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以DsRed2基因为可视标记的双T-DNA共转化载体的构建 被引量:1
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作者 许明 黄志伟 +3 位作者 程祖锌 刘峰 卓学铭 郑金贵 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第3期263-268,共6页
本研究构建了以红色荧光蛋白基因DsRed2作为可视标记的双T-DNA共转化载体PCDMAR-DsRed2-hpt.该载体含有2个独立的T-DNA结构区,其中一个T-DNA区同时含有选择标记基因hpt和红色荧光蛋白基因DsRed2;另一个T-DNA区含有一个通用的多克隆位点... 本研究构建了以红色荧光蛋白基因DsRed2作为可视标记的双T-DNA共转化载体PCDMAR-DsRed2-hpt.该载体含有2个独立的T-DNA结构区,其中一个T-DNA区同时含有选择标记基因hpt和红色荧光蛋白基因DsRed2;另一个T-DNA区含有一个通用的多克隆位点,可任意插入目的基因,在多克隆位点两端含有两段顺式重复的烟草Rb7MARs,用来增强目的基因的稳定表达.此载体可用于高效培育无选择标记的转基因植物. 展开更多
关键词 双T-DNA 共转化 MAR序列 dsred2 无选择标记
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耐热木聚糖酶xynB_(64)和红色荧光蛋白Dsred2的融合表达及其应用 被引量:1
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作者 白羽 申宁 《安徽农业科学》 CAS 2012年第7期3891-3893,共3页
[目的]耐热木聚糖酶xynB64的表达研究,探讨利用红色荧光蛋白Dsred2标签简便快捷地检测包涵体复性的效率。[方法]构建重组质粒pET42a-xynB64和pET42a-xynB64-Dsred2,利用宿主菌Rosetta(DE3)进行表达,DNS法测定酶活,并检测其荧光强度和尿... [目的]耐热木聚糖酶xynB64的表达研究,探讨利用红色荧光蛋白Dsred2标签简便快捷地检测包涵体复性的效率。[方法]构建重组质粒pET42a-xynB64和pET42a-xynB64-Dsred2,利用宿主菌Rosetta(DE3)进行表达,DNS法测定酶活,并检测其荧光强度和尿素复性的包涵体。[结果]红色荧光蛋白Dsred2促进了目的蛋白可溶性表达,重溶包涵体经激发后发射光波长在583 nm,光强度与可溶性大致成正比。[结论]研究表明红色荧光蛋白Dsred2在包涵体复性中可作为报告蛋白,该结果为工业化复性包涵体提供了检测依据。 展开更多
关键词 耐热木聚糖酶xynB64 红色荧光蛋白dsred2 原核表达 包涵体
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肌肉中特异表达真核载体的构建及表达特异性验证
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作者 赵为民 任守文 +5 位作者 方晓敏 李碧侠 涂枫 付言峰 赵芳 王学敏 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1359-1366,共8页
为构建肌肉中特异表达真核载体,本试验以PGL4.10质粒为骨架,利用基因合成、酶切连接方法获得重组载体,同时利用红色荧光蛋白基因DsRed2作为标记基因来检测重组载体在非肌源细胞和肌细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了含有肌球蛋白... 为构建肌肉中特异表达真核载体,本试验以PGL4.10质粒为骨架,利用基因合成、酶切连接方法获得重组载体,同时利用红色荧光蛋白基因DsRed2作为标记基因来检测重组载体在非肌源细胞和肌细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了含有肌球蛋白轻链基因MLC启动子及其增强子的肌肉中特异表达载体,通过mRNA和蛋白水平检测,该表达载体在非肌源性细胞和肌细胞中均不表达DsRed2,只在分化的肌细胞中表达DsRed2。该表达载体的构建为制备肌肉中特异表达的转基因动物奠定了基础。 展开更多
关键词 肌肉 表达载体 MLC 启动子 dsred2 肌细胞
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尾巨桉DH32-28组培再生过程中激素浓度筛选与转基因愈伤组织获得 被引量:3
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作者 张吴滔 白卫国 +7 位作者 苏国芬 费晓云 胡浩 付朝阳 韦利达 李蔷薇 李魁鹏 徐增富 《桉树科技》 2024年第2期1-10,共10页
探索尾巨桉良种无性系DH32-28的组培再生体系,进而建立稳定的遗传转化系统,以期为进一步获得转基因桉树再生植株,以及开展桉树基因功能及分子育种研究提供参考。以DH32-28组培苗叶片和茎段为外植体,通过筛选植物生长调节剂噻苯隆(TDZ)... 探索尾巨桉良种无性系DH32-28的组培再生体系,进而建立稳定的遗传转化系统,以期为进一步获得转基因桉树再生植株,以及开展桉树基因功能及分子育种研究提供参考。以DH32-28组培苗叶片和茎段为外植体,通过筛选植物生长调节剂噻苯隆(TDZ)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、1-萘乙酸(NAA)以及吲哚丁酸(IBA)的合适浓度,进行外植体愈伤组织诱导、不定芽分化和生根诱导;通过测定愈伤组织诱导阶段以及生根诱导阶段组培材料对卡那霉素的耐受力,确定卡那霉素的临界筛选浓度,用于农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化实验。结果表明:以MS为基本培养基,0.025 mg·L^(-1) TDZ+0.15 mg·L^(-1) NAA、0.05 mg·L^(-1) TDZ+0.15 mg·L^(-1) NAA的激素配比分别最适于DH32-28叶片和茎段的愈伤诱导,愈伤诱导率均为98.3%。将诱导出的叶片和茎段愈伤组织转移到含有0.5 mg·L^(-1) 6-BA+0.1 mg·L^(-1) NAA的不定芽分化培养基中,不定芽分化率分别为44.4%和96.7%。以1/2MS为基本培养基,添加0.5 mg·L^(-1)IBA对DH32-28再生芽的不定根诱导率最高,不定根诱导率为72.8%。愈伤组织和不定芽诱导阶段的卡那霉素最适筛选浓度为5 mg·L^(-1),生根阶段最适浓度为20 mg·L^(-1)。本研究成功建立了尾巨桉无性系DH32-28高效的再生体系,并采用农杆菌介导的遗传转化方法将红色荧光蛋白报告基因DsRed2导入到DH32-28茎段受体材料,获得了表达DsRed2的转基因愈伤组织。 展开更多
关键词 尾巨桉DH32-28 再生 遗传转化 dsred2
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