绿原酸对FAdV-4的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响 被引量：8

1

作者 崔淹鸽 李京帅 +1 位作者 李银聚 张春杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第12期4718-4724,共7页

试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4... 试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4感染组均经尿囊腔接种0.2 mL ELD_(50)为1.36×10^(7)拷贝的FAdV-4病毒,对照组注射等体积的生理盐水。用MTT法检测绿原酸的安全浓度(IC_(50)),计算每枚鸡胚接种绿原酸的含量;接种病毒后72 h后,剖检并无菌收集鸡胚肝脏进行病理观察,实时荧光定量PCR法检测病毒载量,ELISA法测定肝脏细胞因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及信号分子磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、核转录因子-κB(NF-κB)和NF-κBp65含量。MTT法测定结果表明,绿原酸对鸡胚成纤维细胞的IC_(50)为28.6μg/mL,每枚鸡胚接种0.2 mL的绿原酸含量分别为858、429、214.5(≈215)、107.25(≈107)和53.125(≈53)μg。FAdV-4病毒接种72 h后,FAdV-4感染组鸡胚肝脏边缘钝圆、肿大,变脆,呈土黄色或黄色,甚至出现坏死;随着绿原酸浓度增加,绿原酸组鸡胚肝脏肿胀渐不明显,坏死灶和出血瘀点减少;肝脏内病毒明显增殖,载量为7.8 log_(2)拷贝/mg,107μg绿原酸即可显著抑制FAdV-4在鸡胚肝脏中的增殖(P<0.05)。炎性细胞因子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加鸡胚肝脏中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量(P<0.01);53μg绿原酸组IL-1β和TNF-α含量极显著增加(P<0.01),107μg绿原酸组IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,107μg绿原酸组IL-1β和TNF-α的含量均极显著降低(P<0.01),215和429μg绿原酸组IL-6的含量显著降低(P<0.05),858μg绿原酸组IL-6的含量极显著降低(P<0.01)。细胞信号分子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量(P<0.01);53μg绿原酸组PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,53μg绿原酸PI3K和NF-κBp65的含量均显著降低(P<0.05);215μg绿原酸组NF-κB的含量显著降低(P<0.05),NF-κBp65的含量极显著降低(P<0.01);当绿原酸达429μg时,PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均极显著降低(P<0.01)。本试验结果表明,绿原酸能够抑制FAdV-4的增殖,且剂量依赖性地抑制炎性因子和信号分子的表达,说明绿原酸可用于鸡抗病毒和炎性相关疾病的防控。 展开更多

关键词 绿原酸 禽腺病毒血清4型(fadv-4) 炎性因子 信号分子 鸡胚

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GPV·MDPV和FAdV-4三重PCR检测方法的建立 被引量：1

2

作者 戴银 胡晓苗 +6 位作者 赵瑞宏 张丹俊 潘孝成 沈学怀 尹磊 周学利 侯宏艳 《安徽农业科学》 CAS 2021年第15期183-184,187,共3页

[目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核... [目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核酸为模板,进行PCR特异性、敏感性和重复性试验。[结果]采用所建立的方法能够扩增出GPV、MDPV和FAdV-4特异性片段,且不能检出鸭黄病毒(DFV)、鸭I型肝炎病毒(DVH-Ⅰ)和禽呼肠孤病毒(ARV);GPV、MDPV和FAdV-4核酸模板的最低检测量分别为20、2、2 pg;对8份阳性临床病料进行检测,可见MDPV、GPV和FAdV-4的检出率均为100%。[结论]建立的三重PCR检测方法能够对MDPV、GPV和FAdV-4这3种病毒进行快速、准确的诊断。 展开更多

关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(MDPV) 禽腺病毒4型(fadv-4) 三重PCR检测

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FAdV-4感染对SPF鸡血清生化指标的影响

3

作者 张桂枝 赵晓阳 +2 位作者 李新正 张晓战 靳双星 《家畜生态学报》 北大核心 2022年第6期71-75,共5页

由Ⅰ群禽腺病毒C种4型(FAdV-4)引起的鸡安卡拉病是近年来在中国广泛流行的一种急性、烈性传染病。为了解FAdV-4感染对鸡血清生化指标的影响,将分离鉴定的FAdV-4肝病毒液接种于易感日龄SPF鸡复制病理模型,同时设立对照,观察临床症状和病... 由Ⅰ群禽腺病毒C种4型(FAdV-4)引起的鸡安卡拉病是近年来在中国广泛流行的一种急性、烈性传染病。为了解FAdV-4感染对鸡血清生化指标的影响,将分离鉴定的FAdV-4肝病毒液接种于易感日龄SPF鸡复制病理模型,同时设立对照,观察临床症状和病理变化,采集血液测定血清生化指标。结果表明:感染组与对照组相比,血液中总胆红素、直接胆红素、间接胆红素均极显著升高(P<0.01),总蛋白和白蛋白显著下降(P<0.05),葡糖糖含量和谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性以及肌酐与尿酸水平均极显著上升(P<0.01)。说明FAdV-4感染可引起鸡肝功能、肾功能受损,导致血清生化指标发生明显变化。 展开更多

关键词 鸡 fadv-4 血清生化指标

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饲粮精氨酸水平对肉仔鸡免疫功能及其抗FAdV-4影响的研究 被引量：15

4

作者 林智鑫 周嘉鑫 +3 位作者 陈立圳 高玉云 王全溪 王长康 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期772-782,共11页

本试验旨在研究饲粮精氨酸水平对肉仔鸡免疫功能及其抗禽腺病毒I群4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的影响。选取1日龄罗斯(Ross)308肉仔鸡300只,随机分为5组(每组5个重复,每个重复12只),设置5个饲粮精氨酸水平组,分别为0.96%、1... 本试验旨在研究饲粮精氨酸水平对肉仔鸡免疫功能及其抗禽腺病毒I群4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的影响。选取1日龄罗斯(Ross)308肉仔鸡300只,随机分为5组(每组5个重复,每个重复12只),设置5个饲粮精氨酸水平组,分别为0.96%、1.20%、1.44%、1.68%和1.92%,试验鸡饲养至21日龄,各重复随机选取4只测定血清免疫指标和免疫相对器官指数。随后各重复再次随机选取6只,并分为感染组和对照组,感染组肌肉注射FAdV-4 NP毒株0.2 mL(TCID50=10-6.23/0.01 mL),对照组肌肉注射等量灭菌生理盐水,感染2 d后,统计死亡率、发病率,ELISA测定肝组织iNOS水平、qPCR测定肝iNOS mRNA表达量及病毒载量。结果表明:1)饲粮精氨酸水平为1.44%、1.68%和1.92%时,均能显著提高脾脏指数(P<0.05)且精氨酸水平为1.68%能显著提高胸腺指数(P<0.05),而精氨酸水平为0.96%会显著降低脾脏、胸腺和法氏囊指数(P<0.05)。2)1.68%精氨酸水平组能显著提高血清球蛋白(GLO)、IgG水平和球蛋白/白蛋白(G/A)比值(P<0.05);精氨酸水平为0.96%显著降低血清球蛋白和IgG水平(P<0.05)。3)精氨酸水平为0.96%可显著降低肉仔鸡血清中IL-1β、TNF-α、iNOS和NO水平(P<0.05),而1.68%和1.92%精氨酸水平组均能显著提高肉仔鸡血清中IL-1β、TNF-α、IFN-γ和iNOS水平(P<0.05)。4)肉鸡感染FAdV-4后,0.96%精氨酸水平组的死亡率会显著高于1.20%、1.44%、1.68%和1.92%组(P<0.05)。5)ELISA测定结果显示,1.44%、1.68%和1.92%精氨酸水平组能显著提高感染后的肝组织iNOS水平。6)1.44%、1.68%和1.92%精氨酸水平组均能显著提高肝iNOS mRNA表达水平(P<0.05);肉鸡感染FAdV-4,iNOS mRNA水平均会显著降低(P<0.05),1.44%、1.68%和1.92%精氨酸水平组能提高感染FAdV-4后肝iNOS mRNA水平(P<0.05)并显著降低肝的病毒载量(P<0.05)。由此可见,肉仔鸡饲粮中精氨酸的不足会降低其机体的免疫功能及抗FAdV-4病毒能力。提高肉仔鸡饲粮中精氨酸水平不仅能提高免疫器官指数、血清免疫因子水平及肝iNOS mRNA表达水平,降低肝的病毒载量,从而提高机体免疫功能和抗病毒能力。 展开更多

关键词 精氨酸 免疫功能 INOS fadv-4

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麻黄鸡ALV-J、FAdV-4、FWPV混合感染的诊断 被引量：3

5

作者 张小波 温贵兰 +4 位作者 张喜懿 陈广 刘蔓蔓 胡璇 孙芸 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期82-87,共6页

为了确定贵州省某规模养殖场病鸡发病的原因,本试验对发病鸡进行了临床剖检,取其鸡冠、肝脏、心脏、脾脏和肾脏等病料组织进行了细菌分离培养,并进行了鸡痘病毒(FWPV)、J亚型禽白血病病毒(ALV-J)和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的PCR检测。... 为了确定贵州省某规模养殖场病鸡发病的原因,本试验对发病鸡进行了临床剖检,取其鸡冠、肝脏、心脏、脾脏和肾脏等病料组织进行了细菌分离培养,并进行了鸡痘病毒(FWPV)、J亚型禽白血病病毒(ALV-J)和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的PCR检测。结果显示:实验室剖检可见病鸡存在鸡冠痘状结痂、肝脏肿瘤结节、心包积液、脾脏肿大等症状;细菌分离培养无菌落形成;基于ALV-J gp85、FAdV-4 penton、FWPV TK基因片段的PCR检测均呈阳性;随后的ALV-J gp85、FAdV-4 penton、FWPV TK基因克隆及序列分析进一步揭示了3种病毒的遗传进化状况。因此,送检病鸡确诊为ALV-J、FAdV-4、FWPV混合感染,依据确诊结果向有关养殖场提出了合理的防治措施建议。 展开更多

关键词 麻黄鸡 ALV-J fadv-4 FWPV 混合感染 PCR检测

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2015-2020年我国禽腺病毒流行病学调查及高致病性FAdV-4分离株遗传变异性分析 被引量：22

6

作者 冯敬敬 牛登云 +3 位作者 马利芳 段宝敏 史秋颖 李颖 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第5期92-98,共7页

为了解目前我国Ⅰ群禽腺病毒的流行情况,本中心以临床诊断、分子生物学检测、血清学检测和LMH细胞病毒分离等方法对全国重点养殖家禽和水禽的区域进行跟踪检测。本实验室于2015-2020年,从北京、天津、河北、山东等30余个省份共收集到709... 为了解目前我国Ⅰ群禽腺病毒的流行情况,本中心以临床诊断、分子生物学检测、血清学检测和LMH细胞病毒分离等方法对全国重点养殖家禽和水禽的区域进行跟踪检测。本实验室于2015-2020年,从北京、天津、河北、山东等30余个省份共收集到7098份疑似样品,hexon基因测序成功1668份,其中FAdV-1型129份、FAdV-2型89份、FAdV-3型34份、FAdV-4型638份、FAdV-5型36份、FAdV-6型5份、FAdV-7型13份、FAdV-8a型177份、FAdV-8b型193份、FAdV-9型8份、FAdV-10型135份和FAdV-11型211份。将FAdV阴性样品全部接种LMH细胞进行病毒分离,共得到分离株703株,其中FAdV-4型分离株439株。高致病性FAdV-4型437株,与高致病性FAdV-4参考株同源性为99.1%~100%,非致病性分离株2株,与ON1参考株同源性为99.6%~100%。hexon基因的188、193、195、238和240位氨基酸也出现变异。 展开更多

关键词 高致病性fadv-4 禽腺病毒 hexon基因

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全悬浮培养LMH细胞制备FAdV-4灭活疫苗的研究 被引量：1

7

作者 秦红刚 韩兴 +7 位作者 秦伟 李晶梅 熊亮 余继钦 谢红玲 漆世华 李凌峰 石宝兰 《中国兽药杂志》 2023年第9期7-13,共7页

通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10^(6)/mL~1×10^(6)/mL接种,细胞密度最高达6×10^(6)/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-... 通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10^(6)/mL~1×10^(6)/mL接种,细胞密度最高达6×10^(6)/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-S细胞制备FAdV-4抗原的最优参数为:接毒时细胞密度2×10^(6)/mL~3×10^(6)/mL、接毒量0.1MOI~1MOI、接毒后48h~72h收毒,所获抗原病毒含量不低于10^(9.25)TCID_(50)/mL。试验鸡分别免疫0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.3mL疫苗,攻毒保护率分别为9/10、10/10、10/10、10/10,表明疫苗有效性良好。本试验成功建立了LMH全悬浮培养细胞株,确定了FAdV-4抗原的生物反应器悬浮培养工艺,验证了悬浮培养抗原的免疫原性,为高效FAdV-4灭活疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 LMH细胞 悬浮培养 fadv-4

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不同制备方式的FAdV-4疫苗免疫效果评价 被引量：1

8

作者 陈红秀 刘学 +3 位作者 张立霞 康福忠 朱秀同 任培森 《现代畜牧兽医》 2024年第9期17-21,共5页

研究旨在评估对比禽腺病毒4型(FAdV-4)悬浮培养、贴壁培养、亚单位蛋白(杆状表达)疫苗的免疫效果,为生产工艺选择合适技术路线提供参考。试验分别制备悬浮培养腺病毒、贴壁培养腺病毒、杆状表达亚单位蛋白疫苗,分别使用3种疫苗免疫SPF... 研究旨在评估对比禽腺病毒4型(FAdV-4)悬浮培养、贴壁培养、亚单位蛋白(杆状表达)疫苗的免疫效果,为生产工艺选择合适技术路线提供参考。试验分别制备悬浮培养腺病毒、贴壁培养腺病毒、杆状表达亚单位蛋白疫苗,分别使用3种疫苗免疫SPF鸡进行免疫效果评价。结果显示,悬浮毒液组鸡群血清中和抗体、ELISA抗体效价均最高,贴壁毒液组鸡群两种抗体效价与其相近;亚单位蛋白组鸡群抗体效价最低,尤其是中和抗体效价明显低于其他两组。攻毒后除亚单位蛋白组有1只死亡外,其他免疫组均无死亡情况。免疫8W后进行攻毒,悬浮毒液组、贴壁毒液组中和抗体效价和攻毒保护率均优于亚单位蛋白组。研究表明,综合各项指标,悬浮毒和贴壁培养毒免疫效果较好。 展开更多

关键词 fadv-4 禽腺病毒 悬浮培养 杆状病毒表达 免疫效果

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鸡cGAS基因的克隆、表达特性分析及FAdV-4感染前后亚细胞定位变化

9

作者 曹影丽 刘琪 +6 位作者 柴震震 杨侃侃 梁月巧 宋祥军 邵颖 涂健 祁克宗 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期453-460,共8页

cGAS作为一种新型的胞质DNA受体,在宿主抵抗DNA病毒而触发的天然免疫中起着至关重要的作用。血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是无囊膜的一种双链DNA病毒,可引起鸡肝炎-心包积液综合征。为明确鸡cGAS(chcGAS)基因功... cGAS作为一种新型的胞质DNA受体,在宿主抵抗DNA病毒而触发的天然免疫中起着至关重要的作用。血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是无囊膜的一种双链DNA病毒,可引起鸡肝炎-心包积液综合征。为明确鸡cGAS(chcGAS)基因功能,探究在鸡肝癌(LMH)细胞中过表达chcGAS以及FAdV-4感染前后细胞定位的变化情况。本研究针对chcGAS序列设计引物进行PCR扩增,并分析该基因序列与其他物种之间的同源性以及预测该基因的结构域,构建重组质粒pET-32a-chcGAS进行原核表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,利用激光共聚焦观察FAdV-4感染LMH细胞前后chcGAS细胞定位变化。结果表明,本试验克隆得到大小为1317 bp的chcGAS基因,与其他物种同源性为50.5%~84.4%,SDS-PAGE分析结果显示,chcGAS蛋白主要以可溶性蛋白质的形式在上清液处表达,目的蛋白质相对分子质量为75000,与预期大小相符。亚细胞定位结果显示,FAdV-4感染可导致定位于细胞核膜上的chcGAS蛋白转移到细胞质中。本研究结果为进一步研究FAdV-4与cGAS-STING信号通路的关联调控机制提供了科学依据。 展开更多

关键词 cGAS 血清4型禽腺病毒(fadv-4) 序列分析 原核表达 亚细胞定位

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亮斑扁角水虻幼虫生物转化对鸡粪中FAdV-4的消减作用研究

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作者 陈帅 严婷婷 +8 位作者 董梦瑶 周煜琛 佘望军 李月 蔡珉敏 黄凤 张吉斌 喻子牛 郑龙玉 《化学与生物工程》 CAS 北大核心 2024年第1期21-27,共7页

将亮斑扁角水虻幼虫(black soldier fly larvae,BSFL)接入含禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的鸡粪中(0~18 d),采用TaqMan qPCR和16S rDNA高通量测序分析了BSFL转化过程中FAdV-4含量的动态变化和微生物区系演化。结果表明,BSFL转化能够显著消... 将亮斑扁角水虻幼虫(black soldier fly larvae,BSFL)接入含禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的鸡粪中(0~18 d),采用TaqMan qPCR和16S rDNA高通量测序分析了BSFL转化过程中FAdV-4含量的动态变化和微生物区系演化。结果表明,BSFL转化能够显著消减鸡粪中的FAdV-4群体载量,转化18 d时FAdV-4减少率达到了99.63%,明显高于对照组(64.74%),并且增加BSFL接种量和日龄能增强对FAdV-4的消减作用;BSFL转化使得物料中的细菌多样性显著降低;厚壁菌门、假单胞菌属受到抑制,而拟杆菌门、异常球菌-栖热菌门丰度则明显提高;居绿藻菌属、特吕珀菌属在BSFL转化体系中与FAdV-4消减密切相关。 展开更多

关键词 亮斑扁角水虻 鸡粪 禽腺病毒血清4型 生物转化 16S rDNA测序

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禽腺病毒I群和禽腺病毒4型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：2

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作者 薛晓岩 张振兴 +4 位作者 杨钦鸿 王位 张伟 李素华 宋建领 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第2期152-158,184,共8页

为建立能快速检测禽腺病毒I群(FAd V-I)和禽腺病毒4型(FAd V-4)的双重Taq Man探针荧光定量PCR(qPCR)方法,本研究根据禽腺病毒(FAd V)的Hexon基因,设计针对FAd V-I和FAd V-4的通用型与特异型引物与探针。采用上述引物经PCR扩增靶基因并... 为建立能快速检测禽腺病毒I群(FAd V-I)和禽腺病毒4型(FAd V-4)的双重Taq Man探针荧光定量PCR(qPCR)方法,本研究根据禽腺病毒(FAd V)的Hexon基因,设计针对FAd V-I和FAd V-4的通用型与特异型引物与探针。采用上述引物经PCR扩增靶基因并克隆至p MD19-T载体中,构建重组质粒标准品p MD19-T-FAd V-I和p MD19-T-FAd V-4,并均经PCR和测序鉴定。将两种重组质粒标准品分别10倍倍比稀释后等体积混合作为模板,采用棋盘法对反应体系和反应条件进行优化,建立了能检测上述病原的双重Taq Man探针q PCR方法,同时对该方法的特异性、敏感性、重复性及对临床样品的适用性进行评价。结果显示,两种重组质粒标准品标准曲线的相关系数(R2)均大于0.996,表明两种质粒标准品混合物的拷贝数与其Ct值具有良好的线性关系;该方法能够特异性检测和区分FAd V-I和FAd V-4,与其他禽类传染病病原核酸不发生交叉反应,具有较强的特异性;该方法对FAd V-I和FAd V-4重组质粒标准品的检测限分别为4.6×10~2拷贝/μL和2.01×10~2拷贝/μL,比常规PCR方法敏感性高10倍,具有较高的敏感性;批内和批间重复性试验的变异系数均小于1.0%,具有较好的重复性和稳定性。采用该方法和常规PCR法对32份疑似感染FAd V-I的家禽组织样品、8份疑似感染FAd V-4的家禽粪便样品进行检测,结果显示二者检测结果的符合率均为100%。结果表明,本研究建立的FAd V-I/FAd V-4双重Taq Man探针q PCR检测方法特异性强、敏感性高、准确性好,为快速诊断FAd V-I的同时鉴别FAd V-4提供了技术支持。 展开更多

关键词 禽腺病毒I群 禽腺病毒4型 HEXON TAQMAN探针 荧光定量PCR

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Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体中和效价与防治效果相关性试验

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作者 蔡青秀 孙亚磊 +4 位作者 于春梅 丛雁方 董照洋 李宸辉 戴建君 《中国动物检疫》 2025年第4期106-111,共6页

为探究Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)卵黄抗体中和效价与预防效果、治疗效果的相关性,对制备的卵黄抗体进行2^(-1)~2^(-4)梯度稀释(中和效价分别为1:282、1:142、1:79、1:36)后,分别进行预防和治疗效果试验。结果显示,在FAdV-4卵黄抗体中和... 为探究Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)卵黄抗体中和效价与预防效果、治疗效果的相关性,对制备的卵黄抗体进行2^(-1)~2^(-4)梯度稀释(中和效价分别为1:282、1:142、1:79、1:36)后,分别进行预防和治疗效果试验。结果显示,在FAdV-4卵黄抗体中和效价不低于1:142时,分别进行预防后攻毒和攻毒后治疗试验,发现试验鸡健活率均不低于80%。结果表明,预防和治疗效果与卵黄抗体效价呈正相关。为保证卵黄抗体的临床使用效果,建议将抗体成品效力检验的中和效价标准定为不低于1:256。本研究为FAdV-4卵黄抗体的临床应用剂量选择提供了数据支持,为卵黄抗体质量标准的制定奠定了理论基础。 展开更多

关键词 Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体 预防效果 治疗效果 相关性

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基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立 被引量：8

13

作者 梅楠 孙海伟 +3 位作者 李允章 汪凯 王桂军 陈鸿军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期807-811,共5页

为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立... 为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立了快速检测FAd V-4的间接ELISA方法,该方法特异性试验结果显示,除FAd V-4外,与其它病原无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法检测血清最低稀释度为1∶12 800,具有较高的敏感性;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%。该方法对FAd V-4临床感染的阳性血清检出率为100%,与琼脂扩散试验结果完全吻合。本研究建立的以Fiber-2重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法能够用于FAd V-4灭活疫苗免疫后的血清学调查。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 fadv-4 Fiber-2 原核表达 间接ELISA

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鹌鹑源FAdV4 Fiber 2、ORF29区序列分析及其致病性研究 被引量：4

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作者 卢琴 罗青平 +7 位作者 张腾飞 罗玲 汪宏才 王红琳 温国元 张蓉蓉 商雨 邵华斌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期36-42,共7页

本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、... 本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、E230Q、S260T、I299V、S304A、P307A、V319I、A380T、S389T、A400G、Q403Q、S406I、T412S、T434S、D438E、S452A、A458N和V477L位点存在点突变,ORF29区缺失了RMITPLYTRPP共11个氨基酸;致病性试验结果,HB1812株对SPF鸡具有致病性,可见典型的心包积液及肝脏发黄等临床症状,HE镜检可见心肌纤维排列紊乱及部分心肌断裂,心肌间隙可见大量红细胞,肝脏可见炎性细胞浸润并伴随少量肝细胞坏死。该研究是国内首次报道鹌鹑源禽腺病毒,为我国FAdV-4的传播方式、灭活疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 鹌鹑源 fadv-4 Fiber 2 ORF29 致病性

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鸡混合感染血清4型禽腺病毒和传染性法氏囊病病毒的诊治 被引量：6

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作者 亓丽红 宋玲玲 +5 位作者 于可响 王友令 马秀丽 鞠艳 刘涛 艾武 《中国家禽》 北大核心 2018年第15期60-62,共3页

2017年6月,山东某养殖场43日龄蛋鸡群出现发热、精神沉郁、拉黄绿色稀便、黄疸、冠髯苍白、衰弱等症状,剖检表现为:心包腔蓄积大量淡黄色水样液体,肝脏充血、肿大、质脆、色淡,心肌松弛,脾脏、肾脏充血肿大,腺胃乳头有弥散性出血点,肺... 2017年6月,山东某养殖场43日龄蛋鸡群出现发热、精神沉郁、拉黄绿色稀便、黄疸、冠髯苍白、衰弱等症状,剖检表现为:心包腔蓄积大量淡黄色水样液体,肝脏充血、肿大、质脆、色淡,心肌松弛,脾脏、肾脏充血肿大,腺胃乳头有弥散性出血点,肺脏水肿,法氏囊肿大,腿肌点状或条状出血,个别肌肉苍白。根据临床症状、剖检病变、琼脂扩散试验和PCR检测结果确诊为血清4型禽腺病毒和传染性法氏囊病病毒混合感染。 展开更多

关键词 fadv-4 IBDV 混合感染 诊治

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表达禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白的重组耐热新城疫病毒的构建及免疫效果评估 被引量：2

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作者 商雨 李林涛 +9 位作者 李丽 徐英英 冯贺龙 汪宏才 张蓉蓉 曾哲 王红琳 罗青平 邵华斌 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期650-659,共10页

【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus sero... 【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的Fiber2基因插入到其基因组上,构建表达Fiber2蛋白的重组耐热NDV质粒pTS-HN-Fiber2。通过病毒拯救技术拯救重组NDV rTS-HN-Fiber2,并测定其生物学特性和作为疫苗候选株的免疫原性和攻毒保护性。【结果】rTS-HN-Fiber2的鸡胚平均致死时间>168 h,且脑内接种致病指数为0,属于弱毒的范畴;在细胞上的生长曲线结果表明,rTS-HN-Fiber2与亲本LaSota株有相似的生长曲线,但最终的生长滴度略低于LaSota株;rTS-HN-Fiber2在56℃处理15 min后,病毒滴度下降约10^(3) TCID_(50)/mL,而LaSota株56℃处理5 min几乎无感染性;间接免疫荧光试验结果表明,rTS-HN-Fiber2能表达Fiber2蛋白。免疫和攻毒试验结果显示,rTS-HN-Fiber2能产生NDV抗体,且能显著提高雏鸡在FAdV-4强毒下的存活率,减轻FAdV-4强毒引起的组织病变,降低组织中的病毒载量。【结论】本研究成功构建了表达FAdV-4 Fiber2蛋白的重组耐热NDV,该病毒保持了亲本LaSota株的弱毒生物学特性,但热稳定性有显著提升;重组NDV免疫雏鸡可产生针对NDV和FAdV-4强毒的保护,该重组NDV可作为开发针对FAdV-4和NDV二联基因工程疫苗的候选病毒株。 展开更多

关键词 禽腺病毒血清4型(fadv-4) 新城疫病毒(NDV) Fiber2蛋白 重组病毒 耐热

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一株鹅源禽腺病毒4型的分离及致病性 被引量：1

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作者 王艳 高亚东 +1 位作者 蒋成辉 曾巧英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4232-4240,共9页

2023年,昆明一朗德鹅场部分雏鹅出现软脖子症状,伴有零星死亡,病变疑似禽心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)。本研究旨在对本次雏鹅病因进行分子病毒学诊断和病原的致病性研究。采集肝病料接种鸡肝癌细胞(leghorn male hep... 2023年,昆明一朗德鹅场部分雏鹅出现软脖子症状,伴有零星死亡,病变疑似禽心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)。本研究旨在对本次雏鹅病因进行分子病毒学诊断和病原的致病性研究。采集肝病料接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH):1)观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),取培养液负染、电镜观察病毒粒子形态;2)靶标4型禽腺病毒(serotype 4 fowl adenovirus,FAdV-4)的衣壳蛋白编码基因hexon基因进行PCR诊断,对扩增基因序列进行遗传演化分析;3)以5×10^(5.5)TCID_(50)/羽的剂量皮下注射感染10日龄健康泰州鹅,进行动物回归感染以确证其致病性。结果显示,将病料上清接种LMH细胞48~72 h后CPE明显,细胞圆缩、间隙变大、随后碎裂、逐渐脱落,电镜观察见二十面体无囊膜病毒粒子;PCR检测FAdV-4阳性,分离纯化病毒,命名为YNKM2023株;hexon基因的遗传演化分析显示,分离株与国内已有的鸡、鸭FAdV-4流行毒株相似性高达99.8%~99.9%,与印度分离株相似性为99.5%~99.6%。接种感染后,泰州鹅未出现典型的临床症状,但感染后3 d开始出现HPS的特征性病变,感染后6 d检测到中和抗体。综上,本研究成功分离到鹅源FAdV-4/YNKM2023株,该毒株与国内已有的鸡鸭流行毒株高度同源,尚未发生明显的基因漂移。分离株可以感染鹅,病毒可以在雏鹅体内复制引起组织器官病变并产生免疫应答,对鹅表现出一定的致病性,这有助于了解FAdV-4在鹅群的流行情况及其对雏鹅的致病性。 展开更多

关键词 鹅源 禽腺病毒4型(fadv-4) 分离 致病性

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血清4型禽腺病毒Fiber-2蛋白截短表达及单克隆抗体制备 被引量：8

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作者 韦悠 谢芝勋 +6 位作者 邓显文 李小凤 谢志勤 范晴 张艳芳 黄娇玲 王盛 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2341-2349,共9页

【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32... 【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32a(+)构建原核表达载体。将表达的重组蛋白进行纯化,并通过Western blotting验证其在大肠杆菌中的表达情况。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠后取脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性细胞株,再利用秋水仙素裂解法、间接ELISA法和间接免疫荧光法(IFA)对其进行鉴定。【结果】成功构建Fiber-2基因截短片段的原核表达系统,获得大小约为67 kD的Fiber-2截短蛋白,以包涵体的形式出现,经纯化后可获得单一的特异性条带,经Western blotting鉴定证明其可与FAdV-4阳性血清结合从而产生一条特异性条带。经过4次亚克隆后筛选到5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(2C2、4F6、5A5、6G10和10B5),其抗体分泌稳定性、特异性好,诱生的细胞上清液抗体效价为1:1600~1:6400,腹水抗体效价为1:320000~1:1280000,秋水仙素裂解检测染色体数目为94~110条。2C2、4F6和10B5杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG2b亚型,轻链为Kappa链;5A5和6G10杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG1亚型,轻链为Kappa链。5株杂交瘤细胞株与感染FAdV-4的鸡肝癌上皮细胞系(LMH)进行IFA检测,结果均为阳性。【结论】制备的Fiber-2截短重组蛋白及单克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,可用于FAdV-4病毒检测试剂盒研发。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒(fadv-4) Fiber-2 基因克隆 重组蛋白 单克隆抗体 Western blotting

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禽腺病毒血清4型贵州株全基因序列分析 被引量：7

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作者 尹德晶 张云丹 +5 位作者 岳筠 李乔斌 何玲 李涛 王开功 程振涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期44-54,共11页

为了解禽腺病毒血清4型(FAdV-4)地方流行毒株的分子进化情况,基于实验室分离的2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株,分别对2株FAdV-4毒株进行PCR分段扩增,扩增产物克隆至载体,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后筛选出重组质粒进行测序,将测序... 为了解禽腺病毒血清4型(FAdV-4)地方流行毒株的分子进化情况,基于实验室分离的2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株,分别对2株FAdV-4毒株进行PCR分段扩增,扩增产物克隆至载体,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后筛选出重组质粒进行测序,将测序结果依次拼接得到病毒的全基因组,获得FAdV-4贵州株的全基因序列,并对其进行序列和遗传进化分析。结果显示,通过PCR分段扩增成功获得了2株FAdV-4贵州株(GZ-BJ株和GZ-QL株)的全基因序列,长度分别为43352、43723 bp,FAdV-4 GZ-BJ株全基因序列长度比FAdV-4 GZ-QL株短371 bp,少6个ORF(22K、putative 9.1 ku、u-exon、ORF17、ORF28、ORF42),二者的氨基酸同源性为57.1%。2株FAdV-4贵州株同国内外不同地区FAdV-4毒株核苷酸同源性在88.7%~100%,与FAdV-4经典毒株ON1比对,2株FAdV-4贵州株和国内FAdV-4分离株均缺失ORF19、ORF27、ORF30。系统进化树分析显示,2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株仍属于Ⅰ群C种FAdV。研究结果表明,2株贵州株FAdV-4 GZ-BJ株和FAdV-4 GZ-QL株较国内外FAdV-4毒株均存在进化与突变,且FAdV-4 GZ-BJ株变化较大,但尚未改变其血清型,这为探索FAdV-4致病机理的分子机制研究提供依据。 展开更多

关键词 禽腺病毒血清4型(fadv-4) 序列分析 变异分析

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X蛋白(pX)在血清4型禽腺病毒感染LMH细胞后对Toll样受体的影响 被引量：2

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作者 李小凤 韦悠 +10 位作者 罗思思 谢志勤 阮志华 张民秀 黄娇玲 李丹 万丽军 李孟 任红玉 谢丽基 谢芝勋 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期2814-2821,共8页

【目的】研究X蛋白(Protein X,pX)在血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)感染LMH细胞后对Toll样受体产生的影响,为进一步阐释FAdV-4感染致病机制和免疫应答机理提供数据参考。【方法】通过PCR扩增X基因编码区序列,与pEF... 【目的】研究X蛋白(Protein X,pX)在血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)感染LMH细胞后对Toll样受体产生的影响,为进一步阐释FAdV-4感染致病机制和免疫应答机理提供数据参考。【方法】通过PCR扩增X基因编码区序列,与pEF1α-HA载体连接,构建重组表达质粒pEF1α-HA-X。将重组表达质粒pEF1α-HA-X和空质粒pEF1α-HA分别转染LMH细胞,24 h后用FAdV-4感染转染后的细胞,2个处理组分别标记为pEF1α-HA-X+和pEF1α-HA+;同时设立转染后未加病毒刺激组作对照,分别标记为pEF1α-HA-X-和pEF1α-HA-。用Western-blotting和间接免疫荧光验证重组蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测Toll样受体(chTLR1a、chTLR1b、chTLR2a、chTLR2b、chTLR3、chTLR4、chTLR5、chTLR7、chTLR15、chTLR21)和效应因子(IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-15)mRNA转录水平的变化。【结果】X基因开放阅读框(ORF)全长540 bp,共编码179个氨基酸残基。Western-blotting结果显示重组X蛋白与HA标签小鼠源单克隆抗体反应,在27 kD处得到单一条带,间接免疫荧光结果可见绿色荧光。实时荧光定量PCR检测发现,与pEF1α-HA-组相比较,pEF1α-HA-X-组chTLR1a和chTLR1b的mRNA转录水平极显著上调(P<0.01,下同),分别为pEF1α-HA-组的9.76和12.34倍;chTLR2a、chTLR2b、chTLR5、chTLR7、chTLR15和chTLR21的mRNA转录水平显著上调(P<0.05,下同)。添加病毒感染后,与pEF1α-HA-X-组相比,pEF1α-HA-X+组chTLR1a和chTLR1b的mRNA转录水平极显著下调,分别下调60.0%和66.7%;chTLR2a、chTLR2b和chTLR3的mRNA转录水平显著提高,分别显著上调2.91、2.01和1.47倍,其他chTLRs的mRNA转录水平下调,但差异不显著(P>0.05);同时,pEF1α-HA-X+组效应因子IFN-α、IFN-β、IL-1β的mRNA转录水平比pEF1α-HA-X-组显著上调,IL-8的mRNA转录水平极显著下调。【结论】在LMH细胞过表达pX并被FAdV-4感染后,pX能激活宿主免疫应答系统,Toll样受体(chTLR2a、chTLR2b和chTLR3)和其效应因子(IFN-α、IFN-β和IL-1β)的mRNA转录水平显著上调以抑制病毒复制,说明pX具备激活宿主细胞天然免疫系统的功能。 展开更多

关键词 fadv-4 PX TOLL样受体 效应因子 实时荧光定量PCR

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