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双重荧光逆转录-聚合酶链式反应与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒
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作者 邓迎春 郭旭光 +3 位作者 牛会敏 任宝红 韩小改 郭瑞 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第12期151-157,共7页
目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型... 目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的方法。方法根据GⅠ型、GⅡ型诺如病毒基因组保守序列设计引探,经过一系列引探浓度筛选,建立了双重荧光RT-PCR和恒温荧光RT-RAA两种检测方法,分别从敏感性、特异性、稳定性、重复性等方面进行了比较研究;同时将这两种方法应用于实际临床样本检测中,并与GB4789.42—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验》进行比对验证。结果建立的两种方法特异性良好,敏感性均可达10 copies/μL;双重荧光RT-PCR方法质粒梯度变异系数(coefficient of variation,CV)值在0.1%~1.5%区间,恒温荧光RT-RAA方法CV值在1.0%~10.0%区间,稳定性和重复性显示双重荧光RT-PCR优于恒温荧光RT-RAA检测方法;31份诺如病毒阳性食品核酸样本均能检出,且50份食品盲样检测结果与国标一致。结论本研究成功建立了双重荧光RT-PCR与恒温荧光RT-RAA快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒方法,两种方法各有优缺点,双重荧光RT-PCR稳定性和重复性好,恒温荧光RT-RAA检测时间短,仅20 min就能完成扩增,可根据不同需求选择一种或两种作为食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的检测方法。 展开更多
关键词 荧光逆转录-聚合酶链式反应 恒温荧光逆转录-重组酶介导等温扩增 gⅰ型诺如病毒 gⅡ型诺如病毒
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伪狂犬病病毒Fa株gp63(gⅠ)基因转移载体质粒的构建 被引量:7
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作者 张银梅 郭万柱 +1 位作者 汪铭书 颜其贵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期338-344,共7页
用限制性核酸内切酶Sall酶切已缺失gⅠ (gE)和部分gp63 ( gⅠ )的重组质粒PPB7- 1DNA后 ,回收大小约 6 0kb片段 ,经T4 DNA连接酶连接后转化入大肠杆菌DH5α株 ,得到含 gp63片段的转移载体质粒PP63。再以SV4 0早期启动子控制的大肠杆菌 ... 用限制性核酸内切酶Sall酶切已缺失gⅠ (gE)和部分gp63 ( gⅠ )的重组质粒PPB7- 1DNA后 ,回收大小约 6 0kb片段 ,经T4 DNA连接酶连接后转化入大肠杆菌DH5α株 ,得到含 gp63片段的转移载体质粒PP63。再以SV4 0早期启动子控制的大肠杆菌 β 半乳糖苷酶 (LacZ)基因作为报告基因 ,将其插入PP63中 gp63基因起始密码子ATG下游的StuⅠ位点 ,在选择培养基中筛选出表达 β 半乳糖苷酶的转化子 ,构建了以gp63为同源序列含LacZ报告基因的转移载体质粒 ,命名为PP63LacZ。在该转移载体质粒中 ,LacZ基因的两端分别与 0 3kb和 0 5kb的PRVgp63同源序列相连 ,经酶切、核酸分子杂交技术鉴定 。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 转移载体 β0半乳糖苷酶基因 重组质粒 重组疫苗 gⅰ基因
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GⅠ-Ⅱ型粉浆涂塑铝瓷底层冠专用代型材料对铝瓷底层冠适合性影响的初步研究 被引量:1
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作者 孟辉 万乾炳 巢永烈 《口腔医学纵横》 CAS CSCD 2001年第1期48-49,共2页
目的 :了解GⅠ Ⅱ型铝瓷专用代型材料对铝瓷底层冠适合性的影响。方法 :采用片切后SMI体式显微镜观察测量的方法测量在专用代型材料上制作的GⅠ Ⅱ型铝瓷底层冠粘固后的边缘浮出量及粘固剂厚度值。结果 :粘固后铝瓷底层冠边缘浮出量为... 目的 :了解GⅠ Ⅱ型铝瓷专用代型材料对铝瓷底层冠适合性的影响。方法 :采用片切后SMI体式显微镜观察测量的方法测量在专用代型材料上制作的GⅠ Ⅱ型铝瓷底层冠粘固后的边缘浮出量及粘固剂厚度值。结果 :粘固后铝瓷底层冠边缘浮出量为 44 .2 1μm ,整体粘固剂厚度为 42 .2 5 μm。 结论 :GⅠ Ⅱ型专用代型材料的凝固膨胀较好地补偿了铝瓷的烧结收缩 ,制作的铝瓷底层冠具有良好的边缘适合性。 展开更多
关键词 牙科材料 gⅰ-Ⅱ型粉浆 铝瓷底层冠 适合性 代型
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