胶原性关节炎大鼠滑膜组织G蛋白偶联受体激酶的表达及白芍总苷对其的影响 被引量：8

1

作者 陈镜宇 吴华勋 +2 位作者 陈尹 张玲玲 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期715-717,共3页

目的研究胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织中G蛋白偶联受体激酶(GRKs)表达以及白芍总苷(TGP)对其的影响。方法SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TGP(25、50、100mg.kg-1)组、雷公藤(GTW40mg.kg-1)组。用鸡Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型,Weste... 目的研究胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织中G蛋白偶联受体激酶(GRKs)表达以及白芍总苷(TGP)对其的影响。方法SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TGP(25、50、100mg.kg-1)组、雷公藤(GTW40mg.kg-1)组。用鸡Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型,Western blot检测滑膜组织GRKs表达水平,并观察TGP灌胃给药对其的影响。结果正常SD大鼠滑膜组织GRK2、GRK5、GRK6均有表达,CIA大鼠关节滑膜组织GRK2、GRK5、GRK6的表达明显升高,TGP给药后GRK2,GRK5,GRK6的表达水平降低,差异有显著性。结论CIA滑膜组织GRKs表达增加,TGP抑制这种异常的变化可能是其治疗CIA的机制之一。 展开更多

关键词 胶原性关节炎 g蛋白偶联受体激酶 白芍总苷

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G蛋白偶联受体激酶2与血清可溶性ST2对老年心肌梗死后心力衰竭预警的意义 被引量：11

2

作者 付治卿 高文谦 +4 位作者 张方圆 谭国娟 韩春光 刘永学 刘宏斌 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期789-792,共4页

目的分析75岁以上老年急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者外周血淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)与血清可溶性ST2(sST2)水平在心力衰竭(心衰)预警中的意义。方法选取75岁以上老年男性急性NSTEMI患者80例作为急性心肌梗死(AMI)组,... 目的分析75岁以上老年急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者外周血淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)与血清可溶性ST2(sST2)水平在心力衰竭(心衰)预警中的意义。方法选取75岁以上老年男性急性NSTEMI患者80例作为急性心肌梗死(AMI)组,平均年龄(85.4±3.2)岁;选取同期体检的健康老年男性30例作为对照组,平均年龄(84.8±2.9)岁。测定2组患者GRK2、血清sST2水平,并行超声心动图检测LVEF、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室舒张末期容积(LVEDV)。AMI组患者在发病后3、6、12、24个月时进行随访。结果AMI组患者GRK2的表达、血清sST2水平均高于对照组[3.60 vs 0.72,(30.63±1.36)μg/L vs (26.87±0.55)μg/L,P<0.01],LVEF低于对照组[(50.87±4.58)%vs (55.15±5.87)%,P<0.01]。AMI组GRK2在发病后3、6、12、24个月随访时逐渐增高(P<0.05,P<0.01),sST2水平在发病后6、12、24个月随访时显著增高(P<0.05),LVEF在发病后6、12、24个月随访时显著降低(P<0.01)。结论 75岁以上老年男性急性NSTEMI患者GRK2对AMI后心衰的预警作用优于sST2。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶2 心肌梗死 心力衰竭 超声心动描记术 淋巴细胞

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G蛋白偶联受体激酶4对内皮素B型受体的异常调节在原发性高血压发生中的作用 被引量：4

3

作者 李美香 郑硕 +4 位作者 姚勇刚 陈彩宇 任红梅 曾春雨 周林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期243-247,共5页

目的探讨G蛋白偶联受体激酶4（G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4）对内皮素B型受体（endothelin receptor B,ETB）的异常调节在原发性高血压中的作用及机制。方法选用12～14周龄,体质量300 g左右的雄性自发性高血压大鼠（spont... 目的探讨G蛋白偶联受体激酶4（G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4）对内皮素B型受体（endothelin receptor B,ETB）的异常调节在原发性高血压中的作用及机制。方法选用12～14周龄,体质量300 g左右的雄性自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHRs）及其对照鼠（Wistar-Kyoto,WKY）各10只,通过无创鼠尾测压仪测定血压,采用右肾上腺静脉插管灌注ETB受体特异性激动剂BQ3020后观察尿流速及尿钠排泄率,荧光定量PCR检测大鼠肾脏GRK4 mRNA水平,Western blot测定大鼠肾脏GRK4及ETB受体的蛋白表达差异,免疫共沉淀法检测ETB受体磷酸化情况,在动物水平观察高血压状态下ETB受体的功能情况。结果 ETB受体激动剂BQ3020对WKY大鼠有明显利尿排钠作用,且这种利尿排钠作用可以被ETB受体抑制剂BQ788阻断,但在SHR大鼠BQ3020的利尿排钠作用受损[尿流速：（11.23±2.16）vs（3.49±1.32）,P〈0.05];尿钠排泄率：[（1 551.43±393.47）vs（601.16±128.15）,P〈0.05];在SHR大鼠肾皮质GRK4的蛋白水平及mRNA水平均较WKY大鼠高[蛋白：（1.38±0.10）vs（0.85±0.07）,P〈0.05];mRNA：[（2.23±0.15）vs（0.78±0.16）,P〈0.05],SHR大鼠ETB受体总蛋白水平与WKY大鼠相比差异无统计学意义（P〉0.05）,但ETB受体磷酸化水平增高。结论 GRK4可能通过对内皮素B型受体的异常调节,参与了原发性高血压发生与发病。 展开更多

关键词 内皮素B型受体 g蛋白偶联受体激酶4 尿钠排泄 原发性高血压

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G蛋白偶联受体激酶在细胞迁移和细胞信号转导中的作用 被引量：6

4

作者 蔡欣 陈京 +1 位作者 张敬美 白波 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1438-1444,共7页

G蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptors,GPCRs）是与G蛋白相连接的最大膜受体家族,能够被不同的配体所激活,如激素、多肽等。GPCRs与配体结合后能激活细胞内的G蛋白,通过不同的信号转导通路产生不同的生物学效应。人类基因组中含... G蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptors,GPCRs）是与G蛋白相连接的最大膜受体家族,能够被不同的配体所激活,如激素、多肽等。GPCRs与配体结合后能激活细胞内的G蛋白,通过不同的信号转导通路产生不同的生物学效应。人类基因组中含有1 000多个GPCRs基因,占整个人类基因组的3%左右。GPCRs是药物研发中最广泛应用的药靶,作用于GPCRs的药物对疼痛、高血压和哮喘等各类疾病具有良好的治疗作用。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶类 受体 g蛋白偶联 信号转导

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G蛋白偶联受体激酶活性调控与细胞炎性损伤 被引量：11

5

作者 王应灯 孙耕耘 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期855-858,共4页

G蛋白偶联受体激酶 (Gprotein coupledreceptorki nases,GRKs)不仅调节G蛋白偶联受体 (GPCR)磷酸化、介导受体脱敏 ,使信号效应降低或消失 ,而且也调节G蛋白和靶细胞骨架 ,同时它还受到蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、肌动蛋白和细胞... G蛋白偶联受体激酶 (Gprotein coupledreceptorki nases,GRKs)不仅调节G蛋白偶联受体 (GPCR)磷酸化、介导受体脱敏 ,使信号效应降低或消失 ,而且也调节G蛋白和靶细胞骨架 ,同时它还受到蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、肌动蛋白和细胞内第二信使钙离子等调节。组织细胞表面存在多种GPCR如血小板活化因子 (PAF)受体、组胺受体、凝血酶受体等 ,介导炎性介质所致细胞损伤的信号转导作用。GRKs磷酸化GPCR 。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶(gRKs) g蛋白偶联受体(gPCR) 炎性介质 细胞损伤 信号转导

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G蛋白偶联受体激酶6对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究 被引量：3

6

作者 梁波 尹俊杰 +1 位作者 王中良 展新荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1801-1806,共6页

目的:研究G蛋白偶联受体激酶6(G protein-coupled receptor kinase 6,GRK6)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用的机制。方法:收集多发性骨髓瘤患者标本及健康对照组标本作为体内试验研究对象。分离获得的原代多发性骨髓瘤浆细... 目的:研究G蛋白偶联受体激酶6(G protein-coupled receptor kinase 6,GRK6)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用的机制。方法:收集多发性骨髓瘤患者标本及健康对照组标本作为体内试验研究对象。分离获得的原代多发性骨髓瘤浆细胞和骨髓瘤细胞系U266、NCI H929为体外试验细胞组。分别用Western blot和quantitative real-time PCR检测GRK6的蛋白表达和mRNA表达。用Brd U试剂盒测定骨髓瘤细胞在GRK6抑制剂CX-4945的处理条件下的增殖变化,应用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测其凋亡水平。结果:多发性骨髓瘤组中GRK6的表达明显高于对照组(P<0.05),在Ⅰ期的表达高于对照组,Ⅱ期高于Ⅰ期,Ⅲ期高于Ⅱ期(P<0.05)。GRK6在多发性骨髓瘤患者标本中蛋白和mRNA的表达均显著高于健康对照组。U266和MM细胞对抑制剂CX-4945呈现高敏性,而NCI H929对其敏感性低。GRK6 siRNA处理细胞后,GRK6在3组骨髓瘤细胞中的表达均显著下调。在细胞增殖检测实验中,CX-4945处理组U266、NCI H929和MM细胞增殖率分别为(58.25±18.24)%、(64.32±20.03)%和(45.42±25.01)%;凋亡检测中,U266、NCI H929和MM细胞凋亡率为(62.82±53.21)%、(43.25±47.05)%和(85.67±40.32)%。结论:多发性骨髓瘤GRK6的表达增强。GRK6抑制剂CX-4945能调节Rac1分子并抑制骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡。GRK6参与骨髓瘤细胞的增殖和凋亡通路。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶6 多发性骨髓瘤 细胞增殖 细胞凋亡

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G蛋白偶联受体激酶活性调控及其在恶性肿瘤中的作用 被引量：2

7

作者 吴晶晶 孙妩弋 +2 位作者 胡姗姗 刘道芳 魏伟 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期440-444,共5页

G蛋白偶联受体(GPCR),是一类重要的细胞表面受体。G蛋白偶联受体激酶(GRK)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,其亚型广泛存在与各种组织,能够特异性地使活化的GPCR发生磷酸化及脱敏,从而终止GPCR介导的信号转导通路。新的研究还发现,GRK不... G蛋白偶联受体(GPCR),是一类重要的细胞表面受体。G蛋白偶联受体激酶(GRK)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,其亚型广泛存在与各种组织,能够特异性地使活化的GPCR发生磷酸化及脱敏,从而终止GPCR介导的信号转导通路。新的研究还发现,GRK不仅作用于GPCR,也可以通过使非GPCR磷酸化或通过非磷酸化作用参与信号转导。GRK不仅能够调节GPCR和非GPCR,其自身活性也可受到多种因素的调节。本文结合GRK的多种功能作用和GRK活性调控,对GRK在脑、内分泌、生殖系统、消化系统及黑色素肿瘤中的作用做简要综述。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶 磷酸化 非磷酸化作用 活性调控 恶性肿瘤

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大气细颗粒物对G蛋白偶联受体激酶4的异常调节在尿钠排泄中的作用 被引量：2

8

作者 曾敬 芦茜 +3 位作者 陈垦 姚勇刚 张骏 曾春雨 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1064-1067,共4页

目的探讨大气细颗粒物(fine particle,fine particulate matter,PM2.5)对G蛋白偶联受体激酶4(G proteincoupled receptor kinase 4,GRK4)的异常调节及其影响尿钠排泄在高血压病发生、发展中的作用。方法以Wistar-Kyoto(WKY)大鼠来源肾... 目的探讨大气细颗粒物(fine particle,fine particulate matter,PM2.5)对G蛋白偶联受体激酶4(G proteincoupled receptor kinase 4,GRK4)的异常调节及其影响尿钠排泄在高血压病发生、发展中的作用。方法以Wistar-Kyoto(WKY)大鼠来源肾脏近曲小管上皮细胞(renal proximal tubule,RPT)株为研究对象,观察在PM2.5刺激对细胞活力、Na+-K+-ATP酶活性以及GRK4、D1R表达的变化;以小干扰RNA(siRNA)技术沉默GRK4,观察PM2.5对Na+-K+-ATP酶活性的影响。结果不同浓度PM2.5(10、50、100μg/mL)处理WKY大鼠RPT细胞株24 h后,细胞活力无明显差异(P>0.05)。PM2.5干预组(100μg/mL)Na+-K+-ATP酶活性明显高于对照组(P<0.05),且对10-6mol/L非诺多泮(fenoldopam)的作用较对照组减低(P<0.05)。不同浓度PM2.5(10、100μg/mL)干预后RPT细胞的GRK4表达明显高于对照组(P<0.05),多巴胺D1受体的蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。以siRNA技术沉默GRK4后,PM2.5对Na+-K+-ATP酶活性的作用较对照组无明显差异(P>0.05)。结论 PM2.5通过调节GRK4表达,进而调控D1受体的表达和Na+-K+-ATP酶活性,参与了对尿钠排泄的调节。 展开更多

关键词 大气细颗粒物 g蛋白偶联受体激酶4 NA+-K+-ATP酶 高血压

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高葡萄糖培养增加H9C2成心肌细胞G蛋白偶联受体激酶2基因表达 被引量：1

9

作者 陈红梅 林秋雄 +2 位作者 谭虹虹 杨华章 余细勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期472-474,共3页

目的前期临床研究发现2型糖尿病患者淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因表达升高,为进一步探讨GRK2表达升高的分子机制,检测高糖对GRK2基因表达的影响。方法H9C2成心肌细胞随机分成5组分别加入以下培养液:空白对照组和不同葡萄糖梯... 目的前期临床研究发现2型糖尿病患者淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因表达升高,为进一步探讨GRK2表达升高的分子机制,检测高糖对GRK2基因表达的影响。方法H9C2成心肌细胞随机分成5组分别加入以下培养液:空白对照组和不同葡萄糖梯度浓度组(0,5.5,12.5,25,33mmol/L),培养72h后采用RT-PCR,WESTERN BLOTTING分别测定GRK2-mRNA和磷酸化Akt(Ser473)蛋白含量比值。结果随着葡萄糖浓度升高,H9C2成心肌细胞的GRK2-mRNA表达水平呈剂量依赖性增加,pearson相关分析提示提示两者间存在直线相关(R=0.683,P<0.001),采用Student Newman-Keuls'q检验,各葡萄糖培养组与无糖培养比较均存在统计学差异(P=0.028,P=0.009,P<0.001)。而磷酸化Akt(Ser473)蛋白表达水平减少,各组间比较存在统计学意义(F=369.1,P<0.001),回归分析和pearson相关分析提示葡萄糖浓度与磷酸化AKt(Ser473)蛋白的表达呈线性负相关(R=-0.913,P<0.001)。结论高糖培养使GRK2表达升高,可能是参与心肌细胞葡萄糖利用受损的重要机制之一。 展开更多

关键词 葡萄糖 成心肌细胞 g蛋白偶联受体激酶2 糖尿病

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帕金森病α-Synuclein转基因小鼠模型中G蛋白偶联受体激酶5的表达 被引量：2

10

作者 刘鹏 高宁 +5 位作者 朱华 代小伟 黄澜 刘亚莉 马春梅 秦川 《中国比较医学杂志》 CAS 2009年第4期1-5,共5页

目的观测G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase,GRK5)在帕金森病α-synuclein转基因小鼠模型中的表达变化情况,了解GRK5在帕金森病中的可能作用,为发现帕金森病发病机制和探索更好的治疗方法提供新的方向。方法采用Wes... 目的观测G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase,GRK5)在帕金森病α-synuclein转基因小鼠模型中的表达变化情况,了解GRK5在帕金森病中的可能作用,为发现帕金森病发病机制和探索更好的治疗方法提供新的方向。方法采用Western blotting和实时荧光定量PCR技术对具有不同的人alpha synuclein(hα--syn)表达水平的帕金森病α-synuclein转基因模型小鼠以及3月龄,6月龄以及9月龄A53T突变型帕金森病α-synuclein转基因模型小鼠脑组织进行GRK5的RNA和蛋白水平检测,与同窝阴性对照小鼠进行比较。结果各组帕金森病α-synuclein转基因小鼠与阴性对照小鼠相比,GRK5蛋白表达水平均有不同程度的增加,并且随着转入的hα--syn蛋白表达水平的高低而有所变化。3月龄和6月龄帕金森病转基因模型小鼠与同月龄阴性对照组小鼠相比,GRK5的mRNA和蛋白水平没有变化;而9月龄帕金森病转基因模型小鼠与同月龄阴性对照组小鼠相比,GRK5的mRNA和蛋白水平都有所增加。结论帕金森病α-synuclein转基因模型小鼠具有更高表达水平的GRK5。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶5 g蛋白偶联受体 帕金森病 Α-SYNUCLEIN

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G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(GIT2)参与免疫调控的研究进展 被引量：1

11

作者 李佳 周艺 郝玉娥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1416-1418,共3页

G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(GIT2)是一类多结构域的信号支架蛋白。GIT2通过与不同蛋白质的相互作用调节细胞功能,主要参与整合素介导的细胞黏附、肌动蛋白细胞骨架组装以及胞内信号传递过程。GIT2在免疫系统中也扮演着重要角色,促... G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(GIT2)是一类多结构域的信号支架蛋白。GIT2通过与不同蛋白质的相互作用调节细胞功能,主要参与整合素介导的细胞黏附、肌动蛋白细胞骨架组装以及胞内信号传递过程。GIT2在免疫系统中也扮演着重要角色,促进中性粒细胞趋化性,抑制其过度产生超氧化物,促进胸腺细胞的阳性选择和趋化性,抑制炎症性肠病,介导肝脏免疫性损伤,且GIT2敲除小鼠具有多种免疫缺陷症状。本文简述了GIT2在免疫体系中的调控作用。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(gIT2) 免疫 Toll样受体 T细胞受体(TCR) 综述

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G蛋白偶联受体激酶在心血管疾病中的作用 被引量：1

12

作者 田艳君 刘海青 +1 位作者 陈京 白波 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1327-1331,共5页

G蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptors,GPCRs）是与G蛋白偶联的膜受体,也是目前已知最大的细胞膜受体家族。GPCRs能够被不同配体所激活,可将激素、神经递质、药物、趋化因子以及光线等多种化学性和物理性细胞外信号转导入细胞内... G蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptors,GPCRs）是与G蛋白偶联的膜受体,也是目前已知最大的细胞膜受体家族。GPCRs能够被不同配体所激活,可将激素、神经递质、药物、趋化因子以及光线等多种化学性和物理性细胞外信号转导入细胞内,在多种生理活动和病理过程中发挥重要的调节作用。GPCRs被认为是高血压、心力衰竭、帕金森氏综合症等多种疾病的药物治疗靶点,市售药物约50%都是以GPCRs为靶点的[1]。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶 心血管疾病

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G蛋白偶联受体激酶5在稳定表达α-Synuclein的SHSY5Y细胞中的基因表达调控功能 被引量：1

13

作者 刘鹏 王晓映 +6 位作者 高宁 朱华 代小伟 黄澜 徐艳峰 马春梅 秦川 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第2期6-11,共6页

目的观测G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase,GRK5)在稳定表达hα-synuclein(人突触核蛋白)的SHSY5Y细胞的胞核、胞浆中的表达情况并对其在帕金森病中的可能作用进行研究。方法应用Western blotting、组蛋白去乙酰化... 目的观测G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase,GRK5)在稳定表达hα-synuclein(人突触核蛋白)的SHSY5Y细胞的胞核、胞浆中的表达情况并对其在帕金森病中的可能作用进行研究。方法应用Western blotting、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)活性检测技术以及shRNA干扰技术等对稳定表达hα-synuclein的SHSY5Y细胞中GRK5的表达及其亚细胞分布、胞核内GRK5蛋白的功能进行研究。结果发现GRK5蛋白在过表达hα-synuclein的细胞核以及细胞浆内均表达增加,胞核中的GRK5蛋白通过影响组蛋白去乙酰化酶的活性对bcl-2基因的转录和表达进行调控。结论帕金森模型中GRK5通过对bcl-2基因的表达进行调控发挥作用。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶5 帕金森病 Α-SYNUCLEIN

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脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞G蛋白偶联受体激酶的影响

14

作者 孙耕耘 肖贞良 王应灯 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期1499-1500,1510,共3页

目的 :鉴定大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVEC)G蛋白偶联受体激酶 (GRK)的亚型 ,并观察脂多糖(LPS)的影响。方法 :在体外分离、培养RPMVEC的基础上 ,采用Westernblot方法检测GRK2和GRK3。结果 :LPS组和LPS +山莨菪碱组GRK2表达明显高于正常... 目的 :鉴定大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVEC)G蛋白偶联受体激酶 (GRK)的亚型 ,并观察脂多糖(LPS)的影响。方法 :在体外分离、培养RPMVEC的基础上 ,采用Westernblot方法检测GRK2和GRK3。结果 :LPS组和LPS +山莨菪碱组GRK2表达明显高于正常对照组 ;RPMVEC无GRK3表达。结论 :LPS引起RPMVEC膜GRK2表达增加可能与促进 β肾上腺素受体 (β受体 )内化 ,从而导致 β -受体下调有关 ,而与GRK3无关 ; 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶 肺 大鼠 脂多糖类

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G蛋白偶联受体激酶4调控小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的机制探讨 被引量：6

15

作者 杨东海 韩愈 +5 位作者 巩正藩 周中淑 吴连判 傅春江 曾春雨 周林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期666-672,共7页

目的探讨G蛋白偶联受体激酶4(G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4)对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法取SPF级健康野生型[8周龄、体质量(21.34±0.42)g]和GRK4转基因型[8周龄、体质量(21.87±0.68)g]... 目的探讨G蛋白偶联受体激酶4(G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4)对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法取SPF级健康野生型[8周龄、体质量(21.34±0.42)g]和GRK4转基因型[8周龄、体质量(21.87±0.68)g]C57BL/6小鼠,各12只。各型分别按随机数字表法分为4组(n=6):野生型假手术对照组、野生型肾脏缺血再灌注损伤组、GRK4转基因型假手术对照组、GRK4转基因型肾脏缺血再灌注损伤组。假手术对照组均采用开腹后不阻断肾动脉血流;缺血再灌注损伤组均采用夹闭肾动脉缺血45 min再灌注24 h,建立小鼠肾脏I/R模型。各组处死小鼠后,取血标本进行肾功能检测(血肌酐、血尿素氮);HE染色观察肾脏病理形态改变,并行肾小管损伤半定量评分;测定肾脏组织中过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)等氧化应激水平改变;TUNEL染色检测肾脏组织中细胞凋亡情况;蛋白质免疫印记方法检测各组小鼠肾脏组织中GRK4和AT1受体的蛋白表达变化。结果野生型小鼠肾脏I/R模型后肾功能受损,血肌酐、血尿素氮升高,肾脏小管上皮细胞脱落、死亡(P<0.05);肾脏组织中GRK4蛋白表达含量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。在GRK4过表达小鼠上研究结果发现,过表达GRK4的肾脏在缺血再灌注损伤后,肾功能损害进一步加重;肾脏病理损伤评分明显增加(P<0.05)。肾脏氧化应激水平明显上升,总SOD下降和MDA升高(P<0.05);肾脏凋亡细胞数目显著增多(P<0.05)。肾脏组织中AT1受体表达量增加(P<0.05),AT1受体含量的升高可以加重小管细胞氧化应激和凋亡的发生。结论 GRK4可以通过上调肾脏AT1受体表达,增加肾脏氧化应激水平和肾小管细胞凋亡,加重肾脏缺血再灌注损伤。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶4 肾脏缺血再灌注损伤 血管紧张素Ⅱ1型受体 凋亡 氧化应激

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G蛋白偶联受体激酶2杂合子敲除小鼠构建及表型鉴定 被引量：3

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作者 陶娟 周伟杰 +5 位作者 邰宇 郭派派 周正炜 王珍 汪庆童 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第7期1035-1041,共7页

目的应用CRISPR/Cas9技术构建G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)杂合敲除(GRK2^+/-)小鼠,用于疾病病理机制及药物靶点研究。方法构建靶向敲除GRK2基因的载体,在体外将先导RNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,在小鼠GRK2基因的第3个... 目的应用CRISPR/Cas9技术构建G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)杂合敲除(GRK2^+/-)小鼠,用于疾病病理机制及药物靶点研究。方法构建靶向敲除GRK2基因的载体,在体外将先导RNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,在小鼠GRK2基因的第3个外显子上造成基因突变,通过PCR及基因测序测定F0代基因型,成功获得13bp和19bp敲除两种GRK2^+/-小鼠。因GRK2纯合子敲除胚胎期死亡,将19bp敲除F0代小鼠与C57BL/6小鼠回交,获得稳定的19bp敲除F1代GRK2^+/-小鼠用于扩繁及实验。结果 GRK2^+/-小鼠基因型稳定,体重较同龄C57BL/6小鼠低,Western blot检测证实GRK2^+/-小鼠心脏、脾脏、胸腺、肝脏、巨噬细胞及肾脏组织中GRK2蛋白的表达均显著降低。结论该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了GRK2^+/-小鼠模型,为进一步研究GRK2在多种脏器、细胞发育中的作用,疾病发病机制及药物作用靶点提供了重要的动物模型。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶2 CRISPR/Cas9 基因工程小鼠 基因型鉴定

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G蛋白偶联受体激酶4基因多态与原发性高血压关联研究

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作者 曹军 朱健华 +1 位作者 崔之础 谢桂香 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2007年第3期162-162,共1页

关键词 g蛋白偶联受体激酶 原发性高血压患者 基因多态 等位基因特异性聚合酶链反应 基因定位 荧光分析 南通地区 基因分型

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G蛋白偶联受体激酶3在口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及其可能的机制

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作者 张晗 罗清琼 +1 位作者 朱丽萍 陈福祥 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期435-442,共8页

目的:探讨沉默G蛋白偶联受体激酶3(G protein-coupled receptor kinase 3,GRK3)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法:利用Oncomine数据库分析GRK3在正常口腔组织及OSC... 目的:探讨沉默G蛋白偶联受体激酶3(G protein-coupled receptor kinase 3,GRK3)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法:利用Oncomine数据库分析GRK3在正常口腔组织及OSCC组织中的表达水平。用RNA干扰技术敲降GRK3在OSCC细胞WSU-HN6和CAL27中的表达,用qPCR法验证干扰效率后,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测敲降GRK3对OSCC细胞增殖和凋亡的影响,Transwell小室法检测对OSCC细胞迁移、侵袭能力的影响,qPCR法检测对OSCC细胞周期、上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)和基质金属蛋白酶(matrix metallopeptidase,MMP)相关分子mRNA水平表达的影响,WB法检测EMT及MMP相关分子的蛋白表达水平变化。结果:OSCC组织中GRK3的表达水平显著高于正常口腔组织(P<0.01)。转染si-GRK3后,OSCC细胞中GRK3 mRNA表达水平均下调70%以上。敲降GRK3可显著抑制OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01),对细胞凋亡无显著影响(P>0.05)。敲降GRK3表达后,OSCC细胞的G0/G1期比例显著增高(t=5.799,P<0.01),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Cyclin D3、周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinases 2,CDK2)和CDK4基因的m RNA表达降低(均P<0.05);EMT相关分子波形蛋白(Vimentin)、Zeb1和Slug表达降低,E-钙黏蛋白(E-Cadherin)表达升高(均P<0.05);MMP3和MMP9表达降低(均P<0.05),MMP2和MMP7表达无明显变化(均P>0.05)。结论:GRK3可通过调节细胞周期促进OSCC细胞的增殖能力,并通过调控EMT和MMP增强细胞的迁移和侵袭能力。 展开更多

关键词 口腔鳞状细胞癌 g蛋白偶联受体激酶3 增殖 迁移 侵袭 上皮-间质转化 基质金属蛋白酶

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G蛋白偶联受体激酶5在大肠杆菌中的表达纯化

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作者 蔡昕明 赵健 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期531-533,共3页

通过RT-PCR扩增得到了人G蛋白偶联受体激酶5(GProtein-coupledreceptorki-nase,GPK5)的基因,将其克隆到表达载体pET-28a中,并将该质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),在10μmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPIG)诱导培养下表达,通过分离纯化,得... 通过RT-PCR扩增得到了人G蛋白偶联受体激酶5(GProtein-coupledreceptorki-nase,GPK5)的基因,将其克隆到表达载体pET-28a中,并将该质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),在10μmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPIG)诱导培养下表达,通过分离纯化,得到部分纯化的GRK5蛋白。体外活性测定表明,纯化后的GPK5能够特异性地磷酸化视紫红质。动力学常数Km=4.3μmol/L,Vmax=25nmol/(mg·min),与文献报道的从真核表达系统中纯化得到的GRK5相近。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶-5 基因表达 蛋白质纯化 活性测定

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滑膜细胞条件性敲除Grk2基因小鼠的构建和鉴定

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作者 左书俊 王伟康 +4 位作者 谷金涛 郭富媛 郭昊周 韩陈陈 魏伟 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第6期1194-1199,共6页

目的构建滑膜细胞条件性敲除G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)基因小鼠并分析基因型,为研究GRK2在滑膜细胞中的功能提供动物模型。方法将Grk2^(flox/+)小鼠交配得到Grk2^(flox/flox)小鼠,Grk2^(flox/flox)... 目的构建滑膜细胞条件性敲除G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)基因小鼠并分析基因型,为研究GRK2在滑膜细胞中的功能提供动物模型。方法将Grk2^(flox/+)小鼠交配得到Grk2^(flox/flox)小鼠,Grk2^(flox/flox)和Col1a1-iCre^(+)小鼠交配,获得Grk2^(flox/+)Col1a1-iCre^(+)与Grk2^(flox/flox)小鼠交配,得到Grk2^(flox/flox) Col1a1-iCre^(+)为目的小鼠。提取DNA,PCR扩增,鉴定基因型;Western blot验证滑膜、肝脏和肾脏组织GRK2敲除效果;HE染色检测滑膜细胞条件性敲除Grk2对踝关节滑膜、肝脏和肾脏组织的影响;多重免疫荧光检测滑膜细胞GRK2表达。结果基因鉴定结果表明,Grk2^(flox/flox) Col1a1-iCre^(+)小鼠Flox和Col1a1-iCre基因型均符合要求;Western blot结果表明,Grk2^(flox/flox) Col1a1-iCre^(+)小鼠滑膜组织GRK2表达降低,肝脏和肾脏组织GRK2表达无明显变化;HE染色结果显示,Grk2^(flox/flox) Col1a1-iCre^(+)小鼠踝关节滑膜、肝脏和肾脏组织病理无明显改变;多重免疫荧光结果表明,Grk2^(flox/flox) Col1a1-iCre^(+)小鼠滑膜细胞GRK2表达降低。结论成功构建和鉴定滑膜细胞条件性敲除Grk2基因小鼠,为进一步研究GRK2在滑膜细胞相关疾病中的作用提供动物模型。 展开更多

关键词 g蛋白偶联受体激酶2 滑膜组织 滑膜细胞 Cre-loxP系统 CRISPR/Cas9 条件性敲除小鼠

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