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Foxo3a基因调控大鼠卵巢颗粒细胞体外发育及预防顺铂对卵巢的毒性作用 被引量:9
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作者 杨玥 房丽红 王雪峰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期796-801,813,共7页
目的研究Foxo3a基因对大鼠卵巢颗粒细胞体外发育的调控及其预防顺铂卵巢毒性作用。方法大鼠原代颗粒细胞体外培养,利用HE染色法及免疫荧光法进行原代颗粒细胞鉴定;构建携带Foxo3a基因的重组腺病毒AD-r Foxo3a,利用RT-PCR及Western-blot... 目的研究Foxo3a基因对大鼠卵巢颗粒细胞体外发育的调控及其预防顺铂卵巢毒性作用。方法大鼠原代颗粒细胞体外培养,利用HE染色法及免疫荧光法进行原代颗粒细胞鉴定;构建携带Foxo3a基因的重组腺病毒AD-r Foxo3a,利用RT-PCR及Western-blot法检测Foxo3a表达;实验分为3组:实验组(AD-r Foxo3a组)、阴性对照组(r AD组)及空白对照组(Control组),分别绘制各组细胞生长曲线,Western-blot法检测各组cyclin D1、p27、Bax、Bim蛋白表达,利用流式细胞术、Hoechst33342/PI法分别检测细胞周期及细胞凋亡情况,流式细胞术检测各组细胞加入最适浓度顺铂后细胞凋亡情况。结果(1)体外分离培养大鼠原代卵巢颗粒细胞存活率>90%,细胞纯度>95%;(2)重组腺病毒AD-r Foxo3a感染颗粒细胞36 h后Foxo3a基因在m RNA水平高表达,感染48 h后在蛋白水平高表达;(3)实验组细胞增殖受到抑制,G1期细胞比例及细胞凋亡率较空白对照组及实验对照组增加(P<0.01),后两组差异无统计学意义;(3)实验组Bim、p27、cyclin D1蛋白较对照组高表达,而各组Bax蛋白表达无明显差异;(4)加入顺铂24 h后实验组细胞凋亡率高于空白对照组及实验对照组(P<0.01),后两组细胞凋亡率差异无统计学意义。结论过表达Foxo3a基因在体外可能通过促进cyclin D1和p27蛋白表达诱导大鼠卵巢颗粒细胞静止在G1期,通过增加Bim蛋白表达诱导颗粒细胞凋亡;同时过表达Foxo3a基因在体外不能逆转顺铂导致的颗粒细胞凋亡,其对于卵泡发育的调控及预防顺铂对卵巢的毒性作用还有待体内实验进一步研究。 展开更多
关键词 foxo3a基因 重组腺病毒 卵巢颗粒细胞 顺铂
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FoxO3a、BubR1基因在皮肤自然衰老过程中的表达及意义 被引量:3
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作者 谢红付 唐桦 +1 位作者 李吉 陈明亮 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期149-151,共3页
目的:探讨FoxO3a和BubR1基因与人皮肤自然衰老的关系。方法:收集80例急腹症手术患者非曝光部位皮肤标本,用反转录(RT)-PCR技术检测皮肤组织中FoxO3a和BubR1mRNA的表达量,并根据年龄分为3组:青年组(<25岁)、中年组(35~45岁)和老年组(... 目的:探讨FoxO3a和BubR1基因与人皮肤自然衰老的关系。方法:收集80例急腹症手术患者非曝光部位皮肤标本,用反转录(RT)-PCR技术检测皮肤组织中FoxO3a和BubR1mRNA的表达量,并根据年龄分为3组:青年组(<25岁)、中年组(35~45岁)和老年组(>55岁),分析不同年龄组之间各基因表达水平的差异。结果:FoxO3amRNA的表达量随年龄增长而增多,BubR1mRNA随年龄增大而表达降低,两者在3组之间表达差异均有显著性(P<0.01),且两者呈显著负相关(P<0.01)。结论:FoxO3a和BubR1均可能在防止人的皮肤自然衰老过程中有一定的作用。 展开更多
关键词 foxo3a基因 BubR1基因 皮肤 衰老
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稀有[鱼句]鲫Foxo3a、Foxo3b基因克隆和表达分析 被引量:1
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作者 钱佳铭 闵倩雯 +2 位作者 董然然 曾圣 张显波 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期222-232,共11页
利用RACE技术自稀有[鱼句]鲫的卵巢中克隆叉头蛋白O3a(Foxo3a)、叉头蛋白O3b(Foxo3b)基因的全长cDNA序列,采用RT-PCR、qRT-PCR和原位杂交法检测其组织分布、时序表达、细胞定位和雷帕霉素处理后的表达。结果显示,Foxo3a基因全长cDNA序列... 利用RACE技术自稀有[鱼句]鲫的卵巢中克隆叉头蛋白O3a(Foxo3a)、叉头蛋白O3b(Foxo3b)基因的全长cDNA序列,采用RT-PCR、qRT-PCR和原位杂交法检测其组织分布、时序表达、细胞定位和雷帕霉素处理后的表达。结果显示,Foxo3a基因全长cDNA序列为2562bp,包括242bp的5′端非编码区、367bp的3′端非编码区、1953bp的开放阅读框,编码650个氨基酸;Foxo3b基因全长cDNA序列为2804bp,包括470bp的5′端非编码区、375bp的3′端非编码区、1959bp的开放阅读框,编码652个氨基酸。Foxo3a基因只在脑和卵巢中表达,在其他组织中不表达;Foxo3b基因在所检测的组织中均有表达,在脑和卵巢中的表达量较高。随着卵巢的发育,Foxo3a基因表达量呈逐渐升高的趋势,Foxo3b基因表达量未出现显著变化。原位杂交结果显示,Foxo3a、Foxo3b基因定位于卵巢Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ时相的生殖细胞和滤泡细胞中。雷帕霉素处理影响了卵巢中Foxo3a基因的表达,对Foxo3b基因的表达无显著影响。试验结果表明,Foxo3a和Foxo3b基因可能在稀有[鱼句]鲫卵子发生中发挥一定的作用。 展开更多
关键词 稀有[鱼句]鲫 foxo3a基因 foxo3b基因 基因克隆 基因表达
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