鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究 被引量：2

1

作者 蔡建平 谢明权 +3 位作者 卞国志 翁亚彪 覃宗华 叶秀华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期912-917,共6页

给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2～7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以1.2×105个/... 给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2～7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以1.2×105个/鸡的同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、病变计分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果.结果表明,孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种后对鸡胚的孵化率无明显影响,所有接种组在出雏后2～7日龄间均能检获后代卵囊,攻虫后各免疫组的相对增重率由攻虫对照的38%～42.9%提高到73.2%～90.5%,病变计分减少率达50%～74.9%,相对卵囊产量为攻虫对照组的28.1%～60.2%,表明以一定剂量的E. necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种鸡胚,可诱导鸡在出雏后笼养条件下对同源艾美耳球虫的免疫保护力;比较不同剂量、不同胚龄的免疫效果,发现在试验设定条件下于17日胚龄接种8×104个子孢子/胚的效果最好. 展开更多

关键词 鸡 球虫病 毒害艾美耳球虫 鸡胚免疫

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鸡球虫重组蛋白rEnApiAP2对鸡免疫保护效果的观察 被引量：2

2

作者 王乐乐 王礼跃 +9 位作者 蔡为民 康喜龙 冯茜茜 张知之 范雪莲 朱玉 刘丹丹 许金俊 潘志明 陶建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1716-1727,共12页

将毒害艾美耳球虫重组蛋白rEnApiAP2单独免疫(单免)或分别与柔嫩艾美耳球虫重组蛋白rEtGAM56或rEtGAM59联合免疫(联免)雏鸡,同时设rEtGAM56单免、rEtGAM59单免、未免疫攻虫和空白组为对照,分别攻毒害艾美耳球虫或柔嫩艾美耳球虫,以成活... 将毒害艾美耳球虫重组蛋白rEnApiAP2单独免疫(单免)或分别与柔嫩艾美耳球虫重组蛋白rEtGAM56或rEtGAM59联合免疫(联免)雏鸡,同时设rEtGAM56单免、rEtGAM59单免、未免疫攻虫和空白组为对照,分别攻毒害艾美耳球虫或柔嫩艾美耳球虫,以成活率、排出血便数、平均增重、相对增重率、病变记分、卵囊减少率、抗球虫指数(ACI)和血清抗体水平为指标,评价rEnApiAP2单免及与rEtGAM联免的免疫保护效果。结果显示:各试验组的成活率均为100%;与未免疫攻虫组比较,各免疫组鸡排血便堆数减少、平均增重增加。在rEnApiAP2单免组间,低剂量组的相对增重率(82.36%)、卵囊减少率(73.88%)和抗球虫指数(155.26)均为最高,平均病变记分最低(1.71)。攻毒害艾美耳球虫后,联免组的ACI值均大于相应的单免组,其中rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(169.83)最高。攻柔嫩艾美耳球虫后,rEnApiAP2单免组的ACI值(128.37)低于rEtGAM56、rEtGAM59单免组(130.12、151.88),rEnApiAP2与rEtGAM59联免组的ACI值(141.62)接近于rEtGAM59单免组,rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(115.46)小于rEtGAM56单免组。各免疫组血清抗体水平均显著高于空白对照组(P<0.05)。rEnApiAP2对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护效果,与rEtGAM联免可提高对毒害艾美耳球虫的免疫保护力。本研究结果为鸡球虫病重组亚单位疫苗研制奠定了基础。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 柔嫩艾美耳球虫 rEnApiAP2 rEtGAM 保护效果

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毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的原核表达与分析 被引量：1

3

作者 彭月梅 叶状 +7 位作者 汪飞燕 王礼跃 冯永翠 王乐乐 候照峰 许金俊 陶建平 刘丹丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期846-853,共8页

旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,... 旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体,对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明,En GPX ORF序列全长753 bp,编码250个氨基酸,体外重组表达蛋白大小约30 ku,主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体,鼠抗rEnGPX多克隆抗体,毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测出EnGPX,其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体(WFBII)及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX,验证其具有良好的反应原性,并定位于配子体及卵囊壁上。以期为研究En GPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索,也为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 EnGPX 克隆表达 反应原性 免疫荧光定位

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EnMIC2重组减毒沙门氏菌的构建及免疫保护效果研究 被引量：14

4

作者 谢明权 覃宗华 +4 位作者 蔡建平 艾哈迈德 彭新宇 魏文康 吴惠贤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期705-710,共6页

成功构建了表达鸡毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)广东株(GD)微线蛋白2基因(EnMIC2)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌,在IPTG诱导下获得了EnMIC2的高效表达,SDSPAGE分析表明,表达产物约占菌体总蛋白的8.6%,分子量大小约为35ku,与抗E.necatrix... 成功构建了表达鸡毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)广东株(GD)微线蛋白2基因(EnMIC2)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌,在IPTG诱导下获得了EnMIC2的高效表达,SDSPAGE分析表明,表达产物约占菌体总蛋白的8.6%,分子量大小约为35ku,与抗E.necatrix的高免血清进行WesternBlotting,结果为阳性。将重组减毒沙门氏菌以108和109CFU/鸡免疫4日龄岭南黄肉鸡,免疫后2周血清中可检测到特异性IgG,3周时抗体水平达到峰值,同时可在肠道检测到特异性IgA的分泌。免疫接种后3周,试验鸡分别经口攻击感染500个E.necatrix(GD)孢子化卵囊,结果显示免疫组与非免疫组有相似的排卵囊曲线;但108和109CFU免疫组的卵囊总产量分别能降低26.62%和48.92%。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 微线蛋白-2 减毒沙门氏菌 免疫保护

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毒害艾美耳球虫晚熟系选育及其生活史研究 被引量：5

5

作者 董辉 索勋 +1 位作者 腾可导 汪明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期405-408,共4页

以剂量为1200～20000个孢子化卵囊/羽的毒害艾美耳球虫(E.necatrix)北京株(中熟系)感染3日龄京星黄羽肉仔鸡,收集感染后第11天粪便中卵囊,孢子化后接种无球虫鸡进行连续传代,经传代16次后,发现其排卵囊高峰较母株(中熟系)推迟了2天,即... 以剂量为1200～20000个孢子化卵囊/羽的毒害艾美耳球虫(E.necatrix)北京株(中熟系)感染3日龄京星黄羽肉仔鸡,收集感染后第11天粪便中卵囊,孢子化后接种无球虫鸡进行连续传代,经传代16次后,发现其排卵囊高峰较母株(中熟系)推迟了2天,即由接种后第7天推迟到第9天,且连续3代排卵囊高峰均出现在第9天,有较好的稳定性。生活史研究表明,其各阶段虫体均比母株的大,但潜在期不变,推测可能是选育得到的晚熟系卵囊中尚含有少量中熟系卵囊的缘故。 展开更多

关键词 鸡 毒害 艾美耳球虫 晚熟系 选育 生活史

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鸡毒害艾美耳球虫LZ株MIC5基因的重组表达及其表达产物的抗原性分析 被引量：5

6

作者 刘红霞 贾万忠 +4 位作者 郭爱疆 张少华 闫鸿斌 岳城 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1575-1580,共6页

根据已发表的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)微线蛋白5(Microneme protein 5,MIC-5)基因的核苷酸序列设计引物,以毒害艾美耳球虫(E.necatrix)DNA为模板,利用PCR方法扩增出EnMIC-5部分基因片段。将基因片段与pMD18-T simple载体连接... 根据已发表的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)微线蛋白5(Microneme protein 5,MIC-5)基因的核苷酸序列设计引物,以毒害艾美耳球虫(E.necatrix)DNA为模板,利用PCR方法扩增出EnMIC-5部分基因片段。将基因片段与pMD18-T simple载体连接,重组质粒测序结果表明EnMIC-5基因大小为1 470 bp,编码490个氨基酸。EnMIC-5与pET-28a(+)载体构建重组表达质粒pET-EnMIC-5,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测,表达产物为相对分子质量约57.5 ku的融合蛋白。Western-blot分析结果表明表达蛋白可被鸡感染E.necatrix阳性血清识别。用重组蛋白免疫昆明鼠,一免后15 d即可检测到相应抗体,且抗体在三免后40 d仍维持较高水平,证实重组蛋白具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 微线蛋白5 基因克隆 重组表达 免疫原性

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毒害艾美耳球虫晚熟系生物学特性研究 被引量：4

7

作者 董辉 索勋 汪明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期600-604,共5页

本文对毒害艾美耳球虫晚熟系基本生物学特性进行了研究。结果表明,晚熟系的致病性与同等剂量中熟系的相当;繁殖能力高于中熟系,且每羽鸡的排卵囊总量与剂量成正相关,每个卵囊的繁殖能力与剂量成负相关;在同等剂量免疫下,晚熟系的免疫原... 本文对毒害艾美耳球虫晚熟系基本生物学特性进行了研究。结果表明,晚熟系的致病性与同等剂量中熟系的相当;繁殖能力高于中熟系,且每羽鸡的排卵囊总量与剂量成正相关,每个卵囊的繁殖能力与剂量成负相关;在同等剂量免疫下,晚熟系的免疫原性好于中熟系;2次免疫后,晚熟系免疫组的保护力与中熟系的相当,攻虫后卵囊繁殖减少率均在99%以上。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 晚熟系 生物学特性 致病性 繁殖能力 鸡 卵囊 免疫原性

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雏鸡感染毒害艾美耳球虫后血清免疫球蛋白含量的动态变化 被引量：2

8

作者 刘晶 郑世民 《动物医学进展》 CSCD 2005年第4期75-77,共3页

采用间接ELISA法检测雏鸡初次及二次感染毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)后血清免疫球蛋白含量的动态变化。结果表明,雏鸡初次感染E.necatrix 后10 d~ 14 d血清IgG, IgM, IgA 含量开始增加,16 d^18 d达到峰值;雏鸡二次攻击性感染E.neca... 采用间接ELISA法检测雏鸡初次及二次感染毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)后血清免疫球蛋白含量的动态变化。结果表明,雏鸡初次感染E.necatrix 后10 d~ 14 d血清IgG, IgM, IgA 含量开始增加,16 d^18 d达到峰值;雏鸡二次攻击性感染E.necatrix 后2 d^7 d,其血清的上述3种免疫球蛋白含量均不同程度低于初次感染雏鸡,随后开始回升,至10 d^14 d明显高于相应对照及初次感染雏鸡。血清抗体,特别是IgG介导的体液免疫,在雏鸡抵抗E.necatrix初次及二次感染中发挥了重要作用。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 血清 IGG IGM IGA 雏鸡

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毒害艾美耳球虫早熟株致病性与繁殖力的研究 被引量：1

9

作者 史宗勇 赵剑 +2 位作者 李赟 史新涛 古少鹏 《农学学报》 2011年第3期46-50,共5页

为选育制备弱毒疫苗所需的毒害艾美耳球虫(Eimeria.necatrix)早熟株,以临床表现、平均增重、相对增重率、小肠病变记分、血便记分、死亡率、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊总产量和每个卵囊的繁殖能力为指标,研究了E.necatrix早熟株与... 为选育制备弱毒疫苗所需的毒害艾美耳球虫(Eimeria.necatrix)早熟株,以临床表现、平均增重、相对增重率、小肠病变记分、血便记分、死亡率、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊总产量和每个卵囊的繁殖能力为指标,研究了E.necatrix早熟株与亲本株的致病性和繁殖力。结果表明该早熟株与其亲本株相比,早熟株的致病性降低了,接种相同剂量时早熟株平均增重、相对增重率高于亲本株,病变记分、血便记分和死亡率均低于亲本株;早熟株产卵高峰提前,繁殖力下降至亲本株的55%左右,符合球虫早熟疫苗株的特性。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 早熟株 致病性 繁殖力

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毒害艾美耳球虫二次感染对雏鸡局部黏膜组织抗体生成细胞的影响 被引量：2

10

作者 贾富勃 郑世民 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第11期143-146,共4页

180只14日龄雏鸡随机分为毒害艾美球虫(Eimeria necatrix,E.necatrix)一次感染组、二次感染组和对照组。应用免疫酶组织化学染色法,对免疫相关指标进行了检测。结果发现,毒害艾美球虫二次感染雏鸡局部黏膜免疫组织的IgA、IgMI、gG生成... 180只14日龄雏鸡随机分为毒害艾美球虫(Eimeria necatrix,E.necatrix)一次感染组、二次感染组和对照组。应用免疫酶组织化学染色法,对免疫相关指标进行了检测。结果发现,毒害艾美球虫二次感染雏鸡局部黏膜免疫组织的IgA、IgMI、gG生成细胞数量均不同程度的高于未感染毒害艾美球虫的对照组雏鸡,表明E.necatrix二次感染雏鸡局部黏膜组织的免疫功能明显增强。 展开更多

关键词 雏鸡 毒害艾美耳球虫 二次感染 局部黏膜组织 抗体生成细胞

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毒害艾美耳球虫和产气荚膜梭菌双重PCR检测方法的建立

11

作者 陈曦 王一 +3 位作者 王佳丽 杨新 宋军科 赵光辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3985-3990,共6页

旨在初步建立可同时检测毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)和产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的双重PCR及纳米PCR检测方法。基于E.necatrix的ITS-2基因和C.perfringens的α毒素基因分别设计、筛选靶基因位点的特异性扩增引物,通... 旨在初步建立可同时检测毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)和产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的双重PCR及纳米PCR检测方法。基于E.necatrix的ITS-2基因和C.perfringens的α毒素基因分别设计、筛选靶基因位点的特异性扩增引物,通过反应体系和退火温度的优化,建立适用于两种病原的特异性双重PCR和双重纳米PCR检测方法;用所建立的方法对6种其它常见寄生性原虫和3种其他细菌进行PCR扩增以验证其特异性;构建两种病原的重组质粒pMD19-T-ITS2和pMD19-T-cpa,将其按10倍倍比稀释成不同浓度梯度的质粒模板用于所建方法的敏感性试验。结果表明:两种方法均能特异性扩增出E.necatrix约150 bp和C.perfringens约400 bp的目的片段,且所建立的两种检测方法对其他6种其他原虫和3种其他细菌的检测结果均为阴性;双重PCR扩增E.necatrix和C.perfringens的最低模板检出量分别是181和1050 copies,而双重纳米PCR的最低模板检出量分别是1.81和105 copies;临床检测结果显示,所建立的2种方法与临床病原学检测结果一致。成功建立了用于E.necatrix和C.perfringens双重PCR和双重纳米PCR检测方法,且敏感性好、特异性高,可为临床上毒害艾美耳球虫和产气荚膜梭菌感染的检测提供技术支持。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 产气荚膜梭菌 PCR 纳米PCR

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毒害艾美耳球虫感染雏鸡泪腺与支气管分泌物免疫球蛋白含量变化

12

作者 贾富勃 郑世民 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第10期31-34,共4页

采用间接酶联免疫吸附试验法检测了毒害艾美耳球虫首次、二次感染雏鸡后,其泪液和气管液的IgAI、gMI、gG含量变化。结果发现,艾美耳球虫首次感染雏鸡后,其泪液和气管液的IgA、IgMI、gG含量在一定时期内较对照雏鸡明显增加;艾美耳球虫二... 采用间接酶联免疫吸附试验法检测了毒害艾美耳球虫首次、二次感染雏鸡后,其泪液和气管液的IgAI、gMI、gG含量变化。结果发现,艾美耳球虫首次感染雏鸡后,其泪液和气管液的IgA、IgMI、gG含量在一定时期内较对照雏鸡明显增加;艾美耳球虫二次大剂量攻击感染雏鸡后,上述免疫球蛋白含量呈现一过性下降,随即开始回升,14 d时较对照和首次感染雏鸡明显增加。表明球虫首次感染所激发的高水平体液免疫对其二次感染有良好的免疫保护作用。 展开更多

关键词 毒害艾美球虫 体液免疫 雏鸡

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鸡毒害艾美耳球虫Api AP2转录因子的克隆、表达与虫体内定位 被引量：1

13

作者 王礼跃 冯茜茜 +9 位作者 蔡为民 刘丹丹 候照峰 康喜龙 张知之 范雪莲 朱玉 许金俊 潘志明 陶建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4379-4388,共10页

顶复门原虫的AP2结构域蛋白(ApiAP2)可能是调控虫体生长发育的转录因子。本研究旨在克隆、表达毒害艾美耳球虫ApiAP2转录因子,检测其天然蛋白及其在虫体内的亚细胞定位。以毒害艾美耳球虫第3代裂殖子的总RNA为模板,RT-PCR扩增毒害艾美... 顶复门原虫的AP2结构域蛋白(ApiAP2)可能是调控虫体生长发育的转录因子。本研究旨在克隆、表达毒害艾美耳球虫ApiAP2转录因子,检测其天然蛋白及其在虫体内的亚细胞定位。以毒害艾美耳球虫第3代裂殖子的总RNA为模板,RT-PCR扩增毒害艾美耳球虫EnApiAP2基因后,连接至pMD18-T载体,测序后构建pET28a(+)-EnApiAP2表达载体,转化至表达菌BL21(DE3),重组菌经测序鉴定后诱导表达,并纯化复性重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗rEnApiAP2多克隆抗体。利用多克隆抗体,分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测裂殖子中天然EnApiAP2蛋白及其定位。最后,应用荧光定量PCR分析EnApiAP2基因在第2、3代裂殖子中的转录水平。结果显示,该基因全长1830 bp,编码610个氨基酸,含有一个AP2结构域,预测分子质量67.69 ku;重组蛋白大小约为74 ku,主要以包涵体形式存在,可以被6×HIS标签单抗、鸡抗毒害艾美耳球虫康复血清和鸡抗柔嫩艾美耳球虫康复血清识别;在第3代裂殖子中检测到天然EnApiAP2蛋白,分子质量约为85 ku;EnApiAP2蛋白定位在第2、3代裂殖子细胞核内;第3代裂殖子EnApiAP2转录水平显著高于第2代裂殖子(P<0.01)。成功克隆、表达了EnApiAP2基因,证实该基因表达的蛋白定位在裂殖子的细胞核内,为进一步研究EnApiAP2蛋白的转录因子功能奠定了基础。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 EnApiAP2基因 克隆 表达 定位

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毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的原核表达与定位分析 被引量：1

14

作者 叶状 王乐乐 +7 位作者 汪飞燕 刘悦 彭月梅 宿世杰 候照峰 许金俊 陶建平 刘丹丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1553-1561,共9页

旨在探析毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的功能。提取毒害艾美耳球虫扬州株配子体总RNA,应用RT-PCR获取EnOXIO1编码基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-EnOXIO1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),体外诱导表达,对重组蛋白进行抗原性分析,应用制... 旨在探析毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的功能。提取毒害艾美耳球虫扬州株配子体总RNA,应用RT-PCR获取EnOXIO1编码基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-EnOXIO1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),体外诱导表达,对重组蛋白进行抗原性分析,应用制备的多抗进行激光共聚焦免疫荧光定位。结果显示,获得的EnOXIO1基因全长为2535 bp,体外重组表达的蛋白大小约100 ku,主要以包涵体的形式存在,表达量约为0.5 mg·mL^(-1)。Western blot分析结果显示,该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体识别,同时能被制备的鼠多抗以及毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明该重组蛋白具有较好的反应原性和交叉反应原性。激光共聚焦免疫荧光定位结果显示,EnOXIO1基因表达产物主要存在于配子体内的成壁体上,参与了卵囊壁的形成。本研究成功克隆和表达了毒害艾美耳球虫EnOXIO1蛋白,并将其定位于配子体和卵囊壁上,为进一步解析EnOXIO1蛋白参与卵囊壁形成的分子机制奠定基础,为研制新型免疫阻断型球虫亚单位疫苗提供重要靶抗原。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 EnOXIO1 克隆表达 免疫荧光定位 功能鉴定

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垫料管理对毒害艾美耳球虫疫苗虫株免疫效果的影响 被引量：3

15

作者 王文莉 刘丽丹 +4 位作者 廖贵城 吴松明 唐建红 谭志坚 翁亚彪 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第1期24-28,共5页

为比较垫料管理对毒害艾美耳球虫疫苗虫株免疫效果的影响,采用谷壳和木屑为垫料,垫料厚度分别为1、2、4 cm,以及定期翻动垫料和不翻动垫料的管理方式对疫苗反应期鸡肠道病变程度和相对增重的影响,以及对攻虫后鸡肠道病变程度、相对增重... 为比较垫料管理对毒害艾美耳球虫疫苗虫株免疫效果的影响,采用谷壳和木屑为垫料,垫料厚度分别为1、2、4 cm,以及定期翻动垫料和不翻动垫料的管理方式对疫苗反应期鸡肠道病变程度和相对增重的影响,以及对攻虫后鸡肠道病变程度、相对增重和免疫保护效果的影响。在疫苗反应期,各免疫组的肠道病变轻微,相对增重与空白对照组无显著差异(P>0.05);免疫21 d后攻虫,所有免疫组均能抵抗1×105个毒害艾美耳球虫强毒孢子化卵囊的攻击,而且肠道病变轻微,相对增重与空白对照组无显著差异(P>0.05)。试验结果表明,厚垫料可提高毒害艾美耳球虫的免疫均匀性,免疫效果稍优于薄垫料。 展开更多

关键词 垫料管理 毒害艾美耳球虫 疫苗虫株 免疫效果

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毒害艾美耳球虫配子体抗原EnGAM22单克隆抗体的制备与鉴定

16

作者 蔡为民 李文静 +5 位作者 王乐乐 苏丁泽阳 朱玉 刘丹丹 许金俊 陶建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期875-882,共8页

旨在制备毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)配子体抗原EnGAM22单克隆抗体,用Ni-NTA亲和层析纯化的重组抗原rEnGAM22免疫BALB/c小鼠,免疫3次后,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用预先建立的ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经有限稀释... 旨在制备毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)配子体抗原EnGAM22单克隆抗体,用Ni-NTA亲和层析纯化的重组抗原rEnGAM22免疫BALB/c小鼠,免疫3次后,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用预先建立的ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行4次亚克隆后,获得2株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株并命名为2F3和3D3;对单抗亚类和特异性进行鉴定,应用单抗识别天然蛋白和虫体定位。结果显示,单克隆抗体2F3和3D3亚类分别为IgG2a、IgG2b,纯化后腹水效价分别为1∶256000、1∶64000,能特异性识别重组抗原rEnGAM22和毒害艾美耳球虫天然配子体蛋白;免疫荧光定位显示单克隆抗体2F3和3D3能特异性识别大配子体的成壁体和卵囊壁,表明EnGAM22抗原参与卵囊壁的形成。制备的单克隆抗体为研究球虫卵囊壁形成的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 配子体蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定

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鸡毒害艾美耳球虫病防控技术研究进展

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作者 陈祥杰 戚南山 +8 位作者 廖申权 李娟 吕敏娜 林栩慧 蔡海明 胡俊菁 张健騑 张浩吉 孙铭飞 《动物医学进展》 北大核心 2023年第9期102-106,共5页

毒害艾美耳球虫是致病力最强的鸡球虫虫种之一,可引起鸡急性小肠球虫病,每年给全球养鸡业造成重大经济损失。饲料添加抗球虫药及活卵囊疫苗免疫仍为当前防控小肠球虫病的主要手段,然而大量抗球虫药物的长期使用导致临床虫株出现广泛而... 毒害艾美耳球虫是致病力最强的鸡球虫虫种之一,可引起鸡急性小肠球虫病,每年给全球养鸡业造成重大经济损失。饲料添加抗球虫药及活卵囊疫苗免疫仍为当前防控小肠球虫病的主要手段,然而大量抗球虫药物的长期使用导致临床虫株出现广泛而严重的耐药性,特别缺乏针对毒害艾美耳球虫的特效药物,而现有鸡球虫病活疫苗对于毒害艾美耳球虫的免疫保护效果仍有待提高。近年来,国内外学者针对毒害艾美耳球虫的药物及疫苗做了大量研究工作,论文对近年来关于毒害艾美耳球虫病防控技术的研究进展进行总结归纳,以期为治疗毒害艾美耳球虫病的药物研发及疫苗研制提供参考。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 防控技术 药物 疫苗

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毒害艾美耳球虫早熟株对鸡免疫效果的评价

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作者 马维彩 何学柏 +5 位作者 孙英健 李本胜 张彩荣 芮国红 李焕荣 李秋明 《北京农学院学报》 2022年第1期91-96,共6页

【目的】探讨毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)早熟株对鸡的免疫效果,为获得安全有效的鸡球虫疫苗株提供试验参考依据。【方法】取4日龄健康、体质量50~70 g鸡随机分为4组,分别为对照组、盐酸氨丙啉添加组、一免组和二免组,每组50只鸡... 【目的】探讨毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)早熟株对鸡的免疫效果,为获得安全有效的鸡球虫疫苗株提供试验参考依据。【方法】取4日龄健康、体质量50~70 g鸡随机分为4组,分别为对照组、盐酸氨丙啉添加组、一免组和二免组,每组50只鸡地面饲养,试验期81 d。对照组、免疫组(免疫组包括一免组和二免组)鸡饲喂基础日粮,盐酸氨丙啉添加组鸡按照药物说明全程基础日粮加盐酸氨丙啉拌服。一免组鸡4日龄一免,剂量1 000个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊;二免组鸡53日龄二免,剂量200个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊。鸡25日龄、53日龄、74日龄时从地面饲养的各组随机抽取6只鸡移到笼上饲养,同时设置红对照组(鸡不免疫不喂药仅攻毒)。笼养鸡除对照组外,其他组鸡均攻毒,攻毒方法为逐只鸡经口接种毒害艾美耳球虫亲本株(10×10^(4)个孢子化卵囊/只)。肉眼观察鸡临床症状,测定鸡平均相对体增质量、小肠病变记分、小肠病变记分减少率、存活率、卵囊减少率与抗球虫指数等指标。【结果】免疫鸡攻毒后,临床观察对照组鸡精神状态良好,未出现任何异常症状;免疫组与红对照组相比精神状态良好、血便减少。不同日龄鸡(25日龄、53日龄和74日龄)攻毒后第7天,盐酸氨丙啉添加组和免疫组鸡相对体增质量均明显低于对照组但极显著高于红对照组且二免组高于一免组。免疫组鸡小肠平均病变记分均低于红对照组,小肠病变记分减少率高于红对照组,其中二免组不同日龄攻毒后鸡小肠平均病变记分均低于一免组,且74日龄鸡攻毒后小肠病变记分减少率最高。红对照组不同日龄鸡卵囊数极显著高于盐酸氨丙啉添加组和免疫组,其中免疫组53日龄鸡和74日龄鸡攻毒后卵囊数均显著高于盐酸氨丙啉添加组,卵囊减少率低于盐酸氨丙啉添加组,且二免组74日龄鸡攻毒后卵囊减少率高达90%。免疫组不同日龄鸡抗球虫指数极显著高于红对照组,二免组不同日龄鸡抗球虫指数均高于145且高于一免组,即二免组鸡抗球虫效果达到中效水平。【结论】毒害艾美耳球虫早熟株2次免疫对鸡具有良好的保护效果,且对鸡生长发育的影响较小。 展开更多

关键词 鸡 毒害艾美耳球虫 早熟株 亲本株 卵囊 免疫效果

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鸡毒害艾美耳球虫ROP30蛋白的原核表达及其对鸡免疫保护效果的观察

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作者 李慧中 张弛 +6 位作者 严丹丽 宋鹏慧 汪飞燕 冯茜茜 刘丹丹 许金俊 陶建平 《畜牧兽医学报》 2025年第3期1419-1430,共12页

旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体En ROP 30基因,并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡,评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板,RT-PCR扩增En ROP 30基因,连接至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET28a(+)-EnROP3... 旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体En ROP 30基因,并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡,评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板,RT-PCR扩增En ROP 30基因,连接至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET28a(+)-EnROP30表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3),重组菌经测序鉴定后诱导表达,并纯化重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗rEnROP30的多克隆抗体。利用多克隆抗体,分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测子孢子(S Z)和MZ-2中的天然EnROP30蛋白及其定位。最后,应用荧光定量PCR分析En ROP 30基因在SZ和MZ-2中的转录水平。用重组蛋白按高剂量(200μg·羽-1)、中剂量(100μg·羽-1)和低剂量(50μg·羽-1)免疫雏鸡,同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照,以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标,评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示:该基因全长1605 bp,编码534个氨基酸,推导相对分子质量为55.55 ku;重组蛋白大小约为65 ku,以可溶形式存在,能被小鼠抗His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别;在S Z和MZ-2中均检测到天然EnROP30蛋白,其分子质量大约为62 ku;EnROP30蛋白定位在S Z和MZ-2的顶端;MZ-2中En ROP 30转录水平显著高于S Z(P<0.05)。各试验组的成活率均为100%;免疫组的平均增重增加,病变记分显著降低(P<0.05);中剂量组的相对增重率(92.96%)、卵囊减少率(66.87%)和ACI值(158.96)均为最高。综上:成功克隆表达了En ROP 30基因,重组蛋白rEnROP30对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护力。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 En ROP 30 克隆 表达 免疫保护力

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