白术内酯Ⅰ调节cGAS-STING通路对乙型肝炎模型大鼠肝功能的影响

1

作者 韩成美 陈茂丽 任维鑫 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期615-619,共5页

目的:探讨白术内酯Ⅰ(ATR-Ⅰ)调节cGAS-STING通路对乙型肝炎病毒(HBV)感染大鼠肝功能的影响。方法:随机选择10只大鼠记为对照组(NC),其余大鼠尾静脉注射HBV抗原构建HBV模型。造模成功的大鼠随机分为HBV组、ATR-Ⅰ组(50μg/kg)、cGAS-ST... 目的:探讨白术内酯Ⅰ(ATR-Ⅰ)调节cGAS-STING通路对乙型肝炎病毒(HBV)感染大鼠肝功能的影响。方法:随机选择10只大鼠记为对照组(NC),其余大鼠尾静脉注射HBV抗原构建HBV模型。造模成功的大鼠随机分为HBV组、ATR-Ⅰ组(50μg/kg)、cGAS-STING通路抑制剂(RU.521)组(450μg/kg)、ATR-Ⅰ+RU.521组(50μg/kg ATR-Ⅰ+450μg/kg RU.521),每组10只,NC组、HBV组注射等量生理盐水,1次/d,持续1周。ELISA检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、IFN-γ、IL-2、TNF-α、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)含量;HE染色检测肝脏组织病理学情况;Masson染色检测肝纤维化程度;Western blot检测肝组织cGASSTING通路蛋白表达。结果:HBV组较NC组胶原容积分数、ALT、AST、HBsAg、HBeAg含量、HA、LN和PCⅢ、IFN-γ、TNF-α和IL-2水平升高,cGAS、STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3及IFN-β水平下降(P<0.05);与HBV组比较,ATR-Ⅰ组肝脏损伤、肝纤维化程度改善,胶原容积分数、ALT、AST、HBsAg、HBeAg含量、HA、LN和PCⅢ、IFN-γ、TNF-α和IL-2水平下降(P<0.05),cGAS、STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3及IFN-β水平升高(P<0.05),RU.521组呈现相反趋势,RU.521消除了ATR-Ⅰ对HBV大鼠肝功能的改善作用。结论:ATR-Ⅰ可能通过激活cGAS-STING通路改善HBV大鼠肝功能。 展开更多

关键词 白术内酯ⅰ cGAS-STING通路 乙型肝炎病毒 肝纤维化 肝功能

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆与原核表达 被引量：9

2

作者 廖俊伟 张小飞 +4 位作者 黄显明 毛火云 尹秀凤 刘大伟 魏建忠 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第7期49-52,共4页

根据GenBank上登录的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组序列,设计一对特异性引物。通过RT-PCR的方法扩增DHV-Ⅰ(A66株)VP3基因并将其5′端起始处稀有密码子同义突变。用限制性内切酶BamHⅠ/SalⅠ消化VP3基因片段和表达载体pGEX-6p-1后构建... 根据GenBank上登录的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组序列,设计一对特异性引物。通过RT-PCR的方法扩增DHV-Ⅰ(A66株)VP3基因并将其5′端起始处稀有密码子同义突变。用限制性内切酶BamHⅠ/SalⅠ消化VP3基因片段和表达载体pGEX-6p-1后构建重组表达质粒pGEX-VP3,转化E.coliBL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析表明,VP3基因在大肠埃希菌中大量表达,表达产物的分子质量约为52 ku。Western blot检测表明,表达产物能与DHV-Ⅰ阳性血清发生反应,具有反应原性。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 VP3基因 克隆与表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭病毒性肝炎研究进展 被引量：7

3

作者 黄显明 张小飞 +2 位作者 魏建忠 李春芬 廖俊伟 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期78-81,共4页

鸭病毒性肝炎(DVH)是由鸭肝炎病毒(DHV)引起雏鸭一种高度致死、高度传播性的病毒性传染病。该病以肝炎为主要特征,具有高发病率和高病死率。DHV分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,3个型之间无交叉保护作用。Ⅰ型DHV呈世界性分布,并常和其他病毒、细... 鸭病毒性肝炎(DVH)是由鸭肝炎病毒(DHV)引起雏鸭一种高度致死、高度传播性的病毒性传染病。该病以肝炎为主要特征,具有高发病率和高病死率。DHV分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,3个型之间无交叉保护作用。Ⅰ型DHV呈世界性分布,并常和其他病毒、细菌混合感染,严重影响了养鸭业,造成了巨大的经济损失。文章对Ⅰ型DVH病原学、致病机理、分子生物学诊断技术和防控等方面进行了综述。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 致病机理 基因结构 分子生物学诊断 防控

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸭Ⅰ型肝炎病毒荧光定量RT-PCR方法建立及初步应用 被引量：9

4

作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 庞耀珊 谢志勤 刘加波 邓显文 范晴 《中国家禽》 北大核心 2012年第10期23-26,共4页

根据GenBank中鸭Ⅰ型肝炎病毒的基因序列,设计合成一对引物和一条Taq-Man探针。进行优化后,建立了能够检测鸭Ⅰ型肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。该方法敏感性好,检测敏感性达到20个模板拷贝数,比常规PCR灵敏度高100倍;该方法特异性强,... 根据GenBank中鸭Ⅰ型肝炎病毒的基因序列,设计合成一对引物和一条Taq-Man探针。进行优化后,建立了能够检测鸭Ⅰ型肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。该方法敏感性好,检测敏感性达到20个模板拷贝数,比常规PCR灵敏度高100倍;该方法特异性强,对番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鹅细小病毒等6种病原体的检测全为阴性。对广西地区鸭群收集的118份病料进行检测,结果阳性率为1.69%。结果提示:在广西地区的鸭群中,存在鸭Ⅰ型肝炎病毒的感染,建立的荧光定量RT-PCR方法可用于鸭Ⅰ型肝炎病毒的临床快速检测。 展开更多

关键词 鸭ⅰ型肝炎病毒 荧光定量RT-PCR 应用

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量：4

5

作者 邵泽香 韦强 +3 位作者 鲍国连 崔言顺 刘燕 季权安 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期434-438,共5页

参考GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了一对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的RT-PCR检测方法。以该方法对实验室分离并保存的DHV强毒株Z10株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到了预期大小... 参考GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了一对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的RT-PCR检测方法。以该方法对实验室分离并保存的DHV强毒株Z10株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到了预期大小为699 bp的目的片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果与GenBank中的DHV-Ⅰ的相应基因序列比对分析,同源性均达90%以上,表明为DHV-Ⅰ的基因序列,对NDV,IBDV,DPV和GPV等常见病毒扩增结果为阴性。该方法敏感性检测结果表明,最低RNA模板检出量为24 pg。表明所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于I型鸭病毒性肝炎病毒的快速诊断。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(dhv-ⅰ) RT-PCR 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

SYBR Green Ⅰ实时定量PCR快速检测鸭瘟病毒的研究 被引量：11

6

作者 汤承 索化夷 +2 位作者 岳华 杨发龙 汤明 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第9期25-27,共3页

根据GenBank中鸭瘟病毒(DPV)UL6和UL7基因的保守序列,设计了一对特异性引物,扩增位于UL6和UL7基因第891～991位长度为101bp片断。以DPV标准强毒株DNA为模板,建立了SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测鸭瘟病毒的方法,用该方法检测鸭瘟标准... 根据GenBank中鸭瘟病毒(DPV)UL6和UL7基因的保守序列,设计了一对特异性引物,扩增位于UL6和UL7基因第891～991位长度为101bp片断。以DPV标准强毒株DNA为模板,建立了SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测鸭瘟病毒的方法,用该方法检测鸭瘟标准强毒、疫苗毒及野毒株均为阳性,检测其他受试的非鸭瘟病毒DNA均为阴性,对鸭瘟强毒和疫苗毒人工感染鸭胚尿囊液的检出率均为100%,对6个临床送检样本的检出率为6/6,与病毒分离鉴定结果一致;最小检出量为1.57×104拷贝/ul。 展开更多

关键词 鸭瘟病毒 UL6和UL7基因 SYBR Green ⅰ 荧光定量PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量：22

7

作者 马秀丽 宋敏训 +2 位作者 黄兵 廖明 辛朝安 《家禽科学》 2006年第11期11-13,共3页

根据Genebank中I型鸭病毒性肝炎病毒的基因序列,设计合成了2对引物,以山东、江苏、广东、河南等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,均得到预期大小的目的片段,两对引物的检测结果一致。并对其中一种方法的敏感性、特异性进行了检测,结... 根据Genebank中I型鸭病毒性肝炎病毒的基因序列,设计合成了2对引物,以山东、江苏、广东、河南等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,均得到预期大小的目的片段,两对引物的检测结果一致。并对其中一种方法的敏感性、特异性进行了检测,结果表明本试验建立的用于I型鸭病毒性肝炎病毒诊断的RT-PCR方法具有较高的敏感性和特异性,最低RNA模板检出量为100pg,只能特异的检测出I型DHV,不能检出NDV、IBDV、DPV和GPV。因此,所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于鸭病毒性肝炎病毒的快速鉴别诊断。 展开更多

关键词 鸭病毒性肝炎病毒 ⅰ型 RT—PCR 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP0基因在杆状病毒表达系统中的表达 被引量：3

8

作者 王安平 顾玲玲 +4 位作者 王永娟 吴双 左伟勇 洪伟鸣 朱善元 《河南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期365-369,共5页

为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus type-Ⅰ,DHAV-Ⅰ)SH株的结构蛋白VP0,首先根据DHAV-Ⅰ SH株VP0基因序列设计一对引物,RT-PCR方法扩增出VP0基因,亚克隆至杆状病毒转移载体pFast Bac1,获得重组质粒p FB-VP0... 为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus type-Ⅰ,DHAV-Ⅰ)SH株的结构蛋白VP0,首先根据DHAV-Ⅰ SH株VP0基因序列设计一对引物,RT-PCR方法扩增出VP0基因,亚克隆至杆状病毒转移载体pFast Bac1,获得重组质粒p FB-VP0,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-VP0,在脂质体介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP0。Western-blot结果显示,表达的重组蛋白相对分子量约为29 k D,间接免疫荧光结果显示重组蛋白能与鸭抗全病毒阳性血清发生特异性反应。研究结果表明,DHAV-Ⅰ SH株的结构蛋白VP0在昆虫细胞中获得了成功表达,为VP0结构蛋白的功能研究和基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭甲型肝炎病毒 VP0基因 昆虫细胞 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达及鉴定 被引量：2

9

作者 顾玲玲 吴萌 +1 位作者 朱善元 王安平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第1期114-117,共4页

为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-Ⅰ)的主要结构蛋白VP1,根据GenBank已发表的DHAV-ⅠSH株VP1基因序列,设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1,获得重组杆状病毒转移载体p FB-VP1,将... 为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-Ⅰ)的主要结构蛋白VP1,根据GenBank已发表的DHAV-ⅠSH株VP1基因序列,设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1,获得重组杆状病毒转移载体p FB-VP1,将其转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定后,构建重组穿梭质粒rBacmid-VP1。在脂质体介导下将重组质粒rBacmid-VP1转染昆虫细胞Sf 9,制备含有DHAV-ⅠVP1基因的重组杆状病毒rBac-VP1。Western blot结果显示,表达的重组蛋白VP1大小约27 ku,能与DHAV-ⅠVP1多克隆抗体发生特异性反应;间接免疫荧光检测结果显示,重组蛋白VP1能与DHAV-Ⅰ全病毒阳性血清发生特异性反应,细胞内出现较强的荧光。以上结果表明,在昆虫细胞中成功表达了具有免疫原性的DHAV-Ⅰ主要结构蛋白VP1。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭甲型肝炎病毒 VP1基因 昆虫细胞 表达 鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP0基因的原核表达与多抗的制备 被引量：1

10

作者 王安平 朱善元 +3 位作者 王永娟 吴双 左伟勇 洪伟鸣 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期658-661,共4页

根据Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(Duck Hepatitis A Virus type-Ⅰ,DHAV-Ⅰ)SH株VP0基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法扩增出VP0基因,克隆入原核表达载体p ET-32a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下重组蛋白获得了成功表达。SDS-PAGE结... 根据Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(Duck Hepatitis A Virus type-Ⅰ,DHAV-Ⅰ)SH株VP0基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法扩增出VP0基因,克隆入原核表达载体p ET-32a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下重组蛋白获得了成功表达。SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白相对分子量约为48 k D,Western-blotting分析表明该蛋白能与His组氨酸单抗发生特异性反应。将目的蛋白切胶纯化后免疫ICR小鼠,制备了针对重组蛋白的多抗血清,Western-blotting分析证明制备的抗血清能够与DHAV-Ⅰ感染的SPF鸡胚尿囊液总蛋白发生特异反应。以上结果表明,VP0基因在大肠杆菌中获得了成功表达,且制备的多抗血清可以用于VP0蛋白的检测。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭甲型肝炎病毒 VP0基因 原核表达 多抗

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸭肝炎病毒Ⅰ型基因片段的原核表达及单克隆抗体的制备 被引量：1

11

作者 高骏 孙凤萍 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期17-20,共4页

根据Genebank上已报道的鸭肝炎病毒Ⅰ型基因的全长序列,设计了1对引物,通过RT-PCR方法扩增出特异的DHV-Ⅰ基因片段;将该片段克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌Rosetta-gami(DE3),并用IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,获得了表观分子... 根据Genebank上已报道的鸭肝炎病毒Ⅰ型基因的全长序列,设计了1对引物,通过RT-PCR方法扩增出特异的DHV-Ⅰ基因片段;将该片段克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌Rosetta-gami(DE3),并用IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,获得了表观分子量在20kD左右的融合表达蛋白;将表达纯化后的蛋白作为抗原,免疫BALB/c健康小鼠,筛选和制备了1株DHV-Ⅰ单克隆抗体细胞株。Western-blot及ELISA分析表明:表达的重组蛋白均能与鸭DHV-Ⅰ阳性血清和制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体产生反应。同时,制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体除了能与重组蛋白反应,还能识别天然的DHV-Ⅰ病毒蛋白。 展开更多

关键词 鸭肝炎病毒ⅰ型 原核表达 单克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒RNA聚合酶基因的克隆及原核表达

12

作者 王超 付玉志 +5 位作者 张伟伟 陈宗艳 李传峰 杨宗伟 吴润 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第2期20-25,共6页

根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运... 根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运用DNAStar软件对ZJ-Ⅴ株病毒与GenBank上已发表的其他不同DHV毒株的RdRp基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,结果表明,ZJ-Ⅴ株与A型DHV-ⅠR85952株（DQ226541）的同源性为97.1%,亲缘关系最近,与2株台湾新型（B型）DHV之间为76.9%和77.0%,与C-GY株和4株韩国新型（C型）DHV株之间为76.2%~76.5%,亲缘关系较远。将RdRp基因克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,获得重组表达质粒pET-RdRp,转化宿主菌E.coli BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示RdRp蛋白分子量约为65 kDa,Western blot检测证明RdRp蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的免疫学活性。本文为进一步研究DHV-Ⅰ的复制机理奠定了基础。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒(dhv-ⅰ) RNA聚合酶基因(RdRp) 原核表达 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

B族Ⅰ型清道夫受体在丙型肝炎病毒入侵细胞中的作用

13

作者 徐庆强 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期425-428,共4页

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)入侵宿主细胞是由多种受体分子介导的多步骤过程,其中B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ/SCARB1)被认为是最先与HCV作用的受体。SR-BⅠ能够与HCV包膜糖蛋白E2相结合,在此过程中位于E2蛋白氨基末端的高变区1(... 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)入侵宿主细胞是由多种受体分子介导的多步骤过程,其中B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ/SCARB1)被认为是最先与HCV作用的受体。SR-BⅠ能够与HCV包膜糖蛋白E2相结合,在此过程中位于E2蛋白氨基末端的高变区1(hypervariable region 1,HVR1)起关键作用。SR-BⅠ与HCV的相互作用不仅能够介导HCV的细胞入侵,还能降低抗体对HCV的中和作用,有助于HCV的免疫逃避。因此,深入研究SR-BⅠ在HCV入侵细胞过程中的作用机制,有望发现在HCV感染的初始环节能够高效地阻断HCV入侵细胞的靶分子,从而预防和治疗HCV的感染。本文就SR-BⅠ的生物学特性、SR-BⅠ与HCV的相互作用对病毒入侵细胞的影响及机制等方面的最新进展作一综述。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 B族ⅰ型清道夫受体 高变区1 入侵

在线阅读 下载PDF 职称材料

雏鸭接种Ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒MY株后血清生化指标的动态变化

14

作者 罗薇 柏黎黎 +3 位作者 刘内生 杨晓农 刘群 龙虎 《中国兽药杂志》 2008年第4期7-11,共5页

用Ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒MY株人工接种4日龄雏鸭，于接种后第6、12、24、48、72、96、144、168、192h及14d采集接种鸭的血液，分离血清，进行生化指标测定，并与同期接种的弱毒疫苗HY、标准毒及对照组的血清生化指标进行比对。与对照组... 用Ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒MY株人工接种4日龄雏鸭，于接种后第6、12、24、48、72、96、144、168、192h及14d采集接种鸭的血液，分离血清，进行生化指标测定，并与同期接种的弱毒疫苗HY、标准毒及对照组的血清生化指标进行比对。与对照组比较：MY组和HY组的白蛋白在接种后24h明显降低，48h差异极显著；血清谷丙转氨酶于24h、144h时段明显升高，且MY组持续至192h。标毒组则表现为接毒后，血清葡萄糖于24～96h降低，甘油三酯于72h、192h显著升高；血清总蛋白72h、96h、144h，白蛋白24—144h，球蛋白72～96h，144h明显降低；谷丙转氨酶于24～192h，血清谷草转氨酶在24～72h显著升高；尿酸72h呈一过性升高。结果表明，感染Ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒MY株与弱毒疫苗HY的血清生化变化规律相似。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒 血清生化指标 动态变化

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定 被引量：7

15

作者 李晓军 张婷婷 +3 位作者 孟凡依 刘明 李刚 张云 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期487-489,共3页

为制备抗Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的单克隆抗体(MAb),本研究采用纯化的DHV-1免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,按常规方法制备MAb,通过间接ELISA方法进行筛选获得4株能稳定传代并分泌抗DHV-1的MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为AF8、BF5、BG6和DB6... 为制备抗Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的单克隆抗体(MAb),本研究采用纯化的DHV-1免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,按常规方法制备MAb,通过间接ELISA方法进行筛选获得4株能稳定传代并分泌抗DHV-1的MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为AF8、BF5、BG6和DB6。Dot-ELISA、间接免疫荧光试验和中和试验等结果表明4株MAbs效价为1∶1 600～1∶3 200,与新型DHV无交叉反应。其中,BF5和BG6具有中和活性。抗DHV-1的MAb的制备为DHV-1的生物学特性研究及其快速诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 单克隆抗体 鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及抗体检测ELISA方法的建立 被引量：6

16

作者 董井泉 张蕾 +2 位作者 马波 师东方 王君伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期542-546,共5页

为鉴定Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)VP1蛋白优势抗原区及建立DHV-Ⅰ抗体检测ELISA方法,本研究以重组质粒pEasy-VP1为模板,将其分为5段(VP1-a^e)及全长VP1经PCR扩增,并分别克隆于pET-32a(+)进行原核表达。经western blot分析表明,截短表达的蛋... 为鉴定Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)VP1蛋白优势抗原区及建立DHV-Ⅰ抗体检测ELISA方法,本研究以重组质粒pEasy-VP1为模板,将其分为5段(VP1-a^e)及全长VP1经PCR扩增,并分别克隆于pET-32a(+)进行原核表达。经western blot分析表明,截短表达的蛋白VP1-c(80 aa^150 aa)抗原性良好。将其纯化作为包被抗原建立了DHV-Ⅰ抗体的间接ELISA检测方法。经反应条件优化确定:VP1-c包被浓度为2μg/mL,DHV-Ⅰ抗血清稀释度为1∶20,其临界值为0.208。该方法能够特异性检测DHV抗体,与其他常见的几种鸭病阳性血清无交叉反应;其批内和批间重复性试验变异系数均小于9%。应用建立的ELISA方法对48份鸭血清进行了检测,与中和试验相比较,符合率为86.9%。表明该方法可以初步应用于DHV抗体的检测和血清流行病学调查。 展开更多

关键词 鸭肝炎病毒 VP1蛋白 抗原优势区 间接ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒基因C型株的分离与鉴定 被引量：4

17

作者 张雪 龚文孝 +3 位作者 胡勇 邹忠 李冉 金梅林 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期23-26,共4页

在湖北某养殖场的雏鸭群中,出现以角弓反张和肝脏树枝状出血为特征的传染性疾病,根据临床病症初步判断疑似鸭肝炎病毒感染。使用本实验室建立的RT-PCR方法对鸭胚分离毒株进行鉴定,扩增出与预期大小相符的929bp的目的片段。该片段序列与G... 在湖北某养殖场的雏鸭群中,出现以角弓反张和肝脏树枝状出血为特征的传染性疾病,根据临床病症初步判断疑似鸭肝炎病毒感染。使用本实验室建立的RT-PCR方法对鸭胚分离毒株进行鉴定,扩增出与预期大小相符的929bp的目的片段。该片段序列与GenBank上公布的Ⅰ型鸭肝炎病毒基因C型株序列同源性达98%,由此可以确定该雏鸭群感染了新型Ⅰ型鸭肝炎病毒。雏鸭回归试验结果表明,尿囊液接种非免疫7日龄雏鸭,48h后试验组出现症状,60h出现雏鸭死亡,出现角弓反张等症状,病理剖检及组织病理学切片都能观察到特征性病理变化,对照组不出现任何临床症状及病理变化。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 变异 逆转录-聚合酶链反应 分离 鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭病毒性肝炎弱毒疫苗的研制 被引量：4

18

作者 冯涛 马秀丽 《家禽科学》 2008年第3期39-40,共2页

本试验从山东地区分离的多株Ⅰ型鸭病毒性肝炎毒株中筛选出免疫原性优良毒株CL,将其在SPF鸡胚中盲传致弱后制备鸭肝炎弱毒疫苗。安全检验、保存期和免疫效力试验结果表明,研制的鸭肝炎弱毒疫苗安全可靠,无毒副作用;-20℃条件下可保存6... 本试验从山东地区分离的多株Ⅰ型鸭病毒性肝炎毒株中筛选出免疫原性优良毒株CL,将其在SPF鸡胚中盲传致弱后制备鸭肝炎弱毒疫苗。安全检验、保存期和免疫效力试验结果表明,研制的鸭肝炎弱毒疫苗安全可靠,无毒副作用;-20℃条件下可保存6个月以上;接种后抗体产生快,3d便可产生较强的免疫力,7d时抗体中和效价为26.3,一次免疫抗体可维持6周以上。 展开更多

关键词 鸭病毒性肝炎 ⅰ型 弱毒疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸭肝炎病毒Ⅰ型VP35'端截短基因的原核表达

19

作者 张继玲 朱善元 +4 位作者 王安平 刘俊 王岑 左为勇 洪伟明 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期688-690,共3页

鸭病毒性肝炎（ Duck viral hepatitit,DVH）是一种由鸭肝炎病毒（ Duck hepatitis virus,DHV）感染导致的急性和高度致死性传染病,可引起21日龄以下的雏鸭发生急性肝炎,有的可能腹泻,病死率高达100%,是严重危害养鸭业的疫病之一。 DHV... 鸭病毒性肝炎（ Duck viral hepatitit,DVH）是一种由鸭肝炎病毒（ Duck hepatitis virus,DHV）感染导致的急性和高度致死性传染病,可引起21日龄以下的雏鸭发生急性肝炎,有的可能腹泻,病死率高达100%,是严重危害养鸭业的疫病之一。 DHV 主要包括3个血清型,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。3个血清型有明显的差异,无交叉免疫性。目前中国发生和流行的主要是Ⅰ型鸭肝炎病毒（ DHV-Ⅰ）[1]。该病毒属于小 RNA病毒科,为无囊膜的单股正链RNA病毒[2-3],其基因组大小约为7690 nt,具有1个开放阅读框,编码2249个氨基酸的聚合蛋白质。该聚合蛋白质经蛋白酶水解可产生11种蛋白质,即 VP0、VP1、VP3、2A1、2A2、2B、2C、3A、3B、3C、3D[4]；其中 VP3蛋白质位于衣壳表面,是 DHV 重要的结构蛋白质之一。DHV-1和人肠道病毒（ Human parechovirus,HPeV）同属于小RNA病毒科,其中HPeV VP3蛋白质的N-末端约20个氨基酸的区域具有很强的免疫原性[5],有文献报道 DHV-ⅠVP3蛋白质在该区域有较高的表面可及性、亲水性值和抗原指数,同样具有较强的免疫原性[6]。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭肝炎病毒 VP3基因 截短 原核表达 duck hepatitis virus typeⅰ

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离与鉴定

20

作者 施旭梅 邵洪泽 +4 位作者 石春军 胡桂学 许志林 白翠 毛文智 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期68-71,共4页

鸭病毒性肝炎(duck virus hepatitis,DVH)是造成养鸭业严重经济损失的传染病之一。作者对松原市某鸭场送检的病死鸭进行病毒分离试验、雏鸭回归试验、DHV分离株ELD50测定、雏鸭保护试验、鸡胚中和试验、鸭胚接种试验和电镜观察等,确诊... 鸭病毒性肝炎(duck virus hepatitis,DVH)是造成养鸭业严重经济损失的传染病之一。作者对松原市某鸭场送检的病死鸭进行病毒分离试验、雏鸭回归试验、DHV分离株ELD50测定、雏鸭保护试验、鸡胚中和试验、鸭胚接种试验和电镜观察等,确诊该病为Ⅰ型鸭病毒性肝炎。试验所分离得到的Ⅰ型鸭肝炎病毒与标准毒株的回归试验病理特征存在一定差异,其基因序列的测定及分析还有待于进一步研究。 展开更多

关键词 ⅰ型鸭病毒肝炎 分离 鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料