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BA-ELISA法快速检测农产品中阿特拉津残留
1
作者 胡刘岭 金靓怡 +2 位作者 李瑞韩 刘重阳 宋洋 《天津师范大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期49-53,共5页
为快速检测阿特拉津在农产品中的残留,基于其单克隆抗体,建立了间接竞争生物素/亲和素酶联免疫法(BA-ELISA).选择黄瓜、玉米、甘蔗作为样品,用乙腈提取3种样品,将得到的提取液经PSA净化后,旋蒸至近干,并用甲醇定容.对提取液作不同倍数... 为快速检测阿特拉津在农产品中的残留,基于其单克隆抗体,建立了间接竞争生物素/亲和素酶联免疫法(BA-ELISA).选择黄瓜、玉米、甘蔗作为样品,用乙腈提取3种样品,将得到的提取液经PSA净化后,旋蒸至近干,并用甲醇定容.对提取液作不同倍数的稀释,以消除复杂基质的影响.采用BA-ELISA法测定样品中的阿特拉津含量,并与气相色谱(GC)法对比.结果显示:最优反应体系中,BA-ELISA法的检测限为0.52±0.13μg/L,灵敏度为12.24±1.28μg/L;添加回收实验中,3种样品的阿特拉津回收率在93.07%~99.67%之间,变异系数在1.5%~6.7%之间,检测时间在1 h左右.该方法的检测结果与GC法基本一致,表明BA-ELISA法可以实现农产品中阿特拉津残留的快速测定. 展开更多
关键词 阿特拉津 快速测定 生物素/亲和素酶联免疫(BA-elisa)
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谷物中呕吐毒素ELISA检测方法的建立
2
作者 董彩文 李亚钦 +3 位作者 孙新城 刘洋 杨贻轲 魏涛 《粮食与油脂》 北大核心 2025年第10期157-162,共6页
基于免疫学检测原理,通过棋盘优化的方法,建立间接竞争ELISA检测方法,并与HPLC法进行比较验证。结果显示:方法的检测限为1.91 ng/mL,灵敏度IC_(50)为37.15 ng/mL,检测范围为4.07~346.74 ng/mL,加标回收率在87.50%~112.04%。根据系列质... 基于免疫学检测原理,通过棋盘优化的方法,建立间接竞争ELISA检测方法,并与HPLC法进行比较验证。结果显示:方法的检测限为1.91 ng/mL,灵敏度IC_(50)为37.15 ng/mL,检测范围为4.07~346.74 ng/mL,加标回收率在87.50%~112.04%。根据系列质量浓度梯度不同批次变异系数之间的差异,孔间和板间变异系数分别为0.527%~6.195%和0.502%~4.800%,证明建立的方法具有较好的精确度。在呕吐毒素含量已知的情况下比较2个不同批次板内和板间变异系数,2个批次板内变异系数分别为1.82%和1.59%,板间变异系数为1.71%,证明建立的方法具有较高的稳定性。通过仪器分析方法比较,证明建立的方法检测结果较为可靠。 展开更多
关键词 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 间接竞争酶联免疫法 食品检测 棋盘优化
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基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：4
3
作者 刘广阔 邹敏 +5 位作者 吴发兴 于皓同 王凯茸 张锐铮 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期1-6,共6页
为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western ... 为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western blot证实重组VP6蛋白有良好的反应原性;以4μg/mL浓度的抗原包被酶标板,一抗血清50倍稀释,酶标二抗稀释10000倍稀释,为最佳工作条件,阴阳临界值为0.233,表明该方法具有良好的特异性和敏感性。建立的检测BRV抗体的间接ELISA可用于临床BRV感染的检测。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 VP6蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验
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山羊源贝氏柯克斯体抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：1
4
作者 张锐铮 于皓同 +2 位作者 王凯茸 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期21-26,共6页
为建立山羊源贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)抗体间接ELISA检测方法,对贝氏柯克斯体的com1基因进行克隆及原核表达,以com1纯化蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法,并对临床收集的血清样本进行检测。结果显示,重组蛋白大小为27 ku,经W... 为建立山羊源贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)抗体间接ELISA检测方法,对贝氏柯克斯体的com1基因进行克隆及原核表达,以com1纯化蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法,并对临床收集的血清样本进行检测。结果显示,重组蛋白大小为27 ku,经Western blot鉴定com1蛋白反应原性良好;ELISA检测方法抗原包被量为4μg/mL,血清的稀释倍数为1∶100,酶标二抗稀释倍数为1∶2500,阴阳临界值为0.278。用该方法对流产衣原体、山羊支原体、牛支原体阳性血清进行检测,均为阴性;当C.burnetii阳性血清稀释至2048倍时检测结果仍为阳性;批内、批间变异系数均小于10%。用该方法对陕西省部分羊场收集到的307份血清样本进行检测,样本阳性率为9.12%。成功建立了一种检测贝氏柯克斯体抗体的间接ELISA检测方法,这为C.burnetii引起的Q热的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 贝氏柯克斯体 com1蛋白 酶联免疫吸附试验 抗体检测
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间接竞争ELISA检测蜂蜜中氧氟沙星残留 被引量：2
5
作者 杨兴东 魏慧雅 曲扬 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第23期240-247,共8页
为了建立间接竞争ELISA法检测氧氟沙星(Ofloxacin,OFLX)在蜂蜜中的残留,本研究采用活性酯法将OFLX与载体蛋白偶联,得到抗OFLX完全抗原(OFLX-BSA)和检测抗原(OFLX-OVA)。采用OFLX-BSA免疫BALB/c小鼠,之后用杂交瘤等技术制备抗OFLX单克隆... 为了建立间接竞争ELISA法检测氧氟沙星(Ofloxacin,OFLX)在蜂蜜中的残留,本研究采用活性酯法将OFLX与载体蛋白偶联,得到抗OFLX完全抗原(OFLX-BSA)和检测抗原(OFLX-OVA)。采用OFLX-BSA免疫BALB/c小鼠,之后用杂交瘤等技术制备抗OFLX单克隆抗体。通过优化反应条件,建立间接竞争ELISA方法,并对该法的准确度、精密度和特异性进行判定。结果显示OFLX与载体蛋白偶联成功;得到一株抗OFLX的杂交瘤细胞株(3D7),单克隆抗体的IC50值为1.17 ng/mL;该法在蜂蜜中的OFLX平均添加回收率为84.1%,其批间变异系数均大于批内的变异系数,与马波沙星的交叉反应率为52.9%,与其他竞争反应物没有交叉反应。本研究建立的间接竞争ELISA方法能够满足OFLX在蜂蜜中残留的测定需求。 展开更多
关键词 氧氟沙星 免疫原 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验(elisa) 蜂蜜
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新霉素ELISA检测方法的建立 被引量：9
6
作者 刘沙洲 桑小雪 +2 位作者 欧阳华学 雷绍荣 白林含 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第14期227-231,共5页
目的:比较直接和间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的优缺点,建立新霉素残留ELISA检测方法。方法:利用自制的新霉素多克隆抗体,采用直接竞争和间接竞争ELISA方法检测新霉素残留,并比较两种方法的优缺点。结... 目的:比较直接和间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的优缺点,建立新霉素残留ELISA检测方法。方法:利用自制的新霉素多克隆抗体,采用直接竞争和间接竞争ELISA方法检测新霉素残留,并比较两种方法的优缺点。结果:新霉素抗血清和庆大霉素的交叉反应率为2.04%,和卡那霉素的交叉反应率为0.02%,和氨苄青霉素、红霉素、四环素的交叉反应率均小于0.01%。初步测试新霉素间接竞争ELISA法的准确性和回收率。板内误差小于4%,板间误差小于11%,回收率为135.5%～191.3%。直接竞争和间接竞争ELISA方法的检测极限分别为28.58ng/mL和51.74ng/mL,达到了国家对新霉素规定的500μg/kg MRL检测限。结论:建立了直接竞争和间接ELISA吸附检测方法,条件优化更成功的间接竞争ELISA可用于开发新霉素检测试剂盒。 展开更多
关键词 新霉素 多克隆抗体 竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay elisa) 方法建立
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鲫鱼(Carassius auratus)卵黄蛋白原的ELISA检测 被引量：27
7
作者 李康 周忠良 +2 位作者 于静 王明山 余晓君 《中国环境科学》 EI CAS CSSCI CSCD 北大核心 2003年第3期276-280,共5页
采用Sephadex G-200柱层析从鲫鱼(Carassius auratus)成熟鱼卵中提取卵黄脂磷蛋白并制备抗卵黄脂磷蛋白抗血清.用DEAE-cellulose阴离子交换层析和Sephacryl S-300分子筛凝胶层析相结合的两步层析从经17(-雌二醇诱导的雌鱼血浆中提纯卵... 采用Sephadex G-200柱层析从鲫鱼(Carassius auratus)成熟鱼卵中提取卵黄脂磷蛋白并制备抗卵黄脂磷蛋白抗血清.用DEAE-cellulose阴离子交换层析和Sephacryl S-300分子筛凝胶层析相结合的两步层析从经17(-雌二醇诱导的雌鱼血浆中提纯卵黄蛋白原.免疫印迹反应显示卵黄脂磷蛋白和卵黄蛋白原都与抗卵黄脂磷蛋白抗血清有特异的反应.以抗卵黄脂磷蛋白抗血清作为抗体,卵黄蛋白原作为竞争抗原建立了间接竞争法酶联免疫吸附反应(ELISA)方法来检测雄鱼血液中卵黄蛋白原含量.该方法可测的最低浓度为7.8ng/mL,工作范围为0.39～25(g/mL,批内和批间误差分别为6.5%和7.5%. 展开更多
关键词 环境雌激素 鲫鱼 elisa 卵黄蛋白原
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动物饲料中玉米赤霉烯酮ELISA检测方法的建立 被引量：18
8
作者 张晓 张晴晴 +3 位作者 程罗根 张心明 刘媛 刘贤进 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期351-355,共5页
为检测动物饲料中玉米赤霉烯酮的含量，建立酯联免疫检测法（ELISA）。结果显示：该方法检测回收率范围为67％～99％，其最低检出限为0．1μg／kg；以建立的ELISA法对随机添加的35个普通动物饲料样本进行分析，并以HPLC法对同一批样品... 为检测动物饲料中玉米赤霉烯酮的含量，建立酯联免疫检测法（ELISA）。结果显示：该方法检测回收率范围为67％～99％，其最低检出限为0．1μg／kg；以建立的ELISA法对随机添加的35个普通动物饲料样本进行分析，并以HPLC法对同一批样品进行检测，两种方法回收率相关系数为0．9561。证明建立的ELISA检测方法适合动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 动物饲料 酶联免疫检测法
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马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究 Ⅰ酶联免疫吸附测定(ELISA) 被引量：13
9
作者 沈建忠 钱传范 +1 位作者 杨汉春 江海洋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期172-179,共8页
本文用混合酸酐法和活化酯法合成４种马杜霉素结合抗原。用其中一种作免疫原，免疫家兔产生抗体；用其余三种作包被原，探讨不同包被原用于ＥＬＩＳＡ检测马杜霉素残留时，对其灵敏度（Ｉ５０）和方法回收率的影响。试验结果表明，马杜... 本文用混合酸酐法和活化酯法合成４种马杜霉素结合抗原。用其中一种作免疫原，免疫家兔产生抗体；用其余三种作包被原，探讨不同包被原用于ＥＬＩＳＡ检测马杜霉素残留时，对其灵敏度（Ｉ５０）和方法回收率的影响。试验结果表明，马杜霉素结合抗原免疫家兔制备的抗体对马杜霉素具有很高的特异性、亲合性和选择性。在间接竞争ＥＬＩＳＡ中，使用Ｍ－Ｃ６－ＯＶＡ（ＡＥ）、Ｍ－ＯＶＡ（ＭＡ）和Ｍ－ＯＶＡ（ＡＥ）作包被原时，马杜霉素标准工作曲线的Ｉ５０值分别为３２３、９７５和８８０ｎｇ／ｍｌ，这证明Ｍ－Ｃ６－ＯＶＡ（ＡＥ）作包被原能大大提高ＥＬＩＳＡ检测的灵敏度。添加回收率试验测得鸡各组织样本回收率为７７７％～１０４３％，变异系数为３８％～１８０％，检测极限为３０～８０μｇ／ｋｇ。 展开更多
关键词 马杜霉素 鸡组织 elisa 药物残留
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瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)卵黄蛋白原的纯化、性质鉴定及ELISA检测方法的建立 被引量：8
10
作者 李育培 刁晓明 +3 位作者 盛晓洒 权恒 翟旭亮 李云 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期91-98,共8页
腹腔注射17β-雌二醇(E2),使瓦氏黄颡鱼雄鱼在7天内产生卵黄蛋白原(Vtg)。采用凝胶过滤和离子交换两种层析技术,从E2诱导的雄性瓦氏黄颡鱼血浆中分离、纯化出Vtg,采用糖、磷、脂蛋白染色技术证明分离、纯化的蛋白为Vtg,该Vtg在非变性条... 腹腔注射17β-雌二醇(E2),使瓦氏黄颡鱼雄鱼在7天内产生卵黄蛋白原(Vtg)。采用凝胶过滤和离子交换两种层析技术,从E2诱导的雄性瓦氏黄颡鱼血浆中分离、纯化出Vtg,采用糖、磷、脂蛋白染色技术证明分离、纯化的蛋白为Vtg,该Vtg在非变性条件下分子量约为240kDa,在SDS变性条件下分子量约为143kDa。纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg经检测显示可能含有类胡萝卜素,但没有二硫键,对热相对稳定。利用纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg,制备了兔抗瓦氏黄颡鱼Vtg多克隆抗血清。用双向免疫扩散法测得抗血清的纯度较高,效价为1︰32;Western blotting检测显示抗血清的特异性较好。以瓦氏黄颡鱼Vtg多克隆抗血清为抗体,以纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg为抗原,建立了间接酶联免疫吸附反应(ELISA)方法检测瓦氏黄颡鱼体内Vtg的含量,标准曲线线性部分的线性方程为y=0.099x+0.4529(R2=0.9327),该方法检测的灵敏度为15.6ng/ml,工作范围为31.2—4000ng/ml,在此范围内,标准曲线具有良好的线性。 展开更多
关键词 瓦氏黄颡鱼 卵黄蛋白原 纯化 多克隆抗血清 酶联免疫吸附反应(elisa)
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检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立 被引量：16
11
作者 刘茂军 靳岷 +2 位作者 杜改梅 邵国青 张映 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期437-441,共5页
选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间... 选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min。对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 检测方法 间接elisa
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应用重组信号蛋白14-3-3间接ELISA诊断日本血吸虫病 被引量：16
12
作者 罗庆礼 王志成 +4 位作者 李敏 郑美娟 余轶婧 罗飞 沈继龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期231-235,共5页
目的探讨重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)间接ELISA用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法表达并利用纯化的rSj14-3-3与成虫抗原(SjAWA)间接ELISA法分别检测51份急性和49份慢性日本血吸虫病患者和50份正常人血清,以上血清标本同时... 目的探讨重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)间接ELISA用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法表达并利用纯化的rSj14-3-3与成虫抗原(SjAWA)间接ELISA法分别检测51份急性和49份慢性日本血吸虫病患者和50份正常人血清,以上血清标本同时用SEA致敏的间接血凝试验(SEA-IHA)检测。再以3种方法检测30份华支睾吸虫感染者、24份卫氏并殖吸虫感染者和31份钩虫感染者血清,分析其交叉反应性。结果51份急性和49份慢性血吸虫病患者血清的rSj14-3-3抗体阳性率分别为98.0%和91.8%;SjAWA的检出率分别为96.1%和90.0%;IHA的阳性率分别为98.0%和93.9%。经统计学分析,以上结果无显著性差异(P>0.05)。Sj14-3-3间接ELISA、SjAWA间接ELISA和SEA-IHA对于30份华支睾吸虫感染者的交叉反应性分别为13.3%、20.0%和16.7%,24份卫氏并殖吸虫感染者分别为8.3%、12.5%和12.5%,31份钩虫感染者分别为12.9%、16.1%和12.9%。经统计学分析结果也无显著性差异(P>0.05)。结论rSj14-3-3抗原间接ELISA法诊断日本血吸虫病,具有高度的敏感性和特异性,可用于血吸虫病的免疫诊断。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 14-3-3蛋白 免疫诊断 elisa间接血凝试验
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间接ELISA检测牛分枝杆菌抗体方法的建立及初步应用 被引量：8
13
作者 张桂荣 万学济 +7 位作者 陈颖钰 吴波 晁彦杰 吕文 钦博 郭爱珍 陈焕春 谭亚娣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期555-560,568,共7页
针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种... 针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种以上抗原的特异性抗体为阳性时,即可判断为结核检测阳性。以TST为标准,判断ELISA方法的敏感性与特异性。结果证明,ELISA方法具有较好的敏感性(71.4%)。对ELISA检测为强阳性的奶牛进行细菌分离,并对5头结核菌分离阳性奶牛进行TST检测,结果有3头为TST阳性,2头可疑,显示出ELISA方法对严重感染牛的检测较TST具有更高的敏感性。由于TST与ELISA分别以细胞免疫与体液免疫为基础,两种检测方法结合应用可进一步提高牛结核病的检出率。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 elisa CFP10-ESAT-6 MPB83 MPB70 结核 检疫
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ELISA和GICA快速检测水产品中氯霉素残留的比较 被引量：20
14
作者 张晓辉 李余动 +3 位作者 孔蕾 周燕 黄家庆 杜建明 《浙江农业学报》 CSCD 2005年第4期216-218,共3页
比较了水产品中氯霉素残留的ELISA和GICA检测方法。经测定,GICA检测限为1.000μg/kg。GICA对ELISA的阴性符合率为94.7%,阳性符合率为92.3%,总符合率为92.5%。结果表明:GICA方法操作简单、快速、特异性强、重复性好,适合水产品中氯霉素... 比较了水产品中氯霉素残留的ELISA和GICA检测方法。经测定,GICA检测限为1.000μg/kg。GICA对ELISA的阴性符合率为94.7%,阳性符合率为92.3%,总符合率为92.5%。结果表明:GICA方法操作简单、快速、特异性强、重复性好,适合水产品中氯霉素残留的现场筛选。 展开更多
关键词 水产品 氯霉素残留 elisa GICA
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双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究 被引量：31
15
作者 葛萃萃 钟青萍 +1 位作者 张旺 欧阳鑫 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期171-175,共5页
研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆... 研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测大肠杆菌O157:H7,正交试验分析表明,捕获抗体于37℃包被2h、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合2h、检测抗体浓度为0.25mg/ml、与抗原于37℃结合1h为最优反应条件。该方法对纯培养菌液检出限为105CFU/ml,具有良好的敏感性及特异性。染菌样品经在EC增菌液中选择性培养后进行双抗夹心ELISA检测,接种量为0.1～1CFU/g(ml)的样品在培养12h后可检出阳性反应,1～10CFU/g(ml)的样品在培养8h后可检出阳性反应。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7:双抗夹心elisa 检测
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玉米赤霉醇酶标抗原的制备及其直接和间接竞争ELISA检测方法的建立与比较 被引量：6
16
作者 刘媛 刘贤进 +4 位作者 余向阳 张存政 张晓 刘蓉蓉 龚振明 《分析科学学报》 CAS CSCD 2008年第2期141-144,共4页
采用活性酯法将半抗原玉米赤霉醇-16-羧丙基醚与辣根过氧化物酶连接,制备了三种结合比的酶标抗原。通过紫外吸收法和直接非竞争ELISA法对酶标抗原的偶联结果和抗原性进行鉴定。最终选择结合比为1.3∶1的酶标抗原建立直接竞争ELISA检测... 采用活性酯法将半抗原玉米赤霉醇-16-羧丙基醚与辣根过氧化物酶连接,制备了三种结合比的酶标抗原。通过紫外吸收法和直接非竞争ELISA法对酶标抗原的偶联结果和抗原性进行鉴定。最终选择结合比为1.3∶1的酶标抗原建立直接竞争ELISA检测方法。并对建立的直接竞争ELISA(DC-ELISA)与间接竞争ELISA(IC-ELISA)方法在检出限、检测线性范围、检测时间和二抗的使用方面进行了比较。 展开更多
关键词 玉米赤霉醇 酶标抗原 酶联免疫吸附试验(elisa)
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牛组织中阿维菌素残留的ELISA研究 被引量：20
17
作者 李俊锁 钱传范 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期77-83,共7页
本文探讨了检测牛组织（血浆、肌肉和肝）中阿维菌素（ＡＶＭ）残留的间接竞争ＥＬＩＳＡ反应条件和样本前处理方法，并对添加样本进行了测定。竞争反应可耐受２０％（ｖ／ｖ）的甲醇。使用４″－Ｏ－（单）琥珀酰ＡＶＭ－ＯＶＡ和５－... 本文探讨了检测牛组织（血浆、肌肉和肝）中阿维菌素（ＡＶＭ）残留的间接竞争ＥＬＩＳＡ反应条件和样本前处理方法，并对添加样本进行了测定。竞争反应可耐受２０％（ｖ／ｖ）的甲醇。使用４″－Ｏ－（单）琥珀酰ＡＶＭ－ＯＶＡ和５－Ｏ－（单）琥珀酰ＡＶＭ－ＯＶＡ作包被原，ＡＶＭ标准液的Ｉ５０＝１．８～４．０ｎｇ／ｍＬ，检测极限为０．０２～０．２ｎｇ／ｍＬ。样本经甲醇一次提取和稀释后直接进行检测，各样本介质中ＡＶＭ的Ｉ５０＝３．６～３０．２ｎｇ／ｍＬ，样本检测极限为０．１～０．６μｇ／ｋｇ。在６．０～６０．０μｇ／ｋｇ添加浓度范围内，回收率（％）＝８７．９～１０８．８（９５．０±８．０），变异系数（ＣＶ．％）＝２．８～１６．９（１０．０±５．２）。本方法适宜对大批量样本进行快速检测。 展开更多
关键词 牛 阿维菌素 组织残留 酶联免疫吸附 残留
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马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究 Ⅱ 免疫亲合色谱—酶联免疫吸附法(IAC—ELISA) 被引量：5
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作者 沈建忠 钱传范 +1 位作者 江海洋 杨汉春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期548-553,共6页
本文首次报道ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ方法测定鸡组织中马杜霉素的残留。制备针对马杜霉素的特异性抗体ＩｇＧ和高容量ＩＡＣ柱（Ｉ柱动态柱容量为７ １６０ｎｇ·ｍｌ－ １ｇｅｌ，Ⅱ柱为３ ７５０ｎｇ·ｍｌ－ １ｇｅｌ） 。组织... 本文首次报道ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ方法测定鸡组织中马杜霉素的残留。制备针对马杜霉素的特异性抗体ＩｇＧ和高容量ＩＡＣ柱（Ｉ柱动态柱容量为７ １６０ｎｇ·ｍｌ－ １ｇｅｌ，Ⅱ柱为３ ７５０ｎｇ·ｍｌ－ １ｇｅｌ） 。组织样品用甲醇提取，经ＩＡＣ柱分离纯化，ＥＬＩＳＡ检测，即ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ 方法。本试验揭示，以组织样本提取纯化稀释液为介质制备的标准曲线（Ｉ５０ 为３３３ ～３７１ｎｇ·ｍｌ－ １ ，斜率为１９５ ～２２０ ，检测极限为１０ ～２８ｎｇ·ｇ－ １） ，其Ｉ５０ 值和斜率与以ＰＢＳＴ－ １０ ％ 甲醇为介质的标准曲线相符，实际ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ检测时，各组织的标准曲线可用后者代替，使操作大为简化、实用。各组织添加马杜霉素３００ ～１２０ ．０μｇ·ｋｇ － １ 水平下，测得样本回收率为７６４ ％ ～１０９ ．０ ％ ，变异系数为３８ ％ ～１６ ．４ ％ 。结果证明了该方法的可靠性。本文建立的ＩＡＣ—ＥＬＩＳＡ法是目前国内外唯一报道的最简便、灵敏的马杜霉素残留检测方法。 展开更多
关键词 马杜霉素 免疫亲合色谱 elisa 肉鸡 残留分析
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鸡肝脏和肌肉组织中常山酮残留的ELISA检测 被引量：5
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作者 吴宁鹏 杜向党 沈建忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期597-602,共6页
将常山酮进行人工改造,制备了半抗原常山酮琥珀酸衍生物（Hal-suc）.采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将半抗原与牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）偶联,制备免疫原和包被原.动物免疫6次后采血制备抗血清,以间接ELISA法测定血清效价... 将常山酮进行人工改造,制备了半抗原常山酮琥珀酸衍生物（Hal-suc）.采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将半抗原与牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）偶联,制备免疫原和包被原.动物免疫6次后采血制备抗血清,以间接ELISA法测定血清效价,测得抗血清的最佳工作浓度为1∶102 400.建立了常山酮在鸡肝脏和肌肉组织中检测的ELISA法,该方法在50、100、500 ng/g 的添加浓度水平下,在鸡肝脏和肌肉组织中测得的平均回收率范围分别为74.2%～96.8%和74.3%～90.0%,检测限分别为28和19 ng/g. 展开更多
关键词 常山酮 鸡肝脏 鸡肌肉 残留 酶联免疫吸附测定法
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高灵敏间接竞争ELISA检测羊乳样本中的牛乳成分 被引量：3
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作者 王士峰 张世伟 +3 位作者 赖心田 冯荣虎 伍聪 杨国武 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期41-43,46,共4页
建立可检测羊乳中掺伪牛乳的间接竞争ELISA方法。通过用牛β-酪蛋白免疫小鼠,制备可特异识别牛乳酪蛋白的单克隆抗体3B9。基于此抗体建立的ELISA的IC50值为92.8 ng/m L牛奶蛋白,理论最低检测限0.35 ng/m L,相对标准偏差小于12%。该方法... 建立可检测羊乳中掺伪牛乳的间接竞争ELISA方法。通过用牛β-酪蛋白免疫小鼠,制备可特异识别牛乳酪蛋白的单克隆抗体3B9。基于此抗体建立的ELISA的IC50值为92.8 ng/m L牛奶蛋白,理论最低检测限0.35 ng/m L,相对标准偏差小于12%。该方法也适用于检测高温高压处理的乳制品,加之操作简单高效,适合大规模高通量样品筛查及羊乳样本中牛奶蛋白半定量分析。 展开更多
关键词 羊乳 掺假 牛奶 单克隆抗体 酶联免疫分析 elisa
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