gga-miR-1574-5p生物学功能预测及其与G3BP2基因靶向关系验证

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作者 平玉宇 黄烜 +5 位作者 蔡清清 王强州 王佳兴 白皓 陈世豪 常国斌 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期2981-2991,共11页

【目的】gga-miR-1574-5p是细胞营养匮乏反应相关的miRNA。本研究旨在分析gga-miR-1574-5p功能并鉴定其与G3BP2基因之间的靶向关系,为进一步解析gga-miR-1574-5p的生物学功能提供科学依据。【方法】通过在线工具miRBase获得gga-miR-1574... 【目的】gga-miR-1574-5p是细胞营养匮乏反应相关的miRNA。本研究旨在分析gga-miR-1574-5p功能并鉴定其与G3BP2基因之间的靶向关系,为进一步解析gga-miR-1574-5p的生物学功能提供科学依据。【方法】通过在线工具miRBase获得gga-miR-1574-5p的成熟序列;使用TargetScan数据库预测gga-miR-1574-5p的靶基因进行GO功能与KEGG通路富集分析,并预测其与G3BP2基因的结合位点;使用双荧光素酶报告基因试验验证gga-miR-1574-5p与G3BP2的靶向关系;运用实时荧光定量PCR检测过表达gga-miR-1574-5p对G3BP2基因表达影响;采用Western blotting检测鸡巨噬细胞中gga-miR-1574-5p对G3BP2蛋白的表达影响。【结果】GO功能富集显示,gga-miR-1574-5p的潜在靶基因主要富集于细胞核、细胞质膜等细胞组分;RNA聚合酶Ⅱ的转录调控、RNA聚合酶Ⅱ的正向转录调控等生物过程;以及蛋白质结合、ATP结合等分子功能。KEGG通路富集显示,靶基因主要富集到卵母细胞减数分裂、TGF-β信号通路和线粒体自噬通路等。TargetScan数据库检测到gga-miR-1574-5p种子区与鸡G3BP2基因3′-非翻译区(3′-UTR)存在结合位点;与G3BP2-3′-UTR野生型质粒和NC-mimics共转染组相比,G3BP2-3′-UTR野生型质粒和gga-miR-1574-5p mimics共转染组的双荧光素酶活性极显著降低(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果表明,与NC-mimics组相比,转染20 nmol/L gga-miR-1574-5p mimics后对G3BP2基因表达水平无显著影响(P>0.05),而转染30、50 nmol/L gga-miR-1574-5p mimics组中G3BP2基因表达量显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01)。Western blotting结果显示,转染gga-miR-1574-5p mimics(20、30、50 nmol/L)后G3BP2蛋白表达水平均极显著低于转染NC-mimics组(P<0.01)。【结论】gga-miR-1574-5p与G3BP2基因存在靶向关系,且gga-miR-1574-5p能通过与G3BP2-3′-UTR特异性结合抑制鸡巨噬细胞中G3BP2基因及蛋白的表达。 展开更多

关键词 gga-miR-1574-5p 靶基因 g3bp2基因 应激颗粒

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环状RNA hsa_circ_0003221靶向miR-139-3p/IGF2BP3轴调控口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的分子机制

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作者 栗璞 王敬雯 邹雅琴 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期759-764,共6页

目的:探讨环状RNA hsa_circ_0003221(circPTK2)靶向微小RNA(miR)-139-3p/胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)轴调控口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡。方法:qRT-PCR检测组织及细胞中circPTK2、miR-139-3p、IGF2BP3 mRNA表达水平;将C... 目的:探讨环状RNA hsa_circ_0003221(circPTK2)靶向微小RNA(miR)-139-3p/胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)轴调控口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡。方法:qRT-PCR检测组织及细胞中circPTK2、miR-139-3p、IGF2BP3 mRNA表达水平;将CAL-27细胞分为5组:sh circPTK2、sh NC、sh circPTK2+miR-139-3p inhibitor、sh circPTK2+inhibitor NC、空白组。分别检测细胞增殖率、凋亡率及相关蛋白、IGF2BP3的表达,并验证miR-139-3p与circPTK2、IGF2BP3的靶向关系。结果:miR-139-3p表达在OSCC组织及细胞中降低,circPTK2、IGF2BP3 mRNA表达增加(P<0.05);沉默circPTK2可抑制细胞增殖及circPTK2、IGF2BP3 mRNA及蛋白表达,促进细胞凋亡及miR-139-3p表达(P<0.05);miR-139-3p inhibitor逆转了沉默circPTK2对CAL-27细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。miR-139-3p分别与circPTK2、IGF 2BP3存在靶向关系。结论:沉默circPTK2可通过miR-139-3p/IGF2BP3轴调控OSCC细胞增殖、凋亡。 展开更多

关键词 circPTK2 口腔鳞癌 增殖 凋亡 miR-139-3p/IgF2bp3轴

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LncRNA MALAT1通过调控miR-124-3p/IGF2BP1分子轴促进宫颈癌细胞增殖和转移 被引量：16

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作者 周莉 秦娟 陆安伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期182-189,共8页

目的:探讨lncRNA MALAT1通过调控miR-124-3p/IGF2BP1分子轴介导宫颈癌细胞增殖和转移的影响。方法:选取2014年4月至2017年12月在贵阳市妇幼保健院妇产科收治的、经手术切除的45例宫颈癌患者癌组织及相应癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系S... 目的:探讨lncRNA MALAT1通过调控miR-124-3p/IGF2BP1分子轴介导宫颈癌细胞增殖和转移的影响。方法:选取2014年4月至2017年12月在贵阳市妇幼保健院妇产科收治的、经手术切除的45例宫颈癌患者癌组织及相应癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系SiHa、Caski、HeLa和C33a,采用q PCR法检测癌组织和癌细胞系中MALAT1的表达水平。构建MALAT1敲降载体、miR-124-3p inhibitor及IGF2BP1过表达载体转染宫颈癌细胞,采用CCK-8、Transwell、Wb及免疫荧光实验探讨MALAT1或其敲降后通过miR-124-3p/IGF2BP1分子轴对宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响。采用双荧光素酶报告基因检测lnc RNA MALAT1、miR-124-3p及IGF2BP1的靶向调控关系。结果:MALAT1在宫颈癌组织和细胞系中高表达(P<0.05或P<0.01)。同时,敲降MALAT1显著抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因证实MALAT1靶向作用miR-124-3p并下调其表达水平,miR-124-3p可负调控IGF2BP1的表达。实验进一步证实敲降MALAT1通过靶向上调miR-124-3p对IGF2BP1的抑制作用,进而抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(P<0.05或P<0.01)。结论:lncRNA MALAT1通过下调miR-124-3p/IGF2BP1分子轴促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,为临床宫颈癌早期诊断/治疗提供了潜在的分子靶点。 展开更多

关键词 宫颈癌 增殖 上皮间质转化 lncRNA MALAT1 miR-124-3p IgF2bp1

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缺氧微环境下HIF-1α与circ-UBE2G1相互调控促进甲状腺癌转移

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作者 邓小玲 张能英 +1 位作者 龙开国 曾峰 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第14期1612-1622,共11页

目的 探究缺氧微环境下缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α与circ-UBE2G1相互调控促进甲状腺癌(thyroid cancer,THCA)转移的机制。方法 利用GEPIA数据库分析circUBE2G1与HIF-1α在THCA中的表达特点及相关性,通过Kaplan-Me... 目的 探究缺氧微环境下缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α与circ-UBE2G1相互调控促进甲状腺癌(thyroid cancer,THCA)转移的机制。方法 利用GEPIA数据库分析circUBE2G1与HIF-1α在THCA中的表达特点及相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析circ-UBE2G1和miR-330-3p与生存率的关系。THCA细胞暴露于缺氧环境,通过转染沉默HIF-1α分析HIF-1α对circUBE2G1转录的调控,并通过转染来沉默circ-UBE2G1。通过靶序列预测和双荧光素酶报告基因验证miR-330-3p与circ-UBE2G1或HIF-1α的靶向关系。利用转染分析HIF-1α过表达以及circ-UBE2G1沉默对THCA细胞迁移和侵袭的影响。通过皮下注射HIF-1α过表达以及circ-UBE2G1沉默的THCA细胞构建荷瘤裸鼠模型。临床收集THCA组织和癌旁正常样本分析circ-UBE2G1、miR-330-3p与HIF-1α的表达及相关性。结果 生信分析结果表明circ-UBE2G1与HIF-1α呈正相关(P<0.01),circ-UBE2G1的高表达与THCA患者低生存率相关(P=0.024)。抑制HIF-1α阻断缺氧对circ-UBE2G1的促进作用(P<0.05)。沉默circ-UBE2G1抑制THCA细胞迁移和侵袭,逆转HIF-1α对其的促进作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-330-3p分别与circ-UBE2G1和HIF-1α靶向结合(P<0.05)。沉默circ-UBE2G1导致miR-330-3p水平升高(P<0.05),而增加miR-330-3p则抑制HIF-1α的表达(P<0.05)。临床THCA样本中circ-UBE2G1与HIF-1α均升高且呈正相关(P<0.05),并且THCA样本中miR-330-3p低表达且分别与circ-UBE2G1和HIF-1α呈负相关(P<0.05)。结论 缺氧通过诱导HIF-1α表达促进circ-UBE2G1的转录,circ-UBE2G1通过靶向miR-330-3p促进HIF-1α的表达,从而促进THCA转移。 展开更多

关键词 甲状腺癌 缺氧 circ-UBE2g1 miR-330-3p HIF-1Α

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利用CRISPR/Cas9技术构建G3BP2基因缺失型BHK21细胞系 被引量：1

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作者 陈琳晖 屈春惠 王世民 《现代畜牧兽医》 2023年第10期6-10,共5页

试验采用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建G3BP2基因敲除的稳定乳仓鼠肾细胞(BHK21)系,并探究其对抗应激能力的影响。将构建的两组PX459-G3BP2-sgRNA重组质粒共转染BHK21细胞,使用嘌呤霉素筛选单克隆细胞株进行连续传代,在传代培养至十代后... 试验采用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建G3BP2基因敲除的稳定乳仓鼠肾细胞(BHK21)系,并探究其对抗应激能力的影响。将构建的两组PX459-G3BP2-sgRNA重组质粒共转染BHK21细胞,使用嘌呤霉素筛选单克隆细胞株进行连续传代,在传代培养至十代后提取蛋白进行蛋白质印迹技术(WB)检测,将敲除稳定性较好的细胞株提取DNA进行PCR扩增及测序。随后将二硫苏糖醇(DTT)溶液加入构建的G3BP2^(-/-)细胞株和野生型细胞株中进行细胞形态观察,测试G3BP2^(-/-)细胞株对热应激的反应。结果显示,试验得到3株G3BP2稳定表达阴性的细胞株:C8、E10、F9。镜检结果显示,缺失G3BP2基因的BHK21细胞的形态比野生型BHK21细胞的细胞形态更易受到影响。研究表明,试验成功获得了稳定的G3BP2^(-/-)细胞系,并验证了其生物学功能,为后续深入研究G3BP2基因在BHK21细胞中其他作用与机制奠定基础。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 基因敲除 g3bp2-/-细胞系

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S-2-(3-氨丙基氨基)乙基硫代磷酸酯对白血病细胞系HL-60细胞增殖与凋亡的影响 被引量：2

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作者 陈宝安 李翠萍 +10 位作者 黄成垠 周敏 程欣 陈津 傅强 高峰 高冲 丁家华 孙耕云 王俊 程坚 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期427-430,共4页

本研究探讨S 2 (3 氨丙基氨基 )乙基硫代磷酸酯 (WR 2 72 1,Amifostine)对白血病细胞系HL 6 0细胞增殖与凋亡的影响。采用XTT法检测细胞增殖及药物敏感性 ,用annexin/PI双染色法检测细胞凋亡 ,用流式细胞术检测细胞周期。结果表明 :WR ... 本研究探讨S 2 (3 氨丙基氨基 )乙基硫代磷酸酯 (WR 2 72 1,Amifostine)对白血病细胞系HL 6 0细胞增殖与凋亡的影响。采用XTT法检测细胞增殖及药物敏感性 ,用annexin/PI双染色法检测细胞凋亡 ,用流式细胞术检测细胞周期。结果表明 :WR 2 72 1对HL 6 0细胞增殖呈浓度时间依赖性抑制作用 ,0 .5mmol/LWR 2 72 137℃处理 30分钟后的HL 6 0细胞对VP16的敏感性增强 ,IC50 由 5 2 .5 μg/ml下降为 4 0 .5 μg/ml。WR 2 72 15 .0mmol/L作用 72小时后 ,早期细胞凋亡由 (5 .5± 1.9) %增加至 (4 8.5± 8.4 ) % (P <0 .0 0 1) ,晚期细胞凋亡由 (1.2± 0 .5 ) %增加至 (39.0± 4 .0 ) % (P <0 .0 0 1) ,并出现G2 M期细胞阻滞。结论 :S 2 (3 氨丙基氨基 )乙基硫代磷酸酯能增强HL 6 0细胞对VP16的敏感性 ,并可通过G2 M期阻滞 ,诱导细胞凋亡 ,从而抑制HL 6 0细胞的增殖。 展开更多

关键词 S2-(3-氨丙基氨基)乙基硫代磷酸酯 HL-60细胞系 细胞增殖 细胞凋亡

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2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮诱导Hep3B人肝癌细胞凋亡的机制

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作者 刘晓冬 韩英浩 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期77-83,107,共8页

近年来,紫草萘醌类衍生物因其临床应用受到副作用的限制。为寻找副作用小疗效高的新型抗肿瘤药物,合成了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮,并对其化学结构进行了鉴定。同时研究了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-... 近年来,紫草萘醌类衍生物因其临床应用受到副作用的限制。为寻找副作用小疗效高的新型抗肿瘤药物,合成了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮,并对其化学结构进行了鉴定。同时研究了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮对人肝癌细胞活力、凋亡的影响及其潜在机制。研究结果表明,通过MTT检测其细胞活力,发现2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮显著降低了人肝癌细胞系的细胞活力。蛋白免疫印迹结果表明,该化合物可通过上调Cle-caspase3、Bad和Bax凋亡相关蛋白表达水平来诱导肝癌细胞Hep3B凋亡。为进一步检测2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮诱导Hep3B细胞发生凋亡的原因,使用荧光探针JC-1检测了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮处理后Hep3B细胞内线粒体膜电位的变化。结果发现,与对照组相比,药物处理组线粒体膜电位显著下降,绿色荧光增强,红色荧光减弱,说明2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮能通过线粒体损伤来诱导Hep3B细胞凋亡。由于2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮显著诱导Hep3B细胞凋亡。因此,2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮具有良好的抗肿瘤活性。 展开更多

关键词 2-(4-甲氧基-苯巯基)-5 8-二甲氧基萘-1 4-二酮 Hep3B细胞系 细胞活力 细胞凋亡

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p53、14-3-3σ、miR-365在UVB致HaCaT细胞G_2/M期阻滞中的作用 被引量：1

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作者 郭院霞 王颖慧 +2 位作者 李明芳 刘明 周美娟 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第9期1388-1391,共4页

目的:研究30mJ/cm2的UVB照射后,HaCaT细胞周期的改变及其可能机制。方法:以人永生化上皮细胞(HaCaT)为研究对象,波长305nm的UVB为干预因子,首先观察了HaCaT细胞在30mJ/cm2的UVB作用后其细胞周期的变化;其次观察了UVB照后不同时间点p53... 目的:研究30mJ/cm2的UVB照射后,HaCaT细胞周期的改变及其可能机制。方法:以人永生化上皮细胞(HaCaT)为研究对象,波长305nm的UVB为干预因子,首先观察了HaCaT细胞在30mJ/cm2的UVB作用后其细胞周期的变化;其次观察了UVB照后不同时间点p53蛋白、14-3-3σ蛋白表达的改变;最后用miR-365高表达的HaCaT细胞分析了miR-365在UVB所致了的周期阻滞中的可能作用。结果:HaCaT细胞在30mJ/cm2的UVB作用后18h出现较明显的G2/M期阻滞;p53、磷酸化的p53以及14-3-3σ蛋白在UVB照射后均有明显升高;miR-365高表达的HaCaT细胞,14-3-3σ蛋白的mRNA表达下降,且在UVB照射后无明显改变。结论:30mJ/cm2的UVB照射可诱导HaCaT细胞发生G2/M期阻滞,p53、14-3-3σ、miR-365可能在其中发挥了重要作用。 展开更多

关键词 中波段紫外辐射 g2 M期阻滞 P53 14-3-3σ miR-365

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干扰素-α诱导HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G的表达及其机制

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作者 王鲁文 陈辉 +2 位作者 褚小刚 严少南 龚作炯 《中国感染控制杂志》 CAS 2009年第3期155-159,共5页

目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子... 目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子OAK—STAT）信号通道是否参与APOBEC3G基因转录调控。方法对HepG2 2．2．15细胞给予不同剂量（0、1、10^1、10^2、10^3、10^4 U／mL）IFN-α刺激8h时，以及10^3 U／mL IFN-α刺激2、4、6、8、10、12h时，收集细胞或培养上清液。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测HepG22．2．15细胞APOBEC3G、STAT-1 mRNA及蛋白的表达水平。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原与e抗原（HBsAg与HBeAg）水平，应用实时荧光定量PCR及RT-PCR分别检测上清液中HBVDNA水平以及细胞中HBVmRNA水平。结果无IFN-α（0 U／mL）刺激时，HepGa2．2．15细胞APOBEC3G表达水平很低。随着IFN-a浓度的升高，APOBEC3GmRNA及蛋白水平逐步升高，IFN-α浓度为10^4 U／mL时，APOBEC3G表达量最高，并且STAT-1分子mRNA及蛋白的表达量亦逐步升高，与APOBEC3G表达量呈现平行相关。随着IFN-a刺激时间的延长，APOBEC3G表达量明显升高，8h时达到最高，其后逐渐下降。10^4 U／mL IFN-α刺激8h时，HepG2 2．2．15细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA及细胞中HBVmR-NA水平均明显低于无IFN-α刺激的HepG22．2．15细胞。结论WN-a能诱导HepG22．2．15细胞表达APO—BEC3G，在一定范围内，APOBEC3G的表达与IFN—d的剂量、作用时间呈正相关；IFN-α诱导APOBEC3G的表达可能是其发挥抗病毒作用的机制之一；IFN-α是否经JAK-STAT信号通道刺激APOBEC3G的表达，二者之间的关系及其机制尚待进一步研究。 展开更多

关键词 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3g 干扰素-Α HEPg2 2.2.15细胞 STAT-1 肝炎 乙型

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miR-9-3p通过IRF2BP2调控食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移和免疫逃逸 被引量：3

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作者 周超锋 王赛 +3 位作者 田青 高洁琼 李洪霖 郭志忠 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第15期1845-1850,共6页

目的:探讨miR-9-3p/IRF2BP2分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)恶性生物学行为的影响。方法:采用ACLBI和Starbase数据库分析miR-9-3p在ESCC中的表达差异及其与患者生存的相关性。双荧光素酶报告基因验证miR-9-3p和IRF2BP2的靶向关系。CCK-8、... 目的:探讨miR-9-3p/IRF2BP2分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)恶性生物学行为的影响。方法:采用ACLBI和Starbase数据库分析miR-9-3p在ESCC中的表达差异及其与患者生存的相关性。双荧光素酶报告基因验证miR-9-3p和IRF2BP2的靶向关系。CCK-8、Annexin V-FITC/PI试剂盒和Transwell分别检测KYSE-30细胞增殖、凋亡和迁移。Western blot检测miR-9-3p/IRF2BP2轴对KYSE-30细胞PD-L1表达的影响。CD8~+T细胞与KYSE-30细胞共培养后,ELISA检测CD8~+T细胞上清中IFN-γ,IL-4和IL-10水平。结果:miR-9-3p在ESCC组织和细胞系中异常高表达,且预示较差的生存率。miR-9-3p靶向负调控IRF2BP2表达。过表达IRF2BP2抑制KYSE-30细胞增殖、迁移和免疫逃逸并促进其凋亡,而miR-9-3p可拮抗IRF2BP2的作用。结论:miR-9-3p通过抑制IRF2BP2表达促进ESCC细胞增殖、迁移和免疫逃逸并抑制其凋亡。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 miR-9-3p IRF2bp2 恶性生物学行为 免疫逃逸

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稳定表达绵羊肺腺瘤病毒受体Hyal-2蛋白细胞系的建立 被引量：3

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作者 刘畅 李磊 +3 位作者 于立新 么宏强 周建华 马学恩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期187-191,共5页

为构建稳定表达绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)的NIH 3T3细胞系,本研究采用RT-PCR方法从绵羊瘤胃组织总RNA中扩增Hyal-2的cDNA,并引入标签多肽HA序列和限制性内切酶位点,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组质... 为构建稳定表达绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)的NIH 3T3细胞系,本研究采用RT-PCR方法从绵羊瘤胃组织总RNA中扩增Hyal-2的cDNA,并引入标签多肽HA序列和限制性内切酶位点,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA-Hyal2-HA。将该重组质粒转染NIH 3T3细胞,并利用G418筛选、纯化,获得了稳定表达JSRV受体蛋白Hyal-2的NIH 3T3细胞系。qPCR、间接免疫荧光及western blot检测结果表明,该细胞系在传代至15代后,Hyal2-HA在NIH 3T3细胞中仍然能够稳定表达,并且主要分布于细胞膜上。JSRV囊膜蛋白诱导细胞转化试验显示,该蛋白的瞬时表达可以导致NIH 3T3细胞出现转化聚积灶,但失去了对稳定表达绵羊Hyal-2蛋白NIH 3T3细胞系的诱导转化作用,其作用机制尚待阐明。该细胞系的建立为进一步研究JSRV与其受体的相互作用致瘤机制奠定了基础。 展开更多

关键词 绵羊肺腺瘤病毒 透明质酸酶-2 真核表达 NIH 3T3细胞系

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甘蔗渣淀粉功能降解菌筛选及s2g5-1和s3g4-8的鉴定 被引量：4

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作者 贺军军 罗萍 +3 位作者 李勤奋 易润华 陈永辉 戴小红 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第13期7711-7714,共4页

[目的]筛选甘蔗淀粉功能降解菌,并对菌株s2g5-1和s3g4-8进行鉴定。[方法]利用多种选择性培养基,从自然发酵不同阶段的甘蔗渣中分离到多种淀粉分解菌,并对其进行初筛和复筛。[结果]获得了淀粉降解功能菌株s2g5-1和s3g4-8。通过形态、生... [目的]筛选甘蔗淀粉功能降解菌,并对菌株s2g5-1和s3g4-8进行鉴定。[方法]利用多种选择性培养基,从自然发酵不同阶段的甘蔗渣中分离到多种淀粉分解菌,并对其进行初筛和复筛。[结果]获得了淀粉降解功能菌株s2g5-1和s3g4-8。通过形态、生理生化和分子综合鉴定得出s2g5-1和s3g4-8菌株均为解淀粉芽孢杆菌。[结论]该研究结果为甘蔗渣工厂化应用提供了理论依据。 展开更多

关键词 甘蔗渣 淀粉降解菌 s2g5-1 s3g4-8

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分子伴侣4-苯基丁酸对HepG2脂肪变模型中细胞损伤的影响

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作者 范竹萍 艾罗燕 +5 位作者 陈荔萍 吴昌维 陈志威 苏大芝 许青青 王晓晗 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1731-1736,1766,共7页

目的观察人肝癌Hep G2细胞脂肪变模型中内质网应激发生的情况,探讨分子伴侣4-苯基丁酸(4-PBA)对该脂肪变模型中内质网应激、氧化应激和凋亡的影响。方法使用0.5、1.0 mmol/L的混合脂肪酸分别干预Hep G2细胞,在不同时间点采用Real-time ... 目的观察人肝癌Hep G2细胞脂肪变模型中内质网应激发生的情况,探讨分子伴侣4-苯基丁酸(4-PBA)对该脂肪变模型中内质网应激、氧化应激和凋亡的影响。方法使用0.5、1.0 mmol/L的混合脂肪酸分别干预Hep G2细胞,在不同时间点采用Real-time PCR方法检测内质网应激相关蛋白CHOP和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA的表达水平。以2 mmol/L的4-PBA干预脂肪变性Hep G2细胞,在不同时间点检测CHOP和GRP78 mRNA的表达,氧化应激指标丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,以及凋亡相关蛋白Caspase-3活性的变化。结果与对照组比较,混合脂肪酸干预组Hep G2细胞内CHOP、GRP78 mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。4-PBA干预可使脂肪变性Hep G2细胞内CHOP和GRP78 mRNA的表达水平下调(P<0.05),MDA含量明显下降,SOD和GSH水平显著升高(P<0.05),Caspase-3活性减低(P<0.05)。结论 Hep G2细胞脂肪变性时发生明显的内质网应激。分子伴侣4-PBA能减轻氧化应激和内质网应激,下调脂肪变性Hep G2细胞Caspase-3活性,减轻细胞损伤。 展开更多

关键词 脂肪变性Hep g2细胞 氧化应激 内质网应激 CASPASE-3 4-苯基丁酸

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粘质沙雷氏菌G1利用玉米浆干粉和磷酸氢二铵生产2,3-丁二醇的研究 被引量：3

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作者 郝英利 张燎原 +4 位作者 孙建安 魏东芝 周文瑜 沈亚领 朱家文 《化学与生物工程》 CAS 2013年第6期34-38,共5页

研究了几种工业氮源对粘质沙雷氏菌G1发酵生产2,3-丁二醇的影响,在确定玉米浆干粉为氮源的基础上,利用Plackett-Burman(PB)实验和响应面法(RSM)实验对玉米浆干粉和磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]的浓度进行了优化,确定优化培养基(g·L-1)为... 研究了几种工业氮源对粘质沙雷氏菌G1发酵生产2,3-丁二醇的影响,在确定玉米浆干粉为氮源的基础上,利用Plackett-Burman(PB)实验和响应面法(RSM)实验对玉米浆干粉和磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]的浓度进行了优化,确定优化培养基(g·L-1)为:蔗糖90,玉米浆干粉20.32,(NH4)2HPO47.21,NaAc 4,柠檬酸钠14,MgSO40.5,Fe-SO40.02,MnSO40.01。并以此优化培养基进行了摇瓶和分批补料发酵,结果表明,摇瓶发酵中,90g·L-1的蔗糖最终被转化成43.06g·L-1的2,3-丁二醇;分批补料发酵中,2,3-丁二醇浓度为128.28g·L-1,产率为2.67g·L-1·h-1,转化率为0.48g·g-1蔗糖。以玉米浆干粉和(NH4)2HPO4为氮源,2,3-丁二醇浓度较高,培养基的成本大幅降低,为工业化生产奠定了基础。 展开更多

关键词 粘质沙雷氏菌g1 玉米浆干粉 磷酸氢二铵 2 3-丁二醇 响应面法 成本 分批补料发酵

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矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对H_2O_2诱导细胞氧化损伤的保护作用 被引量：6

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作者 刘迪 孙宏宇 +3 位作者 时文艳 陈为 马爱新 冯宪敏 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第6期273-278,共6页

目的:研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对人胚肾HEK-293细胞氧化损伤的保护作用。方法:通过检测细胞活力、活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)水平考察C3G对氧化损伤细胞的影响,并采用Western blot法和q RTPCR检测Nrf2和Keap1的蛋白表达量和m ... 目的:研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对人胚肾HEK-293细胞氧化损伤的保护作用。方法:通过检测细胞活力、活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)水平考察C3G对氧化损伤细胞的影响,并采用Western blot法和q RTPCR检测Nrf2和Keap1的蛋白表达量和m RNA表达量变化。结果表明:C3G预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于H_2O_2损伤组(p <0.05),并呈浓度依赖性提高; H_2O_2损伤组的DCF荧光强于对照组,ROS相对含量增加到近2倍,1.25、5、20μmol/L C3G预处理后细胞荧光强度逐渐减弱,ROS相对量呈浓度依赖性降低; C3G预处理后细胞MDA水平呈浓度依赖性降低; 1.25、5、20μmol/L C3G处理后,Nrf2的m RNA表达和蛋白表达量均呈浓度依赖性上调,Keap1蛋白表达量显著低于H_2O_2损伤组(p <0.05),5和20μmol/L C3G对Keap1的m RNA下调作用明显。结论:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对HEK-293细胞有保护作用,可降低细胞ROS和MDA水平,其作用机制可能是通过激活Nrf2/Keap1信号通路以抵抗H_2O_2导致的细胞氧化损伤。 展开更多

关键词 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3g) 氧化应激 NRF2 信号通路

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ω-3脂肪酸对人胃癌细胞凋亡信号传导的影响

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作者 巩涛 李勇 +5 位作者 郭建文 范立桥 赵群 王力利 焦志凯 张志栋 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期489-490,493,共3页

目的:观察EPA和DHA对人胃癌BGC-823细胞凋亡信号传导的影响。方法:采用MTT法测定肿瘤细胞抑制率,流式细胞检测肿瘤细胞凋亡率和bcl-2、Gα、PKCβⅡ基因蛋白的表达。结果:45μg/ml和48h时间点的EPA或DHA可显著抑制肿瘤细胞的生长(P<0... 目的:观察EPA和DHA对人胃癌BGC-823细胞凋亡信号传导的影响。方法:采用MTT法测定肿瘤细胞抑制率,流式细胞检测肿瘤细胞凋亡率和bcl-2、Gα、PKCβⅡ基因蛋白的表达。结果:45μg/ml和48h时间点的EPA或DHA可显著抑制肿瘤细胞的生长(P<0.001),凋亡率明显升高(P<0.001),bcl-2基因蛋白表达下降(P<0.05),Gα和PKCβⅡ基因蛋白表达明显下降(P<0.001)。结论:ω-3脂肪酸可诱导人胃癌BGC-823细胞发生凋亡,信号传导途径Gα-PKCβⅡ的改变在细胞凋亡中起到重要的作用。 展开更多

关键词 Ω-3脂肪酸 人胃癌BgC-823细胞 凋亡 BCL-2 gα PKCβⅡ

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绿茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导效应 被引量：7

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作者 王坤英 梁清清 +1 位作者 李卫国 王辉 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期126-130,共5页

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是绿茶多酚的主要成分,具有抗氧化、抗衰老、抗过敏和潜在的抗癌特性.本文运用MTT试验,DAPI染色和Annexin V-FITC分析了EGCG对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱... 表没食子儿茶素-3-没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是绿茶多酚的主要成分,具有抗氧化、抗衰老、抗过敏和潜在的抗癌特性.本文运用MTT试验,DAPI染色和Annexin V-FITC分析了EGCG对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导.结果表明,EGCG对Hep G2细胞具有明显的增殖抑制作用,存在剂量和时间依赖效应;EGCG能诱导Hep G2细胞凋亡,并具有剂量依赖效应. 展开更多

关键词 HEP g2细胞 表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EgCg) 细胞增殖 细胞凋亡

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G_2流形中超曲面上诱导SU(3)结构的内蕴挠率的显式分解

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作者 李兴校 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期151-151,共1页

关键词 g2-结构 诱导的SU(3)结构 内蕴挠率 不可约分解

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黄芪-葛根药对通过PI3K/Akt/FoxO1通路调控糖异生作用治疗糖尿病大鼠作用机制 被引量：16

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作者 魏爽 李冀 +2 位作者 付强 韩东卫 郝峰 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2022年第8期32-38,I0014,共8页

目的 观察黄芪-葛根(芪葛)药对对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝组织磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框转录因子1(FoxO1)通路及磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)、限速酶葡萄糖6-磷酸酶(G6Pase)蛋白表达的影响以探讨其治疗T2DM作用机... 目的 观察黄芪-葛根(芪葛)药对对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝组织磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框转录因子1(FoxO1)通路及磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)、限速酶葡萄糖6-磷酸酶(G6Pase)蛋白表达的影响以探讨其治疗T2DM作用机制。方法 采用高脂饲料联合一次性小剂量尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)方法建立T2DM大鼠模型;成模后除正常组10只外,设芪葛低、中、高剂量组,阳性药组及模型组5组,将成模大鼠随机平均分入。各组大鼠连续药物干预4周后,麻醉,取材后对大鼠血清FBG、FINS、肝功、血脂及糖原水平进行检测;苏木素-伊红法染色观察肝脏组织病理形态学改变;蛋白免疫印迹法检测肝脏组织PI3K/Akt/FoxO1信号通路中相关蛋白及G6Pase、PEPCK蛋白水平。结果 相比于模型组,芪葛高、中剂量组FBG及FINS水平均降低,糖原水平显著升高(P<0.05,P<0.01);各给药组甘油三酯(TG)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及低密度脂蛋白(LDL-C)均显著降低(P<0.01,P<0.05)且与阳性药组差异无统计学意义(P>0.05);芪葛高、低剂量组TC水平降低(P<0.05)且与阳性药组差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果发现,与模型组相比,各给药组大鼠肝脏组织体积及色泽均有明显改善,虽仍有不同程度的肝组织结构紊乱、肝细胞脂肪变性、肝细胞肿胀、胞浆内可存在大小、数量均不等的脂滴空泡,但显著优于模型组大鼠肝脏组织状态。与模型组相比,芪葛高剂量组FoxO1、G6Pase及PEPCK蛋白表达降低,Akt、PI3K、p-Akt、p-PI3K表达升高(P<0.05)。结论 芪葛药对可能是通过调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路,降低G6Pase、PEPCK的表达,抑制糖异生作用,调节糖脂代谢,修复肝损伤,从而发挥治疗T2DM作用的。 展开更多

关键词 2型糖尿病 PI3K/Akt/FoxO1通路 黄芪-葛根药对 糖异生 PEPCK g6Pase

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6-羟基山萘酚-3-O-β-葡萄糖苷抑制脱氧核糖氧化损伤的机理 被引量：2

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作者 王媛凯 支鹏 张立伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第3期29-32,共4页

目的:研究6-羟基山萘酚-3-O-β-葡萄糖苷(6-HK-3-O-G)抑制Fenton反应和对羟自由基清除的能力,并对其抑制Fenton反应的机理进行初步探讨。方法:利用脱氧核糖氧化损伤的实验检测模型和DPPH自由基的清除实验。结果:6-HK-3-O-G对羟自由基具... 目的:研究6-羟基山萘酚-3-O-β-葡萄糖苷(6-HK-3-O-G)抑制Fenton反应和对羟自由基清除的能力,并对其抑制Fenton反应的机理进行初步探讨。方法:利用脱氧核糖氧化损伤的实验检测模型和DPPH自由基的清除实验。结果:6-HK-3-O-G对羟自由基具有较强的清除能力;对Fenton反应引起的2-脱氧核糖氧化损伤具有保护作用,其保护作用机理与6-HK-3-O-G直接对Fenton反应所产生的羟自由基的清除作用有关,但更主要的可能是由于6-HK-3-O-G与Fe2+的络合作用,阻断了Fenton反应的进行。结论:6-HK-3-O-G具有强的抗氧化活性,在生理条件下,6-HK-3-O-G与Fe2+的络合作用可能是其抑制Fenton反应的关键因素。 展开更多

关键词 6-羟基山萘酚-3-O-β葡萄糖苷(6-HK-3-O—g) FENTON反应 2-脱氧核糖 DPPH自由基

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