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大鼠谷氨酰胺合成酶RNA干扰表达载体的构建及其影响星形胶质细胞黏附的初探 被引量：1
1
作者 刘春兴 张滨 邹健 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1397-1401,共5页
目的:构建并鉴定大鼠谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)RNA干扰表达载体,并检测GS对星形胶质细胞黏附的影响。方法:利用软件根据GS mRNA序列设计特异性siRNA序列,与GS真核表达载体GS-EGFP以LipofectamineTM2000试剂联合转染Hela-... 目的:构建并鉴定大鼠谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)RNA干扰表达载体,并检测GS对星形胶质细胞黏附的影响。方法:利用软件根据GS mRNA序列设计特异性siRNA序列,与GS真核表达载体GS-EGFP以LipofectamineTM2000试剂联合转染Hela-G细胞,以GFP为指标鉴定其有效性;体外合成该siRNA插入序列,将其定向克隆至真核表达载体pRNATH1.l/Neo中并转染至大鼠星形胶质细胞中,以免疫细胞化学方法鉴定GS的表达;通过免疫化学法对actin特异性染色分析GSRNA干扰后对星形胶质细胞黏附的影响。结果:GS siRNA能有效抑制GS-EGFP在Hela-G细胞中的表达;DNA测序证实合成并被克隆入真核表达载体pRNAT HI.1/Neo的siRNA插入序列完全正确,GS siRNA表达载体可特异性抑制星形胶质细胞中GS的表达;GS RNA干扰导致细胞黏附力显著降低。结论:成功构建大鼠GS siRNA真核表达载体,初步表明GS影响星形胶质细胞的黏附,为后期研究GS在中枢神经系统损伤后反应性星形胶质细胞中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 反应性星形胶质细胞 谷氨酰胺合成酶 真核表达载体 RNA干扰 细胞黏附 sirna表达载体 大鼠 免疫细胞化学方法
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