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Direct-PCR检测柑橘黄龙病的快速制样方法研究 被引量：4
1
作者 王华堂 曾鑫年 +1 位作者 薛培培 杨柳 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期733-738,共6页
【目的】开发一种适用于Direct-PCR快速简便、有效的柑橘黄龙病病原DNA提取方法。【方法】从样品制备、提取速度以及DNA纯度等方面,分别比较研究了2种Direct-PCR制样方法与普通试剂盒制样方法提取柑橘黄龙病病原DNA的优缺点,并利用优化... 【目的】开发一种适用于Direct-PCR快速简便、有效的柑橘黄龙病病原DNA提取方法。【方法】从样品制备、提取速度以及DNA纯度等方面,分别比较研究了2种Direct-PCR制样方法与普通试剂盒制样方法提取柑橘黄龙病病原DNA的优缺点,并利用优化的制样技术分别比较了柑橘黄龙病病原16S rDNA的扩增效果。【结果】其中一种Direct-PCR制样方法所提取的柑橘叶片样品经RT-qPCR检测可以检测出黄龙病病原;通过优化制样后,该方法所提取的样品还可以通过常规PCR进行黄龙病病原检测。【结论】开发了一种更为快速简便、有效的柑橘黄龙病病原DNA提取方法,可为大批量快速检测柑橘黄龙病提供技术支撑。 展开更多
关键词 柑橘 黄龙病病原 direct-pcr DNA提取
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Nested-PCR检测种传番茄细菌性溃疡病菌 被引量：6
2
作者 闵现华 刘箐 +6 位作者 韩跃武 文朝慧 王军平 刘姝彤 刘雅莉 宋蕤 施颖波 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期28-31,共4页
利用番茄溃疡病菌特异性引物对纯菌液、模拟带菌种子及自然感染种子提取液分别进行Direct-PCR和Nested-PCR检测。结果在纯菌液中,Direct-PCR的检测灵敏度为105cfu/mL,Nested-PCR为102cfu/mL;在模拟带菌种子提取液中,Direct-PCR的检测灵... 利用番茄溃疡病菌特异性引物对纯菌液、模拟带菌种子及自然感染种子提取液分别进行Direct-PCR和Nested-PCR检测。结果在纯菌液中,Direct-PCR的检测灵敏度为105cfu/mL,Nested-PCR为102cfu/mL;在模拟带菌种子提取液中,Direct-PCR的检测灵敏度为107cfu/mL,Nested-PCR为104cfu/mL;在自然感染种子提取液中,稀释104倍后Nested-PCR仍然可以检出。建立的番茄种子Nested-PCR检测技术,无需经过核酸提取步骤,可以在8 h内完成整个检测过程,方便快捷,成本低廉,可作为番茄种子带菌的常规检测方法。 展开更多
关键词 番茄溃疡病 番茄种子 direct-pcr NESTED-PCR
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香蕉束顶病毒PCR检测技术研究 被引量：21
3
作者 肖火根 胡晋生 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期5-8,共4页
建立了聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ），并报道了ＢＢＴＶ免疫捕捉ＰＣＲ（ＩＣ－ＰＣＲ）和直接结合ＰＣＲ（ＤＢ－ＰＣＲ）检测方法ＩＣ－ＰＣＲ和ＤＢ－ＰＣＲ分别能从４μ... 建立了聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ），并报道了ＢＢＴＶ免疫捕捉ＰＣＲ（ＩＣ－ＰＣＲ）和直接结合ＰＣＲ（ＤＢ－ＰＣＲ）检测方法ＩＣ－ＰＣＲ和ＤＢ－ＰＣＲ分别能从４μｇ和０． 展开更多
关键词 香蕉 束顶病毒 免疫捕捉PCR 直接结合PCR
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猪圆环病毒2型快速直接PCR检测方法的建立与流行病学调查 被引量：8
4
作者 徐引弟 闫静娟 +5 位作者 焦文强 王治方 张青娴 朱文豪 李海利 王克领 《山西农业科学》 2018年第8期1374-1377,共4页
为了解河南省猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学情况,参考Gen Bank的PCV2 ORF2的序列,设计1对引物,建立PCV2的快速直接PCR检测方法,并进行特异性和敏感性试验。运用该方法对2016年5月至2017年5月采集到的河南省共125份疑似猪圆环病毒2型的... 为了解河南省猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学情况,参考Gen Bank的PCV2 ORF2的序列,设计1对引物,建立PCV2的快速直接PCR检测方法,并进行特异性和敏感性试验。运用该方法对2016年5月至2017年5月采集到的河南省共125份疑似猪圆环病毒2型的病料进行PCV2检测,阳性样品测序,分析河南省PCV2的遗传变异情况。结果显示,建立的PCR检测方法快速、特异、敏感,适用于临床检测或流行病学调查;所检测的125份样品中,55份样品为PCV2阳性,阳性率高达44%。阳性结果序列分析显示,核苷酸序列同源性在88.7%~99.8%,42份在PCV2b基因群。结果表明,河南省PCV2感染率较高,PCV2b为流行血清亚型,病毒变异严重。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 直接PCR ORF2 序列分析
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免疫捕捉PCR和直接PCR技术检测单核细胞增生性李斯特菌比较研究 被引量：3
5
作者 刘雅莉 刘箐 +6 位作者 刘芳 韩舜愈 王婧 夏俊芳 汪小波 樊学军 田绿波 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第20期243-248,共6页
将免疫学技术与分子生物学技术相结合,建立了免疫捕捉PCR(IC-PCR),并与传统的直接PCR(Direct-PCR)进行比较。结果显示:纯菌液中IC-PCR检测灵敏度(104CFU/mL)是Direct-PCR灵敏度(105CFU/mL)的10倍;模拟带菌实验结果表明:IC-PCR最低可检测... 将免疫学技术与分子生物学技术相结合,建立了免疫捕捉PCR(IC-PCR),并与传统的直接PCR(Direct-PCR)进行比较。结果显示:纯菌液中IC-PCR检测灵敏度(104CFU/mL)是Direct-PCR灵敏度(105CFU/mL)的10倍;模拟带菌实验结果表明:IC-PCR最低可检测到5×101个细菌/PCR反应体系(即104CFU/mL),检测限比Direct-PCR(5×103个细菌/PCR反应体系即106CFU/mL)高100倍;特异性实验、干扰实验结果表明IC-PCR可特异检测单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monaytogenes,LM),而和18株其他常见食源性致病菌无交叉反应。IC-PCR具有快速、经济、灵敏、特异等优点,是一种适合食品安全监管部门、食品企业的LM快速检测方法。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 免疫捕捉PCR 直接PCR
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PCR产物直接测序技术中影响因素的研究 被引量：14
6
作者 徐祖元 包其郁 牛宇欣 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期548-550,共3页
探讨了PCR产物直接测序技术中的影响因素,结果表明:PCR产物特异性是影响其测序成败的关键因素,PCR反应只有产生惟一扩增产物时,其产物才能被用来直接测序;PCR反应体系残留混合物（dNTP、引物和盐离子等）对其测序质量有明显不利影响,PC... 探讨了PCR产物直接测序技术中的影响因素,结果表明:PCR产物特异性是影响其测序成败的关键因素,PCR反应只有产生惟一扩增产物时,其产物才能被用来直接测序;PCR反应体系残留混合物（dNTP、引物和盐离子等）对其测序质量有明显不利影响,PCR产物纯化后其测序质量能明显提高;同时,PCR产物大小不同,其测序反应的模板用量也不同,在一定长度范围内,最适模板用量随PCR产物长度增加而增加。 展开更多
关键词 PCR产物 直接测序技术 影响因素 聚合酶链反应 DNA自动测序仪
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Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用 被引量：5
7
作者 邹凯南 曹禹 +2 位作者 夏子芳 郑卫国 周怀谷 《法医学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期448-450,共3页
目的验证Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用价值。方法取FTA卡、滤纸上保存的建库血样和各类涉案生物性检材1948份,用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型检测,同时采用SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex... 目的验证Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用价值。方法取FTA卡、滤纸上保存的建库血样和各类涉案生物性检材1948份,用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型检测,同时采用SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex16试剂盒进行平行试验。对4个试剂盒相同基因座的分型进行比对,以确认Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的灵敏度和准确性。结果 Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的检测成功率为97.79%,同一样本在相同基因座与SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex16试剂盒的STR分型结果相同。结论利用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型,信息量大、结果准确可靠,可应用于法庭科学。 展开更多
关键词 法医遗传学 短串联重复序列 Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒
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云南玉溪葡萄糖-6-磷酸脱氧酶缺乏症基因突变研究 被引量：4
8
作者 潘宝龙 田兴亚 +2 位作者 张秀琴 黄尤光 李树德 《实用医学杂志》 CAS 2007年第21期3314-3317,共4页
目的:调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率,分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征,探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法。方法:NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人,NBT定量酶活性,PCR-ARMS法检测中国人中最常见的三种突变,作P... 目的:调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率,分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征,探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法。方法:NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人,NBT定量酶活性,PCR-ARMS法检测中国人中最常见的三种突变,作PCR-SSCP分析,最后用DNA测序分析和证实。结果:(1)450例当地居民筛查发现G6PD缺乏症患者48例(男31例,女17例)。(2)PCR-ARMS发现G1388A21例(43.75%)、G1376T4例(8.33%),未见A95G。(3)PCR-SSCP发现27例异常,PCR-DNA测序结果与PCR-ARMS结果吻合。2份未知突变样本测序分析证实为C1311T。(4)测序发现复合型突变:1例G1376T/IVS-11T93C,1例G1376T/C1311T和1例G1388A/IVS-11T93C。结论:(1)云南玉溪G6PD缺乏症发病率为10.67%,男性13.78%,女性7.56%;男、女性别比例1.82。(2)云南玉溪G6PD缺乏症基因突变以Gl388A突变最常见,其次是G1376T突变,两种突变共占52.08%,未发现A95G突变。(3)研究云南玉溪G6PD缺乏症基因突变型对指导优生、优育,预防该病的遗传传播,提高我省各地州人口素质具有一定的社会意义。对开展G6PD缺乏症的基因诊断具有一定的应用价值和指导意义。 展开更多
关键词 基因 突变 G6PD缺乏症PCR-ARMS PCR-SSCP PCR-DNA测序
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在单个PCR管内快捷完成定点突变 被引量：6
9
作者 谢振华 史小军 蔡国平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期681-684,共4页
采用大引物方法,利用质粒多克隆位点两侧的普通测序引物作为旁侧引物,在单个PCR管内,经2个步骤共34个循环进行定点突变.该方法通过优化模板和引物的量达到降低PCR循环次数,通过加入10个在68℃复性条件下的PCR循环达到增加突变效率而无... 采用大引物方法,利用质粒多克隆位点两侧的普通测序引物作为旁侧引物,在单个PCR管内,经2个步骤共34个循环进行定点突变.该方法通过优化模板和引物的量达到降低PCR循环次数,通过加入10个在68℃复性条件下的PCR循环达到增加突变效率而无需胶纯化.本方法达到平均62%的突变效率,而且全长扩增产物的产率很高. 展开更多
关键词 定点突变 PCR 大引物
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猪肉中常见致病菌的多重直接PCR法的建立与应用 被引量：2
10
作者 宋雪 赵格 +7 位作者 王娟 黄秀梅 盖文燕 赵建梅 曲志娜 李月华 张林波 王君玮 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期710-715,共6页
目的建立检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌和小肠耶尔森氏菌5种致病菌的多重直接PCR方法。方法根据大肠杆菌phoA、沙门氏菌invA、金黄色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小肠耶尔森氏菌ail的基因序列,设计多重直接PCR引物,... 目的建立检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌和小肠耶尔森氏菌5种致病菌的多重直接PCR方法。方法根据大肠杆菌phoA、沙门氏菌invA、金黄色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小肠耶尔森氏菌ail的基因序列,设计多重直接PCR引物,建立并优化多重直接PCR反应条件,检测引物的扩增特异性和灵敏性,并将所建立的方法应用于实际采集猪肉样本的检测,与金标培养法相比较,计算多重直接PCR检测法的敏感性、准确性以及阳性预测值。结果所设计的多重直接PCR引物对5种菌都有特异扩增,最低检出限量大肠杆菌为10CFU,金黄色葡萄球菌敏感性为100CFU,沙门氏菌、李斯特菌、小肠耶尔森氏菌敏感性可达1CFU。60份猪肉样本中检出大肠杆菌15份、沙门氏菌6份、金黄色葡萄球菌21份、李斯特菌20份、小肠耶尔森氏菌35份,阳性检出率均高于金标培养法,总体检测敏感性为100%,准确性为94%,阳性预测值为81.44%。结论多重直接PCR法实现了同时对各食源性致病菌敏感特异的检测,并且省去了提取模板的步骤,将检测时间缩短至3h左右,便于食品安全风险监测中常见食源性致病菌的通量检测。 展开更多
关键词 多重直接PCR 猪肉 食源性致病菌
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免疫捕获PCR法快速检测金黄色葡萄球菌 被引量：2
11
作者 夏俊芳 刘箐 +7 位作者 韩舜愈 刘芳 王婧 刘雅莉 汪小波 樊学军 田绿波 黄超杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期181-187,共7页
旨在建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)免疫捕获PCR技术,并探讨其灵敏度和特异性。SA特异性抗体包被PCR管以富集待测样品中目标菌,之后在同一PCR管里直接进行免疫捕获PCR,并和直接PCR比较。免疫捕获PCR法可特... 旨在建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)免疫捕获PCR技术,并探讨其灵敏度和特异性。SA特异性抗体包被PCR管以富集待测样品中目标菌,之后在同一PCR管里直接进行免疫捕获PCR,并和直接PCR比较。免疫捕获PCR法可特异性检测2株SA菌株,而无法检测到其它8种常见食源性致病菌,说明该方法对SA具有良好的特异性;该方法对纯菌液而言,检测灵敏度可达到2.35×102CFU/mL,是直接PCR的100倍;对5种食品模拟带菌检测发现,无需增菌培养,其灵敏度可达到2.35×103-2.35×104CFU/mL,是直接PCR的10-100倍。免疫捕获PCR法集免疫学与分子生物学检测技术于一体,具有高特异性、高灵敏度、检测快速、易于操作、成本低廉等诸多优点,是一种适合基层实验室使用的检测技术。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 免疫捕获PCR 直接PCR
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用滚环扩增与大引物PCR法高效构建定点突变序列 被引量：7
12
作者 赵松子 沈向群 《江西农业学报》 CAS 2009年第8期7-8,11,共3页
建立了一种简单、快捷的高效定点诱变方法。第一轮PCR反应中,上游引物和突变引物先以1∶10的比例进行不对称PCR,提高大引物突变比例。第二轮PCR反应以滚环扩增产生的单链DNA作为大引物PCR反应的模板,不需要优化PCR反应的条件,通过一般... 建立了一种简单、快捷的高效定点诱变方法。第一轮PCR反应中,上游引物和突变引物先以1∶10的比例进行不对称PCR,提高大引物突变比例。第二轮PCR反应以滚环扩增产生的单链DNA作为大引物PCR反应的模板,不需要优化PCR反应的条件,通过一般的反应条件就可得到大量PCR产物,并且诱变的成功率可达100%。 展开更多
关键词 滚环扩增 定点突变 PCR 大引物
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一种热激PCR法高效鉴定重组克隆 被引量：3
13
作者 顾洪雁 袁晓伟 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期36-39,共4页
利用热激PCR法和菌落直接PCR法进行大肠杆菌和农杆菌的鉴定,筛选含有GFP-linker-C-TAPa或wtGPA1-C-TAPa的pCAMBIA2300EC的阳性克隆,比较热激PCR法和菌落直接PCR法的优劣。热激PCR法阳性检出率是100%,菌落直接PCR法阳性检出率是60%左右... 利用热激PCR法和菌落直接PCR法进行大肠杆菌和农杆菌的鉴定,筛选含有GFP-linker-C-TAPa或wtGPA1-C-TAPa的pCAMBIA2300EC的阳性克隆,比较热激PCR法和菌落直接PCR法的优劣。热激PCR法阳性检出率是100%,菌落直接PCR法阳性检出率是60%左右。热激PCR法是一种快速可靠的鉴定重组阳性克隆的方法。 展开更多
关键词 热激PCR 菌落直接PCR 阳性检出率
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中国汉族人群中Dia抗原和Dib抗原的分子遗传分析 被引量：25
14
作者 杨宝成 苏宇清 +3 位作者 喻琼 魏天莉 李大成 梁延连 《法医学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期283-285,共3页
目的研究中国汉族人群Diego血型系统中Dia和Dib抗原表达的分子遗传背景。方法采用血型血清学方法对2990例非血缘关系的捐血者进行Diego血型鉴定,从中随机选择20例表现型为Di(a-b+)的样本,以及筛选到的所有Di(a+b-)稀有血型样本,采用PCR-... 目的研究中国汉族人群Diego血型系统中Dia和Dib抗原表达的分子遗传背景。方法采用血型血清学方法对2990例非血缘关系的捐血者进行Diego血型鉴定,从中随机选择20例表现型为Di(a-b+)的样本,以及筛选到的所有Di(a+b-)稀有血型样本,采用PCR-SSP、DNA直接测序方法分析Diego血型基因的分子遗传背景。结果2990例捐血者中,发现Di(a+b-)表现型2例,Di(a+b+)167例,Di(a-b+)2821例。随机选择的20例表现型为Di(a-b+)的DNA样本,经PCR-SSP法检测的基因型为DI2DI2,对DI基因第19外显子直接测序,2561位上碱基为C。2例稀有血型Di(a+b-)的DNA序列在19外显子2561位上碱基为T,基因型为DI1DI1。结论中国汉族人群Dia和Dib抗原表达的分子遗传基础是DI基因第19外显子2561位上碱基T-C的置换,引起第854位氨基酸的改变。 展开更多
关键词 中国汉族人群 Diego血型 PCR-SSP技术 直接测序
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RT-PCR和免疫荧光抗体试验检测猪瘟病毒的比较研究 被引量：3
15
作者 俞伏松 车勇良 +4 位作者 江斌 吴胜会 林琳 陈少莺 林天龙 《福建农业学报》 CAS 2007年第3期231-234,共4页
根据已发表的CSFV序列合成1对引物，以猪瘟病毒（CSFV）兔化弱毒株为模板，建立并优化了检测CSFV的RT—PCR方法，并与直接荧光抗体试验（DFA）进行比较，检测了15份临床疑似病料。结果如下：应用RT—PCR对CSFV兔化弱毒株RNA进行扩增，... 根据已发表的CSFV序列合成1对引物，以猪瘟病毒（CSFV）兔化弱毒株为模板，建立并优化了检测CSFV的RT—PCR方法，并与直接荧光抗体试验（DFA）进行比较，检测了15份临床疑似病料。结果如下：应用RT—PCR对CSFV兔化弱毒株RNA进行扩增，获得与预期大小相符长为509bp的特异性目的片段，敏感性达到10Pg的CSFV—RNA，对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）和猪2型圆环病毒（PCV2）进行同条件扩增均为阴性，RT—PCR产物测序结果与文献报道的CSFV不同毒株的核苷酸序列同源性达到95％～99％；15份临床疑似病料应用RT—PCR的检出率为66．7％，而应用免疫荧光试验的检出率为60．0％，二者的总符合率为80％。表明RT—PCR方法比DFA更敏感，两种方法均可用于猪瘟的快速诊断。 展开更多
关键词 RT—PCR 直接荧光抗体试验 检测 猪瘟病毒
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白细胞介素2镇痛功能位点氨基酸残基相对空间位置的重要性研究 被引量：2
16
作者 蒋春雷 徐荻 +2 位作者 曹蕾 路长林 刘新垣 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期83-85,共3页
免疫调节因子白细胞介素－２（ＩＬ－２）具有中枢镇痛作用，其功能位点由ＩＬ－２分子的第４４、４５和１０７、１１７位氨基酸残基共同组成。采用基因定点突变和ＰＣＲ技术，缺失ＩＬ－２分子第６６～９９位残基，改变第４４、４５位... 免疫调节因子白细胞介素－２（ＩＬ－２）具有中枢镇痛作用，其功能位点由ＩＬ－２分子的第４４、４５和１０７、１１７位氨基酸残基共同组成。采用基因定点突变和ＰＣＲ技术，缺失ＩＬ－２分子第６６～９９位残基，改变第４４、４５位残基与１０７、１１７位残基的相对空间位置，发现其镇痛功能消失。结果提示了组成ＩＬ－２分子镇痛功能位点的氨基酸残基间相对空间位置排列的重要性。 展开更多
关键词 白细胞介素2 氨基酸 残基 空间结构 镇痛
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四翼无刺线虫形态和分子鉴定 被引量：7
17
作者 高正琴 岳秉飞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期635-639,644,共6页
目的四翼无刺线虫是一种重要的人兽共患寄生虫病的病原,其对实验动物的感染危害严重。然而,缺乏有效检测鉴定四翼无刺线虫的技术。本研究目的是建立四翼无刺线虫诊断方法,为国家标准的修订提供科学依据。方法应用直接镜检法对肠道中的... 目的四翼无刺线虫是一种重要的人兽共患寄生虫病的病原,其对实验动物的感染危害严重。然而,缺乏有效检测鉴定四翼无刺线虫的技术。本研究目的是建立四翼无刺线虫诊断方法,为国家标准的修订提供科学依据。方法应用直接镜检法对肠道中的四翼无刺线虫进行筛查。应用多重PCR和测序技术鉴定四翼无刺线虫特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28SrRNA。结果采用直接镜检实时动态显微视频技术在肠道中检出数量众多的四翼无刺线虫虫卵、幼虫和成虫。根据四翼无刺线虫的卵细胞、幼虫、雌雄成虫的大小和形态来鉴定虫种。应用多重PCR和测序技术从分离获得的四翼无刺线虫中鉴定出特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28SrRNA,与其他不同种寄生虫无交叉反应。SPF和清洁级实验动物四翼无刺线虫感染率分别为41.5%和40.8%。结论直接镜检法和多重PCR结合测序技术能够快速准确检测鉴定出四翼无刺线虫。实验动物在四翼无刺线虫的传播中可能起着重要的储存作用。因此,需要考虑该寄生虫的潜在健康危害,以防传染人类。 展开更多
关键词 四翼无刺线虫 直接镜检 多重PCR 测序
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两种方法在二斑叶螨电压门控钠离子通道基因突变检测中的应用 被引量：1
18
作者 杨顺义 岳秀利 +4 位作者 王进军 沈慧敏 郭金梅 沈一凡 周兴隆 《草业学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期153-160,共8页
靶标突变是二斑叶螨对拟除虫菊酯类药剂产生高抗性的重要原因,而用于靶标突变检测的方法较多,有必要寻找一种经济、灵敏且有效的方法进行突变检测。本研究根据二斑叶螨电压门控钠离子通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)基因上... 靶标突变是二斑叶螨对拟除虫菊酯类药剂产生高抗性的重要原因,而用于靶标突变检测的方法较多,有必要寻找一种经济、灵敏且有效的方法进行突变检测。本研究根据二斑叶螨电压门控钠离子通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)基因上已报道的3个点突变(L1022V、A1215D和F1538I),采用PCR产物直接测序和限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)两种不同的方法对二斑叶螨田间种群(WW-R和LZ-R)进行靶标VGSCs基因突变检测。PCR产物直接测序结果显示,与SS种群相比,WW-R和LZ-R种群VGSCs基因均存在两种氨基酸突变A1215D和F1538I,但没有发现存在F1022V突变,其中A1215D突变发生在结构域ⅡS6-ⅢS1连接处,F1538I突变发生在结构域ⅢS6螺旋处,而采用PCR-RFLP方法只检测出A1215D突变。两种不同的方法对田间采集的二斑叶螨种群VGSCs基因突变位点检测的比较,为抗菊酯类药剂二斑叶螨种群抗性分子监测技术的建立和抗性治理奠定了基础。 展开更多
关键词 二斑叶螨 甲氰菊酯 靶标突变 直接测序法 PCR-RFLP法
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利用PCR-DGGE技术快速检测鉴定饲用微生物 被引量：3
19
作者 孙晓棠 龙良鲲 +2 位作者 崔汝强 姚青 朱红惠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期72-75,共4页
针对目前国内外对饲用微生物添加剂中多种微生物的检测缺乏简捷有效手段这一现实状况,通过PCR-DGGE方法建立了地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis、粪肠球菌Enterococcus faecalis、植物乳杆菌Lactobacillus planta-rum、干酪乳杆菌Lac... 针对目前国内外对饲用微生物添加剂中多种微生物的检测缺乏简捷有效手段这一现实状况,通过PCR-DGGE方法建立了地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis、粪肠球菌Enterococcus faecalis、植物乳杆菌Lactobacillus planta-rum、干酪乳杆菌Lactobacillus casei4种标准菌株的分子指纹图谱,建立了一套这4种微生物的快速同步检测技术,并用该检测技术对市场上一种饲用微生物添加剂进行分析,结果判定其含有6种优势菌群,包括植物乳杆菌和干酪乳杆菌.本技术还可以推广应用到目前国家允许添加的其他16种饲用微生物的检测,为饲用微生物添加剂产品质量监控提供了技术支撑. 展开更多
关键词 饲用微生物 检测 PCR-DGGE
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牛支原体快速PCR检测方法的建立及其应用 被引量：3
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作者 徐引弟 李海利 +3 位作者 王治方 张青娴 索延乐 宋振宇 《中国奶牛》 2017年第6期41-44,共4页
本试验旨在建立一种可直接从病料中快速检测牛支原体的PCR方法,并且应用于临床。根据牛支原体16S rRNA基因设计一对引物,配制PCR扩增体系,样品经简单处理后加入体系进行扩增,最终扩增出1 390bp片段,进一步的试验证明该方法具有良好的特... 本试验旨在建立一种可直接从病料中快速检测牛支原体的PCR方法,并且应用于临床。根据牛支原体16S rRNA基因设计一对引物,配制PCR扩增体系,样品经简单处理后加入体系进行扩增,最终扩增出1 390bp片段,进一步的试验证明该方法具有良好的特异性和敏感性。临床样品检测结果显示,该方法的检出率与传统PCR的符合率为100%。试验表明,该方法能快速直接从临床样品中检测出牛支原体,可用于牛支原体的大量临床样品的检测。 展开更多
关键词 快速直接PCR 牛支原体 特异性 敏感性 临床应用
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