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细胞色素P_(450)2C通过GPX4/ACSL4轴调控高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞铁死亡的机制研究
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作者 罗婷 李艳 +1 位作者 谢立科 吕红彬 《眼科新进展》 北大核心 2025年第9期691-695,共5页
目的探讨细胞色素P_(450)2C调控高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)铁死亡的分子机制。方法取体外培养的hRMECs分成6组。NG组:细胞培养于含5.5mmol·L^(-1)葡萄糖的无血清DMEM培养基中。NG+非诺贝特组:NG组基础上加入10μmol... 目的探讨细胞色素P_(450)2C调控高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)铁死亡的分子机制。方法取体外培养的hRMECs分成6组。NG组:细胞培养于含5.5mmol·L^(-1)葡萄糖的无血清DMEM培养基中。NG+非诺贝特组:NG组基础上加入10μmol·L^(-1)非诺贝特。NG+利福平组:NG组基础上加入10μmol·L^(-1)利福平。HG组:细胞培养于含25.5mmol·L^(-1)葡萄糖的无血清DMEM培养基中。HG+非诺贝特组:HG组基础上加入10μmol·L^(-1)非诺贝特。HG+利福平组:HG组基础上加入10μmol·L^(-1)利福平。各组细胞均培养48h后,进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞活力,采用试剂盒法检测hRMECs中丙二醛(MDA)和铁含量,流式细胞仪检测各组细胞Liperfluo相对荧光强度,实时荧光定量PCR检测hRMECs中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、细胞色素P_(450)2C和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)mRNA表达水平,Westernblot检测hRMECs中GPX4、细胞色素P_(450)2C和ACSL4蛋白表达水平。结果最适诱导浓度分析发现,10μmol·L^(-1)非诺贝特组细胞活力较HG组升高最显著,10μmol·L^(-1)利福平组细胞活力下降最显著(P<0.05),故选择10μmol·L^(-1)分别作为非诺贝特和利福平的最适诱导浓度用于后续实验。NG组、NG+非诺贝特组、NG+利福平组、HG组、HG+非诺贝特组、HG+利福平组细胞活力分别为(100.00±7.85)%、(102.15±9.07)%、(69.97±4.22)%、(61.74±6.13)%、(83.64±7.58)%、(56.96±5.34)%;与NG组相比,HG组细胞活力显著降低(P<0.05);与HG组相比,HG+非诺贝特组细胞活力显著升高(P<0.05)。与NG组相比,HG组hRMECs中MDA、铁含量及Liperfluo相对荧光强度均升高(均为P<0.05)。与HG组相比,HG+非诺贝特组hRMECs中MDA、铁含量及Liperfluo相对荧光强度均降低(均为P<0.05);HG+利福平组hRMECs中MDA、铁含量及Liperfluo相对荧光强度均升高(均为P<0.05)。与NG组相比,HG组hRMECs中细胞色素P_(450)2C和ACSL4mRNA及蛋白表达水平均升高,而GPX4mRNA及蛋白表达水平均降低(均为P<0.05)。与HG组相比,HG+非诺贝特组hRMECs中细胞色素P_(450)2C和ACSL4mRNA及蛋白表达水平均降低,GPX4mRNA及蛋白表达水平均升高(均为P<0.05);HG+利福平组hRMECs中细胞色素P_(450)2C和ACSL4mRNA及蛋白表达水平均升高,GPX4mRNA及蛋白表达水平均降低(均为P<0.05)。结论细胞色素P_(450)2C可通过调控GPX4/ACSL4信号轴,促进高糖环境下hRMECs的铁死亡;抑制细胞色素P_(450)2C表达可对DR发挥保护作用;调控该通路的关键因子GPX4和ACSL4的表达水平或平衡状态,有望成为减缓DR进展的潜在策略。 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 细胞色素P_(450)2C 利福平 非诺贝特 铁死亡 gpx4/acsl4通路
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五味子合剂对糖尿病肾病大鼠氧化应激与铁死亡的影响及机制
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作者 张术姣 张帅星 +7 位作者 曹梓静 白雪慧 吴玲 邓媛媛 张赛 马钰 刘伟敬 张勉之 《中华中医药学刊》 北大核心 2025年第8期111-115,I0034-I0036,共8页
目的探讨五味子合剂(Schisandrae mixture,SM)对糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏的保护作用及机制。方法将60只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、达格列净(Dagliquin,DA)组、SM高剂量(SM-H)组、SM中剂量(SM-M)组、S... 目的探讨五味子合剂(Schisandrae mixture,SM)对糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏的保护作用及机制。方法将60只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、达格列净(Dagliquin,DA)组、SM高剂量(SM-H)组、SM中剂量(SM-M)组、SM低剂量(SM-L)组,高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导造模。每4周检测血糖(Glu)、24 h尿蛋白定量(24 hUTP);给药12周后,称取肾质量,采集血清及肾组织,计算肾脏指数(Kidney index,KI);检测血肌酐(Serum creatinine,Scr)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN);苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)、六胺银(Silver hexamine,PASM)及马松(Masson)染色观察肾组织病理形态;相应试剂盒检测肾组织丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽(Glutathione,GSH)水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blotting(WB)检测肾组织中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血红素氧合酶1(Heme Oxygenase-1,HO-1)的mRNA及蛋白表达量;免疫组化检测肾组织谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)及酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(Acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)水平。结果与对照组相比,模型组病理损伤明显加重;Glu、24hUTP、Scr、BUN及KI明显升高,MDA水平明显升高,SOD、GSH水平明显降低,HIF-1α和HO-1的蛋白及mRNA表达水平明显升高,GPX4表达水平明显降低,ACSL4表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,DA组及SM各组病理损伤明显减轻;Glu、24hUTP、Scr、BUN和KI均降低,肾组织MDA水平降低,SOD、GSH水平增高,其中以SM-H组上述各指标变化最为明显,并且除SM-L组BUN、MDA及SOD外均有统计学意义(P<0.05);SM-H组HIF-1α和HO-1的蛋白及mRNA水平明显升高,GPX4表达水平明显升高,ACSL4表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SM对DN具有一定肾保护作用,可能与调控HIF-1α/HO-1通路减轻氧化应激及调控GPX4/ACSL4通路抑制铁死亡有关。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 五味子合剂 氧化应激 铁死亡 HIF-1α/HO-1通路 gpx4/acsl4通路
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