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流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究 被引量:2
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作者 黄山雨 梁立滨 +10 位作者 李俊平 王倩 赵青青 周陈陈 赵玉辉 王广文 李奇兵 孔凡迪 李呈军 陈化兰 姜丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期987-992,共6页
A型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是病毒编码的必需蛋白,在病毒复制周期中发挥重要作用。NS1蛋白在病毒侵入宿主后大量表达,抑制宿主干扰素通路的激活,选择性关闭宿主基因的表达且能够增强病毒蛋白的表达。为研究宿主DOK6蛋白与NS1蛋白的相... A型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是病毒编码的必需蛋白,在病毒复制周期中发挥重要作用。NS1蛋白在病毒侵入宿主后大量表达,抑制宿主干扰素通路的激活,选择性关闭宿主基因的表达且能够增强病毒蛋白的表达。为研究宿主DOK6蛋白与NS1蛋白的相互作用关系,本研究利用重组质粒p CAGGS-V5-DOK6、p CAGGS-Flag-NS1共转染293T细胞,利用免疫共沉淀试验(Co-IP)检测,结果显示沉淀NS1蛋白后能够检测到DOK6蛋白条带,表明DOK6蛋白与NS1蛋白存在相互作用;将二者共转染A549细胞后利用激光共聚焦显微镜观察,发现二者在细胞质中存在共定位,表明两种蛋白在细胞质中发生相互作用。通过双分子荧光互补试验(BiFC)检测,结果显示NS1蛋白能够与DOK6蛋白的磷酸化酪氨酸结合结构域(Phosphotyrosine binding domain,PTB)结合从而发出较强荧光,表明NS1蛋白能够与DOK6蛋白(PTB)结构域发生相互作用。本研究进一步完善了A型流感病毒NS1蛋白参与的复杂分子间相互作用网络,为深入理解流感病毒在宿主体内复制的分子调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 流感病毒 NS1蛋白 dok6蛋白 蛋白相互作用
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Dok 6促进神经营养因子3诱导的过表达原肌球蛋白相关激酶C的PC12细胞突起生长 被引量:1
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作者 李玮琦 尤元刚 +1 位作者 阴彬 彭小忠 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期751-755,802,共6页
目的探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行... 目的探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行过表达,之后用NT-3刺激PC12细胞突起生长,检测不同Dok6片段的效应。结果各个融合克隆均能在细胞内稳定表达。融合了Dok6 PTB结构域+C末端以及单纯C末端的融合克隆均可以挽救由于TrkC受体516位酪氨酸突变导致的PC12细胞突起生长减少,而融合单纯的Dok6 PTB结构域则无此效应。结论Dok6可以促进NT-3诱导的过表达TrkC的PC12细胞突起生长,并且此效应与其C末端密切相关。 展开更多
关键词 dok6 PC12细胞 神经营养因子3 突起生长 融合克隆
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