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GeneScan试剂盒法快速定量检测玉米中CaMV35S启动子
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作者 朱飞宇 黄宇飞 +3 位作者 高梅莹 刘佳 刘丹 铁晓威 《现代农业科技》 2025年第14期121-124,130,共5页
针对玉米中转入的CaMV35S启动子,开展了一种新型试剂盒[GMO Quant(LR)35S Screen corn]荧光定量PCR检测方法试验,建立新的转基因玉米中含有CaMV35S启动子标记基因的定量检测方法。选用3个玉米品种先玉1321、裕丰303和先玉335进行了CaMV... 针对玉米中转入的CaMV35S启动子,开展了一种新型试剂盒[GMO Quant(LR)35S Screen corn]荧光定量PCR检测方法试验,建立新的转基因玉米中含有CaMV35S启动子标记基因的定量检测方法。选用3个玉米品种先玉1321、裕丰303和先玉335进行了CaMV35S启动子荧光定量PCR检测,标准偏差分别为0.15%、0.39%和0.61%,标准曲线相关系数均在0.98以上,扩增效率为90%~110%,试剂盒中配有1%MON863玉米基因组DNA(已知CaMV35S启动子含量在0.5%左右)作为对照材料,试验结果符合荧光定量PCR检测试验要求,确认此方法准确有效。此方法具有高度的特异性、高效性,是一种新型高效定量检测CaMV35S启动子的方法。 展开更多
关键词 荧光定量PCR CaMV35S启动子 转基因玉米 定量检测 GeneScan试剂
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奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的临床应用评估 被引量:2
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作者 胡秀花 王子华 +5 位作者 黄鹏成 刘园园 毛君杰 王桂琴 马翀 王少林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期61-69,共9页
为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧... 为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧场155份奶牛乳房炎奶样分别进行菌株鉴定和耐药性检测,并将检测试剂盒与其他3种检测结果进行比较和分析。结果显示,检测试剂盒与传统细菌分离培养在病原菌检出情况上基本保持一致,均主要检出了大肠杆菌、芽孢杆菌属和凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)等;检测试剂盒与16S rRNA基因扩增子测序结果在菌属组成上一致性较高,均主要检出了假单胞菌属、链球菌属和葡萄球菌属等;药物敏感性试验结果显示,检出率较高的66株病原菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物的耐药率普遍偏高;奶样中β-内酰胺酶耐药基因blaZ的检测试剂盒检出结果与同一奶样中分离菌株的药物敏感性试验结果一致率达58%(7/12)。综上所述,该检测试剂盒具有较高的准确度和病原覆盖率,可为牧场奶牛乳房炎主要病原的快速诊断和耐药基因(blaZ)监测提供有效的技术支持,从而降低抗菌药物的使用量,以减少牧场经济损失。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂(PCR-荧光探针) 细菌分离培养 16S rRNA基因扩增子测序 药物敏感性试验
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市售酶抑制法农残速测试剂盒对多种农药的敏感性研究 被引量:2
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作者 乔礼 赵建波 罗俊霞 《河南农业》 2024年第7期35-37,共3页
用市售酶抑制法农残速测试剂盒进行农药残留快速检测,具有操作简便、出结果快、对检测人员技术水平要求低等优点,在日常农药残留监管中应用广泛。酶抑制法农残速测,是基于有机磷和氨基甲酸酯类农药对动物体内胆碱酯酶抑制作用的原理。
关键词 酶抑制 胆碱酯酶 技术水平 农药残留 试剂 有机磷和氨基甲酸酯类农药 敏感性研究 检测人员
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国标法和新型试剂盒法测定维B_(12)含量的方法比较
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作者 蔡晓霞 吴家碧 +5 位作者 陈叶兰 李诗华 陈紫媚 卢靖怡 芦平 谢黔兰 《农产品加工》 2024年第2期69-73,共5页
比较传统国标方法和新型试剂盒方法测定维B_(12)的含量差异。采用国标GB 5413.14—2010和试剂盒方法测试婴儿配方乳粉定量分析质控样品中维B_(12)的含量,对结果进行方法专属性、标准曲线线性、精密度、准确性和稳定性比较。结果表明,2... 比较传统国标方法和新型试剂盒方法测定维B_(12)的含量差异。采用国标GB 5413.14—2010和试剂盒方法测试婴儿配方乳粉定量分析质控样品中维B_(12)的含量,对结果进行方法专属性、标准曲线线性、精密度、准确性和稳定性比较。结果表明,2种方法的专属性良好,标准曲线线性良好,相关系数R>0.99,符合GB/T27404—2008《实验室质量控制规范》的要求;2种方法测得定量分析质控样品中维B_(12)的含量均在满意范围内且接近质控样品特性值(5.09μg/100 g),2种方法的相对标准偏差<7.5%;精密度试验及稳定性试验中,2种方法的相对标准偏差均<5%。传统国标法与试剂盒法均稳定准确,其对维B_(12)的含量测定结果差异性不显著,可根据实验室的经济能力及实验室自身条件选择适当的方法进行测试。 展开更多
关键词 国标 试剂 维B_(12)
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适合转录组测序的葡萄叶片总RNA试剂盒提取法的改进 被引量:13
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作者 杨晓燕 张波 +3 位作者 黄方爱 颜欢 李月荣 郑秋生 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期215-220,共6页
RNA试剂盒法是获取植物高质量RNA样品的常用技术,针对3种常见RNA提取试剂盒在红地球葡萄叶样品RNA提取效果进行评估和优化,以期找到适合红地球葡萄叶片RNA表达谱测序需求的高质量RNA提取策略。试验依据3种试剂盒推荐时间和条件进行RNA提... RNA试剂盒法是获取植物高质量RNA样品的常用技术,针对3种常见RNA提取试剂盒在红地球葡萄叶样品RNA提取效果进行评估和优化,以期找到适合红地球葡萄叶片RNA表达谱测序需求的高质量RNA提取策略。试验依据3种试剂盒推荐时间和条件进行RNA提取,并对时间等条件进行优化,比对了优化前后RNA质量。结果显示,试剂盒经优化后的方法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280在1.8-2.2之间,OD260/OD230大于2,28S与18S条带清晰完整,RNA-Seq测序质量及基因覆盖度符合要求。在红地球葡萄叶片上的RNA提取结果表明,延长提取试剂与样品的接触时间操作可以显著提高RNA提取质量(纯度/完整性)。 展开更多
关键词 红地球葡萄 RNA提取 试剂 转录组短枪测序
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国标法和试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数的测定 被引量:6
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作者 徐琼 王志伟 +3 位作者 冯琦 陈欣钦 顾文佳 曲勤凤 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2014年第7期56-59,共4页
比较GB5413.19-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定》中微生物法和商品化生物素检测试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数测定的差异性,为相关企业和检测机构提供有益参考.两方法均是利用植物乳杆菌(Lactobaci... 比较GB5413.19-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定》中微生物法和商品化生物素检测试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数测定的差异性,为相关企业和检测机构提供有益参考.两方法均是利用植物乳杆菌(LactobaciLLuspLantarum)对生物素具有敏感性的特点,通过测定菌株的生长变化来反映样品中生物素质量分数.结果表明,国标法测定标准曲线在生物素质量分数为(0.01~0.1)× 10-2 μg/g范围内具有良好的线性关系(R2=0.9963),试剂盒法在(0.08~0.72)×10-2 μg/g范围内线性良好(R2=0.9747).以这两种方法对5份婴幼儿食品中生物素质量分数进行检测比较,两者均能有效测定生物素质量分数,国标法检测最大RSD%为2.836,而试剂盒法最大RSD%为9.777,但均不影响最终结果判断.两种方法均适合于婴幼儿食品中生物素的测定,国标法相对于试剂盒法有更好的稳定性,但操作过程较为繁杂;而试剂盒法的检测周期短,适合于大批量检测工作. 展开更多
关键词 生物素 国标 试剂 食品分析
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生乳体细胞检测试剂盒方法与现有方法的比较 被引量:3
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作者 梁春梅 喻东威 +5 位作者 常建军 宋晓东 解鑫 吴玉秋 赵媛 许璐 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期43-45,共3页
对快速简便检测生乳中体细胞数的试剂盒法进行验证,通过与《NY/T800-2004生鲜牛乳中体细胞测定方法》中的显微镜法,以及市场上应用广泛的快速仪器法进行对比,可知试剂盒法与其他方法之间在统计学上均无显著性差异(P>0.05),且仪器方... 对快速简便检测生乳中体细胞数的试剂盒法进行验证,通过与《NY/T800-2004生鲜牛乳中体细胞测定方法》中的显微镜法,以及市场上应用广泛的快速仪器法进行对比,可知试剂盒法与其他方法之间在统计学上均无显著性差异(P>0.05),且仪器方法和标准方法,仪器方法之间在统计学上也均无显著性差异(P>0.05),试剂盒方法相对标准偏差小于10%,通过实验可知该方法具有很高的精密度和准确度,能够满足生乳中体细胞数的快速、准确检测要求,对生乳的质量检测和监测牛乳房炎都有重要作用。 展开更多
关键词 生乳 体细胞 试剂
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酶偶联试剂盒法与干式生化分析法测定血清肌酸激酶、尿素的对比分析 被引量:6
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作者 封文平 冯连世 李开刚 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期586-587,共2页
本研究通过酶偶联试剂盒法与干式生化分析法测定肌酸激酶、尿素的对比分析 ,力求在实际应用中 ,科学地将两种测试方法结合起来 ,并使数据具有可比性和共用性 ,为运动员机能评定提供多种方法。研究对象为国家游泳队 1 5名女子游泳运动员 ... 本研究通过酶偶联试剂盒法与干式生化分析法测定肌酸激酶、尿素的对比分析 ,力求在实际应用中 ,科学地将两种测试方法结合起来 ,并使数据具有可比性和共用性 ,为运动员机能评定提供多种方法。研究对象为国家游泳队 1 5名女子游泳运动员 ,同时采用两种方法测定血清肌酸激酶和血尿素 ,结果显示两种方法没有显著性差异且存在显著性相关。表明两种方法测定血清肌酸激酶、血尿素的结果具有可比性 。 展开更多
关键词 运动员机能评定 酶偶联试剂 干式生化分析 血清肌酸激酶 血尿素
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试剂盒法测定乳粉中的维生素 被引量:9
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作者 王旻 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2012年第3期57-59,共3页
通过对国家标准GB 5413-2010和德国拜法公司微生物法测维生素试剂盒说明书的研究,做对比试验,两种检测方法差异率小于10%。找出试剂盒标准曲线的实际质量分数,绘制出标准曲线,定出实验室适用的试剂盒方法。
关键词 微生物 检测 维生素 试剂
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ECLIPSE50试剂盒法与TTC法检测乳中抗生素残留的比较 被引量:2
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作者 武波波 李文献 +3 位作者 李梅芝 王少武 刘燕 李红 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2008年第5期52-54,共3页
采用ECLIPSE50试剂盒法和国标TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)法同时对40份来自不同奶站的新鲜奶样进行抗生素残留检测。结果表明,ECLIPSE50试剂盒法阳性率20%,国标TTC法阳性率12.5%。检测结果差异显著。同时指出了TTC法在检测灵敏度方面... 采用ECLIPSE50试剂盒法和国标TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)法同时对40份来自不同奶站的新鲜奶样进行抗生素残留检测。结果表明,ECLIPSE50试剂盒法阳性率20%,国标TTC法阳性率12.5%。检测结果差异显著。同时指出了TTC法在检测灵敏度方面的缺陷。因此,在乳的抗生素残留检测中,灵敏度高、简便、快速的ECLIPSE50试剂盒法可作为国标TTC法的补充。 展开更多
关键词 ECLIPSE 50试剂 国标TTC 抗生素残留
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运用Identifiler试剂盒对硅珠法提取石蜡包埋组织DNA质量的评估 被引量:1
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作者 林旭 王建文 +2 位作者 尹雅莎 谢素梅 冀强 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期577-581,共5页
目的:运用硅珠法从石蜡包埋的组织中提出DNA,Identifiler试剂盒评估DNA质量。方法:南京医科大学第一附属医院病理科2009~2011年石蜡包块49例,运用硅珠法提取石蜡包埋组织DNA,通过紫外分光光度计测定DNA纯度和Identifiler试剂盒PCR后313... 目的:运用硅珠法从石蜡包埋的组织中提出DNA,Identifiler试剂盒评估DNA质量。方法:南京医科大学第一附属医院病理科2009~2011年石蜡包块49例,运用硅珠法提取石蜡包埋组织DNA,通过紫外分光光度计测定DNA纯度和Identifiler试剂盒PCR后3130型毛细管电泳仪分析提取DNA片段的完整性。结果:经紫外分光光度计测定胃癌组织D(260 nm)/D(280nm)均值为1.84±0.02,肺癌组织为1.85±0.02,甲状腺癌组织为1.82±0.02,3组间比较P>0.05,因此硅珠法提取石蜡包埋组织DNA不会因组织差异而影响提取效果;Identifiler试剂盒PCR后毛细管电泳显示其提取效果,46例(93%)得出完整的16个基因座STR峰型。结论:硅珠法可应用于多种组织的DNA提取,并保证提取DNA样品的纯度和完整度。 展开更多
关键词 石蜡包埋组织 硅珠 Identifiler试剂 DNA
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快速酶免法(EIA)检测弓形体试剂盒的研究 被引量:1
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作者 吴叙苏 计浩 +1 位作者 吕立新 王春香 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 1990年第6期51-53,共3页
快速酶免法系采用聚乙二醇(PEG)稀释抗体,可使弓形体抗原与抗体反应由原来37℃2小时缩短为10分钟。通过对388份样品测定,快速EIA法阳性率为36%,间接血凝(IHA)作对比,阳性率为26%。两法阳性反应完全相符,但检出率快速EIA高于IHA。人工... 快速酶免法系采用聚乙二醇(PEG)稀释抗体,可使弓形体抗原与抗体反应由原来37℃2小时缩短为10分钟。通过对388份样品测定,快速EIA法阳性率为36%,间接血凝(IHA)作对比,阳性率为26%。两法阳性反应完全相符,但检出率快速EIA高于IHA。人工造病12头猪,于11天和21天采血检测抗体水平,EIA法阳性两次皆为100%。由于EIA技术中实行包被一步标准化,使本法操作更为简便、灵敏、快速。 展开更多
关键词 弓形体 酶免 检测 试剂
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结核分枝杆菌胶体金法快速鉴别试剂盒的临床应用观察 被引量:4
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作者 王易伟 《中国防痨杂志》 CAS 2008年第5期468-469,共2页
关键词 结核分枝杆菌 特异性 结核杆菌 分枝杆菌属 试剂 胶体金 快速鉴别
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脲酶的制备及终点法检测尿素氮试剂盒的配制
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作者 刘宝琦 郭慧云 +4 位作者 杨平 明炬 刘凯 崔京华 刘兰英 《吉林大学自然科学学报》 CAS CSCD 1993年第3期111-115,共5页
报道了以刀豆为原料制备脲酶的一种简便方法,其总收率为37.1%,比活达43.6μmol·min^(-1)/mg蛋白.用该酶配制的尿素氮试剂盒检测误差仅为1.5%,在4℃可保存三个月.EDTA和甘油是脲酶的有效稳定剂.
关键词 尿素氮 试剂 终点 脲酶
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市售酶抑制-比色法农残速测试剂盒对多种农药敏感性的研究 被引量:3
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作者 乔礼 罗俊霞 《河南农业》 2023年第10期22-23,42,共3页
酶抑制法农药残留快速检测试剂盒是基于有机磷和氨基甲酸酯类农药对动物体内胆碱酯酶的抑制作用研制的。进行检测时,在胆碱酯酶及其底物(乙酰胆碱)的共存体系中加入农产品样品提取液,当样品中含有不同浓度的有机磷或氨基甲酸酯类农药时... 酶抑制法农药残留快速检测试剂盒是基于有机磷和氨基甲酸酯类农药对动物体内胆碱酯酶的抑制作用研制的。进行检测时,在胆碱酯酶及其底物(乙酰胆碱)的共存体系中加入农产品样品提取液,当样品中含有不同浓度的有机磷或氨基甲酸酯类农药时,酶活性受到不同程度抑制。 展开更多
关键词 胆碱酯酶 氨基甲酸酯类农药 酶抑制 试剂 乙酰胆碱 比色 样品提取液 农药残留快速检测
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hpL单向免疫扩散法试剂盒的研究和应用 被引量:2
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作者 王晓东 崔建华 +3 位作者 孟召祥 马洪良 张捷 李秀敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期226-228,共3页
hpL单向免疫扩散法试剂盒的研究和应用王晓东,崔建华,孟召祥,马洪良(吉林省计划生育科学研究所长春130041)张捷,李秀敏(白求恩医科大学二院呼吸内科长春130041)单向环状免疫扩散技术(singleradial... hpL单向免疫扩散法试剂盒的研究和应用王晓东,崔建华,孟召祥,马洪良(吉林省计划生育科学研究所长春130041)张捷,李秀敏(白求恩医科大学二院呼吸内科长春130041)单向环状免疫扩散技术(singleradialimmunodiffusion,S... 展开更多
关键词 免疫扩散 试剂 制备 人胎盘泌乳素 胎盘
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囊虫IgG胶体金诊断试剂盒(层析法)的研制和考核 被引量:5
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作者 袁建华 甘绍伯 +2 位作者 陈志勇 吴赵永 叶江南 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第6期59-61,共3页
目的 在国内外率先开发成功用于囊虫病诊断的IgG金标层析法 (一步法 )诊断试剂盒。方法 采用独特制备猪囊尾蚴囊液抗原的方法 ;先进制备胶金试剂盒工艺并以比利时提供的囊虫IgG试剂盒 (ELISA)做参照。 结果 产品经中国药品生物制品... 目的 在国内外率先开发成功用于囊虫病诊断的IgG金标层析法 (一步法 )诊断试剂盒。方法 采用独特制备猪囊尾蚴囊液抗原的方法 ;先进制备胶金试剂盒工艺并以比利时提供的囊虫IgG试剂盒 (ELISA)做参照。 结果 产品经中国药品生物制品检定所检定合格。对试剂盒的特异性、敏感性进行了临床考核。其敏感性为 93 .2 3 % ,特异性为 97.3 7% ,该试剂盒检测包虫血清的交叉反应率为 4 5 .0 0 % ,与血吸虫、肝吸虫、肺吸虫等寄生虫病人血清无交叉反应。结论 该试剂盒敏感性、特异性良好 ,操作简单、快速 ,结果判读容易 ,特别适用于基层和现场应用。 展开更多
关键词 囊虫病 诊断试剂 胶体金 层析
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差速超速离心法与试剂盒法提取娟姗牛乳源性外泌体的分析比较 被引量:3
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作者 范士杰 马露 卜登攀 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期5441-5447,共7页
本试验旨在探究不同方法提取娟姗牛乳源性外泌体的优缺点。采用差速超速离心法和试剂盒法2种提取方法对娟姗牛乳源性外泌体进行提取,通过透射电镜(TEM)、Bradford蛋白定量、免疫印迹(WB)和粒径分析(NTA)方法对2种提取方法得到的外泌体... 本试验旨在探究不同方法提取娟姗牛乳源性外泌体的优缺点。采用差速超速离心法和试剂盒法2种提取方法对娟姗牛乳源性外泌体进行提取,通过透射电镜(TEM)、Bradford蛋白定量、免疫印迹(WB)和粒径分析(NTA)方法对2种提取方法得到的外泌体进行比较鉴定,并采用细胞毒性试验对试剂盒法提取的外泌体进行细胞毒性评估。结果显示:2种提取方法均获得了茶托样结构的囊泡,但TEM视野下试剂盒法提取的外泌体较差速超速离心法多。试剂盒法提取的外泌体蛋白浓度显著高于差速超速离心法(P<0.05)。2种提取方法均能够检测到外泌体的标志性蛋白凋亡连接基因2相互作用蛋白X(ALIX)和四次跨膜蛋白(CD81);差速超速离心法提取的外泌体CD81蛋白丰度极低,且并未鉴定出标志性蛋白肿瘤敏感基因101蛋白(TSG101),但试剂盒法检测到了TSG101。2种提取方法得到的外泌体粒径分布均符合外泌体的正常粒径大小(30~150 nm)。进一步通过细胞毒性试验发现,试剂盒法提取的外泌体对细胞的增殖分化几乎没有影响。因此,基于本试验条件下,试剂盒法更适用于提取娟姗牛乳源性外泌体。 展开更多
关键词 外泌体 娟姗牛乳 差速超速离心 试剂
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莱克多巴胺的化学发光免疫测定法试剂盒的研究 被引量:2
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作者 沈浩龙 陈巧钦 +5 位作者 张长弓 何琼 张慧 徐竟波 郭书林 黄印尧 《中国动物检疫》 CAS 2014年第7期91-96,共6页
本研究通过制备莱克多巴胺(Ractopamine,RAC)高活性单克隆抗体,用辣根过氧化物酶(HRP)标记RAC,以鲁米诺(luminol)为发光底物,建立直接竞争法检测莱克多巴胺。并对包被液、包被条件、包被蛋白浓度、封闭蛋白种类、孵育时间和酶用... 本研究通过制备莱克多巴胺(Ractopamine,RAC)高活性单克隆抗体,用辣根过氧化物酶(HRP)标记RAC,以鲁米诺(luminol)为发光底物,建立直接竞争法检测莱克多巴胺。并对包被液、包被条件、包被蛋白浓度、封闭蛋白种类、孵育时间和酶用量等参数进行优化,成功研制出了化学发光检测RAC的试剂盒。该方法的线性检测范围可达到0.1ng/mL—10ng/mL;线性相关系数r=0.998,IC50值为0.6763ng/mL;理论检测限小于0.1ng/mL。批内变异系数为7.62%~8.65%;批间变异系数为8.15%;回收率在85%±15%之间,与克伦特罗等其它β-受体激动剂不发生交叉反应。 展开更多
关键词 莱克多巴胺(RAC) 化学发光免疫测定(CLIA) 试剂
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牛奶中牛DNA提取试剂盒法的建立 被引量:1
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作者 王一凡 乔春艳 刘永峰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第9期137-146,共10页
【目的】提高牛奶中牛DNA的分离提取效率,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒法。【方法】以从牧场中采集的新鲜牛奶为材料,在前期建立的牛奶中牛DNA提取方法基础上,针对消化温度(55,60,65℃)、消化时间(10,60,120,180,240 min)、质量分... 【目的】提高牛奶中牛DNA的分离提取效率,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒法。【方法】以从牧场中采集的新鲜牛奶为材料,在前期建立的牛奶中牛DNA提取方法基础上,针对消化温度(55,60,65℃)、消化时间(10,60,120,180,240 min)、质量分数20%十二烷基硫酸钠(SDS)裂解液用量(20,35,50,65,80μL)、20 mg/mL蛋白酶K用量(0,10,30,50,70μL)等重要参数依次进行优化,通过DNA品质测定筛选最佳的DNA提取条件,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒方法,并用深加工的奶粉和高低温液态奶制品对试剂盒方法进行验证。【结果】不同消化温度和消化时间从牛奶中提取的总DNA、线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的完整性均表现良好,但不同消化温度和消化时间的DNA质量浓度和纯度存在差异,在消化温度为60℃、消化时间为10 min、SDS裂解液用量为50μL、蛋白酶K用量为50μL时,提取的DNA品质较优,是最佳的DNA提取条件,该条件下DNA平均质量浓度为97 ng/μL,平均纯度为1.44。对优化指标后建立的试剂盒方法进行验证,结果表明该方法不仅适用于生鲜牛奶,而且还适用于液态和固态奶制品。【结论】在所获得的最佳DNA提取条件下,牛奶体细胞裂解充分、完全,所提DNA质量浓度和纯度较高,完整性较好,PCR扩增性能较强。建立的牛奶中牛DNA提取试剂盒法适用范围较广。 展开更多
关键词 牛奶 DNA提取 提取条件优化 试剂
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