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GST-Jab1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化
1
作者
黄瑾
郑玉建
+1 位作者
鲁重元
万梅
《石河子大学学报(自然科学版)》
CAS
2007年第5期585-588,共4页
目的获取GST-Jab1蛋白,进一步研究Jab1的功能。方法以pMSCVneo-Jab1为模板,PCR扩增Jab1 DNA片断,EcoRI和XhoI双酶切后克隆至pGEX-5X-1表达载体,测序验证。将正确重组的pGEX-5X-1-Jab1表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导后,超声破碎细胞,...
目的获取GST-Jab1蛋白,进一步研究Jab1的功能。方法以pMSCVneo-Jab1为模板,PCR扩增Jab1 DNA片断,EcoRI和XhoI双酶切后克隆至pGEX-5X-1表达载体,测序验证。将正确重组的pGEX-5X-1-Jab1表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导后,超声破碎细胞,用GST琼脂糖珠对上述表达产物进行纯化,SDS-PAGE、Western Blot分析和鉴定诱导表达和纯化的GST-Jab1蛋白质。结果成功构建了pGEX-5X-1-Jab1重组表达载体,SDS-PAGE分析结果显示表达和纯化的蛋白质与融合蛋白GST-Jab1预期分子量一致,Western Blot鉴定结果证实纯化的蛋白质为GST-Jab1。结论成功地表达、纯化了GST-Jab1融合蛋白。
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关键词
JAB1
gst融合蛋白原核表达
蛋白
质纯化
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职称材料
山羊IL-2的体外表达及其多克隆抗血清的制备
被引量:
4
2
作者
海岗
刘胜旺
+1 位作者
韩宗玺
陈洪岩
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期685-689,共5页
应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(Caprine interleukin-2,CapIL-2)基因并进行测序,将编码山羊IL-2蛋白的基因亚克隆至pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达融合蛋白通过ProBondT...
应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(Caprine interleukin-2,CapIL-2)基因并进行测序,将编码山羊IL-2蛋白的基因亚克隆至pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达融合蛋白通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。纯化产物经3次免疫新西兰白兔,制备出山羊IL-2抗血清。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2,并制备出兔抗山羊IL-2抗血清,为下一步开展山羊IL-2重组蛋白的应用研究奠定了基础。
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关键词
山羊IL-2
融合
蛋白原
核
表达
抗血清
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职称材料
山羊IL-2基因的克隆、表达及其多克隆抗血清的制备
3
作者
海岗
刘胜旺
陈洪岩
《中国比较医学杂志》
CAS
2007年第8期I0060-I0060,共1页
应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重...
应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE分析显示,表达的山羊IL-2融合蛋白分子量约为18kD。包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后,通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。用所获得的重组山羊IL-2纯化产物经3次肌内注射新西兰白兔,制备了兔抗山羊IL-2多克隆血清,并用Western blot进行了证明。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2融合蛋白,并制备了抗山羊IL-2多克隆抗血清,为下一阶段关于山羊IL-2重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。
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关键词
山羊IL-2
融合
蛋白原
核
表达
抗血清
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职称材料
题名
GST-Jab1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化
1
作者
黄瑾
郑玉建
鲁重元
万梅
机构
新疆医科大学公共卫生学院
阿拉巴马大学医学院病理系
出处
《石河子大学学报(自然科学版)》
CAS
2007年第5期585-588,共4页
基金
美国NIH项目(CA112942-01)提供部分资助
文摘
目的获取GST-Jab1蛋白,进一步研究Jab1的功能。方法以pMSCVneo-Jab1为模板,PCR扩增Jab1 DNA片断,EcoRI和XhoI双酶切后克隆至pGEX-5X-1表达载体,测序验证。将正确重组的pGEX-5X-1-Jab1表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导后,超声破碎细胞,用GST琼脂糖珠对上述表达产物进行纯化,SDS-PAGE、Western Blot分析和鉴定诱导表达和纯化的GST-Jab1蛋白质。结果成功构建了pGEX-5X-1-Jab1重组表达载体,SDS-PAGE分析结果显示表达和纯化的蛋白质与融合蛋白GST-Jab1预期分子量一致,Western Blot鉴定结果证实纯化的蛋白质为GST-Jab1。结论成功地表达、纯化了GST-Jab1融合蛋白。
关键词
JAB1
gst融合蛋白原核表达
蛋白
质纯化
Keywords
Jab1
expression of
gst
fusion protein in E.coli
protein purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
山羊IL-2的体外表达及其多克隆抗血清的制备
被引量:
4
2
作者
海岗
刘胜旺
韩宗玺
陈洪岩
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期685-689,共5页
文摘
应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(Caprine interleukin-2,CapIL-2)基因并进行测序,将编码山羊IL-2蛋白的基因亚克隆至pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达融合蛋白通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。纯化产物经3次免疫新西兰白兔,制备出山羊IL-2抗血清。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2,并制备出兔抗山羊IL-2抗血清,为下一步开展山羊IL-2重组蛋白的应用研究奠定了基础。
关键词
山羊IL-2
融合
蛋白原
核
表达
抗血清
Keywords
caprine IL-2 fusion protein
prokaryotic expression
antisera
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
山羊IL-2基因的克隆、表达及其多克隆抗血清的制备
3
作者
海岗
刘胜旺
陈洪岩
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
2007年第8期I0060-I0060,共1页
文摘
应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE分析显示,表达的山羊IL-2融合蛋白分子量约为18kD。包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后,通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。用所获得的重组山羊IL-2纯化产物经3次肌内注射新西兰白兔,制备了兔抗山羊IL-2多克隆血清,并用Western blot进行了证明。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2融合蛋白,并制备了抗山羊IL-2多克隆抗血清,为下一阶段关于山羊IL-2重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。
关键词
山羊IL-2
融合
蛋白原
核
表达
抗血清
分类号
R512.6 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GST-Jab1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化
黄瑾
郑玉建
鲁重元
万梅
《石河子大学学报(自然科学版)》
CAS
2007
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
山羊IL-2的体外表达及其多克隆抗血清的制备
海岗
刘胜旺
韩宗玺
陈洪岩
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
山羊IL-2基因的克隆、表达及其多克隆抗血清的制备
海岗
刘胜旺
陈洪岩
《中国比较医学杂志》
CAS
2007
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