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无融合标签的蜂毒肽在大肠杆菌中的表达纯化和抑菌研究
1
作者
彭鑫怡
席志文
+1 位作者
张荣珍
徐岩
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期47-55,共9页
蜂毒肽(Melittin,MET)是一种具有抗炎和抗肿瘤作用的小分子活性肽,其可溶性表达和无融合标签活性肽的纯化一直是个难题。基于类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)的相变特性和内含肽(Intein)的自裂解特性,构建重组表达菌株Escheri...
蜂毒肽(Melittin,MET)是一种具有抗炎和抗肿瘤作用的小分子活性肽,其可溶性表达和无融合标签活性肽的纯化一直是个难题。基于类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)的相变特性和内含肽(Intein)的自裂解特性,构建重组表达菌株Escherichia coli/pET21a-ELP-Intein-MET,在E.coli BL21(DE3)宿主细胞中实现融合蛋白的可溶性表达。重组菌破碎上清液经过温度诱导的可逆相变循环纯化以及融合蛋白自裂解的pH、温度和时间优化,在pH 7.0、30℃的条件下自裂解32 h,再经过凝胶层析纯化,得到了纯度高于95%的无融合标签的蜂毒肽。纯化后的蜂毒肽用于Staphylococcus aureus、Bacillus subtilis 168和Escherichia coli JM109的抑菌研究,发现其对革兰氏阳性菌的抑制作用强于革兰氏阴性菌,蜂毒肽在3种菌中的最小抑菌质量浓度分别为12.5、50.0、100.0μg/mL。作者通过引入弹性蛋白和内含肽,不仅实现了蜂毒肽的高效可溶性表达,且通过较简便的蛋白质分离纯化获得无融合标签的蜂毒肽,该纯化活性肽的抑菌功能与商品化的蜂毒肽相似,有望为蜂毒肽的工业化制备提供新的思路。
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关键词
蜂毒肽
elp标签
内含肽
抑菌活性
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职称材料
类弹性蛋白作为功能纳米材料在生物工程领域研究及应用进展
被引量：
4
2
作者
周阳
王桃桃
+4 位作者
闫丹丹
王莹莹
施沁璇
孙丽慧
林锋
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期198-208,共11页
类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)是一种具有弹性功能且对温度敏感的人造蛋白质聚合物,主要由五肽重复序列单元Val-Pro-Gly-Xaa-Gly(VPGXG)n构成。ELP对温度敏感的可逆相变特征体现在低于相变温度(Transition temperature,Tt)...
类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)是一种具有弹性功能且对温度敏感的人造蛋白质聚合物,主要由五肽重复序列单元Val-Pro-Gly-Xaa-Gly(VPGXG)n构成。ELP对温度敏感的可逆相变特征体现在低于相变温度(Transition temperature,Tt)时呈可溶状态,在高于相变温度的溶液中呈凝聚状态,此过程可逆。基于ELP标签的可逆相变循环(Inverse transition cycle,ITC)是一种新型的分离纯化重组蛋白质的非色谱技术。利用ELP融合蛋白的可逆相变特性,经过多次ITC循环从可溶的蛋白上清溶液中特异性分离出含有ELP标签的融合蛋白。该技术仅需常规的离心机就能得到与色谱法的亲和层析纯度相当的目的蛋白,成本低、操作简便,适合大规模生产的需要。ELP和ELP衍生分子具有良好的弹性、自组装性、长期稳定性和生物活性等特性,精确控制ELP的设计有利于操纵它们对外界环境的刺激反应和其他物理功能特征,ELP可调的理化性质和良好生物相容性使ELP在生物学上也具有广泛的应用。重点阐述了ELP相变特性及机理,ELP融合蛋白的设计,ELP标签对融合蛋白的影响,ELP标签在蛋白质纯化、生物医药、生物工程、水凝胶及新兴领域方面的应用,ELP发展方向及亟待解决的关键问题和技术。
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关键词
类弹性蛋白
ITC技术
elp标签
蛋白纯化
生物应用
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职称材料
题名
无融合标签的蜂毒肽在大肠杆菌中的表达纯化和抑菌研究
1
作者
彭鑫怡
席志文
张荣珍
徐岩
机构
江南大学工业微生物教育部重点实验室
江南大学生物工程学院
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期47-55,共9页
基金
国家“十四五”重点研发计划项目(2023YFA0914500)
国家自然科学基金项目(31970045)
+2 种基金
江苏省研究生科研与实践创新计划项目(1012050205205974)
国家轻工技术与工程一流学科(LITE2018-12)
高等学校学科创新引智计划项目(111-2-06)。
文摘
蜂毒肽(Melittin,MET)是一种具有抗炎和抗肿瘤作用的小分子活性肽,其可溶性表达和无融合标签活性肽的纯化一直是个难题。基于类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)的相变特性和内含肽(Intein)的自裂解特性,构建重组表达菌株Escherichia coli/pET21a-ELP-Intein-MET,在E.coli BL21(DE3)宿主细胞中实现融合蛋白的可溶性表达。重组菌破碎上清液经过温度诱导的可逆相变循环纯化以及融合蛋白自裂解的pH、温度和时间优化,在pH 7.0、30℃的条件下自裂解32 h,再经过凝胶层析纯化,得到了纯度高于95%的无融合标签的蜂毒肽。纯化后的蜂毒肽用于Staphylococcus aureus、Bacillus subtilis 168和Escherichia coli JM109的抑菌研究,发现其对革兰氏阳性菌的抑制作用强于革兰氏阴性菌,蜂毒肽在3种菌中的最小抑菌质量浓度分别为12.5、50.0、100.0μg/mL。作者通过引入弹性蛋白和内含肽,不仅实现了蜂毒肽的高效可溶性表达,且通过较简便的蛋白质分离纯化获得无融合标签的蜂毒肽,该纯化活性肽的抑菌功能与商品化的蜂毒肽相似,有望为蜂毒肽的工业化制备提供新的思路。
关键词
蜂毒肽
elp标签
内含肽
抑菌活性
Keywords
Melittin
elp
tag
Intein
Antibacterial activity
分类号
S896.5 [农业科学—特种经济动物饲养]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
类弹性蛋白作为功能纳米材料在生物工程领域研究及应用进展
被引量：
4
2
作者
周阳
王桃桃
闫丹丹
王莹莹
施沁璇
孙丽慧
林锋
机构
江苏大学生命科学研究院
浙江淡水水产研究所农业部淡水健康养殖重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期198-208,共11页
基金
浙江省重点研发计划项目(2018C02019)
国家大宗淡水鱼产业体系项目(CARS-45-39)。
文摘
类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)是一种具有弹性功能且对温度敏感的人造蛋白质聚合物,主要由五肽重复序列单元Val-Pro-Gly-Xaa-Gly(VPGXG)n构成。ELP对温度敏感的可逆相变特征体现在低于相变温度(Transition temperature,Tt)时呈可溶状态,在高于相变温度的溶液中呈凝聚状态,此过程可逆。基于ELP标签的可逆相变循环(Inverse transition cycle,ITC)是一种新型的分离纯化重组蛋白质的非色谱技术。利用ELP融合蛋白的可逆相变特性,经过多次ITC循环从可溶的蛋白上清溶液中特异性分离出含有ELP标签的融合蛋白。该技术仅需常规的离心机就能得到与色谱法的亲和层析纯度相当的目的蛋白,成本低、操作简便,适合大规模生产的需要。ELP和ELP衍生分子具有良好的弹性、自组装性、长期稳定性和生物活性等特性,精确控制ELP的设计有利于操纵它们对外界环境的刺激反应和其他物理功能特征,ELP可调的理化性质和良好生物相容性使ELP在生物学上也具有广泛的应用。重点阐述了ELP相变特性及机理,ELP融合蛋白的设计,ELP标签对融合蛋白的影响,ELP标签在蛋白质纯化、生物医药、生物工程、水凝胶及新兴领域方面的应用,ELP发展方向及亟待解决的关键问题和技术。
关键词
类弹性蛋白
ITC技术
elp标签
蛋白纯化
生物应用
Keywords
elastin-like polypeptide
ITC technology
elp
tag
protein purification
biological application
分类号
TB383.1 [一般工业技术—材料科学与工程]
Q81 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
无融合标签的蜂毒肽在大肠杆菌中的表达纯化和抑菌研究
彭鑫怡
席志文
张荣珍
徐岩
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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职称材料
2
类弹性蛋白作为功能纳米材料在生物工程领域研究及应用进展
周阳
王桃桃
闫丹丹
王莹莹
施沁璇
孙丽慧
林锋
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
4
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