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花生抗旱基因AhCPK8及其互作蛋白GAPDH的克隆及分子鉴定
1
作者 何梅 张佳蕾 +6 位作者 范士凯 孟静静 王建国 郭峰 李新国 万书波 杨莎 《作物学报》 北大核心 2025年第10期2713-2726,共14页
花生(Arachis hypogaea L.)是重要的油料和经济作物,干旱是限制花生产量的主要因素之一。探明花生响应干旱胁迫的关键基因,对后续花生品种改良,提高产量具有重要意义。本研究以花生品种花育22号(HY22)为研究对象,足钙(SC)、缺钙(NC)2种... 花生(Arachis hypogaea L.)是重要的油料和经济作物,干旱是限制花生产量的主要因素之一。探明花生响应干旱胁迫的关键基因,对后续花生品种改良,提高产量具有重要意义。本研究以花生品种花育22号(HY22)为研究对象,足钙(SC)、缺钙(NC)2种营养液水培培养,终浓度为20%PEG-6000溶液模拟干旱胁迫处理(DSC、DNC)。通过干旱处理后转录组数据结合花生钙传感蛋白编码基因CPKs的差异表达筛选出花生抗旱基因AhCPK8。以干旱处理后的花生叶片为材料,利用酵母双杂交筛选到其互作蛋白甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)并得到初步验证。GAPDH家族基因在调节植物对非生物胁迫的反应中发挥着重要作用。基于AhGAPDH基因家族的生物信息学分析,在花生中共鉴定出21个GAPDH基因,再根据大豆和拟南芥系统发育树关系以及基因在12条染色体上的先后顺序进行命名。基本理化特征结果表明,AhGAPDH家族成员大多数为稳定、疏水性蛋白;同一聚类的AhGAPDH家族成员大多数表现出相似的motif结构、保守结构域和基因结构;启动子区域中有丰富的光响应、植物激素响应及非生物胁迫响应相关的顺式作用元件。AhCPK8与AhGAPDH存在相互作用,共同调控花生的抗旱性。 展开更多
关键词 花育22号 抗旱性 AhCPK8 互作蛋白 gapdh
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表达副猪格拉瑟菌GAPDH和OmP26的重组猪霍乱沙门氏菌构建及免疫学评价
2
作者 陈丽璇 符颖 +3 位作者 陈政权 李莉莉 张伟孝 张建民 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第3期319-325,共7页
【目的】构建能同时表达副猪格拉瑟菌Glaesserella parasuis关键抗原GAPDH和OmP26的重组猪霍乱沙门氏菌Salmonella choleraesuis,并评估其作为二联疫苗候选株的潜力,以期为预防G.parasuis和S.choleraesuis感染提供一种新型高效的解决方... 【目的】构建能同时表达副猪格拉瑟菌Glaesserella parasuis关键抗原GAPDH和OmP26的重组猪霍乱沙门氏菌Salmonella choleraesuis,并评估其作为二联疫苗候选株的潜力,以期为预防G.parasuis和S.choleraesuis感染提供一种新型高效的解决方法。【方法】选取多种血清型的G.parasuis中广泛存在的抗原GAPDH和OmP26作为外源抗原,以S.choleraesuis C500Δasd缺失株为载体,构建同时表达GAPDH和OmP26的G.parasuis-S.choleraesuis重组菌株,并对其生物学特性和免疫效果展开研究。【结果】PCR与测序结果共同表明,本研究成功构建重组菌株C501(pYA-GAPDH-OmP26),该菌株能稳定携带GAPDH和OmP26基因片段(大小分别为1020和798 bp),在连续传代100次中均能稳定扩增目标片段;且生长曲线、生化特性与对照菌C501(pYA3493)一致。重组菌株C501(pYA-GAPDH-OmP26)对S.choleraesuis C78-1和G.parasuis 5型强毒株SH0165的保护率分别为62.5%和50.0%,而C501(pYA3493)对S.choleraesuis C78-1的保护率为50.0%,对G.parasuis 5型强毒株SH0165则无保护作用。【结论】重组沙门氏菌C501(pYA-GAPDH-OmP26)能稳定携带异源基因,具有与亲本菌株相近的生物学特性及良好的表达特性,能够诱导机体对G.parasuis和S.choleraesuis产生联合免疫反应,为G.parasuis-S.choleraesuis二联基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 副猪格拉瑟菌 猪霍乱沙门氏菌 C500Δasd缺失株 gapdh OmP26
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三七植物GAPDH基因克隆及序列分析 被引量：27
3
作者 朱华 李珅 +1 位作者 赵瑞强 吴耀生 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1316-1319,共4页
采用改进的异硫氰酸胍法提取高质量三七总RNA,运用RT-PCR方法克隆了三七GAPDH基因的部分序列,长度为627 bp,编码209个氨基酸,为半定量RT-PCR以及Real-time RT-PCR等技术在三七植物研究中的应用提供了条件.氨基酸序列比对结果表明,该序... 采用改进的异硫氰酸胍法提取高质量三七总RNA,运用RT-PCR方法克隆了三七GAPDH基因的部分序列,长度为627 bp,编码209个氨基酸,为半定量RT-PCR以及Real-time RT-PCR等技术在三七植物研究中的应用提供了条件.氨基酸序列比对结果表明,该序列与拟南芥、烟草、人参的GAPDH氨基酸序列的同源性分别为91%、93%、95%;核苷酸序列的同源性分别为82%、84%、85%. 展开更多
关键词 三七 gapdh基因 克隆
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杧果MGAPDH同源基因的克隆及其表达分析 被引量：11
4
作者 罗聪 何新华 +2 位作者 胡颖 谭超 欧世金 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1019-1024,F0003,共7页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖代谢和能量代谢过程中的关键酶。根据GAPDH基因保守序列设计PCR引物,利用RT-PCR和改良RACE技术,首次从杧果中分离克隆出MGAPDH同源基因的cDNA全长序列。该序列全长为1 356 bp,开放阅读框为1 203 bp,编码... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖代谢和能量代谢过程中的关键酶。根据GAPDH基因保守序列设计PCR引物,利用RT-PCR和改良RACE技术,首次从杧果中分离克隆出MGAPDH同源基因的cDNA全长序列。该序列全长为1 356 bp,开放阅读框为1 203 bp,编码401个氨基酸。利用分子生物学软件对MGAPDH蛋白进行生物信息学分析,结果显示:MGAPDH蛋白分子量为42.8 ku,等电点为8.9;该蛋白包含2个功能域,即NADB_Rossmannsuperfamily和Gp_dh_C superfamily;MGAPDH蛋白不含信号肽序列和跨膜结构,是非分泌蛋白,位于叶绿体中。氨基酸序列进化分析结果显示,杧果MGAPDH蛋白可能与光合作用有关。半定量分析显示,杧果MGAPDH同源基因在杧果不同组织中均表达,并且表达水平差异不明显,说明杧果MGAPDH同源基因可作为杧果基因差异表达的内参基因。 展开更多
关键词 杧果 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh) 表达分析 序列分析
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食蚊鱼(Gambusia afinis)cat、gapdh和gst基因的克隆及其在生态毒理学中的应用 被引量：7
5
作者 欧瑞康 武小燕 +4 位作者 库培佳 王兰 苏甜 梁惜梅 聂湘平 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期83-92,共10页
根据Ensembl、Genbank登录的鱼类cat、gapdh和gst基因的CDS序列设计普通PCR扩增引物,寻找食蚊鱼的cat、gapdh和gst基因的c DNA片段,并根据定量引物设计要求设计出相应的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR引物,建立了食蚊鱼cat、gapdh和gst... 根据Ensembl、Genbank登录的鱼类cat、gapdh和gst基因的CDS序列设计普通PCR扩增引物,寻找食蚊鱼的cat、gapdh和gst基因的c DNA片段,并根据定量引物设计要求设计出相应的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR引物,建立了食蚊鱼cat、gapdh和gst基因的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR方法。该方法在104~108数量级范围内有良好线性关系(R=0.999~1.000);熔解曲线显示扩增产物特异性良好,均为单一峰值;质粒标准品最高浓度与最低浓度的批内试验变异系数与批间试验变异系数均低于2%。利用该方法监测和评价环境污染物对水生生物的影响,选择了水体中常见典型药物污染物——双氯芬酸,研究其对食蚊鱼抗氧化基因表达的影响。结果表明,雌性食蚊鱼暴露在不同浓度双氯芬酸钠(0.005、0.05、0.5和5 mg·L-1)24 h后,其肝脏cat、gapdh和gst的mRNA呈现显著变化,相对于对照组,在低浓度0.005 mg·L-1时,cat与gst mRNA的表达量均有极显著上升(p<0.01),而其它浓度均极显著下降(p<0.01)。试验表明该方法具有快速、精确、灵敏度高的优点,可为利用该类小型鱼类的原位污染物的生物监测和生态毒理评价提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 食蚊鱼 CAT gapdh GST 实时荧光定量PCR 双氯芬酸
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中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：6
6
作者 田月珍 黄锡霞 +8 位作者 狄江 田可川 吴伟伟 徐新明 哈尼克孜 付雪峰 张艳花 马依拉 艾买提 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1938-1943,共6页
【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR G... 【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR Green I染料技术的Real-Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其熔解曲线分析。【结果】以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值(Ct)与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系,GAPDH基因标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=一3.679 51g/X+35.648,相关系数R=0.999 8;试验重复性好,批内和批间变异系数(CV%)分别为0.22%～3.45%和1.30%～4.89%。【结论】所建立的方法具有快速、线性范围广、重复性强等特点,GAPDH可作为内参基因用于绵羊相关基因的定量表达研究。 展开更多
关键词 中国美利奴羊(新疆型) gapdh基因 RT—PCR 内参基因
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家兔GAPDH基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立 被引量：9
7
作者 高博 杨晓农 +2 位作者 于学辉 罗薇 黄河 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第1期69-73,共5页
根据GenBank登录的家兔GAPDH基因保守区域CDS序列设计1对引物,通过反应体系及反应条件优化,成功建立了检测家兔GAPDH基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法。结果表明,该方法检测GAPDH的最低拷贝数为32拷贝/μL,在较广的范围内（3.2... 根据GenBank登录的家兔GAPDH基因保守区域CDS序列设计1对引物,通过反应体系及反应条件优化,成功建立了检测家兔GAPDH基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法。结果表明,该方法检测GAPDH的最低拷贝数为32拷贝/μL,在较广的范围内（3.2×10^1-3.2×10^7拷贝/μL）有良好的线性关系（r=0.999）;熔解曲线分析显示扩增产物的特异性单峰,其Tm为（87±0.2）℃;5个不同浓度标准品组内试验变异系数为1.67%4.73%,组间试验变异系数为2.66%8.74%。该方法具有快速、灵敏、高通量及可重复性强等优点,为GAPDH基因作为内参基因进行家兔功能基因与病原基因表达的定量分析提供了方法学基础。 展开更多
关键词 家兔 gapdh基因 实时荧光定量RT-PCR 内参基因
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赤桉GAPDH家族基因的克隆及其序列分析 被引量：3
8
作者 陈鸿鹏 朱凤云 +1 位作者 吴志华 谢耀坚 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2014年第1期120-127,共8页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）是高等植物糖酵解和糖异生反应中的关键酶，是维持生命活动能量形成的最基本酶之一，它氧化甘油醛-3-磷酸生成1，3-二磷酸甘油酸，由此为糖酵解过程提供产生ATP的底物[1-4]。此外，由于该酶基因为管家基因... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）是高等植物糖酵解和糖异生反应中的关键酶，是维持生命活动能量形成的最基本酶之一，它氧化甘油醛-3-磷酸生成1，3-二磷酸甘油酸，由此为糖酵解过程提供产生ATP的底物[1-4]。此外，由于该酶基因为管家基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或组织中的蛋白质表达量较为恒定，故被广泛用作实时荧光定量PCR的内参基因[5-9]。近年来，随着研究的不断深入，发现GAPDH还参与胚胎的特化、细胞融合、微管结束、磷酸转移酶激活、DNA复制与修复等过程，并调控组蛋白基因的表达、调节端粒结构，具有核膜融合和微管成束的活性[10-14]。同时，GAPDH的mRNA和蛋白质水平会受到各种环境因素的影响，并具有不同的亚细胞定位以及多元化的生理功能[15-16]。 展开更多
关键词 赤桉 gapdh 家族基因 克隆 序列分析
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文心兰GAPDH基因片段的克隆及序列分析 被引量：4
9
作者 张国付 蒋素华 +3 位作者 崔波 袁秀云 田云芳 叶永忠 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期68-71,共4页
采用Trizol法提取文心兰花期花葶总RNA,并运用RT-PCR方法克隆了文心兰GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)基因的2个部分序列,长度均为875 bp,编码291个氨基酸残基.序列分析结果表明,与其它已登录物种的GAPDH基因相比,其核苷酸序列的同源性均在79... 采用Trizol法提取文心兰花期花葶总RNA,并运用RT-PCR方法克隆了文心兰GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)基因的2个部分序列,长度均为875 bp,编码291个氨基酸残基.序列分析结果表明,与其它已登录物种的GAPDH基因相比,其核苷酸序列的同源性均在79%以上,与蕙兰(JN177724.1)同源性高达到92%,氨基酸序列的同源性也在85%以上;且与单子叶植物的同源序列表现出较高的相似性.本研究已克隆出文心兰GAPDH基因的部分cDNA同源序列片段,分别命名为OnGA1和OnGA2,并在GenBank注册,登录号分别为JN981141和JN981142. 展开更多
关键词 文心兰 gapdh基因 克隆
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实时荧光PCR检测鸡GAPDH基因方法的建立 被引量：8
10
作者 李娅 韦平 +5 位作者 金元昌 韦信贤 杨先荣 牛搏学 梁韦芬 苏清康 《中国家禽》 北大核心 2008年第8期37-40,共4页
根据GenBank上鸡的3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehy-drogenase,GAPDH)基因的序列,在保守区域设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了荧光定量PCR法。采用梯度浓度的GAPDH基因重组标准品质粒DNA进行荧光定量... 根据GenBank上鸡的3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehy-drogenase,GAPDH)基因的序列,在保守区域设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了荧光定量PCR法。采用梯度浓度的GAPDH基因重组标准品质粒DNA进行荧光定量PCR并建立了标准曲线,经分析显示标准曲线的Ct值与标准品浓度的对数值之间存在良好的线性关系;动力学曲线分析表明,在本研究所建立的反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度都达到10拷贝/反应。实时荧光定量PCR检测GAPDH基因表达水平标准品质粒和标准曲线的建立,为GAPDH基因作为内参基因进行鸡功能基因与病原基因表达的定量分析奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡 gapdh基因 实时荧光定量PCR 内参基因
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擎天凤梨GAPDH基因的克隆及序列分析 被引量：5
11
作者 刘建新 张智 +2 位作者 丁华侨 葛亚英 王炜勇 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期722-726,共5页
管家基因GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)常被用作定量、半定量PCR试验的内参,以确定目标基因的相对表达量。基于前期从全长cDNA文库中获得GAPDH基因的EST单克隆,进行PrimerWalking测序,获得一个GAPDH的全长cDNA序列,... 管家基因GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)常被用作定量、半定量PCR试验的内参,以确定目标基因的相对表达量。基于前期从全长cDNA文库中获得GAPDH基因的EST单克隆,进行PrimerWalking测序,获得一个GAPDH的全长cDNA序列,序列长1 790 bp,编码421个蛋白氨基酸,命名为GoGAP-DH1。采用Blast,ExPASy,ProtParam,SPOMA,Find Conserved Domains(NCBI),ClustalX,MEGA等生物信息学软件对cDNA序列、氨基酸序列、保守区、亲缘关系等特征进行分析。结果表明,GoGAPDH1与玉米的细胞质GAPDH基因源性最高,为82%。初步推断GoGAPDH1可能是一个胞质型GAPDH。 展开更多
关键词 擎天凤梨 gapdh 克隆
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GAPDH功能多样性 被引量：21
12
作者 尚海旭 井然 +1 位作者 贾弘禔 倪菊华 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期371-374,共4页
3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)一直以来被认为是一种只分布在细胞质中、仅在糖酵解过程中起关键作用的酶。但是近年来,越来越多的研究表明GAPDH是一种多功能蛋白,且在细胞核、细胞质、生物膜上... 3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)一直以来被认为是一种只分布在细胞质中、仅在糖酵解过程中起关键作用的酶。但是近年来,越来越多的研究表明GAPDH是一种多功能蛋白,且在细胞核、细胞质、生物膜上均有定位。如在细胞核内,GAPDH参与tRNA出核、mRNA稳定性调节、DNA损伤修复、组蛋白转录调控、凋亡及神经退行性疾病发生等。在细胞质中,GAPDH有磷酸激酶活性、催化微管聚合的功能及参与细胞保护。在生物膜上,GAP-DH可促进膜融合、参与膜转运等。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh) 功能多样性
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Taqman荧光定量PCR是核酸水平对管家基因GAPDH进行定量的好方法 被引量：4
13
作者 王萍 丛敏 +5 位作者 李忆梅 唐淑珍 刘晓明 王宝恩 贾继东 尤红 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期210-213,共4页
目的 比较Taqman荧光定量PCR法、SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法和普通PCR法制作3-磷酸甘油醛（GAPDH）标准曲线的检出下限、线性范围的差异，确定一种较好的GAPDH绝对定量方法。方法 构建含GAPDH全长的质粒，经PCR和EcoRⅠ限制性酶切鉴定... 目的 比较Taqman荧光定量PCR法、SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法和普通PCR法制作3-磷酸甘油醛（GAPDH）标准曲线的检出下限、线性范围的差异，确定一种较好的GAPDH绝对定量方法。方法 构建含GAPDH全长的质粒，经PCR和EcoRⅠ限制性酶切鉴定确认后，紫外定量并连续稀释10倍作为标准品。分别用Taqman法和SYBR GreenⅠ法于荧光定量PCR仪上制作标准曲线，同时用普通PCR结合琼脂糖凝胶电泳利用Quantity One软件定量并制作标准曲线。结果 Taqman法检出GAPDH的下限为2．0×10^4拷贝，线性范围：2．0×10^4～2．0×10^10拷贝；SYBR GreenⅠ法检出GAPDH的下限为2．0×10^7拷贝，线性范围：2．0×10^7～2．0×10^10拷贝；普通PCR检出GAPDH的下限为2．0×10^6拷贝，线性范围：2．0×10^7～2．0×10^9拷贝。结论 Taqman荧光定量PCR法比SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法和普通PCR法的灵敏度高，线性范围宽，是核酸水平对GAPDH定量的好方法。 展开更多
关键词 PCR gapdh 荧光定量
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siRNA对鸡胚成纤维细胞中GAPDH基因表达的抑制作用 被引量：4
14
作者 陈学辉 孟和 +1 位作者 潘玉春 崔芳岩 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第2期199-203,共5页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过短双链RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性抑制相应基因表达的新技术。作为研究基因功能的有效手段,该技术已在线虫、果蝇、斑马鱼和鼠等动物中进行了应用。本研究利用体外转录合成的... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过短双链RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性抑制相应基因表达的新技术。作为研究基因功能的有效手段,该技术已在线虫、果蝇、斑马鱼和鼠等动物中进行了应用。本研究利用体外转录合成的短双链干扰RNA(siRNA),针对鸡的管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH),在鸡胚成纤维细胞中对其表达进行干扰。结果显示siGAPDH能有效阻断GAPDH基因在鸡胚成纤维细胞中的表达,而不相关的siRNA则对该基因的表达没有影响,证明在鸡细胞中也存在RNA干扰现象,为利用RNAi技术对鸡的基因功能研究奠定了一定基础。 展开更多
关键词 RNAI 鸡胚成纤维细胞:gapdh
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刺五加GAPDH基因全长cDNA的克隆与生物信息学分析 被引量：2
15
作者 修乐山 柴丽花 +1 位作者 周秘 邢朝斌 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期124-127,共4页
采用cDNA末端RACE技术,从刺五加叶片中克隆到GAPDH基因cDNA的全长序列,并运用生物信息学方法对该基因的cDNA序列、保守区、氨基酸序列、亲缘关系等特征进行分析,并预测其编码蛋白质的结构和功能。研究结果表明,刺五加GAPGH基因的cDNA全... 采用cDNA末端RACE技术,从刺五加叶片中克隆到GAPDH基因cDNA的全长序列,并运用生物信息学方法对该基因的cDNA序列、保守区、氨基酸序列、亲缘关系等特征进行分析,并预测其编码蛋白质的结构和功能。研究结果表明,刺五加GAPGH基因的cDNA全长为1 437 bp,开放阅读框全长为1 023 bp,编码一个具有340个氨基酸残基的蛋白,蛋白分子质量为37.070 ku,理论等电点(pI)为7.71。刺五加GAPDH蛋白不存在跨膜结构域,定位于细胞质中,属于亲水蛋白。 展开更多
关键词 刺五加 gapdh 克隆
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巴夫杜氏藻GAPDH基因部分序列的克隆 被引量：2
16
作者 尚常花 朱顺妮 +1 位作者 袁振宏 王忠铭 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期126-127,134,共3页
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的一个关键酶,由于其基因表达量相对恒定,因此在定量和半定量PCR试验中常被用作内源参照基因来确定目标基因的相对表达量。从巴夫杜氏藻(Dunaliella parva)中克隆GAPDH基因,并对基因序列进行了... 3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的一个关键酶,由于其基因表达量相对恒定,因此在定量和半定量PCR试验中常被用作内源参照基因来确定目标基因的相对表达量。从巴夫杜氏藻(Dunaliella parva)中克隆GAPDH基因,并对基因序列进行了分析。以巴夫杜氏藻cDNA为模板,根据GAPDH的保守序列设计引物,PCR扩增获得了673 bp的cDNA序列。在此基础上,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了913 bp的3′-cDNA序列,进而获得了cDNA部分序列1 393 bp。序列分析结果表明:巴夫杜氏藻GAPDH cDNA部分序列包括1 055 bp的编码区和338 bp的3′非翻译区。该基因的克隆为半定量和定量PCR等技术在巴夫杜氏藻分子生物学研究中的应用提供了内源参照基因。 展开更多
关键词 巴夫杜氏藻 gapdh基因 克隆
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蕙兰GAPDH基因的全长克隆及生物信息学分析 被引量：2
17
作者 田云芳 蒋素华 +1 位作者 袁秀云 崔波 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期870-877,共8页
根据GenBank中已登陆的GAPDH基因的同源核苷酸保守序列,设计简并引物,采用RT-PCR的方法得到5个875 bp的片段,分别命名为CfGAPDH1-CfGAPDH5,GenBank登录号分别为JN177722-JN177726。同时结合RACE方法得到蕙兰GAPDH基因cDNA全长,命名为CfG... 根据GenBank中已登陆的GAPDH基因的同源核苷酸保守序列,设计简并引物,采用RT-PCR的方法得到5个875 bp的片段,分别命名为CfGAPDH1-CfGAPDH5,GenBank登录号分别为JN177722-JN177726。同时结合RACE方法得到蕙兰GAPDH基因cDNA全长,命名为CfGAPDH(JX560732),该序列cDNA全长为1 496 bp,具有完整的开放阅读框(ORF,173-1 195 bp),编码340个氨基酸,该基因编码的氨基酸序列与其他植物的GAPDH蛋白有较高的同源性(80%以上)。系统进化分析表明蕙兰CfGAPDH基因核苷酸序列与墨兰GAPDH1、GAPDH2和春兰GAPDH1的同源性最高(99%),所编码的氨基酸序列与墨兰GAPDH2的同源性达100%。生物信息学分析推测,该基因编码的蛋白残基主要有两个卷曲螺旋区域,分别位于25和250位点附近,属于不稳定蛋白,亲水性较强,初步推断CfGAPDH是一个胞质型GAPDH,二级结构中的β转角所占比例较高(41.2%),三级结构与春兰和小麦非常相似。 展开更多
关键词 蕙兰 gapdh RACE 生物信息学
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牛支原体GAPDH定点突变、原核表达及生物学特性初步分析 被引量：5
18
作者 石磊 胡长敏 +1 位作者 彭清洁 郭爱珍 《中国奶牛》 2012年第5期1-4,共4页
根据已发表的牛支原体GAPDH基因序列设计引物,从牛支原体湖北分离株扩增出GAPDH基因,亚克隆于载体pET-30a。设计定点突变引物,采用环状PCR法对载体上GAPDH基因进行两轮定点突变,原核表达突变成功的重组质粒,获得重组牛支原体GAPDH蛋白,... 根据已发表的牛支原体GAPDH基因序列设计引物,从牛支原体湖北分离株扩增出GAPDH基因,亚克隆于载体pET-30a。设计定点突变引物,采用环状PCR法对载体上GAPDH基因进行两轮定点突变,原核表达突变成功的重组质粒,获得重组牛支原体GAPDH蛋白,经Western-blot证实该重组蛋白具有较好的反应原性,为其在牛支原体病防控中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 牛支原体 gapdh 定点突变 表达 生物学特性
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吉富罗非鱼源无乳链球菌Sip-GAPDH融合基因的构建及其原核表达 被引量：2
19
作者 王蓓 李桂欢 +4 位作者 鲁义善 汤菊芬 黄郁葱 吴灶和 简纪常 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期137-142,共6页
利用重叠延伸(SOEing)PCR技术,将吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQ0910株表面免疫原性蛋白(Surface immunogenic protein,Sip)基因与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因通过Linker序列融合,构... 利用重叠延伸(SOEing)PCR技术,将吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQ0910株表面免疫原性蛋白(Surface immunogenic protein,Sip)基因与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因通过Linker序列融合,构建成为Sip-GAPDH融合基因。将其定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。结果表明,重组质粒pET-32a-Sip-GAPDH在大肠杆菌BL21(DE3)中表达后所获得的融合蛋白Sip-GAPDH分子量为102.01 kD,表达最佳条件为37℃,IPTG浓度0.1 mmol/L,诱导5 h。Western blot鉴定结果表明融合基因得到了成功表达。 展开更多
关键词 无乳链球菌 Sip-gapdh融合基因 重叠延伸PCR技术 原核表达
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半滑舌鳎GAPDH基因开放读码框的克隆及序列分析 被引量：1
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作者 陈蓉 饶颖竹 +1 位作者 梁静真 邓富琳 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期126-130,共5页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)广泛存在于真核生物中,对许多生理活动具有重要作用。参考金头鲷和斑马鱼的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计一对简并引物,提取半滑舌鳎肌肉组织总RNA,采用RT-PCR技术对GAPDH基因进行克隆测序及序列... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)广泛存在于真核生物中,对许多生理活动具有重要作用。参考金头鲷和斑马鱼的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计一对简并引物,提取半滑舌鳎肌肉组织总RNA,采用RT-PCR技术对GAPDH基因进行克隆测序及序列分析。结果表明,从半滑舌鳎肌肉组织中成功克隆了GAPDH基因的开放读码框(ORF),序列全长1 002 bp,编码333个氨基酸,分子量为36.0235 ku,等电点PI为7.75。序列同源性分析显示,该序列与其他鱼类的GAPDH氨基酸序列具有较高的同源性。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh) 开放读码框(ORF) 克隆 序列分析
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