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神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化
1
作者
陈燕
张瑛
+3 位作者
李金照
邓巍
夏另朝
邱蓉
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
1998年第4期382-385,共4页
根据基因库中的顺序，设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物，以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列，经ＤＮＡ测序确认后，该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３...
根据基因库中的顺序，设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物，以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列，经ＤＮＡ测序确认后，该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导，在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体，经充分洗涤，溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的变性缓冲液中．经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离，梯度洗脱，以１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查含ＧＤＮＦ的部分．将含单体ＧＤＮＦ部分进行复性，再次用ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子柱分离同源二体ＧＤＮＦ．最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳纯化，纯度大于９５％．经Ｎ端测序表明序列正确．经测定，每升培养菌可得约１０ｍｇ纯化的ＧＤＮＦ．
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关键词
神经营养因子
gdnf编码顺序
PCR法
表达产物
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题名
神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化
1
作者
陈燕
张瑛
李金照
邓巍
夏另朝
邱蓉
机构
中国科学院生物物理研究所
中国科学院视觉信息加工开放实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
1998年第4期382-385,共4页
文摘
根据基因库中的顺序，设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物，以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列，经ＤＮＡ测序确认后，该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导，在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体，经充分洗涤，溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的变性缓冲液中．经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离，梯度洗脱，以１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查含ＧＤＮＦ的部分．将含单体ＧＤＮＦ部分进行复性，再次用ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子柱分离同源二体ＧＤＮＦ．最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳纯化，纯度大于９５％．经Ｎ端测序表明序列正确．经测定，每升培养菌可得约１０ｍｇ纯化的ＧＤＮＦ．
关键词
神经营养因子
gdnf编码顺序
PCR法
表达产物
Keywords
Coding sequence of
gdnf
,PCR method,Expression,Purification of rh
gdnf
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化
陈燕
张瑛
李金照
邓巍
夏另朝
邱蓉
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
1998
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