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稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系的建立
被引量：
2
1
作者
刘欢
刘亭
+6 位作者
陆定艳
孙莉
何俊奇
李勇军
王永林
孙佳
席晓岚
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期103-108,共6页
目的建立稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系,为进一步建立稳定双表达人POR与人细胞色素P450(CYP)的细胞系奠定基础。方法构建POR重组慢病毒并感染Flp-In^(TM) CHO细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,挑...
目的建立稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系,为进一步建立稳定双表达人POR与人细胞色素P450(CYP)的细胞系奠定基础。方法构建POR重组慢病毒并感染Flp-In^(TM) CHO细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,挑选转染细胞进行嘌呤霉素筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。利用丝裂霉素C(MMC)细胞毒实验、实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞POR的表达,获得稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞株。构建稳定双表达POR和CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞(Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19)和单表达CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO细胞(Flp-In^(TM) CHO-2C19),并用环磷酰胺(CPA)测定CYP2C19酶活性。结果与感染阴性对照病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞相比,感染POR重组慢病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞MMC代谢活性升高,POR mRNA和蛋白的表达水平增加,说明获得了可稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞。与Flp-In^(TM) CHO细胞相比,Flp-In^(TM) CHO-2C19的CPA代谢活性无显著差异,而Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19的CPA代谢活性增加且明显高于Flp-In^(TM) CHO-2C19细胞。结论成功建立了稳定表达POR且可进一步用于CYP转基因细胞构建的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞系。
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关键词
人
细胞
色素P450氧化还原酶(POR)
慢病毒
Flp-In^(
tm
)
cho
-POR
细胞
系
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职称材料
细胞色素P4502A13野生型/突变体稳定表达Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立
被引量：
1
2
作者
郑丹丹
李靖
+2 位作者
王永林
李勇军
刘亭
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2021年第2期191-195,共5页
目的:构建稳定表达细胞色素P4502A13(CYP2A13)野生型(CYP2A13*1)和5种突变体的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法:构建CYP2A13野生型、各突变体的pcDNA5/FRT重组质粒。将pcDNA5-CYP2A13*1、*2、*5、*6、*8和*9重组质粒分别转染至Flp-In^(TM)CH...
目的:构建稳定表达细胞色素P4502A13(CYP2A13)野生型(CYP2A13*1)和5种突变体的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法:构建CYP2A13野生型、各突变体的pcDNA5/FRT重组质粒。将pcDNA5-CYP2A13*1、*2、*5、*6、*8和*9重组质粒分别转染至Flp-In^(TM)CHO细胞中,用实时荧光定量PCR、Western blot和黄曲霉毒素B1(AFB1)细胞毒性实验检测转染细胞中CYP2A13表达量及其活性,筛选稳定表达CYP2A13野生型和各突变体的Flp-In^(TM)CHO细胞。结果:和转染pcDNA5/FRT空质粒的Flp-In^(TM)CHO细胞相比,转染各CYP2A13野生型和各突变体的CHO细胞中CYP2A13 mRNA和蛋白表达水平增加,对AFB1毒性敏感度增加(P<0.05)。结论:成功建立了稳定表达CYP2A13*1、*2、*5、*6、*8和*9 Flp-In^(TM)CHO细胞系。
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关键词
细胞
色素P4502A13
黄曲霉毒素B1
突变体
稳定表达
Flp-In^(
tm
)
cho
细胞
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职称材料
题名
稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系的建立
被引量：
2
1
作者
刘欢
刘亭
陆定艳
孙莉
何俊奇
李勇军
王永林
孙佳
席晓岚
机构
贵州医科大学
贵州医科大学药学院药物分析教研室
贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期103-108,共6页
基金
国家自然科学基金(82060703,U1812403-5)
贵州省省级科技计划项目(黔科合基础-2K[2022]重点037)
+1 种基金
贵州省普通高等学校科技拔尖人才项目(黔教合KY字[2021]033)
贵州省优秀青年科技人才项目(黔科合平台人才[2021]5619号)。
文摘
目的建立稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系,为进一步建立稳定双表达人POR与人细胞色素P450(CYP)的细胞系奠定基础。方法构建POR重组慢病毒并感染Flp-In^(TM) CHO细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,挑选转染细胞进行嘌呤霉素筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。利用丝裂霉素C(MMC)细胞毒实验、实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞POR的表达,获得稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞株。构建稳定双表达POR和CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞(Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19)和单表达CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO细胞(Flp-In^(TM) CHO-2C19),并用环磷酰胺(CPA)测定CYP2C19酶活性。结果与感染阴性对照病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞相比,感染POR重组慢病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞MMC代谢活性升高,POR mRNA和蛋白的表达水平增加,说明获得了可稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞。与Flp-In^(TM) CHO细胞相比,Flp-In^(TM) CHO-2C19的CPA代谢活性无显著差异,而Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19的CPA代谢活性增加且明显高于Flp-In^(TM) CHO-2C19细胞。结论成功建立了稳定表达POR且可进一步用于CYP转基因细胞构建的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞系。
关键词
人
细胞
色素P450氧化还原酶(POR)
慢病毒
Flp-In^(
tm
)
cho
-POR
细胞
系
Keywords
human cytochrome P450 oxidoreductase(POR)
lentivirus
Flp-In^(
tm
)
cho
-POR cell line
分类号
Q554 [生物学—生物化学]
Q559.9 [生物学—生物化学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
细胞色素P4502A13野生型/突变体稳定表达Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立
被引量：
1
2
作者
郑丹丹
李靖
王永林
李勇军
刘亭
机构
贵州医科大学基础医学院病理生理学教研室
贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室
贵州医科大学药学院
贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2021年第2期191-195,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81603189,U1812403-05)
贵州省自然科学基金项目(黔科合基础[2019]1280号)
贵州省普通高等学校科技拔尖人才项目(黔教合KY字[2021]033)。
文摘
目的:构建稳定表达细胞色素P4502A13(CYP2A13)野生型(CYP2A13*1)和5种突变体的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法:构建CYP2A13野生型、各突变体的pcDNA5/FRT重组质粒。将pcDNA5-CYP2A13*1、*2、*5、*6、*8和*9重组质粒分别转染至Flp-In^(TM)CHO细胞中,用实时荧光定量PCR、Western blot和黄曲霉毒素B1(AFB1)细胞毒性实验检测转染细胞中CYP2A13表达量及其活性,筛选稳定表达CYP2A13野生型和各突变体的Flp-In^(TM)CHO细胞。结果:和转染pcDNA5/FRT空质粒的Flp-In^(TM)CHO细胞相比,转染各CYP2A13野生型和各突变体的CHO细胞中CYP2A13 mRNA和蛋白表达水平增加,对AFB1毒性敏感度增加(P<0.05)。结论:成功建立了稳定表达CYP2A13*1、*2、*5、*6、*8和*9 Flp-In^(TM)CHO细胞系。
关键词
细胞
色素P4502A13
黄曲霉毒素B1
突变体
稳定表达
Flp-In^(
tm
)
cho
细胞
Keywords
cytochrome P4502A13
aflatoxin B1
mutant
stable expression
Flp-In^(
tm
)
cho
cell
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系的建立
刘欢
刘亭
陆定艳
孙莉
何俊奇
李勇军
王永林
孙佳
席晓岚
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
细胞色素P4502A13野生型/突变体稳定表达Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立
郑丹丹
李靖
王永林
李勇军
刘亭
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2021
1
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