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三种FLAG融合标签的构建、表达及亲和常数测定
被引量：
1
1
作者
戴志昂
丁先锋
《浙江理工大学学报（自然科学版）》
2010年第2期313-317,共5页
FLAG融合标签是由8个氨基酸组成的短肽,可用于重组蛋白的免疫吸附纯化。为了建立一个基于FLAG融合标签的共表达纯化体系,将2个新的FLAG标签序列DYKDYKDYK和DYKDEDDK与FLAG标签的原有序列DYKDDDDK分别命名为FLAG1、FLAG2和FLAG3,利用PCR...
FLAG融合标签是由8个氨基酸组成的短肽,可用于重组蛋白的免疫吸附纯化。为了建立一个基于FLAG融合标签的共表达纯化体系,将2个新的FLAG标签序列DYKDYKDYK和DYKDEDDK与FLAG标签的原有序列DYKDDDDK分别命名为FLAG1、FLAG2和FLAG3,利用PCR将FLAG标签融合到SHP2酪氨酸磷酸酶NSH2结构域序列的C端,并将其重组到原核表达载体pGEX-2T中,并在大肠杆菌中进行表达。利用GST亲和层析柱和分子筛层析柱纯化融合蛋白,Western blotting法检测其免疫活性。免疫印迹结果表明,3个FLAG融合标签都可以被抗-FLAG单克隆抗体M2(AFM2)特异性识别。利用ELISA技术测定3个FLAG标签与AFM2的亲和常数(1/Kd),其Kd值分别为0.143 80、.128 1、0.080 1μmol/L。
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关键词
flag融合标签
免疫吸附纯化
抗-
flag
单克隆抗体M2
亲和常数
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职称材料
题名
三种FLAG融合标签的构建、表达及亲和常数测定
被引量：
1
1
作者
戴志昂
丁先锋
机构
浙江理工大学生命科学学院
出处
《浙江理工大学学报（自然科学版）》
2010年第2期313-317,共5页
文摘
FLAG融合标签是由8个氨基酸组成的短肽,可用于重组蛋白的免疫吸附纯化。为了建立一个基于FLAG融合标签的共表达纯化体系,将2个新的FLAG标签序列DYKDYKDYK和DYKDEDDK与FLAG标签的原有序列DYKDDDDK分别命名为FLAG1、FLAG2和FLAG3,利用PCR将FLAG标签融合到SHP2酪氨酸磷酸酶NSH2结构域序列的C端,并将其重组到原核表达载体pGEX-2T中,并在大肠杆菌中进行表达。利用GST亲和层析柱和分子筛层析柱纯化融合蛋白,Western blotting法检测其免疫活性。免疫印迹结果表明,3个FLAG融合标签都可以被抗-FLAG单克隆抗体M2(AFM2)特异性识别。利用ELISA技术测定3个FLAG标签与AFM2的亲和常数(1/Kd),其Kd值分别为0.143 80、.128 1、0.080 1μmol/L。
关键词
flag融合标签
免疫吸附纯化
抗-
flag
单克隆抗体M2
亲和常数
Keywords
flag
fusion tag
immuno affinity chromatography
AFM2
affinity constant
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
三种FLAG融合标签的构建、表达及亲和常数测定
戴志昂
丁先锋
《浙江理工大学学报（自然科学版）》
2010
1
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