HCV C-Fc基因转染的小鼠树突状细胞促进混合淋巴细胞反应的作用 被引量：3

1

作者 王全楚 冯志华 +2 位作者 周永兴 聂青和 白雪帆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期301-303,共3页

目的 :观察HCVC Fc基因电穿孔法转染的小鼠树突状细胞(DC)功能的改变。方法 :分离小鼠骨髓单个核细胞与rmGM CSF和rmIL 4培养 1wk,对培养的细胞进行形态学观察 ,并用FACS检测细胞表面DEC2 0 5的表达。以通过质粒pcD NA3HCVC Fc电穿孔法... 目的 :观察HCVC Fc基因电穿孔法转染的小鼠树突状细胞(DC)功能的改变。方法 :分离小鼠骨髓单个核细胞与rmGM CSF和rmIL 4培养 1wk,对培养的细胞进行形态学观察 ,并用FACS检测细胞表面DEC2 0 5的表达。以通过质粒pcD NA3HCVC Fc电穿孔法转染培养的DC ,用间接免疫荧光染色测定转染细胞中HCVC Fc的水平 ;用混合淋巴细胞反应检测电穿孔法转染细胞的功能。结果 :培养 1wk后 ,得到具有典型DC形态的细胞 ,以质粒pcDNA3HCVC Fc为载体电穿孔法转染DC后 ,转染细胞中可检测到较高水平的HCVC Fc。与对照组相比较以电穿孔法转染的细胞能明显刺激混合淋巴细胞反应。结论 :小鼠骨髓单个核细胞加GM CSF和IL 4培养 1wk ,可生成大量的DC。质粒pcDNA3HCVC Fc转染培养的DC对T细胞刺激作用显著增强。 展开更多

关键词 小鼠树突状细胞 电转染 混合淋巴细胞反应 HCV C—fc基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽流感病毒M2e基因与鸡IgG Fc基因在巴斯德毕赤酵母中的融合表达 被引量：3

2

作者 尚书文 侯继波 +5 位作者 徐公豹 牛明福 王秀清 何家惠 陈溥言 姜平 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第1期17-22,共6页

【目的】得到融合蛋白M2e-Fc,并检测其免疫学特性,为研制禽流感通用疫苗奠定基础。【方法】根据禽流感病毒H5N1的M2e蛋白氨基酸序列设计2条长互补引物,通过重叠区互补扩增基因法扩增出目的基因M2e,然后与鸡IgGFc片段基因一起克隆入毕赤... 【目的】得到融合蛋白M2e-Fc,并检测其免疫学特性,为研制禽流感通用疫苗奠定基础。【方法】根据禽流感病毒H5N1的M2e蛋白氨基酸序列设计2条长互补引物,通过重叠区互补扩增基因法扩增出目的基因M2e,然后与鸡IgGFc片段基因一起克隆入毕赤酵母表达质粒中,构建酵母表达载体。将阳性质粒线性化后电转化入感受态毕赤酵母X-33中,再经甲醇诱导后,通过Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定融合蛋白。之后用其免疫非免疫鸡,检验其免疫原性。【结果】成功构建了表达M2e和Fc融合蛋白的酵母表达载体pPICZαA-M2-Fc,并通过Zeocin筛选及PCR鉴定出了阳性重组子;阳性重组子经甲醇诱导后得到融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定证实,融合蛋白得到正确表达,并且可以与M2e阳性血清反应。动物免疫试验证实,该融合蛋白可以诱导鸡产生抗M2e抗体,具有良好的免疫原性。【结论】融合蛋白M2e-Fc在巴斯德毕赤酵母表达系统中得到了成功表达,该融合蛋白具有较好的免疫原性,为后期进行其他免疫试验奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 M2e基因 鸡IGG fc基因 巴斯德毕赤酵母

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡传染性支气管炎病毒S1基因与猪IgG Fc基因在HeLa细胞中的融合表达

3

作者 张明富 陈汉阳 +3 位作者 彭博 佟铁俦 陈焕春 郭爱珍 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期276-281,共6页

根据Genbank中发表的猪IgG Fc段基因及IBV S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41 S基因的质粒为模板扩增出IBV S1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5 kb,IgG... 根据Genbank中发表的猪IgG Fc段基因及IBV S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41 S基因的质粒为模板扩增出IBV S1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5 kb,IgG Fc大小为1kb,序列正确。将IBV S1与IgG Fc基因串连,插入含有人组织型纤维蛋白溶酶原激活物分泌信号肽序列(tPA)真核表达载体pcDNA3.1-tPA上,在HeLa细胞上进行瞬时融合表达。经免疫荧光和斑点杂交检测,表达产物同时具有IBV S1蛋白和IgG Fc活性。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 S1基因 猪IgG fc基因 真核表达 融合表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达 被引量：9

4

作者 陈红梅 白雪帆 +4 位作者 黄长形 洪沙 王平忠 韦三华 王九平 《医学研究生学报》 CAS 2004年第1期12-14,17,共4页

目的 :构建含人IL 2cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在真核细胞中表达 ,以期用于乙型肝炎病毒 (HBV)DNA疫苗的研究。　方法 :应用重叠延伸剪切技术 (SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL 2 /Fc,回... 目的 :构建含人IL 2cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在真核细胞中表达 ,以期用于乙型肝炎病毒 (HBV)DNA疫苗的研究。　方法 :应用重叠延伸剪切技术 (SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL 2 /Fc,回收后克隆到中间 pGEM TEasyTA克隆载体 ,得到合适的酶切位点后 ,用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3.1中 ,得到真核重组载体 pcDNA 3.1IL 2 /Fc。然后用脂质体法转染SP2 / 0细胞。　结果 :对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析 ,证明连接正确 ;经ELISA检测证实 ,该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。　结论 :成功构建了真核表达载体 pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在SP2 / 0细胞中有效表达。 展开更多

关键词 IL-2/fc融合基因 基因表达 真核细胞 乙型肝炎病毒 DNA疫苗 真核表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立FcγR基因大片段敲除小鼠模型 被引量：4

5

作者 吴曦 霍桂桃 +5 位作者 刘甦苏 谷文达 曹愿 柳全明 吕建军 范昌发 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期583-591,共9页

目的使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90kb的小鼠FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础。方法使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA。通过... 目的使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90kb的小鼠FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础。方法使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA。通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒检测sgRNA在体外的活性。选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9mRNA一并注射受精卵。通过PCR检测及测序,得到1只敲除片段为89711bp的基因修饰小鼠,且同时敲除FcγR2b基因5’端,FcγR3基因3’端及FcγR4基因。而且还利用软件预测了8个脱靶可能性最高的位点,并对首建鼠基因组的上述8个脱靶位点全部测序确认。结果结果显示未在预测脱靶位点附近发现小片段插入或缺失。结论建立了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除基因组超大片段的技术,该技术结合BAC转基因技术,将为建立含有复杂基因族的人源化小鼠提供新的途径。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 fcγR基因 大片段敲除 小鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

水貂IgG Fc段基因及抗原性分析

6

作者 蒋磊 赵翠 +3 位作者 沈强 郭浩 王秋菊 常维山 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第2期78-82,共5页

根据GenBank上发布的水貂IgG中Fc段的序列(L07789.1),设计合成1对引物用于扩增水貂Fc段基因。从水貂脾脏中提取总RNA,RT-PCR扩增水貂Fc段基因,获得大小约606 bp的片段,将其连接T载体并测序。然后进行遗传进化分析,在此基础上利用Western... 根据GenBank上发布的水貂IgG中Fc段的序列(L07789.1),设计合成1对引物用于扩增水貂Fc段基因。从水貂脾脏中提取总RNA,RT-PCR扩增水貂Fc段基因,获得大小约606 bp的片段,将其连接T载体并测序。然后进行遗传进化分析,在此基础上利用Western blot进行抗体杂交试验。结果显示水貂IgG Fc与Fc犬核苷酸序列同源性为85.0%,氨基酸序列同源性为80.5%。Western blot显示水貂IgG重链可以和抗犬IgG有效结合,遗传进化分析得出哺乳动物中水貂与犬IgG Fc的亲缘关系最近。通过以上分析和相关文献得出用犬的诊断试剂可以检测水貂疾病,或用犬的抗血清进行水貂疾病治疗。 展开更多

关键词 水貂 IGG fc基因 遗传进化分析 Western BLOT

在线阅读 下载PDF 职称材料

TAP1基因和FcεRIβ基因多态性与哮喘及其表型的相关性研究 被引量：4

7

作者 徐青 邓伟吾 +3 位作者 李伟杰 黄绍光 张洪熹 孙碧雄 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期212-214,217,共4页

目的 :为研究TAP1基因和FcεRIβ基因多态性与哮喘及其表型的关系。 方法 :选择TAP1基因中微卫星DNA标志———TAP1及FcεRIβ基因中RFLP位点———RsaI,采用Amp FLP和RFLP方法在散发哮喘病人中进行分析 ,并检测其血清总IgE水平 ,过敏... 目的 :为研究TAP1基因和FcεRIβ基因多态性与哮喘及其表型的关系。 方法 :选择TAP1基因中微卫星DNA标志———TAP1及FcεRIβ基因中RFLP位点———RsaI,采用Amp FLP和RFLP方法在散发哮喘病人中进行分析 ,并检测其血清总IgE水平 ,过敏原皮试及气道高反应性 ,应用相关分析观察TAP1及RsaI等位基因与哮喘及其表型的关系。结果 :RsaI位点等位基因片段与哮喘及气道高反应性相关 ,未见TAP1与哮喘或其表型相关。结论 :FcεRIβ基因可能是哮喘发病的一个候选基因 ,TAP1基因可能与哮喘的发病无关。 展开更多

关键词 哮喘 TAP1基因 fcεIβ基因 相关分析 基因多态性 免疫表型

在线阅读 下载PDF 职称材料

人TβRⅡ-IgG1Fc融合基因重组腺病毒载体的构建

8

作者 贾利 薛建新 卢铀 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2136-2138,2145,共4页

目的构建含有人TGF-β1Ⅱ型受体胞外区及IgG1Fc段融合基因的腺病毒载体,并进行初步的功能活性鉴定。方法RT-PCR扩增人TGF-β1Ⅱ型受体胞外区及IgG1Fc段基因,通过OverlapPCR融合为目的基因hTβRⅡ-IgG1Fc;克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,线... 目的构建含有人TGF-β1Ⅱ型受体胞外区及IgG1Fc段融合基因的腺病毒载体,并进行初步的功能活性鉴定。方法RT-PCR扩增人TGF-β1Ⅱ型受体胞外区及IgG1Fc段基因,通过OverlapPCR融合为目的基因hTβRⅡ-IgG1Fc;克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,线性化后转染含骨架质粒的BJ5183菌,同源重组构建腺病毒质粒;将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞,并扩增、纯化、RT-PCR鉴定;ELISA初步检测重组腺病毒的功能活性。结果目的基因经酶切分析、测序鉴定正确;RT-PCR及ELISA表明重组腺病毒能表达hTβRⅡ-IgG1Fc,中和HLF分泌的TGF-β1。结论成功构建了含融合基因hTβRⅡ-IgG1Fc的腺病毒载体,体外实验证实表达的蛋白具有中和TGF-β1的作用,为进一步研究放射性肺纤维化的基因治疗提供实验依据。 展开更多

关键词 TβRⅡ-ⅠgG1fc基因 重组腺病毒 放射性肺纤维化 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

Fcγ受体IIA基因多态性与慢性牙周炎易感性的相关性研究 被引量：5

9

作者 唐燕 章锦才 +1 位作者 张蕴惠 庞若愚 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期158-161,共4页

目的　探讨Fcγ受体ⅡA基因多态性和慢性牙周炎的易感性相关关系。方法　采用序列特异性引物多聚酶链反应 (PCR_SSP) ,对 6 3例重度慢性牙周炎患者、10 3例轻中度慢性牙周炎患者及 80名健康对照者的Fcγ受体ⅡA基因多态性进行检测 ,比... 目的　探讨Fcγ受体ⅡA基因多态性和慢性牙周炎的易感性相关关系。方法　采用序列特异性引物多聚酶链反应 (PCR_SSP) ,对 6 3例重度慢性牙周炎患者、10 3例轻中度慢性牙周炎患者及 80名健康对照者的Fcγ受体ⅡA基因多态性进行检测 ,比较各组间基因型分布及等位基因频率的差异。结果　FcγRⅡA_R R131基因型在重度慢性牙周炎与健康对照组之间的分布差异有显著性 (P <0 0 12 5 ) ,而在轻中度慢性牙周炎组与健康对照组、重度慢性牙周炎组与轻中度慢性牙周炎组之间的分布差异无显著性 (P >0 0 12 5 )。结论　FcγRⅡA_R R131基因型与慢性牙周炎的严重程度相关 ,提示其可能与汉族人群慢性牙周炎的易感性有关。 展开更多

关键词 fcγ受体ⅡA基因 基因多态性 慢性牙周炎 CP 牙周炎 细胞免疫

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠sFcγRIIb基因原核表达及活性鉴定

10

作者 张艳芬 刘利鹏 +4 位作者 陈瑶 崔哲 毕克维 王南南 刘中成 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期165-171,共7页

旨在克隆大鼠FcγRIIb基因,构建s FcγRIIb原核表达体系,制备重组大鼠s FcγRIIb蛋白。采用RT-PCR技术从RBL-2H3细胞中克隆FcγRIIb胞外区基因,构建重组表达质粒转化大肠杆菌诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,复性后利用Western blott... 旨在克隆大鼠FcγRIIb基因,构建s FcγRIIb原核表达体系,制备重组大鼠s FcγRIIb蛋白。采用RT-PCR技术从RBL-2H3细胞中克隆FcγRIIb胞外区基因,构建重组表达质粒转化大肠杆菌诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,复性后利用Western blotting、ELISA进行鉴定。结果显示,成功克隆大鼠s FcγRIIb基因,构建原核表达载体s FcγRIIb-p ET17b,转化大肠杆菌BL21(DE3)。通过对表达体系进行优化,确定IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导时间为4 h时蛋白表达效率最高,重组蛋白主要以包涵体形式存在。包涵体经8 mol/L尿素溶解,利用Ni-NTA柱亲和层析获得了较高纯度的重组蛋白。采用梯度透析复性法对s FcγRIIb进行复性后,经Western blotting、ELISA与竞争性ELISA鉴定,重组蛋白s FcγRIIb可被特异性抗体所识别且与Ig G具有结合能力。成功建立了大鼠FcγRIIb基因原核表达体系,制备了具有生物学功能的重组蛋白。 展开更多

关键词 抑制性受体 fcγRIIb基因 原核表达 重组蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

正常汉族人群FcαR1基因结构研究

11

作者 古宏标 黄玮俊 +3 位作者 陈素琴 胡彬 李彩霞 王一鸣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1489-1492,共4页

目的:构建我国汉族人群FcαR1基因单倍型及单倍型域。方法:提取100例正常广东汉族人基因组,分段扩增FcαR1基因并直接测序鉴定SNP基因型。选取MAF>0.10的SNP构建单倍型及单倍型域。结果:汉族人群FcαR1基因共有3个单倍型域,每个单倍... 目的:构建我国汉族人群FcαR1基因单倍型及单倍型域。方法:提取100例正常广东汉族人基因组,分段扩增FcαR1基因并直接测序鉴定SNP基因型。选取MAF>0.10的SNP构建单倍型及单倍型域。结果:汉族人群FcαR1基因共有3个单倍型域,每个单倍型域中包含的单倍型数3至7个,平均为5.33个,单倍型域中常见单倍型数2至3个,平均2.3个。结论:FcαR1基因存在单倍型及单倍型域,本研究结果将为进一步以该基因为候选基因进行疾病基因定位奠定基础。 展开更多

关键词 基因 fcαR1 单元型 单元型域

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠Fcε3-4基因克隆及原核表达

12

作者 张艳芬 时海浪 +2 位作者 王培莹 乔晓强 刘中成 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2012年第4期387-392,共6页

为了获得重组Fcε3-4蛋白,从变态反应性哮喘大鼠脾组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法克隆大鼠Fcε3-4基因,构建成原核表达载体pET17b-Fcε3-4,并转化大肠杆菌进行诱导表达,Fcε3-4蛋白主要以包涵体形式存在.经Ni-NAT亲和层析柱对尿素溶解... 为了获得重组Fcε3-4蛋白,从变态反应性哮喘大鼠脾组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法克隆大鼠Fcε3-4基因,构建成原核表达载体pET17b-Fcε3-4,并转化大肠杆菌进行诱导表达,Fcε3-4蛋白主要以包涵体形式存在.经Ni-NAT亲和层析柱对尿素溶解的Fcε3-4蛋白进行了纯化,并利用降低尿素梯度的方法柱上对纯化蛋白进行了复性.经Western Blotting和ELISA鉴定,Fcε3-4蛋白具有Fcε的免疫特异性,能被抗大鼠Fcε抗体特异性识别,为下一步研究该蛋白奠定了基础. 展开更多

关键词 大鼠 fcε3-4基因 克隆 表达 免疫特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

职业苯接触后外周血中T细胞FcεRIγ基因表达下调

13

作者 范静婧 陈云玉 +5 位作者 王婧薷 李萡 杨力建 陈少华 巫进明 李扬秋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期743-744,共2页

目的:了解职业苯接触及慢性苯中毒工人外周血中T细胞受体信号传导通路FcεRIγ基因的表达情况。方法:利用实时荧光定量PCR法分别检测22例职业苯接触工人、12例慢性苯中毒工人及9例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中FcεRIγ基因表达情况... 目的:了解职业苯接触及慢性苯中毒工人外周血中T细胞受体信号传导通路FcεRIγ基因的表达情况。方法:利用实时荧光定量PCR法分别检测22例职业苯接触工人、12例慢性苯中毒工人及9例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中FcεRIγ基因表达情况。结果:正常人、职业苯接触及慢性苯中毒工人FcεRIγ基因表达水平的中位数分别为37.50%、12.65%、7.41%,职业苯接触及慢性苯中毒工人FcεRIγ基因表达与正常成人相比均显著下降(P<0.05);尽管慢性苯中毒工人外周血中FcεRIγ基因表达水平降低程度较职业苯接触更为明显,但二者之间无统计学意义(P>0.05)。结论:职业苯接触及慢性苯中毒工人外周血中T细胞FcεRIγ基因表达水平均下调,这种表达异常可能与接触苯后机体细胞免疫功能障碍有关。 展开更多

关键词 苯 fcεRIγ基因表达 实时定量PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠IgG Fc片段与金黄色葡萄球菌黏附素FnBPB-ClfA的融合表达及其免疫学特性 被引量：3

14

作者 潘海婷 郝永清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期299-303,共5页

为提高金黄色葡萄球菌(S.aureus)串联表达的黏附素重组蛋白(r Fn BPB-Clf A)的免疫效力,本研究将RT-PCR扩增的大鼠Ig G Fc段基因与本实验室已构建的S.aureus Fn BPB-Clf A基因串联,采用SOE-PCR进行扩增,制备Fc-Fn BPB-Clf A融合基因,并... 为提高金黄色葡萄球菌(S.aureus)串联表达的黏附素重组蛋白(r Fn BPB-Clf A)的免疫效力,本研究将RT-PCR扩增的大鼠Ig G Fc段基因与本实验室已构建的S.aureus Fn BPB-Clf A基因串联,采用SOE-PCR进行扩增,制备Fc-Fn BPB-Clf A融合基因,并将其克隆于p ET-32a(+)载体中进行原核表达。将表达的重组蛋白(r Fc-Fn BPBClf A)经乳头管注射(200μg/只)免疫哺乳期Wistar大鼠,并于加强免疫2周后,以1×109 cfu S.aureus经乳头管攻毒。结果表明,在加强免疫7 d后,与r Fn BPB-Clf A免疫组相比,r Fc-Fn BPB-Clf A免疫组血清和乳清中的抗体水平明显增高,而且Ig G水平动态检测结果表明,其特异性抗体上升趋势明显高于r Fn BPB-Clf A免疫组。攻毒保护试验证明,r Fc-Fn BPB-Clf A和r Fn BPB-Clf A免疫组对S.aureus清除率均显著高于对照组(p<0.01)。本研究结果表明,r Fc-Fn BPB-Clf A对S.aureus乳房炎的免疫效果更佳,为进一步研制有效防治S.aureus乳房炎疫苗提供了实验依据。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 大鼠IgG fc基因 FnBPB-ClfA串联基因

在线阅读 下载PDF 职称材料