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GST-Exendin-4在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化
被引量：
2
1
作者
张怡
周庆峰
+2 位作者
贾孟
张红绪
李成伟
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期155-159,共5页
为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL...
为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在不同浓度的IPTG和不同温度诱导下,经SDS-PAGE分析鉴定,表达出Mr约为30 kD的目的蛋白,灰度扫描显示目的蛋白占菌体总蛋白的29.9%,超声裂解后的上清通过Sepharose 4B亲和层析纯化、透析、除盐及冷冻干燥得到高纯度的目的蛋白。本研究成功制备了高纯度的GST-Exendin-4融合蛋白,为下一步进行目的蛋白大规模的生产打下了良好的基础。
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关键词
exendin-
4
融合蛋白
可溶表达
亲和纯化
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职称材料
CTLA-4/Ig融合蛋白在COS-7中的表达、纯化及鉴定
被引量：
6
2
作者
易绍萱
吴军
+6 位作者
王锡华
李彦
刘志刚
姜庆
罗高兴
周立新
肖光夏
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第6期523-526,共4页
目的 探讨pCTLA 4/Ig融合蛋白表达载体在哺乳动物细胞中的表达及表达产物的鉴定、纯化 ,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法 将pCTLA 4/Ig表达质粒转染COS 7细胞 ,双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清中融合蛋白表达 ;ProteinA亲和层...
目的 探讨pCTLA 4/Ig融合蛋白表达载体在哺乳动物细胞中的表达及表达产物的鉴定、纯化 ,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法 将pCTLA 4/Ig表达质粒转染COS 7细胞 ,双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清中融合蛋白表达 ;ProteinA亲和层析纯化 ,SDS PAGE、Western印迹、3H TdR掺入等进行分子量、纯度、抗原特异性及生物学活性鉴定。结果 在pCTLA 4/Ig质粒转染后的 48h和 96h上清中 ,均能检测到CTLA 4/Ig融合蛋白表达 ;经亲和层析纯化后 ,在SDS PAGE胶上出现一条分子量约 5 0× 10 3 的与预期分子量大小相符的蛋白条带 ,该蛋白能与抗人CTLA 4单抗特异结合 ;该纯化融合蛋白能抑制人MLR ,抑制率为6 0 %～ 70 %。结论 在哺乳动物细胞中成功地表达并纯化了有生物学活性的重组人CTLA 4/Ig融合蛋白。
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关键词
CTLA-
4
融合蛋白
COS-7细胞
脂质体转染法
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职称材料
题名
GST-Exendin-4在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化
被引量：
2
1
作者
张怡
周庆峰
贾孟
张红绪
李成伟
机构
周口师范学院生命科学系植物遗传与分子育种重点实验室
商丘师范学院生命科学系
河南师范大学生命科学学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期155-159,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30901877)
河南省科技厅社会发展项目(092102310209)
河南省教育厅自然科学研究计划项目(2009B180021)
文摘
为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在不同浓度的IPTG和不同温度诱导下,经SDS-PAGE分析鉴定,表达出Mr约为30 kD的目的蛋白,灰度扫描显示目的蛋白占菌体总蛋白的29.9%,超声裂解后的上清通过Sepharose 4B亲和层析纯化、透析、除盐及冷冻干燥得到高纯度的目的蛋白。本研究成功制备了高纯度的GST-Exendin-4融合蛋白,为下一步进行目的蛋白大规模的生产打下了良好的基础。
关键词
exendin-
4
融合蛋白
可溶表达
亲和纯化
Keywords
exendin-4 fusion protein soluble expression affinity purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
CTLA-4/Ig融合蛋白在COS-7中的表达、纯化及鉴定
被引量：
6
2
作者
易绍萱
吴军
王锡华
李彦
刘志刚
姜庆
罗高兴
周立新
肖光夏
机构
第三军医大学附属西南医院烧伤研究所
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第6期523-526,共4页
基金
国家自然科学基金资助重大项目!(399934302)
军队杰出人才基金资助项目!(1996)
文摘
目的 探讨pCTLA 4/Ig融合蛋白表达载体在哺乳动物细胞中的表达及表达产物的鉴定、纯化 ,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法 将pCTLA 4/Ig表达质粒转染COS 7细胞 ,双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清中融合蛋白表达 ;ProteinA亲和层析纯化 ,SDS PAGE、Western印迹、3H TdR掺入等进行分子量、纯度、抗原特异性及生物学活性鉴定。结果 在pCTLA 4/Ig质粒转染后的 48h和 96h上清中 ,均能检测到CTLA 4/Ig融合蛋白表达 ;经亲和层析纯化后 ,在SDS PAGE胶上出现一条分子量约 5 0× 10 3 的与预期分子量大小相符的蛋白条带 ,该蛋白能与抗人CTLA 4单抗特异结合 ;该纯化融合蛋白能抑制人MLR ,抑制率为6 0 %～ 70 %。结论 在哺乳动物细胞中成功地表达并纯化了有生物学活性的重组人CTLA 4/Ig融合蛋白。
关键词
CTLA-
4
融合蛋白
COS-7细胞
脂质体转染法
Keywords
CTLA
4
fusion
protein
affinity
chromatography
gene
expression
purification
activity identification
分类号
Q510.3 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GST-Exendin-4在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化
张怡
周庆峰
贾孟
张红绪
李成伟
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
CTLA-4/Ig融合蛋白在COS-7中的表达、纯化及鉴定
易绍萱
吴军
王锡华
李彦
刘志刚
姜庆
罗高兴
周立新
肖光夏
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2000
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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