键词 gst融合表达戊型肝炎病毒单克隆抗体抗原表位; 在线阅读下载PDF 职称材料

GST-Jab1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化: 3; 作者黄瑾郑玉建 +1 位作者鲁重元万梅《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第5期585-588,共4页; 目的获取GST-Jab1蛋白,进一步研究Jab1的功能。方法以pMSCVneo-Jab1为模板,PCR扩增Jab1 DNA片断,EcoRI和XhoI双酶切后克隆至pGEX-5X-1表达载体,测序验证。将正确重组的pGEX-5X-1-Jab1表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导后,超声破碎细胞,... 展开更多; 关键词 JAB1 gst融合蛋白原核表达蛋白质纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

丁香假单胞大豆致病变种harpin编码基因的克隆表达与功能研究被引量：4: 4; 作者张岩伍辉军 +1 位作者周晓辉高学文《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期6-12,共7页; 采用PCR方法从丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和S1菌株中分别克隆到大小为1 026和1 038 bp的hrpZ基因(hrpZPsgA1和hrpZPsgS1),对该基因进行了原核表达和功能研究。SDS-PAGE显示其表达产物为相对分子质量62... 展开更多; 关键词丁香假单胞大豆致病变种 harpin编码基因 gst融合表达烟草过敏性反应促生; 在线阅读下载PDF 职称材料

番茄ACC合酶(LeACS2)在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：1: 5; 作者李剑峰周惠 +2 位作者徐增富李凝屈良鹄《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期71-74,78,共5页; 植物激素乙烯参与了植物生长发育等一系列生理过程,通过控制乙烯的合成进而控制经济作物的衰老和果实的成熟,给农业带来深远影响。ACC合酶是高等植物乙烯生物合成的限速酶。通过RT_PCR将番茄ACC合酶(LeACS2)cDNA克隆至大肠杆菌表达载体p... 展开更多; 关键词番茄 ACC合酶 gst融合表达可溶性纯化酶活; 在线阅读下载PDF 职称材料

新型环形病毒AGVAGV2衣壳蛋白VPVP1的原核表达被引量：2: 6; 作者夏驰超田晓彦 +6 位作者张翼史馨瑾季星妤石梦雨秦爱建邵红霞叶建强《中国家禽》北大核心 2016年第5期14-17,共4页; 为建立AGV2血清学检测方法,利用p GEX-6P-1载体,对AGV2的衣壳蛋白VP1基因进行分段GST融合表达,成功构建了4个VP1分段GST融合表达载体,分别命名为VP1_1-462、VP1_463-924、VP1_925-1383以及VP1_735-1089。经IPTG诱导、SDS-PAGE以及Wester... 展开更多; 关键词 AGV2 VP1 gst融合表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名分选酶A(SrtA)的GST融合表达、纯化及活性测定被引量：4: 1; 作者邓思罗立新; 机构华南理工大学生物科学与工程学院; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期121-125,共5页; 文摘构建GST/金黄色葡萄球菌分选酶A(SrtA)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化分选酶,并利用展示在酵母表面的底物检测分选酶的活性。以pMD20-SrtA为模板,PCR扩增得到SrtA△N59基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX-SrtA△N59,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,GST亲和层析分离纯化得到SrtA△N59,与展示在酵母表面的底物序列QALPETGEE-linker-EGFP作用,产生游离的EGFP,通过酶标仪检测EGFP荧光强度确定分选酶的活性。结果显示,重组表达载体pGEX-SrtA△N59经IPTG诱导,表达出相对分子质量约为42 kD的融合蛋白,SDS-PAGE分析,该融合蛋白是以可溶形式表达。分离纯化得到的分选酶与底物作用,其荧光强度由568.66±12.14增加至921.43±13.02。以上结果表明,成功构建了重组表达载体pGEX-SrtA△N59,并在大肠杆菌中获得了可溶表达的有活性的分选酶。; 关键词分选酶A gst融合表达纯化底物活性测定; Keywords SrtA gst fusion expression Purification Substrate Activity assay; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定: 2; 作者梁久红梁立敏董敏韩振格董晨孟继鸿; 机构东南大学医学院病原生物学与免疫学系; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期321-323,327,共4页; 基金国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA02A235) 国家自然科学基金资助项目(30671858) 东南大学优秀博士生学位论文资助项目(YBJJ0414); 文摘目的:以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体(mAb),与代表HEV4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中国株p166的GST或His融合蛋白、中国株非融合重组蛋白p179Chn以及GST融合的HEV无关蛋白进行ELISA检测,鉴定mAb所识别的抗原表位。结果:获得3株稳定分泌抗p166Chn-GST的杂交瘤细胞株,分泌的mAb1A8、9B4和8H10与p166Chn-GST反应,与GST不反应。其中1A8和9B4可与带GST标签的4种p166-GST蛋白以及N和C端截短的p146Chn-GST、p137Chn-GST反应,而不与4种p166-His蛋白反应,也不与p179Chn反应,与HEV病毒颗粒竞争试验阴性,与GST融合的HEV无关蛋白无交叉反应性,表明1A8和9B4识别的抗原表位不是HEV病毒颗粒表面天然存在的抗原表位,而是GST与HEV ORF2编码蛋白的465-601aa区段序列共同形成的新的抗原表位。结论:GST能够赋予基因工程重组蛋白以新的抗原特性,它与融合表达的重组蛋白可以共同形成新的抗原表位。; 关键词 gst融合表达戊型肝炎病毒单克隆抗体抗原表位; Keywords gst fusion-expression hepatitis E virus monoclonal antibody antigenic epitope; 分类号 R373.21 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名GST-Jab1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化: 3; 作者黄瑾郑玉建鲁重元万梅; 机构新疆医科大学公共卫生学院阿拉巴马大学医学院病理系; 出处《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第5期585-588,共4页; 基金美国NIH项目(CA112942-01)提供部分资助; 文摘目的获取GST-Jab1蛋白,进一步研究Jab1的功能。方法以pMSCVneo-Jab1为模板,PCR扩增Jab1 DNA片断,EcoRI和XhoI双酶切后克隆至pGEX-5X-1表达载体,测序验证。将正确重组的pGEX-5X-1-Jab1表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导后,超声破碎细胞,用GST琼脂糖珠对上述表达产物进行纯化,SDS-PAGE、Western Blot分析和鉴定诱导表达和纯化的GST-Jab1蛋白质。结果成功构建了pGEX-5X-1-Jab1重组表达载体,SDS-PAGE分析结果显示表达和纯化的蛋白质与融合蛋白GST-Jab1预期分子量一致,Western Blot鉴定结果证实纯化的蛋白质为GST-Jab1。结论成功地表达、纯化了GST-Jab1融合蛋白。; 关键词 JAB1 gst融合蛋白原核表达蛋白质纯化; Keywords Jab1 expression of gst fusion protein in E.coli protein purification; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名丁香假单胞大豆致病变种harpin编码基因的克隆表达与功能研究被引量：4: 4; 作者张岩伍辉军周晓辉高学文; 机构南京农业大学植物保护学院/农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室; 出处《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期6-12,共7页; 基金国家863计划项目(2012AA101504) 国家公益性行业(农业)科研专项(201303015) +3 种基金国家博士后科研基金项目(2012M511770); 文摘采用PCR方法从丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和S1菌株中分别克隆到大小为1 026和1 038 bp的hrpZ基因(hrpZPsgA1和hrpZPsgS1),对该基因进行了原核表达和功能研究。SDS-PAGE显示其表达产物为相对分子质量62×103的融合蛋白,harpinZPsgA1和harpinZPsgS1的相对分子质量约为35×103。harpinZPsgS1的粗提蛋白经GSTrap FF纯化后质量浓度可达1.1 mg.mL-1。生物活性检测表明,该蛋白对热稳定,对蛋白酶K敏感,可以在非寄主植物烟草上激发过敏反应,过敏反应可以被真核生物代谢抑制剂抑制,并且对烟草有明显的促生作用。序列比对发现,来自丁香假单胞大豆致病变种的hrpZ基因可分为2类,一类以hrpZPsgA1为代表,包括hrpZPsg12,另一类以hrpZPsgS1为代表,包括来自r0和Race4菌株的hrpZ基因。这2类hrpZ基因的核苷酸同源性为79%,氨基酸同源性为77%,均富含甘氨酸,不含半胱氨酸,与假单胞菌属以外的其他革兰氏阴性植物病原细菌harpin编码基因不存在相似性。; 关键词丁香假单胞大豆致病变种 harpin编码基因 gst融合表达烟草过敏性反应促生; Keywords Pseudomonas syringae pv.glycinea harpin-encoding gene gst fusion expression tobacco hypersensitive response growth promotion; 分类号 S432.42 [农业科学—植物病理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名番茄ACC合酶(LeACS2)在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：1: 5; 作者李剑峰周惠徐增富李凝屈良鹄; 机构中山大学生命科学学院∥基因工程教育部重点实验室香港科技大学生物系; 出处《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期71-74,78,共5页; 基金国家自然科学基金资助项目(30129001); 文摘植物激素乙烯参与了植物生长发育等一系列生理过程,通过控制乙烯的合成进而控制经济作物的衰老和果实的成熟,给农业带来深远影响。ACC合酶是高等植物乙烯生物合成的限速酶。通过RT_PCR将番茄ACC合酶(LeACS2)cDNA克隆至大肠杆菌表达载体pET30a中并使之与GST编码序列进行融合而构建了重组表达质粒pET_LeACS2_GST。转化获得含有该重组表达质粒的大肠杆菌BL21 starTM(DE3)pLysS细胞,在IPTG的诱导下成功表达出含有LeACS2的大小约83 000的融合蛋白。该融合蛋白具有较好的可溶性。通过GST亲和层析和MonoQ阴离子交换两步纯化后的LeACS2能够催化其底物SAM生成ACC。; 关键词番茄 ACC合酶 gst融合表达可溶性纯化酶活; Keywords ACC synthase LeACS2 gst fusion good solubility purification activity assay; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新型环形病毒AGVAGV2衣壳蛋白VPVP1的原核表达被引量：2: 6; 作者夏驰超田晓彦张翼史馨瑾季星妤石梦雨秦爱建邵红霞叶建强; 机构扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 出处《中国家禽》北大核心 2016年第5期14-17,共4页; 基金国家自然科学基金青年科学基金项目(31402228) 扬州大学大学生创新创业训练计划(x2015715、x2015721、x2015730) 江苏高校优势学科建设工程; 文摘为建立AGV2血清学检测方法,利用p GEX-6P-1载体,对AGV2的衣壳蛋白VP1基因进行分段GST融合表达,成功构建了4个VP1分段GST融合表达载体,分别命名为VP1_1-462、VP1_463-924、VP1_925-1383以及VP1_735-1089。经IPTG诱导、SDS-PAGE以及Western blot分析发现,VP1_1-462以及VP1_925-1383的表达产物主要以包涵体形式表达,而VP1_463-924以及VP1_735-1089的表达产物具有可溶性,且VP1_925-1383的表达量最高。这些AGV2 VP1分段GST融合表达产物的获得为建立用于AGV2流行病学调查的血清学检测方法奠定理论基础。; 关键词 AGV2 VP1 gst融合表达; Keywords AGV2 VP1 gst fusion expression; 分类号 S852.659 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	分选酶A(SrtA)的GST融合表达、纯化及活性测定	邓思罗立新	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2012	4	在线阅读下载PDF 职称材料
2	GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定	梁久红梁立敏董敏韩振格董晨孟继鸿	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2008	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	GST-Jab1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化	黄瑾郑玉建鲁重元万梅	《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS	2007	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	丁香假单胞大豆致病变种harpin编码基因的克隆表达与功能研究	张岩伍辉军周晓辉高学文	《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	4	在线阅读下载PDF 职称材料
5	番茄ACC合酶(LeACS2)在大肠杆菌中的可溶性表达	李剑峰周惠徐增富李凝屈良鹄	《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2005	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	新型环形病毒AGVAGV2衣壳蛋白VPVP1的原核表达	夏驰超田晓彦张翼史馨瑾季星妤石梦雨秦爱建邵红霞叶建强	《中国家禽》北大核心	2016	2	在线阅读下载PDF 职称材料