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酸土环脂芽孢杆菌的鼠源多克隆抗体制备及纯化
被引量：
2
1
作者
夏凯
李建科
于振
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第15期162-164,168,共4页
以耐热菌标准菌株(Aliyclobacillus acidoterrestris)为抗原,通过背部肌肉注射免疫SD大鼠,取血制备免疫血清,再通过饱和硫酸铵沉淀法和ProtainG亲和层析纯化制备耐热菌鼠源多克隆抗体,经测定抗体效价达到1:12800。经SDS-PAGE鉴定抗体为I...
以耐热菌标准菌株(Aliyclobacillus acidoterrestris)为抗原,通过背部肌肉注射免疫SD大鼠,取血制备免疫血清,再通过饱和硫酸铵沉淀法和ProtainG亲和层析纯化制备耐热菌鼠源多克隆抗体,经测定抗体效价达到1:12800。经SDS-PAGE鉴定抗体为IgG,纯化效果好,与食源性常见菌无交叉反应,证明特异性良好。本研究首次建立了耐热菌鼠源多克隆抗体的制备及纯化方法,为耐热菌的酶联免疫检测研究提供了基础。
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关键词
酸土环脂芽孢杆菌
SD大鼠
多克隆抗体
蛋白
g亲和层析
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职称材料
基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立
被引量：
2
2
作者
马艳平
郝乐
+5 位作者
梁志凌
马江耀
李盈
柯浩
刘振兴
曹俊明
《南方水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期113-119,共7页
鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1 785 bp,编码594个氨基酸。该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将p ORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合...
鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1 785 bp,编码594个氨基酸。该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将p ORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合成的截短ORF65(truncated ORF65)插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-trun ORF65;进一步采用DNAstar、ABCpred、Bepi Pred 1.0软件预测了p ORF65的5个B细胞表位优势区段,以合成的截短ORF65为模板,通过SOE-PCR将5个B细胞表位优势区段编码序列融合后插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-mod ORF65。重组质粒分别转入BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析,p ET32a-mod ORF65获得高效表达,表达的融合蛋白分子量为56.4 k D。此外,利用r Protein G亲和层析纯化了锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)血清Ig M,免疫小鼠,制备了鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体。在上述研究的基础上,将纯化的p ORF65作为包被抗原,鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体作为检测抗体,建立了间接ELISA方法,该方法可以检测p EGFP-ORF65 DNA疫苗免疫锦鲤后产生的特异性抗体。
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关键词
鲤疱疹病毒3型
ORF65
B细胞表位融合表达
rProtein
g亲和层析
ELISA
抗体特异性检测
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职称材料
题名
酸土环脂芽孢杆菌的鼠源多克隆抗体制备及纯化
被引量：
2
1
作者
夏凯
李建科
于振
机构
陕西师范大学食品工程与营养科学学院
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第15期162-164,168,共4页
基金
农业部现代苹果产业技术体系项目(nycytx-08)
陕西省科技攻关项目(2004K01-G7)
文摘
以耐热菌标准菌株(Aliyclobacillus acidoterrestris)为抗原,通过背部肌肉注射免疫SD大鼠,取血制备免疫血清,再通过饱和硫酸铵沉淀法和ProtainG亲和层析纯化制备耐热菌鼠源多克隆抗体,经测定抗体效价达到1:12800。经SDS-PAGE鉴定抗体为IgG,纯化效果好,与食源性常见菌无交叉反应,证明特异性良好。本研究首次建立了耐热菌鼠源多克隆抗体的制备及纯化方法,为耐热菌的酶联免疫检测研究提供了基础。
关键词
酸土环脂芽孢杆菌
SD大鼠
多克隆抗体
蛋白
g亲和层析
Keywords
Aliyclobacillua acidoterrestris
spra
g
ue dawley rat
polyclonal antibody
hitrap protain
g
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立
被引量：
2
2
作者
马艳平
郝乐
梁志凌
马江耀
李盈
柯浩
刘振兴
曹俊明
机构
广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站
出处
《南方水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期113-119,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31402347)
广东省科技计划项目(2016A020210029)
+1 种基金
广州市科技计划项目(201707010216)
广东省海洋与渔业厅渔港建设和渔业产业发展专项(A201701C04)
文摘
鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1 785 bp,编码594个氨基酸。该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将p ORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合成的截短ORF65(truncated ORF65)插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-trun ORF65;进一步采用DNAstar、ABCpred、Bepi Pred 1.0软件预测了p ORF65的5个B细胞表位优势区段,以合成的截短ORF65为模板,通过SOE-PCR将5个B细胞表位优势区段编码序列融合后插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-mod ORF65。重组质粒分别转入BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析,p ET32a-mod ORF65获得高效表达,表达的融合蛋白分子量为56.4 k D。此外,利用r Protein G亲和层析纯化了锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)血清Ig M,免疫小鼠,制备了鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体。在上述研究的基础上,将纯化的p ORF65作为包被抗原,鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体作为检测抗体,建立了间接ELISA方法,该方法可以检测p EGFP-ORF65 DNA疫苗免疫锦鲤后产生的特异性抗体。
关键词
鲤疱疹病毒3型
ORF65
B细胞表位融合表达
rProtein
g亲和层析
ELISA
抗体特异性检测
Keywords
cyprinid herpesvirus 3
ORF65
B cell epitope fusion expression
rProtein
g
affinity chromato
g
raphy
ELISA
specificantibody detection
分类号
S917.1 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
酸土环脂芽孢杆菌的鼠源多克隆抗体制备及纯化
夏凯
李建科
于振
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立
马艳平
郝乐
梁志凌
马江耀
李盈
柯浩
刘振兴
曹俊明
《南方水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
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