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Dot-ELISA检测减蛋综合征病毒的研究 被引量:5
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作者 王雪敏 郑明球 +1 位作者 蔡宝祥 陈溥言 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第1期38-39,共2页
将辣根过氧化物酶(HRP)直接标记到McAb(IgG)上,建立了检测减蛋综合征(EDS76)病毒的DotELISA方法,可敏感、特异、及早、快速地检测细胞培养物和实验感染鸡样品中的病毒抗原,某发病鸡场的泄殖腔拭子... 将辣根过氧化物酶(HRP)直接标记到McAb(IgG)上,建立了检测减蛋综合征(EDS76)病毒的DotELISA方法,可敏感、特异、及早、快速地检测细胞培养物和实验感染鸡样品中的病毒抗原,某发病鸡场的泄殖腔拭子样品的阳性率为4333%(13/30)。 展开更多
关键词 dot-elisa 检测 减蛋综合征病毒 鸡病
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Dot-ELISA间接法检测鸡产蛋下降综合症的研究 被引量:1
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作者 王文志 颜世敢 +3 位作者 曹洪敬 秦良勇 任素芳 崔锦鹏 《山东农业科学》 1998年第5期15-18,共4页
常规方法分离纯化鸡IgG,免疫山羊制备羊抗鸡IgG二抗,以辣根过氧化物酶(HRP)标记制备酶标记物的工作浓度为1∶1000,选用硝酸纤维素膜(NC)作固相载体,建立检测EDSV抗原的斑点间接酶联免疫吸附试验诊断方法。... 常规方法分离纯化鸡IgG,免疫山羊制备羊抗鸡IgG二抗,以辣根过氧化物酶(HRP)标记制备酶标记物的工作浓度为1∶1000,选用硝酸纤维素膜(NC)作固相载体,建立检测EDSV抗原的斑点间接酶联免疫吸附试验诊断方法。检测EDSV鸭胚毒40份,阳性检出率100%;人工感染发病鸡的卵巢、输卵管、泄殖腔拭子各50份,阳性检出率分别为100%、100%、94%。与传染性支气管炎、新城疫、传染性法氏囊病无交叉反应,试验显示该方法简便、特异、快速、结果直观、便于生产应用。 展开更多
关键词 dot-elisa 产蛋下降综合症 检测
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鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用 被引量:1
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作者 魏蔷 李青梅 +3 位作者 金前跃 宋亚鹏 白怡霖 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第2期128-135,共8页
为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iE... 为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 纤维蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 双抗体夹心elisa
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单抗夹心ELISA检测产蛋下降综合征病毒的研究 被引量:1
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作者 王雪敏 蔡宝祥 +1 位作者 郑明球 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1998年第3期8-9,共2页
利用3株特异性单抗,建立了检测EDSV的夹心ELISA方法。经测定,McAb最适包被浓度为2μg/ml,McAb-HRP最佳工作浓度为1∶400,该方法最小检出浓度为0.03μg/ml,与常见的几种鸡的传染病的病原无... 利用3株特异性单抗,建立了检测EDSV的夹心ELISA方法。经测定,McAb最适包被浓度为2μg/ml,McAb-HRP最佳工作浓度为1∶400,该方法最小检出浓度为0.03μg/ml,与常见的几种鸡的传染病的病原无交叉反应。对某发病鸡场的50份泄殖腔拭子样本进行了检测,阳性率为84%(42/50)。 展开更多
关键词 elisa 检测 减蛋综合征 病毒 鸡病
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上海地区近几年鸭新发病毒性传染病的血清学调查 被引量:8
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作者 周锦萍 孙泉云 +6 位作者 刘佩红 陈备娟 杨文 沈悦 鞠龚讷 卢军 薛霞 《中国家禽》 北大核心 2005年第3期9-11,共3页
于2003年从上海市5个区17个养鸭场(户)的鸭群中采集276份血清样品,采用进口ELISA试剂盒对冠状病毒、传染性法氏囊病毒、新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒的感染状况进行了血清学调查。结果表明,受检鸭群存有不同程度的阳性率,原来只感染... 于2003年从上海市5个区17个养鸭场(户)的鸭群中采集276份血清样品,采用进口ELISA试剂盒对冠状病毒、传染性法氏囊病毒、新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒的感染状况进行了血清学调查。结果表明,受检鸭群存有不同程度的阳性率,原来只感染鸡的疫病逐步向鸭群延伸。 展开更多
关键词 鸭群 血清学调查 上海地区 传染性法氏囊病毒 产蛋下降综合征 血清样品 养鸭 新发 发病 病毒性传染病
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PCR方法检测鸡减蛋综合征病毒 被引量:2
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作者 王爱华 李全福 +1 位作者 苏杰 孙继国 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期88-91,共4页
根据已报道的鸡减蛋综合征(Egg drop syndrome 1976EDS-76)病毒DNA序列,设计合成了1对能扩增300bpDNA片段的引物,建立了EDS-76病毒的聚合酶链式反应(PCR)诊断方法。该方法对EDS-76病毒标准株AV-127扩增结果为阳性;对鸡传染性支... 根据已报道的鸡减蛋综合征(Egg drop syndrome 1976EDS-76)病毒DNA序列,设计合成了1对能扩增300bpDNA片段的引物,建立了EDS-76病毒的聚合酶链式反应(PCR)诊断方法。该方法对EDS-76病毒标准株AV-127扩增结果为阳性;对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的扩增结果均为阴性。结果表明该方法特异且敏感,检测的最低病毒DNA含量达到2.5×10^-2pg,PCR检测表明,从试验感染鸡的心脏中不能检测出病毒,肝脏和肾脏只有在感染后7~15d检出,在试验感染后4~21d的子宫、血液和4~17d的脾中均能检测到病毒。 展开更多
关键词 鸡减蛋综合征(EDS-76)病毒 聚合酶链式反应 检测
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减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立 被引量:3
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作者 董春娜 李刚 +4 位作者 李伟 张坤 史利军 哈小琴 胡永浩 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期1-5,共5页
根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μmol·L-1,内引物浓度0.8μmol... 根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μmol·L-1,内引物浓度0.8μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 mmol·L-1,dNTP浓度0.8 mmol·L-1,甜菜碱浓度0.5 mmol·L-1,BstDNA聚合酶浓度8 U,最佳反应温度65℃;扩增出的EDSV基因呈特征性梯状条带,显色反应呈绿色荧光;检测EDSV的灵敏度高,是普通PCR检测的10倍,可检测到60个拷贝的基因组DNA;特异性强,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡胚致死孤儿病毒(CELO)无交叉反应;该方法重复性好,稳定性高,可准确快速地进行减蛋综合征病毒的检测. 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 环介导等温扩增 检测
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应用二重实时荧光定量RT-PCR鉴别坦布苏病毒与产蛋下降综合征病毒 被引量:9
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作者 曾婷婷 谢芝勋 +6 位作者 谢丽基 邓显文 谢志勤 罗思思 刘加波 黄莉 黄娇玲 《中国家禽》 北大核心 2015年第1期17-21,共5页
为更加快速敏感地对两种导致产蛋下降的禽类病毒:坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒进行鉴别,试验建立了一套二重实时荧光定量RT-PCR方法。通过针对两种病毒的特异保守序列,设计两套引物和探针,分别标记不同的荧光基团和淬灭基团,并优化... 为更加快速敏感地对两种导致产蛋下降的禽类病毒:坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒进行鉴别,试验建立了一套二重实时荧光定量RT-PCR方法。通过针对两种病毒的特异保守序列,设计两套引物和探针,分别标记不同的荧光基团和淬灭基团,并优化反应体系。结果显示:建立的二重实时荧光定量RT-PCR方法只扩增这两种病毒的目的片段,无交叉扩增反应,与其他常见禽类病原体也无扩增反应;该检测体系最低可同时检测100个拷贝的坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒,比常规PCR和RT-PCR敏感10~100倍;检测30份样品,共检出7份EDSV阳性,6份TMUV阳性,与病毒分离结果符合。表明建立的二重实时荧光定量RT-PCR方法可以快速、敏感、特异地鉴别诊断坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 产蛋下降综合征病毒 荧光探针 鉴别
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