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地高辛配基标记DNA探针检测HLAⅡ类基因技术的建立 被引量:2
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作者 余进 张锐发 +2 位作者 李明 万军梅 李伯南 《广州医学院学报》 1995年第2期10-16,共7页
本文报道了采用序列特异性寡核苷酸探针杂交(SSOPH)检测HLAⅡ类基因(DRB、DQB)多态性的方法。实验包括少量全血提取模板DNA、PCR基因扩增基因多态性区域片断、尼龙膜点样、特异性寡核苷酸探针合成及地高辛配基(DIG-11-ddUTP)标记、探针... 本文报道了采用序列特异性寡核苷酸探针杂交(SSOPH)检测HLAⅡ类基因(DRB、DQB)多态性的方法。实验包括少量全血提取模板DNA、PCR基因扩增基因多态性区域片断、尼龙膜点样、特异性寡核苷酸探针合成及地高辛配基(DIG-11-ddUTP)标记、探针杂交;条件洗涤、化学发光显影等一系列步骤。该实验方法具有用血量少、结果精确稳定、操作简便安全、不污染环境等优点。作者对模板DNA的提取、杂交缓冲液制备、标记探针的使用剂量以及条件洗涤等多个环节作了改良,使实验方法和结果进一步优化。 展开更多
关键词 HLA-DR dq基因序列特异性寡核苷酸探针杂交 非同位素DNA探针标记
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PCR-SSP检测HLA-B_(27)基因分型诊断强直性脊柱炎 被引量:1
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作者 董魁 吴俊柱 沈云青 《山东医药》 CAS 北大核心 2004年第25期61-61,共1页
关键词 HLA-B27 基因分型 诊断 PCR-SSP技术 强直性脊柱炎 序列异性引物 患者 寡核苷酸探针 聚合酶链反应
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PCR-SSP/PCR-SSO两种KIR基因分型方法的比较 被引量:2
3
作者 李娟 慕力 +6 位作者 韩兴乔 张华 孙乐静 暨波 魏博 杨俊晔 韩俊领 《生物医学工程与临床》 CAS 2021年第2期225-231,共7页
目的杀伤细胞免疫蛋白样受体(KIR)基因在自然杀伤细胞活性调节、机体抗感染、移植免疫过程中发挥重要作用。在脐带血移植中,KIR基因分型的效率和准确关系到移植的成败。为了满足临床上对KIR基因分型的要求,对比分析聚合酶链反应-序列特... 目的杀伤细胞免疫蛋白样受体(KIR)基因在自然杀伤细胞活性调节、机体抗感染、移植免疫过程中发挥重要作用。在脐带血移植中,KIR基因分型的效率和准确关系到移植的成败。为了满足临床上对KIR基因分型的要求,对比分析聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)和聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)两种方法,试图建立一个高效便捷检测KIR基因分型的方法学体系。方法从2018年到2019年已外送到第三方检测实验室(北京博富瑞医学检验实验室有限公司)做过KIR基因分型检测的脐带血样本中随机取出12份,分别用PCR-SSP及PCR-SSO商品化试剂盒进行KIR基因分型检测,并通过凝胶电泳分析或MATCH IT!DNA软件分析,获取KIR基因分型结果。结果12例脐带血样本中,PCR-SSO方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果完全一致,PCR-SSP方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果9例相同,有2例因出现漏孔而无法判读,有1例出现了假阳性带。结论PCR-SSO方法学检测KIR基因效果优于PCR-SSP,但是PCR-SSO方法学也存在当微珠的荧光校准值接近于临界值时,结果出现错判的现象;为保证KIR基因分型的准确度,建议PCR-SSP方法出现漏孔或者PCR-SSO方法荧光校准值接近于临界值时两种方法相互验证。 展开更多
关键词 KIR基因 基因分型 聚合酶链反应-序列异性引物(PCR-SSP) 聚合酶链反应-序列异性寡核苷酸探针(PCR-SSO) 荧光校准值 相互验证
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基因扩增技术
4
作者 武建国 《医学研究生学报》 CAS 1991年第3期274-274,共1页
用 DNA 探针技术分析特异的核苷酸序列来诊断传染病和遗传病,使诊断的灵敏度有了很大的提高,但由于特异的靶序列含量极微,一般情况下即使用 DNA 杂交技术也难以测出,常需将嵌有靶基因的载体导入细菌细胞中,细菌快速繁殖,靶基因得到扩增... 用 DNA 探针技术分析特异的核苷酸序列来诊断传染病和遗传病,使诊断的灵敏度有了很大的提高,但由于特异的靶序列含量极微,一般情况下即使用 DNA 杂交技术也难以测出,常需将嵌有靶基因的载体导入细菌细胞中,细菌快速繁殖,靶基因得到扩增后再进行检测。此法费时、费事,难于实际应用。1985年 Saiki 和1987年 Mullis 分别建立了多聚酶链反应(polymerase chaim reaction,PCR),又称特异性 DNA 序列引物定向酶促扩增技术,能选择性扩增、浓集一个特异性 DNA 展开更多
关键词 基因扩增技术 DNA 探针技术 多聚酶链反应 核苷序列 序列 选择性扩增 杂交技术 异性 多瘤病毒
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对HLA-B座位中低分辨中模棱两可基因分型的调查分析
5
作者 鞠瑞青 《中国实用医药》 2014年第4期255-255,共1页
人类白细胞抗原(HLA)是目前所知的最具有多态性的遗传系统之一,它位于人类第6号染色体短臂上,总长度3600 kb,约占人类基因组总长度的1/3000。整个HLA复合体共有数十个基因座,可分为HLA-Ⅰ类、HLA-Ⅱ类、HLA-Ⅲ类基因。HLA-B基因座属于... 人类白细胞抗原(HLA)是目前所知的最具有多态性的遗传系统之一,它位于人类第6号染色体短臂上,总长度3600 kb,约占人类基因组总长度的1/3000。整个HLA复合体共有数十个基因座,可分为HLA-Ⅰ类、HLA-Ⅱ类、HLA-Ⅲ类基因。HLA-B基因座属于HLA-Ⅰ类基因,它是HLA编码系统中最复杂,多态性最多的区域,由于其高变区各个等位基因差异仅在几个碱基,且只有极少等位基因某个高变区具有独立的碱基序列,因而交叉反应众多,故B位点往往出现定型困难[1]。尽管现有特异性寡核苷酸探针技术已经达到了中等分辨水平,但对于HLA-B座位上有些模棱两可的基因型尚不能分辨识别。作者所在实验室采用特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)技术对13485例HLA-B座位进行中低分辨调查分析,并对筛选出的模棱两可等位基因通过采用聚合酶链反应-序列特异性引物扩增(PCR-SSP)技术进行进一步确认。 展开更多
关键词 HLA-B 聚合酶链反应-序列异性引物扩增 异性寡核苷酸探针 基因分型 调查 人类白细胞抗原 HLA-Ⅰ类 人类基因
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