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不同表达条件对Eimeria tenella丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响 被引量:7
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作者 孙铭飞 覃宗华 +5 位作者 谢明权 袁建丰 吕敏娜 余劲术 吴彩艳 蔡建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1158-1165,共8页
为探讨不同原核表达载体、不同表达温度对重组表达Eimeria tenella丙二酸单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响,以生物信息学技术预测的E.tenellaⅡ型脂肪酸合成代谢途径中的丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶(Et-MCAT)编码序列为基础,分别设计引物... 为探讨不同原核表达载体、不同表达温度对重组表达Eimeria tenella丙二酸单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响,以生物信息学技术预测的E.tenellaⅡ型脂肪酸合成代谢途径中的丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶(Et-MCAT)编码序列为基础,分别设计引物扩增完整ORF,采取截除信号肽而保留转导肽以及切除信号肽和转导肽的不同策略,选择pMAL-c2x、pET-32a(+)和pProExHTa3种不同表达载体分别构建重组表达质粒,转化大肠杆菌Rosseta(DE3)后,在不同条件下诱导表达,利用酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶联系统测定表达产物的酶活性,以评价不同表达策略对表达效果和表达产物活性的影响。表达水平和酶活性分析结果显示,惟切除信号肽和转导肽后的功能蛋白编码区能表达,Rosseta(DE3)/pMAL-c2x-mcat体系的可溶性表达量高于Rosseta(DE3)/pET-32a(+)-mcat,但二者表达产物的酶活性相似,且均随着诱导温度的降低其可溶性蛋白表达量增加。但Rosseta(DE3)/pProExHTa-mcat体系仅能表达不溶性蛋白,且复性后无酶活性,改变诱导温度对表达效果无明显影响。结果表明不同表达载体和诱导温度对大肠杆菌所表达EtMCAT的活性及其表达形式有显著影响,其中融合标签和表达温度可能是主要的影响因素,包涵体表达的重组酶即使复性处理仍难达到酶活性分析的要求。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶 表达载体 酶活性
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球安等药物抗Eimeria tenella的效力 被引量:9
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作者 聂奎 姚琼 +1 位作者 蒋明斌 周荣琼 《动物医学进展》 CSCD 2000年第1期50-52,共3页
将 1日龄罗曼公雏于无球虫条件下饲养至 1 3日龄时随机分组 ,按组分别投予球安 ( Avatec,含 2 5 % L asalocid) 1 2 5 mg/ kg。球佳 (含 2 % Diclazuril) 1 mg/ kg,加福( Cygro,含 1 % Maduramycin) 5 mg/ kg和球净 ( Necoxine,含 2 5 %... 将 1日龄罗曼公雏于无球虫条件下饲养至 1 3日龄时随机分组 ,按组分别投予球安 ( Avatec,含 2 5 % L asalocid) 1 2 5 mg/ kg。球佳 (含 2 % Diclazuril) 1 mg/ kg,加福( Cygro,含 1 % Maduramycin) 5 mg/ kg和球净 ( Necoxine,含 2 5 % Nicabazine和 1 .6 %Ethopabata) 1 2 5 mg/ kg,并设立不给药不感染、不给药感染对照组。给药后第 3d,除不给药不感染对照组的鸡只外 ,其余全部试验鸡每只分别接种 E.tenella孢子化卵囊 1× 1 0 5个 ,根据各组鸡的存活率、相对增重率、盲肠病变计分、血便记分和抗球虫指数对 4种药物进行药物疗效判定。试验结果表明 :球安、球佳为高效抗球虫药 ,其存活率都达 1 0 0 % ,相对增重率分别为 1 0 3.1 2 5和 92 .5 ,平均血便记分为 0 .0 2和 0 .0 1 ,病变值 8.75和 6 .75 ,抗球虫指数 1 89.375和 1 80 .75 ;而加福和球净虽对雏鸡保护率为 1 0 0 % ,但血便和肠组织病变严重 ,抗球虫指数仅为 99.2 5和1 0 5 .75 ,表明抗球虫无效。 展开更多
关键词 球安 抗球虫药 疗效试验 鸡球虫病
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柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)小配子发育超微结构的观察
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作者 安健 汪明 +1 位作者 孔繁瑶 殷佩云 《北京农学院学报》 2000年第4期19-23,共5页
利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫小配子发育的超微结构进行了观察 小配子母细胞和大配子母细胞于相邻的宿主细胞内相伴产生 ,系由末代裂殖子侵入后 ,长大变圆而形成 小配子的形成为直接分化型 首先细胞核分裂为多个 ,随后细胞核向周边... 利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫小配子发育的超微结构进行了观察 小配子母细胞和大配子母细胞于相邻的宿主细胞内相伴产生 ,系由末代裂殖子侵入后 ,长大变圆而形成 小配子的形成为直接分化型 首先细胞核分裂为多个 ,随后细胞核向周边移动 ,随之近核处限制膜外突 ,临近处限制膜下陷 中心粒在核上方形成并发育为基粒、鞭毛中的微管和附着微管 ,早期形成的小配子仍与小配子母细胞的残体相连 成熟小配子与残体分离 ,外型呈香蕉状 ,外被单位膜 ,内有一电子结构十分致密的细胞核 ,核头端侧面有一个巨大线粒体 ,小配子有鞭毛 2根 ,每根鞭毛内有微管 ,为 9+2结构 ,附着微管至少 6根 。 展开更多
关键词 球虫 柔嫩艾美耳球虫 小配子 超微结构
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Analysis for Pathogenicity and Development of Transgenic Eimeria tenella Expressing both Yellow Fluorescent Protein and TgDHFR-TS Genes
4
作者 YAN Wen-chao WANG Tian-qi +4 位作者 SUO Xun HAN Li-fang DING Ke DONG Fa-ming ZHANG Long-xian 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期93-96,共4页
In order to determine the effect of foreign genes on a transgenic parasite,the pathogenicity and development in chickens of transgenic E.tenella strain TE1,which expresses yellow fluorescent protein (YFP) and dihydrof... In order to determine the effect of foreign genes on a transgenic parasite,the pathogenicity and development in chickens of transgenic E.tenella strain TE1,which expresses yellow fluorescent protein (YFP) and dihydrofolate reductase thymidylate synthase derived from Toxoplasma gondii(TgDHFR-TS), were compared with that of the parental strain BJ.Results indicated that the fecundity of the transgenic parasite(TE1) was reduced at least 4 times relative to that of the BJ strain.Low dosage of the TE1 strain induced less pathogenesis in chickens than did the BJ strain,but chickens inoculated with a higher dosage of TE1 oocysts displayed severe pathogenicity and mortality as did the BJ strain.In addition,trophozoites, the first generation and the second generation meronts and merozoites,microgamonts and macrogamonts of the transgenic parasite TE1 were seen by fluorescence microscopy.More interestingly,not all four sporonts in the sporulating transgenic oocysts express YFP.These findings suggest that the expression of YFP and TgDHFR-TS genes to some extent reduced pathogenicity and reproductive potential of transgenic E.tenella.Recombination between homologous or non-homologous chromosomes occurred during zygotic meiosis in E.tenella strain TE1. 展开更多
关键词 eimeria tenella TRANSFECTION FECUNDITY PATHOGENICITY live vaccine vector
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柔嫩艾美耳球虫感染对黄羽肉鸡生产性能、免疫器官和肠道形态的影响
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作者 董理月 范作堃 +7 位作者 唐美慧 汤建强 于海亮 张涛 张跟喜 谢恺舟 赵振华 戴国俊 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1263-1271,共9页
【目的】探究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染对黄羽肉鸡生产性能、免疫器官及盲肠肠道形态结构的影响。【方法】7个半同胞家系黄羽肉鸡在感染柔嫩艾美耳球虫后,根据球虫敏感性指标筛选出抗性和易感家系,组成抗性组和易感组,分别... 【目的】探究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染对黄羽肉鸡生产性能、免疫器官及盲肠肠道形态结构的影响。【方法】7个半同胞家系黄羽肉鸡在感染柔嫩艾美耳球虫后,根据球虫敏感性指标筛选出抗性和易感家系,组成抗性组和易感组,分别在感染期和恢复期比较分析不同抗性组间的生产性能、免疫器官和肠道形态结构的差异。【结果】无论是感染期还是恢复期,抗性与易感鸡平均体重和平均日增重均极显著低于对照组(P<0.01),料重比均极显著高于对照组(P<0.01)。在感染的不同时期,抗性组、易感组和对照组鸡胸腺、脾脏等7种免疫器官指数均差异不显著(P>0.05),但恢复期免疫器官指数高于感染期。此外,感染期抗性组与易感组鸡均出现盲肠黏膜坏死,肌层不完整、断裂等病理变化,易感组鸡盲肠上皮可见球虫配子;而恢复期抗性组鸡盲肠组织结构逐渐恢复至正常,易感组鸡盲肠组织各层结构仍呈现明显变性或坏死。【结论】无论处于感染期还是恢复期,感染柔嫩艾美耳球虫后抗性或易感鸡的生产性能均降低且肠道形态发生改变,但处于恢复期时,抗性鸡能逐渐恢复至健康状态,而易感鸡盲肠则出现不可逆的损伤。本研究结果为深入探究柔嫩艾美耳球虫感染恢复后对鸡的生产性能和肠道的影响提供了参考。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 黄羽肉鸡 抗性 生产性能 肠道形态
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复方中药和西药单独及联合用药对鸡E.tenella的疗效研究 被引量:4
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作者 都业良 刘焕奇 +2 位作者 李迎梅 肖永霞 邹明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第13期5992-5993,共2页
[目的]为防治鸡球虫病提供合理的用药方案。[方法]以1日龄健康AA肉仔鸡为试验动物,复方中药(青蒿、常山、仙鹤草、地榆炭、当归等按一定比例合成。)和盐霉素(西药)为供试药品,对肉仔鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫,然后将供试药物按一定剂量... [目的]为防治鸡球虫病提供合理的用药方案。[方法]以1日龄健康AA肉仔鸡为试验动物,复方中药(青蒿、常山、仙鹤草、地榆炭、当归等按一定比例合成。)和盐霉素(西药)为供试药品,对肉仔鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫,然后将供试药物按一定剂量拌入鸡饲料,研究复方中药和西药单独及联合用药对鸡球虫病的防治效果。[结果]盐霉素组、0.50%、0.25%、0.10%和0.05%复方中药组的抗球虫指数和鸡存活率分别为124.51、113.55、138.74、146.70、117.03和80.00%、70.00%、83.33%、86.67%、66.67%,2组中西药结合组的抗球虫指数分别为136.44和131.11。[结论]0.1%复方中药的抗球虫效果最好,且优于常用抗球虫药物盐霉素,而中、西药联合用药并无明显的抗球虫效果。 展开更多
关键词 复方中药 柔嫩艾美耳球虫 抗球虫指数
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氢溴酸常山酮对鸡柔嫩艾美耳球虫的防治试验研究
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作者 张勇 庄皓翔 +1 位作者 何成华 孙卫东 《现代畜牧科技》 2025年第1期22-26,共5页
鸡球虫病是寄生在鸡肠道的一种常见疾病,对全世界的养鸡业造成重大的危害。艾美耳虫球虫通过感染肠道上皮并引起病变而破坏肠道完整性,最终使受感染鸡表现出营养吸收和利用不良,造成生长性能降低,免疫功能下降引发继发性疾病增加。该研... 鸡球虫病是寄生在鸡肠道的一种常见疾病,对全世界的养鸡业造成重大的危害。艾美耳虫球虫通过感染肠道上皮并引起病变而破坏肠道完整性,最终使受感染鸡表现出营养吸收和利用不良,造成生长性能降低,免疫功能下降引发继发性疾病增加。该研究以致病力强、危害严重的柔嫩艾美耳球虫为研究对象,观察鸡攻虫后氢溴酸常山酮防治效果。试验结果表明,与阳性对照组的相对增重率57.67%相比,药物防治组相对增重率高达84.92%,有显著提高。同时,药物防治组较阳性对照组的盲肠病变计分、盲肠内容物触片中卵囊数量明显降低,盲肠组织的病变程度明显减轻。这表明氢溴酸常山酮有较好的防治柔嫩艾美耳球虫的效果。这些试验结果为临床上鸡球虫病的防控提供了新的思路和方案。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 防治效果 研究
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鸡球虫重组蛋白rEnApiAP2对鸡免疫保护效果的观察 被引量:2
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作者 王乐乐 王礼跃 +9 位作者 蔡为民 康喜龙 冯茜茜 张知之 范雪莲 朱玉 刘丹丹 许金俊 潘志明 陶建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1716-1727,共12页
将毒害艾美耳球虫重组蛋白rEnApiAP2单独免疫(单免)或分别与柔嫩艾美耳球虫重组蛋白rEtGAM56或rEtGAM59联合免疫(联免)雏鸡,同时设rEtGAM56单免、rEtGAM59单免、未免疫攻虫和空白组为对照,分别攻毒害艾美耳球虫或柔嫩艾美耳球虫,以成活... 将毒害艾美耳球虫重组蛋白rEnApiAP2单独免疫(单免)或分别与柔嫩艾美耳球虫重组蛋白rEtGAM56或rEtGAM59联合免疫(联免)雏鸡,同时设rEtGAM56单免、rEtGAM59单免、未免疫攻虫和空白组为对照,分别攻毒害艾美耳球虫或柔嫩艾美耳球虫,以成活率、排出血便数、平均增重、相对增重率、病变记分、卵囊减少率、抗球虫指数(ACI)和血清抗体水平为指标,评价rEnApiAP2单免及与rEtGAM联免的免疫保护效果。结果显示:各试验组的成活率均为100%;与未免疫攻虫组比较,各免疫组鸡排血便堆数减少、平均增重增加。在rEnApiAP2单免组间,低剂量组的相对增重率(82.36%)、卵囊减少率(73.88%)和抗球虫指数(155.26)均为最高,平均病变记分最低(1.71)。攻毒害艾美耳球虫后,联免组的ACI值均大于相应的单免组,其中rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(169.83)最高。攻柔嫩艾美耳球虫后,rEnApiAP2单免组的ACI值(128.37)低于rEtGAM56、rEtGAM59单免组(130.12、151.88),rEnApiAP2与rEtGAM59联免组的ACI值(141.62)接近于rEtGAM59单免组,rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(115.46)小于rEtGAM56单免组。各免疫组血清抗体水平均显著高于空白对照组(P<0.05)。rEnApiAP2对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护效果,与rEtGAM联免可提高对毒害艾美耳球虫的免疫保护力。本研究结果为鸡球虫病重组亚单位疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 柔嫩艾美耳球虫 rEnApiAP2 rEtGAM 保护效果
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柔嫩艾美耳球虫莫能菌素耐药株筛选及其与敏感株基因组SNP密度分布差异分析
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作者 顾小龙 薛毅 +6 位作者 方素芳 班成怿 施宇博 杨舰航 杜芳辰 齐珍珍 崔平 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5108-5116,共9页
【目的】明确莫能菌素耐药虫株与敏感虫株在基因水平的差异,进而解析莫能菌素耐药性产生的分子机制。【方法】通过模拟田间感染的方式诱导柔嫩艾美耳球虫对莫能菌素的耐药性。第1次诱导试验,将400只14日龄无球虫鸡平均分为2组,分别为Ⅰ... 【目的】明确莫能菌素耐药虫株与敏感虫株在基因水平的差异,进而解析莫能菌素耐药性产生的分子机制。【方法】通过模拟田间感染的方式诱导柔嫩艾美耳球虫对莫能菌素的耐药性。第1次诱导试验,将400只14日龄无球虫鸡平均分为2组,分别为Ⅰ组(接种不加药组)和Ⅱ组(莫能菌素推荐剂量组),按照100 mg/kg在基础饲粮中添加莫能菌素。从Ⅰ组中随机选择10只鸡,接种对莫能菌素敏感的柔嫩艾美耳球虫豪顿株,剂量为5000卵囊/鸡。自接种后8 d开始,将Ⅰ组新鲜粪便抛洒到Ⅱ组垫料上模拟球虫田间感染,连续抛洒17 d。接种后33 d,随机剖检Ⅱ组10只鸡,收集盲肠内卵囊。第2次诱导试验,将100只14日龄无球虫鸡作为Ⅲ组(莫能菌素高剂量组),按照133 mg/kg在饲料中添加莫能菌素,随机选择10只鸡接种收集的卵囊,剂量为5000卵囊/鸡。接种后17 d,莫能菌素添加量提高至400 mg/kg。接种后27 d,收集盲肠卵囊。以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和最适抗球虫活性百分率(POAA)四项指标综合判定诱导株的耐药性。提取耐药株或敏感株孢子化卵囊基因组并进行基因组重测序,通过单核苷酸多态性(SNP)密度分布解析耐药株与敏感株之间的差异。【结果】第1次诱导试验,接种后33 d获得耐100 mg/kg莫能菌素的卵囊(1×莫能菌素诱导株)。第2次诱导试验,接种后27 d获得耐400 mg/kg莫能菌素的卵囊(4×莫能菌素诱导株)。4×莫能菌素诱导株的ACI为121,POAA为25.4%,RLS为33%,POP为64%。与参考基因组相比,敏感株基因组SNP共12191个,耐药株基因组SNP共74931个,耐药株在第11号染色体3.3~4.2 Mb区间内SNP富集分布,该区间内3个基因ETH2_1113700、ETH2_1113500和ETH2_1113600的SNP位于编码区。【结论】本研究获得了对莫能菌素完全耐药的柔嫩艾美耳球虫耐药株。在第11号染色体,耐药株与敏感株的SNP分布具有显著差异,筛选到3个耐药候选基因。 展开更多
关键词 球虫病 柔嫩艾美耳球虫 莫能菌素 耐药性 SNP密度
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常山散对雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的防治效果 被引量:2
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作者 王贺 郭志廷 +6 位作者 李建喜 张景艳 王磊 张康 孙继文 尚小粉 马永华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1278-1289,共12页
旨在研究中药常山散对雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段抗球虫效果和免疫功能的影响。试验设置6大组,分别为攻虫前1天、攻虫当天、第2天、第3天、第4天和第5天给药时间点设计组,每个设计组包括3个处理组,分别为Ⅰ组(健康对照组)和Ⅱ... 旨在研究中药常山散对雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段抗球虫效果和免疫功能的影响。试验设置6大组,分别为攻虫前1天、攻虫当天、第2天、第3天、第4天和第5天给药时间点设计组,每个设计组包括3个处理组,分别为Ⅰ组(健康对照组)和Ⅱ组(感染对照组),饲喂基础饲粮;Ⅲ组(常山散推荐剂量组),按照0.1g·kg^(-1)在基础饲粮中拌料饲喂,连续给药4 d,每组10只鸡,共180只。16日龄时,Ⅱ组和Ⅲ组每只鸡口服5×10^(4)个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊。结果表明:与Ⅰ组相比,Ⅲ组的日均增重(average dialy gain, ADG)在球虫发育前期(攻虫前1天、攻虫当天)差异不显著(P>0.05),发育后期显著降低(P<0.05),Ⅱ组在球虫发育的整个时期ADG均显著降低(P<0.05),降低幅度大于Ⅲ组。与Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组的日均采食量(average daily feed intake, ADFI)有所下降,其中Ⅱ组下降最为明显,Ⅲ组有所改善。与Ⅱ组相比,中药常山散显著(P<0.05)降低感染雏鸡每克粪便卵囊数(oocysts per gram, OPG)。球虫感染破坏盲肠黏膜的完整性,使盲肠肌膜增厚。中药常山散可减轻球虫感染引起的肠黏膜损伤。与Ⅱ组相比,饲粮中添加常山散可降低盲肠病变评分(P<0.05)。攻虫前1天、攻虫当天和第2天试验组中Ⅲ组的抗球虫指数(anticoccidial index, ACI)分别为198.83、190.23、165.49,攻虫第3、4和5天试验组中Ⅲ组的ACI分别为150.53、155.00和146.18,说明在球虫发育的前期给药,常山散具有良好的抗球虫效果,后期随着球虫在鸡体内的发育,常山散的治疗效果降低。与Ⅱ组相比,常山散增加血液中免疫球蛋白IgA、IgM、IgG含量,提高脾脏指数和法氏囊指数。综上所述,常山散可改善感染雏鸡的生长性能,显著降低感染雏鸡OPG和盲肠病变评分,增强感染雏鸡免疫功能。 展开更多
关键词 中药 常山散 柔嫩艾美耳球虫
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“复方常青”对鸡柔嫩艾美耳球虫感染的疗效 被引量:1
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作者 杜鹏 杨佳佳 +4 位作者 向万江 王艺舟 罗天麻 鲜思美 王碧 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期128-133,共6页
为探究基于网状Meta分析配制出的中药组方“复方常青”对鸡柔嫩艾美耳球虫病的治疗效果,将180只黄羽肉鸡随机分为6组,分别为复方常青高、中、低剂量组(A、B、C),地克珠利组(D),不攻虫也不给药的阴性对照组(E)和攻虫不给药的阳性对照组(F... 为探究基于网状Meta分析配制出的中药组方“复方常青”对鸡柔嫩艾美耳球虫病的治疗效果,将180只黄羽肉鸡随机分为6组,分别为复方常青高、中、低剂量组(A、B、C),地克珠利组(D),不攻虫也不给药的阴性对照组(E)和攻虫不给药的阳性对照组(F)。除E组外,雏鸡在15日龄灌服1×10^(5)个球虫孢子化卵囊以构建感染模型;A、B、C组以中药原药兑水给药,给药浓度分别为5、2.5、1 mL/L,D组以地克珠利溶液1 mL/L兑水给药,并从18日龄起连续治疗5 d。通过增重情况、料肉比、盲肠病变、每克盲肠内容物卵囊数、存活率、抗球虫指数及细胞因子稳态来评价药物治疗效果。结果显示,A组对感染雏鸡增加体重、减轻盲肠病变、减少每克盲肠内容物卵囊数及提高存活率的作用优于其他治疗组,所获得的抗球虫指数最高(>180);B组对细胞因子IL-17、IL-10平衡作用优于其他治疗组。表明复方常青中药组方可有效的治疗鸡柔嫩艾美耳球虫病。 展开更多
关键词 复方常青 地克珠利 柔嫩艾美耳球虫 抗球虫指数
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鸡柔嫩艾美耳球虫2种假定致密颗粒蛋白基因的克隆与表达
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作者 李天恩 周思含 +3 位作者 孙洪超 付媛 石团员 闫文朝 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期503-514,共12页
柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是一种严重危害养鸡业健康发展的高致病性原虫,致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)是顶复合器门原虫胞内寄生重要功能蛋白,具有较高的免疫学应用价值,然而目前尚未有关于球虫致密颗粒蛋白的确... 柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是一种严重危害养鸡业健康发展的高致病性原虫,致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)是顶复合器门原虫胞内寄生重要功能蛋白,具有较高的免疫学应用价值,然而目前尚未有关于球虫致密颗粒蛋白的确切报道。为发掘柔嫩艾美耳球虫GRAs并研究其功能,采用生物信息学、分子生物学、免疫学等技术从E.tenella北京株中鉴定到2种假定致密颗粒蛋白(hypothetical dense granule protein,hEtGRA)hEtGRA12、hEtGRA9,并用纯化后的蛋白分别免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA、Western blot方法检测2种蛋白的抗原性。分子克隆结果表明,hEtGRA 12、hEtGRA 9基因编码区长度分别为1188、1110 bp,分别编码395、369个氨基酸,与其他顶复合器门原虫致密颗粒蛋白GRA12、GRA9物种间相似性分别为28.8%~39.6%、27.5%~29.5%;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9条带大小分别为63.6、67.0 ku;ELISA与Western blot结果表明,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9均能诱导小鼠产生较高的抗体水平,且均可被鸡抗E.tenella阳性血清识别,表明具有较好的抗原性。该研究鉴定到2种球虫假定致密颗粒蛋白基因hEtGRA 12、hEtGRA 9,获得了重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9,为球虫致密颗粒蛋白基因功能和免疫应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 假定致密颗粒蛋白 原核表达 多克隆抗体 抗原性
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分泌表达柔嫩艾美耳球虫EtMIC2重组枯草芽孢杆菌的构建与抗体检测
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作者 邓瑞鹏 龚海燕 +2 位作者 兰卓 陈兆国 王春仁 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第6期72-78,133,共8页
鸡球虫病是一种严重危害养鸡业生产的流行性肠道寄生原虫病,可造成严重的经济损失。目前,应用抗球虫药是防治球虫病的主要手段,但随着抗药性和环境污染等问题的出现,抗球虫疫苗的研究成为防控球虫病的热点。柔嫩艾美耳球虫是鸡球虫病的... 鸡球虫病是一种严重危害养鸡业生产的流行性肠道寄生原虫病,可造成严重的经济损失。目前,应用抗球虫药是防治球虫病的主要手段,但随着抗药性和环境污染等问题的出现,抗球虫疫苗的研究成为防控球虫病的热点。柔嫩艾美耳球虫是鸡球虫病的主要病原,因此,研究旨在通过芽孢杆菌表达系统,构建能够分泌表达柔嫩艾美耳球虫微线体蛋白2(Eimeria tenella isolate microneme protein 2,EtMIC2)重组枯草芽孢杆菌菌株,为研发新型鸡球虫疫苗奠定基础。首先,采用PCR及质谱分析方法鉴定食用性及饲用性菌株,然后从柔嫩艾美耳球虫基因组中扩增EtMIC2基因,通过无缝克隆技术将其克隆至pBE2-R质粒中,构建重组质粒pBE2-R-EtMIC2,并采用冰浴转化将重组质粒分别整合至两株枯草芽孢杆菌中,最后采用PCR、SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。将重组菌株饲喂雏鸡,免疫7 d后初步检测抗体效价。结果表明:EtMIC2基因克隆成功,且成功整合于饲用性枯草芽孢杆菌基因组,目的蛋白正确表达,并分泌至胞外,将重组菌株饲喂给雏鸡后,血液中检测出EtMIC2抗体。研究成功构建了分泌表达柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的重组枯草芽孢杆菌,且重组菌株能刺激动物产生抗体,可用于后续的抗球虫免疫保护性试验。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 枯草芽孢杆菌 EtMIC2 分泌表达 抗体检测
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发酵中药复方制剂对鸡柔嫩艾美尔球虫病的疗效研究
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作者 陈雷 孙国波 +2 位作者 段会勇 陈甜甜 赵京岚 《中国兽药杂志》 2024年第9期65-70,共6页
探讨发酵中药对鸡柔嫩艾美尔球虫病的防治效果。将210只海蓝褐蛋公鸡随机分成7组,分别为对照组、模型组、西药组及0.5‰、1‰、2‰、4‰发酵中草药组。攻毒柔嫩艾美尔球虫卵囊,对鸡只灌胃中药后,观察发病情况。同时根据成活率、相对增... 探讨发酵中药对鸡柔嫩艾美尔球虫病的防治效果。将210只海蓝褐蛋公鸡随机分成7组,分别为对照组、模型组、西药组及0.5‰、1‰、2‰、4‰发酵中草药组。攻毒柔嫩艾美尔球虫卵囊,对鸡只灌胃中药后,观察发病情况。同时根据成活率、相对增重率、OPG值、抗球虫指数、血清免疫等指标,对发酵中草药治疗鸡球虫病的效果进行评价。2‰发酵中药组鸡成活率100%,相对增重率为92.95%,OPG值为3.46,ACI为169.95,而西药组成活率96.7%,相对增重率为86.95%,OPG值2.18,ACI为154.62。另外2‰发酵中药组可以显著提高鸡的IgG含量和IL-12含量,提高免疫力。2‰发酵中草药组在7个试验组中抗柔嫩艾美尔球虫病效果最好。 展开更多
关键词 发酵 中药复方 柔嫩艾美尔球虫 防治 免疫
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鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析
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作者 倪君丽 刘欣超 +7 位作者 孙栋 方肆云 王定爱 申翰钦 严专强 戚南山 孙铭飞 顾有方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5159-5172,共14页
为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其... 为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位,分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA,通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因,构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven;将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达;以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化,间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven,RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达,质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后,检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达,其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明,pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功,在鸡体内有良好的免疫原性,为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 多表位重组质粒 真核表达 DNA疫苗
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复方中药制剂青常颗粒对鸡球虫病的防治效果研究
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作者 陈润山 徐进 +9 位作者 王宁 何斌 邵志勇 夏琴 杨文海 陈夏冰 刘维 曹锐格 段俊 吴利军 《中兽医医药杂志》 CAS 2024年第4期26-31,F0002,共7页
探究复方中药制剂青常颗粒对鸡球虫病的防治效果。试验选取180只1日龄健康的海兰灰雏鸡,随机分为健康对照组(A组)、球虫感染组(B组)、青常颗粒低剂量组(C组)、青常颗粒中剂量组(D组)、青常颗粒高剂量组(E组)、化药对照组(F组),每组3个重... 探究复方中药制剂青常颗粒对鸡球虫病的防治效果。试验选取180只1日龄健康的海兰灰雏鸡,随机分为健康对照组(A组)、球虫感染组(B组)、青常颗粒低剂量组(C组)、青常颗粒中剂量组(D组)、青常颗粒高剂量组(E组)、化药对照组(F组),每组3个重复,每个重复10只鸡,试验鸡15日龄时人工感染5×10~4个孢子化的柔嫩艾美耳球虫卵囊,感染8 d后将试验鸡剖检,观察并测定雏鸡存活率、相对增重率、盲肠病变值、球虫卵囊值、免疫器官指数和盲肠组织病理变化,通过计算抗球虫指数来评价青常颗粒对鸡球虫病的防治效果。结果表明,青常颗粒高剂量组雏鸡存活率、相对增重率和免疫器官指数显著高于球虫感染组(P<0.05),而球虫卵囊值和盲肠病变值显著低于球虫感染组(P<0.05);青常颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组的ACI分别为125.81、157.22和173.45,盲肠组织病理观察显示青常颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组总体病理变化轻于球虫感染组。结果提示青常颗粒对鸡球虫病具有良好的防治效果。 展开更多
关键词 中药制剂 柔嫩艾美耳球虫 鸡球虫病 抗球虫指数
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不同杀虫剂对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化的影响
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作者 何熙 徐清华 +2 位作者 庄皓翔 何成华 孙卫东 《现代畜牧科技》 2024年第9期9-13,共5页
为了解不同杀虫剂对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化的影响,为鸡球虫病的防治提供参考。试验采用不同浓度的大灭25CS(1∶50、1∶100)、保安定500EC(1∶2500、1∶5000)、大灭G 15.1%ZC(1∶100、1∶200)、剑心200SC(1∶800、1∶1600)分别对鸡... 为了解不同杀虫剂对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化的影响,为鸡球虫病的防治提供参考。试验采用不同浓度的大灭25CS(1∶50、1∶100)、保安定500EC(1∶2500、1∶5000)、大灭G 15.1%ZC(1∶100、1∶200)、剑心200SC(1∶800、1∶1600)分别对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊作用24、48 h,观察其对球虫卵囊孢子化的影响。结果表明,不同杀虫剂对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊的孢子化均有一定的抑制作用,但其抑制作用随着时间的推移有所减弱;不同杀虫剂使鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的外观结构出现皱褶、凹陷等变化。这些试验结果为鸡柔嫩艾美耳球虫病的预防提供了新的思路。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 杀虫剂 卵囊
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5株柔嫩艾美耳球虫对4种抗球虫药的抗药性 被引量:30
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作者 顾有方 郭广富 陈会良 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期727-730,共4页
选择260只19日龄雏鸡,随机分成26组,每组10只,研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)南京株、凤阳株、扬州株、宣城株和蒙城株对地克珠利(Diclazuril)、马杜霉素(Maduramicin)、氯羟吡啶(Clopidol)、氯苯胍(Robenidine)的抗药性。每株球虫均设... 选择260只19日龄雏鸡,随机分成26组,每组10只,研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)南京株、凤阳株、扬州株、宣城株和蒙城株对地克珠利(Diclazuril)、马杜霉素(Maduramicin)、氯羟吡啶(Clopidol)、氯苯胍(Robenidine)的抗药性。每株球虫均设4个感染用药组、1个感染不用药组,另外设1个不感染不用药组。以POAA、RLS、ROP、ACI作为指标,判定5株球虫对4种药物的抗药性。结果表明凤阳株、扬州株和蒙城株分别仅对马杜霉素、氯苯胍、地克珠利敏感,南京株和宣城株对该4种药物均已产生不同程度的抗药性。提示目前在凤阳、扬州和蒙城地区可分别合理地使用马杜霉素、氯苯胍和地克珠利,对其它药物须减少或暂停使用。 展开更多
关键词 马杜霉素 柔嫩艾美耳球虫 地克珠利 抗球虫药 抗药性 雏鸡 用药 药组 感染 药物
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柔嫩艾美耳球虫氯嗪苯乙氰抗性株与氯羟吡啶抗性株的实验室诱导 被引量:12
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作者 甘德培 汪明 +1 位作者 吴志光 郭建宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期253-258,共6页
在药物浓度递增的情况下 ,经过 10次传代 ,诱导出对 1 2 5mg/kg氯嗪苯乙氰产生抗药性的E .tenella虫株 ,初始诱导浓度为 0 0 7mg/kg ;经过 6次传代 ,诱导出对 150mg/kg氯羟吡啶产生抗药性的E .tenella虫株 ,初始诱导浓度为 75mg/kg。... 在药物浓度递增的情况下 ,经过 10次传代 ,诱导出对 1 2 5mg/kg氯嗪苯乙氰产生抗药性的E .tenella虫株 ,初始诱导浓度为 0 0 7mg/kg ;经过 6次传代 ,诱导出对 150mg/kg氯羟吡啶产生抗药性的E .tenella虫株 ,初始诱导浓度为 75mg/kg。低浓度 (0 12 5mg/kg)氯嗪苯乙氰即具有高效抗球虫作用。在诱导过程中 ,E .tenella一旦对低浓度 (0 0 7mg/kg ,0 12 5mg/kg)氯嗪苯乙氰产生了较为稳定的抗药性 ,诱导过程便进行得很快 ,一步一个台阶 ,即球虫的抗药性突破某一阈值后容易对高一级浓度的药物产生抗药性。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 氯嗪苯乙氰 氯羟吡啶 抗性株 球虫病 实验室诱导 抗球虫药
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柔嫩艾美耳球虫野外抗药性虫株的RAPD分析 被引量:12
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作者 李安兴 蔡建平 +2 位作者 谢明权 吴惠贤 廖翔化 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期299-303,共5页
用RAPD方法对柔嫩艾美耳球虫 (Eimeriatenella)的 8个分别来源于黑龙江、北京、四川、甘肃和广东的中山、新会、东莞以及广州近郊的江村镇的野外分离虫株和 2个药物敏感性虫株进行了遗传多态性分析。同时用 9种抗球虫药物即马杜霉素 (5m... 用RAPD方法对柔嫩艾美耳球虫 (Eimeriatenella)的 8个分别来源于黑龙江、北京、四川、甘肃和广东的中山、新会、东莞以及广州近郊的江村镇的野外分离虫株和 2个药物敏感性虫株进行了遗传多态性分析。同时用 9种抗球虫药物即马杜霉素 (5mg/kg)、盐霉素 (6 0mg/kg)、莫能霉素 (12 0mg/kg)、拉沙菌素 (90mg/kg)、克球多(15 0mg/kg)、常山酮 (3mg/kg)、氯氢苯乙氰 (1mg/kg)、尼卡巴嗪 (12 5mg/kg)和球痢灵 (12 5mg/kg)分别对 8个野外虫株进行抗药性试验 ,8个虫株对上述药物均有不同程度的抗药性。RAPD分析表明 :10个样品都有相似而清晰的主带 ,每个泳道有 5~ 13条带不等 ,大小为 0 18~ 2 10kb。它们之间的相似率 (SI)大于 4 0 5 8% ,最大的为90 72 % ,这种相似率属种内变异水平。根据SI值可把 10个样品划分为 3个类群 :广东虫株类群 ,群内比较 ,平均SI值为 76 6 0 % ;广东省外虫株类群 ,群内比较的平均SI值为 72 14 % ;敏感株类群 ,其间的SI值为 89 2 7%。在另一方面 ,广东株与广东省外株、敏感株之间比较 ,其SI的平均值分别仅为 6 3 0 3%和 4 7 2 5 % 。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 野外抗药性虫株 RAPD分析 鸡球虫
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