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DoksPTB结构域与EGFR特异性结合 被引量:1
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作者 阎志勇 吴爱群 +2 位作者 张勇 路长林 何成 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第3期509-511,共3页
目的:探讨Doks家族的PTB结构域在识别上游分子时的特异性。方法:利用裂解大量内源性表达表皮生长因子受体(EGFR)的COS-7传代细胞株获取EGFR,利用大肠杆菌表达GST融合蛋白GST1PTB、GST4PTB和GST5PTB,采用GST共沉淀技术检测Dok1、4和5的PT... 目的:探讨Doks家族的PTB结构域在识别上游分子时的特异性。方法:利用裂解大量内源性表达表皮生长因子受体(EGFR)的COS-7传代细胞株获取EGFR,利用大肠杆菌表达GST融合蛋白GST1PTB、GST4PTB和GST5PTB,采用GST共沉淀技术检测Dok1、4和5的PTB结构域能否与EGFR结合。结果:Dok1的PTB结构域,而非Dok4和Dok5的PTB结构域,能够特异性地与被激活的EGFR结合,不能与未激活的EGFR结合。结论:Doks家族的PTB结构域功能有差别,即PTB结构域在识别上游分子时具有特异性。 展开更多
关键词 doks PTB结构域 谷胱苷肽-S转移酶共沉淀 表皮生长因子受体
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p62Dok PTB结构域融合蛋白的表达和纯化 被引量:3
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作者 阎志勇 吴爱群 +4 位作者 张勇 由振东 路长林 周明明 何成 《河南医科大学学报》 北大核心 2001年第4期404-407,共4页
目的 :制备p6 2DokPTB结构域的GST融合蛋白。方法 :用PCR方法扩增编码p6 2DokPTB结构域的cD NA ,并将其克隆入表达载体pGEX 4T 3中 ,转化大肠杆菌BL 2 1,构建成表达GST PTB融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后 ,经Glutathion Sepharose 4... 目的 :制备p6 2DokPTB结构域的GST融合蛋白。方法 :用PCR方法扩增编码p6 2DokPTB结构域的cD NA ,并将其克隆入表达载体pGEX 4T 3中 ,转化大肠杆菌BL 2 1,构建成表达GST PTB融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后 ,经Glutathion Sepharose 4B亲和层析柱纯化 ,用SDS PAGE进行分析 ,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的 2 5 %。结果 :获得重组GST PTB融合蛋白 ,纯度在 95 %以上 ,产物得率约 75 %。结论 :成功制备高纯度p6 2DokPTB结构域的GST融合蛋白 ,为进一步研究p6 2DokPTB结构域的结构和生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 p62Dok PTB结构域 重组蛋白 融合蛋白 基因表达 纯化
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Dok1与表皮生长因子受体之间相互作用的酵母双杂交研究
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作者 张勇 刘秀杰 +5 位作者 张骐 阎志勇 矫力 刘翾 路长林 何成 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期755-758,共4页
目的 :研究 downstream of kinases(dok1 )与表皮生长因子受体 (EGFR)之间的相互作用 ,寻找 EGFR的可能底物或调控蛋白 ,以深入认识 EGFR下游信号转导机制。 方法 :将 EGFR胞内域与 L ex A蛋白融合作为 DNA结合蛋白 ,分别将dok1、dok1 ... 目的 :研究 downstream of kinases(dok1 )与表皮生长因子受体 (EGFR)之间的相互作用 ,寻找 EGFR的可能底物或调控蛋白 ,以深入认识 EGFR下游信号转导机制。 方法 :将 EGFR胞内域与 L ex A蛋白融合作为 DNA结合蛋白 ,分别将dok1、dok1 PTB及 dok1 ΔPTB与 B4 2 AD蛋白融合作为激活域蛋白 ,共转化酵母菌后 ,通过 β-半乳糖苷酶活性检测、生长实验以及免疫共沉淀实验分析它们之间的相互作用。结果 :dok1及 dok1 PTB与 EGFR之间在酵母中存在结合 ,而 dok1Δ PTB不与 EGFR结合。 结论 :首次证实 EGFR与 dok1之间具有相互作用 ,dok 1的 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 dok1 PTB 酵母双杂交
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表皮生长因子受体与Dok1 PTB结构域结合关键位点的确定
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作者 阎志勇 蔡太生 +3 位作者 张勇 汤善均 路长林 何成 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第6期1107-1109,共3页
目的确定表皮生长因子受体(EGFR)与Dok1PTB结构域结合的关键氨基酸残基位点。方法合成包含磷酸化的酪氨酸残基的EGFR胞内域的5个小肽片段,利用谷胱苷肽S转移酶共沉淀技术确定能够抑制Dok1PTB结构域与激活的EGFR结合的小肽。结果pY1086或... 目的确定表皮生长因子受体(EGFR)与Dok1PTB结构域结合的关键氨基酸残基位点。方法合成包含磷酸化的酪氨酸残基的EGFR胞内域的5个小肽片段,利用谷胱苷肽S转移酶共沉淀技术确定能够抑制Dok1PTB结构域与激活的EGFR结合的小肽。结果pY1086或pY1148小肽能抑制激活的EGFR与Dok1PTB结构域的结合。结论pY1086和pY1148是激活的EGFR与Dok1PTB结构域结合的关键位点。 展开更多
关键词 EGFR Dok1 谷胱苷肽-S转移酶共沉淀
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流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究 被引量:2
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作者 黄山雨 梁立滨 +10 位作者 李俊平 王倩 赵青青 周陈陈 赵玉辉 王广文 李奇兵 孔凡迪 李呈军 陈化兰 姜丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期987-992,共6页
A型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是病毒编码的必需蛋白,在病毒复制周期中发挥重要作用。NS1蛋白在病毒侵入宿主后大量表达,抑制宿主干扰素通路的激活,选择性关闭宿主基因的表达且能够增强病毒蛋白的表达。为研究宿主DOK6蛋白与NS1蛋白的相... A型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是病毒编码的必需蛋白,在病毒复制周期中发挥重要作用。NS1蛋白在病毒侵入宿主后大量表达,抑制宿主干扰素通路的激活,选择性关闭宿主基因的表达且能够增强病毒蛋白的表达。为研究宿主DOK6蛋白与NS1蛋白的相互作用关系,本研究利用重组质粒p CAGGS-V5-DOK6、p CAGGS-Flag-NS1共转染293T细胞,利用免疫共沉淀试验(Co-IP)检测,结果显示沉淀NS1蛋白后能够检测到DOK6蛋白条带,表明DOK6蛋白与NS1蛋白存在相互作用;将二者共转染A549细胞后利用激光共聚焦显微镜观察,发现二者在细胞质中存在共定位,表明两种蛋白在细胞质中发生相互作用。通过双分子荧光互补试验(BiFC)检测,结果显示NS1蛋白能够与DOK6蛋白的磷酸化酪氨酸结合结构域(Phosphotyrosine binding domain,PTB)结合从而发出较强荧光,表明NS1蛋白能够与DOK6蛋白(PTB)结构域发生相互作用。本研究进一步完善了A型流感病毒NS1蛋白参与的复杂分子间相互作用网络,为深入理解流感病毒在宿主体内复制的分子调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 流感病毒 NS1蛋白 DOK6蛋白 蛋白相互作用
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Dok 6促进神经营养因子3诱导的过表达原肌球蛋白相关激酶C的PC12细胞突起生长 被引量:1
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作者 李玮琦 尤元刚 +1 位作者 阴彬 彭小忠 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期751-755,802,共6页
目的探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行... 目的探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行过表达,之后用NT-3刺激PC12细胞突起生长,检测不同Dok6片段的效应。结果各个融合克隆均能在细胞内稳定表达。融合了Dok6 PTB结构域+C末端以及单纯C末端的融合克隆均可以挽救由于TrkC受体516位酪氨酸突变导致的PC12细胞突起生长减少,而融合单纯的Dok6 PTB结构域则无此效应。结论Dok6可以促进NT-3诱导的过表达TrkC的PC12细胞突起生长,并且此效应与其C末端密切相关。 展开更多
关键词 Dok6 PC12细胞 神经营养因子3 突起生长 融合克隆
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Dok1与TrkA之间相互作用的酵母双杂交研究
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作者 刘翾 张勇 +5 位作者 矫力 刘秀杰 张照环 王永刚 朱伟 何成 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期497-499,共3页
目的:研究downstream of kinases1(dok1)与TrkA之间的相互作用,寻找TrkA的可能底物或调控蛋白,以深入认识TrkA下游信号转导机制。方法:将TrkA胞内域与LexA蛋白融合作为DNA结合蛋白,分别将dok1、dok1PTB及dok1ΔPTB与B42AD蛋白融合作为... 目的:研究downstream of kinases1(dok1)与TrkA之间的相互作用,寻找TrkA的可能底物或调控蛋白,以深入认识TrkA下游信号转导机制。方法:将TrkA胞内域与LexA蛋白融合作为DNA结合蛋白,分别将dok1、dok1PTB及dok1ΔPTB与B42AD蛋白融合作为激活域蛋白,共转化酵母菌后,通过β-半乳糖苷酶活性检测以及氨基酸营养缺陷生长实验分析它们之间的相互作用。结果:dok1及dok1PTB与TrkA之间在酵母中存在结合,而dok1ΔPTB不与TrkA结合。结论:证实TrkA与dok1之间具有相互作用,dok1的PTB结构域在介导此相互作用的过程中非常重要。 展开更多
关键词 TRKA Dok1 酵母双杂交
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脂质诱导的p62^(dok)高表达增加肝葡萄糖异生
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作者 裴亚萍 丁佑铭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1676-1680,共5页
目的:探讨p62dok表达与肝细胞葡萄糖异生间的相互关系。方法:利用小鼠高脂饮食模型,观察p62dok表达与肝组织胰岛素信号转导和葡萄糖异生调节蛋白表达间的关系;利用原代培养的小鼠肝细胞,采用基因沉默和过表达等方法,研究p62dok表达量对... 目的:探讨p62dok表达与肝细胞葡萄糖异生间的相互关系。方法:利用小鼠高脂饮食模型,观察p62dok表达与肝组织胰岛素信号转导和葡萄糖异生调节蛋白表达间的关系;利用原代培养的小鼠肝细胞,采用基因沉默和过表达等方法,研究p62dok表达量对胰岛素信号通路和葡萄糖异生的影响。采用蛋白免疫印迹法检测蛋白和磷酸化蛋白表达。结果:在高脂饮食处理的小鼠肝组织和游离脂肪酸处理的原代培养小鼠肝细胞中,p62dok的表达量显著增加、蛋白激酶B(Akt)和叉头框蛋白O1(FoxO1)磷酸化程度降低,葡萄糖异生调节蛋白葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)的含量增加。沉默p62dok可增加游离脂肪酸处理的原代培养小鼠肝细胞中Akt和FoxO1磷酸化,降低G6Pase和PEPCK的含量。结论:高脂可上调肝细胞p62dok表达,并通过抑制胰岛素信号转导而调节葡萄糖异生。 展开更多
关键词 p62dok 肝细胞 葡萄糖异生 胰岛素信号转导
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基于DOK分级模式的研究型课堂教学设计——物质在溶解过程中有能量变化吗 被引量:3
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作者 张建波 《化学教学》 CAS 北大核心 2018年第7期63-67,共5页
将DOK分级模式应用于化学课堂教学设计;用具体的课例,详细说明不同的DOK分级在教学中的对应呈现方式。通过设计相应的教学活动,有助于研究型课堂的打造。
关键词 DOK分级模式 知识深度分级 研究型课堂 教学设计
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