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DNA聚合酶δ相互作用蛋白2在疾病中的作用
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作者 王科科 肖冰 鲁静朝 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2379-2386,共8页
DNA聚合酶δ相互作用蛋白2(Poldip2)是由人Poldip2基因编码的一种多功能蛋白,最初因与人DNA聚合酶δ的p50亚基和增殖细胞核抗原结合而被发现。Poldip2与NADPH氧化酶4型亚基结合促进活性氧的产生,并在细胞骨架重塑中具有重要作用。此外,P... DNA聚合酶δ相互作用蛋白2(Poldip2)是由人Poldip2基因编码的一种多功能蛋白,最初因与人DNA聚合酶δ的p50亚基和增殖细胞核抗原结合而被发现。Poldip2与NADPH氧化酶4型亚基结合促进活性氧的产生,并在细胞骨架重塑中具有重要作用。此外,Poldip2参与DNA复制、DNA损伤修复、线粒体功能、细胞外基质调节、细胞周期、细胞黏附和迁移等多种细胞活动。本文总结了Poldip2在心血管疾病、呼吸系统疾病、肾脏疾病、神经系统疾病、癌症和内分泌疾病等疾病中的作用,为探索Poldip2作为疾病治疗靶点提供参考。 展开更多
关键词 dna聚合酶δ相互作用蛋白2 活性氧 线粒体
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钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂药动学相互作用研究进展
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作者 邓艳茹 曹格溪 +2 位作者 李颖 李亚静 董占军 《中国临床药理学与治疗学》 北大核心 2025年第4期570-576,共7页
钠-葡萄糖共转运蛋白2(sodium-glucose co-transporter 2,SGLT2)抑制剂是一类新型口服降糖药物,具有降糖疗效确切、不易引起低血糖、心血管保护及肾脏获益等特点,近年来在临床上应用广泛,与其他药物联用的相互作用也逐渐受到关注。目前... 钠-葡萄糖共转运蛋白2(sodium-glucose co-transporter 2,SGLT2)抑制剂是一类新型口服降糖药物,具有降糖疗效确切、不易引起低血糖、心血管保护及肾脏获益等特点,近年来在临床上应用广泛,与其他药物联用的相互作用也逐渐受到关注。目前我国临床使用较为常见的SGLT2抑制剂包括卡格列净、达格列净、恩格列净、艾托格列净和恒格列净,该类药物主要经Ⅱ相代谢酶尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(uridine diphosphate glucuronidase,UGT)代谢,并有多种转运体参与其在体内的处置过程。本文综述了上述不同SGLT2抑制剂的药动学特点以及与他汀类降脂药、抗肿瘤药、抗菌药、非甾体抗炎药、中药等多种药物的相互作用研究,以期促进临床SGLT2抑制剂的安全合理用药。 展开更多
关键词 钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂 药代动力学 药物相互作用 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移 转运体
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DNA聚合酶δ相互作用蛋白1能促进GFP蛋白的降解
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作者 张波 周芳亮 +2 位作者 卢芳国 严杰 张健 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期363-365,370,共4页
目的证明过表达DNA聚合酶δ相互作用蛋白1(PDIP1)能否促进外源性GFP蛋白的降解。方法将HEK293细胞共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1,利用荧光显微镜检测细胞绿色荧光强度,然后利用Western blot法检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系... 目的证明过表达DNA聚合酶δ相互作用蛋白1(PDIP1)能否促进外源性GFP蛋白的降解。方法将HEK293细胞共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1,利用荧光显微镜检测细胞绿色荧光强度,然后利用Western blot法检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系,再利用氯化铵与MG132分别进行干预,并检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系。结果共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1的HEK293细胞绿色荧光强度明显低于单转pEGFP-C3质粒的细胞;随着PDIP1蛋白表达量的增大,GFP蛋白的表达量减少;利用MG132干预可以明显抑制PDIP1对GFP的降解,而氯化铵干预没有显示明显的效应。结论过表达PDIP1可以促进外源性GFP蛋白的降解,且这一降解是通过蛋白酶体途径进行的,提示PDIP1可能参与细胞内某些蛋白的泛素化降解。 展开更多
关键词 dna聚合δ相互作用蛋白1 绿色荧光蛋白 降解 HEK293细胞
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小鼠肿瘤致死因子α诱导的TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ亚单位的相互作用 被引量:2
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作者 胡小晓 熊熙文 +1 位作者 周建林 张健 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2004年第3期70-74,共5页
人类B12蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α的诱导的蛋白,在小鼠中又称为TNFAIP1,其功能尚未见报导.采用蛋白质pull down、荧光定位和免疫共沉淀分析一系列实验证明小鼠TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ的亚单位P50发生直接相互作用.由此推测T... 人类B12蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α的诱导的蛋白,在小鼠中又称为TNFAIP1,其功能尚未见报导.采用蛋白质pull down、荧光定位和免疫共沉淀分析一系列实验证明小鼠TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ的亚单位P50发生直接相互作用.由此推测TNFAIP1蛋白参与DNA复制过程,并为研究人TNFAIP1基因的功能提供参考. 展开更多
关键词 蛋白 亚单位 致死因子 小鼠肿瘤 诱导 dna聚合 肿瘤坏死因子a dna复制 相互作用 基因
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乙型肝炎病毒聚合酶与UXT蛋白的潜在相互作用鉴定 被引量:1
5
作者 陈孟璋 邹奕 +3 位作者 李君武 李月琴 李弘剑 周天鸿 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期686-689,共4页
目的研究乙肝病毒聚合酶(HBV Pol)在肝细胞内潜在的相互作用的蛋白质因子,为揭示HBV Pol发挥功能的分子机制,进一步了解HBV在细胞内复制的机制提供依据。方法构建重组诱饵质粒pGBKT7-Pol,利用GAL4酵母双杂交系统筛选人肝cDNA文库得到与H... 目的研究乙肝病毒聚合酶(HBV Pol)在肝细胞内潜在的相互作用的蛋白质因子,为揭示HBV Pol发挥功能的分子机制,进一步了解HBV在细胞内复制的机制提供依据。方法构建重组诱饵质粒pGBKT7-Pol,利用GAL4酵母双杂交系统筛选人肝cDNA文库得到与HBV Pol相互作用的蛋白质因子,再通过GST-Pull down验证蛋白间的相互作用。结果酵母双杂交筛选得到宿主蛋白Ubiquitously Expressed Transcrip(tUXT),GST-pull down确证蛋白间的相互作用。结论 UXT为一潜在的与HBV Pol相互作用的肝细胞蛋白质因子,这可能为研究HBV Pol在病毒生活周期中的功能提供线索。 展开更多
关键词 酵母双杂交 乙肝病毒聚合 UXT 蛋白相互作用
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人转运蛋白SR2的原核表达及其与HIV-1整合酶体外相互作用的检测
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作者 许晓双 张大为 孔韧 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期38-41,共4页
人转运蛋白SR2(TRN-SR2)与HIV-1整合酶(IN)相互作用是抗HIV治疗的有效靶点,寻找和设计该靶点的高效抑制剂具有重要的临床意义和广阔的应用前景。因此为了开展以TRN-SR2与HIV-1IN相互作用为靶点的抑制剂筛选研究,以pGEX-2T为载体的重组质... 人转运蛋白SR2(TRN-SR2)与HIV-1整合酶(IN)相互作用是抗HIV治疗的有效靶点,寻找和设计该靶点的高效抑制剂具有重要的临床意义和广阔的应用前景。因此为了开展以TRN-SR2与HIV-1IN相互作用为靶点的抑制剂筛选研究,以pGEX-2T为载体的重组质粒pGST-TRN-SR2在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行原核表达,并利用亲和层析纯化得到浓度为0.80mg/mL的重组TRN-SR2蛋白;然后采用生物膜干涉技术(BLI)进行体外检测重组TRN-SR2蛋白与HIV-1IN的相互作用和结合情况。结果表明,重组TRN-SR2蛋白与HIV-1IN相互结合信号明显升高,且测得平衡解离常数KD值为45.2nmol/L。最后利用均相时间分辨荧光技术(HTRF)和交叉滴定实验确定了TRN-SR2与HIV-1IN在该靶点抑制剂筛选实验体系中的最适反应浓度分别为20和40nmol/L。以上研究结果说明原核表达的重组TRN-SR2蛋白的活性较好且与HIV-1IN体外相互作用明显,同时在筛选实验体系中TRN-SR2与HIV-1IN最适浓度的确定也为后续抑制剂的筛选提供了相应的研究基础。 展开更多
关键词 HIV-1整合 TRN-SR2 蛋白-蛋白相互作用 BLI HTRF
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Taq DNA聚合酶的分子改造及其在探针法qPCR直扩体系中的应用 被引量:1
7
作者 胡松青 袁家惠 +1 位作者 刘光毅 侯轶 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第4期8-16,共9页
Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术的核心组分,其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而,野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶,采用基因工程技术将双链DN... Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术的核心组分,其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而,野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶,采用基因工程技术将双链DNA结合蛋白Sso7d或Sto7d融合在野生型Taq DNA聚合酶的N端或C端,构建了4个均可溶表达的改造体,再经过耐受性测试筛选较优的改造体,结果显示:改造体Taq-Sto的耐受性最高,其热稳定性不受影响,且在1 s/kbp的延伸条件下能成功扩增靶标,表明Taq-Sto具有增强的延伸性能,在TaqMan探针法qPCR体系中对腐殖酸、单宁酸、全血等抑制剂同样表现出良好的耐受性。EMSA实验发现:Taq-Sto对DNA模板的结合亲和力有所提高,有利于增强Taq-Sto对模板的竞争力;将Taq-Sto应用于非洲猪瘟病毒(ASFV)的TaqMan探针法qPCR检测,与商品化试剂相比,Taq-Sto具有更低的ASFV检出限,且在体积分数为2%~6%的猪粪便样本或猪肉样本中的检测灵敏度分别为100.0%和85.4%,说明Taq-Sto在直扩qPCR检测领域更具有优势。 展开更多
关键词 Taq dna聚合 双链dna结合蛋白 耐受性 聚合链式反应
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野生型DNA聚合酶β重组绿色荧光蛋白表达载体的构建 被引量:3
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作者 赵国强 秦冰 +5 位作者 何炜 赵军 路静 宋谦 崔自由 董子明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第4期590-592,共3页
目的:构建携带野生型DNA聚合酶β基因(wtDNApolβ)的重组真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ。方法:运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出wtDNApolβ的开放阅读框序列,T-A克隆至pGEM-T载体,再定向克隆至pEGFP-C3,重组质粒pEGF... 目的:构建携带野生型DNA聚合酶β基因(wtDNApolβ)的重组真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ。方法:运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出wtDNApolβ的开放阅读框序列,T-A克隆至pGEM-T载体,再定向克隆至pEGFP-C3,重组质粒pEGFP-C3-polβ用限制性内切酶酶切鉴定,通用鉴定引物PCR扩增鉴定,并进行DNA序列分析。结果与结论:多种鉴定方法证实了重组载体pEGFP-C3-polβ中的wtDNApolβ序列与GenBank中已知的序列相符。携带wtDNApolβ的重组增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ构建成功。 展开更多
关键词 dna聚合Β 增强型绿色荧光蛋白 dna序列分析
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激活素受体相互作用蛋白4的基因克隆
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作者 王世瑶 柳忠辉 +4 位作者 牟大鹏 张红军 杨琼 常颖 台桂香 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期37-40,共4页
目的:克隆新的与激活素受体ⅡA(ActRⅡA)相互作用蛋白,即激活素受体相互作用蛋白4(ActRIP4)基因。方法:应用ActRIP2基因片段作为探针,从小鼠cDNA文库中钓取ActRIP4 cDNA;采用哺乳细胞双杂交进一步确定ActRIP4与ActRⅡA的相互作用;RT-PC... 目的:克隆新的与激活素受体ⅡA(ActRⅡA)相互作用蛋白,即激活素受体相互作用蛋白4(ActRIP4)基因。方法:应用ActRIP2基因片段作为探针,从小鼠cDNA文库中钓取ActRIP4 cDNA;采用哺乳细胞双杂交进一步确定ActRIP4与ActRⅡA的相互作用;RT-PCR检测ActRIP4 mRNA在组织中的表达情况。结果:克隆的ActRIP4基因全长691bp,ORF区编码118个氨基酸残基;ActRIP4与ActRⅡA具有特异性结合作用;天然的ActRIP4 mRNA在小鼠多种组织中表达。结论:ActRIP4属于ActRIP家族新成员,可以与ActRⅡA相互作用,可能在多种组织中介导激活素受体信号传导过程。 展开更多
关键词 激活素 受体相互作用蛋白 哺乳动物细胞双杂交 逆转录聚合链反应
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汉坦病毒核蛋白与细胞蛋白的相互作用
10
作者 王平忠 白雪帆 陈延平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期680-682,共3页
关键词 汉坦病毒肺综合征 细胞蛋白 相互作用 蛋白 负链RNA病毒 肾综合征出血热 包膜糖蛋白 RNA聚合
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聚合物刷与生物分子相互作用的研究进展 被引量:5
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作者 王思怿 郭旭虹 陈凯敏 《功能高分子学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期359-376,共18页
聚合物刷是由一端紧密接枝在一个曲面或平面的聚合物链组成的大分子结构。近年来,随着聚合物制备方法和表面修饰技术的不断发展,聚合物刷的应用范围也在不断拓宽,相关研究已成为功能高分子材料领域的热点之一。具有特殊结构和功能的聚... 聚合物刷是由一端紧密接枝在一个曲面或平面的聚合物链组成的大分子结构。近年来,随着聚合物制备方法和表面修饰技术的不断发展,聚合物刷的应用范围也在不断拓宽,相关研究已成为功能高分子材料领域的热点之一。具有特殊结构和功能的聚合物刷在生物分子固定、蛋白质分离、酶催化、药物控释等方面具有广阔的应用前景。本文综述了聚合物刷与生物分子相互作用及应用的最新研究进展,并展望了今后的发展方向。 展开更多
关键词 聚合物刷 生物分子 相互作用 蛋白固定化 催化
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聚合酶链式反应扩增甘蔗钙调蛋白基因及其序列分析 被引量:9
12
作者 林俊芳 陈如凯 +1 位作者 金志强 郑学勤 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期28-33,共6页
从甘蔗茎顶端分生组织提取总RNA,反转录合成CDNA第一条链,以此为模板,参考大麦钙调蛋白基因序列设计并合成5′端和3′端引物,PCR扩增甘蔗钙调蛋白基因,与克隆载体PGEM—3Zf(十)重组,转化E.coli HB101得到重组克隆.DNA序列分析结果表明;... 从甘蔗茎顶端分生组织提取总RNA,反转录合成CDNA第一条链,以此为模板,参考大麦钙调蛋白基因序列设计并合成5′端和3′端引物,PCR扩增甘蔗钙调蛋白基因,与克隆载体PGEM—3Zf(十)重组,转化E.coli HB101得到重组克隆.DNA序列分析结果表明;甘蔗钙调蛋白基因由450个核甘酸组成,编码148个氨基酸;在核甘酸序列上与迄今知道的几种植物的钙调蛋白基因有很高的同源性,同源率在80%以上;编码的氨基酸序列同源性更高,同源率高达90%以上. 展开更多
关键词 甘蔗 钙调蛋白基因 聚合链式反应 dna序列
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钠钾ATP酶抑制剂通过调节DNA损伤感应复合体Mre11/Rad50/Nbs1的表达诱导肝癌HepG2细胞周期阻滞 被引量:7
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作者 徐忠伟 王凤梅 +2 位作者 王聪聪 单娜娜 徐瑞成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期323-327,共5页
目的研究钠钾ATP酶抑制剂华蟾毒配基(cinobufagin)对人肝癌HepG2细胞DNA损伤修复阻断及其发生机制。方法免疫组化分析人肝癌临床组织标本、正常肝组织中钠钾ATP酶α1亚单位的表达;以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,实验分为对照组、5μmol... 目的研究钠钾ATP酶抑制剂华蟾毒配基(cinobufagin)对人肝癌HepG2细胞DNA损伤修复阻断及其发生机制。方法免疫组化分析人肝癌临床组织标本、正常肝组织中钠钾ATP酶α1亚单位的表达;以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,实验分为对照组、5μmol·L^(-1)华蟾毒配基作用6、12和24 h组;单细胞电泳检测DNA双链断裂,Real time-PCR和Western blot检测损伤修复基因Mre11、Rad50、Nbs1和p53的表达变化,流式细胞术检测细胞周期。结果肝癌组织钠钾ATP酶α1亚单位表达与癌旁组织相比明显升高(P<0.05);华蟾毒配基诱导HepG2细胞DNA断裂的发生率与作用时间高度相关,作用时间延长断裂效应更加明显(P<0.05),Mre11,Nbs1,Rad50和p53表达随药物作用时间延长逐渐升高(P<0.05),流式细胞术分析细胞周期对照组S期细胞比例为(21.32±4.21)%,5μmol·L^(-1)华蟾毒配基处理6 h后为(33.25±5.72)%,处理12 h后为(56.72±6.29)%,作用24 h后为(67.32±9.42)%。结论华蟾毒配基激活Mre11/Rad50/Nbs1损伤感应复合体介导肝癌Hep G2细胞周期阻滞。 展开更多
关键词 华蟾毒配基 HEPG2细胞 dna双链断裂 钠钾ATP 细胞周期 细胞周期相关蛋白
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乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节人类新基因HBVDNAPTP1的克隆及原核表达与组织表达分析 被引量:3
14
作者 伦永志 张黎颖 +3 位作者 成军 郭江 洪源 赵宝昌 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期49-52,共4页
目的克隆应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学技术筛选得到的乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶反式调节新型靶基因HBVDNAPTP1,构建HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中表达,并进一步分析HBVDNAPTP1在组织中的分布表达水... 目的克隆应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学技术筛选得到的乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶反式调节新型靶基因HBVDNAPTP1,构建HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中表达,并进一步分析HBVDNAPTP1在组织中的分布表达水平。方法应用RT-PCR技术扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导以获得HBVDNAPTP1融合蛋白的表达,利用Westernblot证实表达蛋白的特异性。应用UniGene数据库对HBVDNAPTP1基因的染色体中定位及组织分布表达水平进行分析。结果RT-PCR扩增获得HBVD-NAPTP1基因片段,插入pET-32a(+)表达载体,转化BL21(DE3)受体菌,经IPTG诱导获得了HBVDNAPTP1重组蛋白的表达,Westernblot证实了表达的重组蛋白的特异性。HBVDNAPTP1在多数组织中低表达,仅在脑垂体腺、扁桃体、舌、胸腺、气管与脐带中无表达。结论成功构建了HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,利用大肠埃希菌原核表达系统获得了重组蛋白的表达,并初步了解了HBVDNAPTP1基因的染色体定位与组织表达水平。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 dna聚合 反式调节蛋白 原核表达 组织表达分析
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互隔交链孢酚通过PKA-CREB信号通路激活NIH3T3细胞中DNA聚合酶β表达 被引量:3
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作者 赵继敏 路静 +4 位作者 刘康栋 王瑾瑾 杨洪艳 黄幼田 董子明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期744-748,共5页
目的:探讨互隔交链孢酚(AOH)诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中DNA聚合酶β(DNA polβ)表达增高的分子信号通路。方法:①15μmol/L AOH作用NIH3T3细胞16 h,利用Western blotting方法检测细胞中DNA polβ的表达,并利用磷酸化CREB抗体检测AO... 目的:探讨互隔交链孢酚(AOH)诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中DNA聚合酶β(DNA polβ)表达增高的分子信号通路。方法:①15μmol/L AOH作用NIH3T3细胞16 h,利用Western blotting方法检测细胞中DNA polβ的表达,并利用磷酸化CREB抗体检测AOH作用后NIH3T3细胞中CREB信号分子是否被激活。②利用PKA-CREB信号通路特异性抑制剂H89预处理NIH3T3细胞1 h,再加入AOH作用,分别检测磷酸化CREB和DNA polβ表达的变化。结果:①与溶剂对照组相比,AOH诱导NIH3T3细胞中DNA polβ表达明显增高,而且磷酸化CREB蛋白含量也明显增加,差异均显著。②用PKA特异性抑制剂H89预处理,可部分抑制NIH3T3细胞中CREB蛋白的磷酸化,并且降低了AOH引起的NIH3T3细胞中DNA polβ的表达增加。结论:PKA-CREB信号通路在AOH诱导的NIH3T3细胞中DNA polβ表达起重要作用。 展开更多
关键词 链格孢酚 dna聚合Β 蛋白A CAMP反应元件结合蛋白 NIH3T3细胞
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血清型2型猪链球菌烯醇化酶参与猪链球菌抗吞噬作用 被引量:2
16
作者 霍春月 纪颖 +2 位作者 任丽丽 张静 孔军伶 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1146-1149,共4页
目的制备高纯度的猪链球菌烯醇化酶(SsEno)重组蛋白并通过抗体封闭实验评价SsEno对猪链球菌抗吞噬能力的影响,鉴定其与人纤维蛋白原(hFg)结合的活性。方法构建hisSsEno重组表达质粒,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达后,通过S... 目的制备高纯度的猪链球菌烯醇化酶(SsEno)重组蛋白并通过抗体封闭实验评价SsEno对猪链球菌抗吞噬能力的影响,鉴定其与人纤维蛋白原(hFg)结合的活性。方法构建hisSsEno重组表达质粒,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE分析蛋白表达情况,镍柱亲和纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。用hisSsEno免疫兔制备其高滴度的抗血清并通过人全血杀伤模型评价Eno对猪链球菌抗吞噬能力的影响。采用ELISA和Far-Western blot法鉴定hisSsEno与hFg结合活性。结果成功构建了His标签蛋白原核表达质粒并获得了高纯度的hisSsEno重组表达蛋白。SsEno免疫的抗血清能显著降低强致病的猪链球菌05ZYH33在人全血中的存活能力。hisSsEno能特异地与hFg结合。结论获得了hisSsEno重组表达蛋白,通过抗体阻封和全血杀伤模型发现SsEno是猪链球菌潜在的抗吞噬因子,且hisSsEno能特异性结合hFg。 展开更多
关键词 血清型2型猪链球菌 烯醇化 抗吞噬 人纤维蛋白 相互作用
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Bst DNA聚合酶的纯化及等温扩增检测体系的构建 被引量:1
17
作者 谭拥军 吴莎莎 +1 位作者 谭桂湘 向勤 《湖南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第12期98-106,共9页
Bst DNA聚合酶是等温扩增反应中的一个关键酶,但由于专利限制,目前国内实验室所使用的Bst DNA聚合酶大多需要从国外进口,价格昂贵且长途运输影响酶活性,因此亟需自主生产出Bst DNA聚合酶应用于等温扩增检测技术.通过构建Bst Fragement... Bst DNA聚合酶是等温扩增反应中的一个关键酶,但由于专利限制,目前国内实验室所使用的Bst DNA聚合酶大多需要从国外进口,价格昂贵且长途运输影响酶活性,因此亟需自主生产出Bst DNA聚合酶应用于等温扩增检测技术.通过构建Bst Fragement的原核表达质粒,采用原核蛋白表达系统和His-Tag亲和纯化手段,制备成本低,活性高,特异性强的Bst DNA聚合酶.同时,针对特定的模板,对自制Bst DNA聚合酶的扩增反应进行了进一步优化,用不同的产物鉴定方法对扩增效果进行检测,并最终筛选出该酶最优的扩增反应条件为60 mM K^+、30 mM(NH4)2SO4、pH为9.0.最后,验证了Bst DNA聚合酶能用于快速准确检测肺炎支原体、肺炎衣原体,降低了相关病原体核酸检测的成本,为之后核酸检测在基层医疗的更广泛应用提供了条件. 展开更多
关键词 Bst dna聚合 重组蛋白 扩增 核酸检测
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RNA干扰Rbl-2基因调控DNA甲基化转移酶介导心脏干细胞凋亡 被引量:2
18
作者 夏慧苏 余细勇 +4 位作者 林秋雄 李晓红 朱杰宁 麦丽萍 林曙光 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2306-2310,共5页
目的:视网膜母细胞瘤样蛋白2(Rbl-2)在调控DNA甲基化转移酶(DNMT)中发挥重要作用,而DNMT影响干细胞的分化。本文旨在探讨调控Rbl-2基因的表达对心脏干细胞凋亡的影响。方法:分离培养人心脏干细胞,转染Rbl-2 siRNA。采用real time RT-PC... 目的:视网膜母细胞瘤样蛋白2(Rbl-2)在调控DNA甲基化转移酶(DNMT)中发挥重要作用,而DNMT影响干细胞的分化。本文旨在探讨调控Rbl-2基因的表达对心脏干细胞凋亡的影响。方法:分离培养人心脏干细胞,转染Rbl-2 siRNA。采用real time RT-PCR检测Rbl-2和DNMT-3B mRNA表达水平,Westernblotting检测DNMT-3B蛋白表达和caspase-3活化片段,并以Annexin V-FITC/PI双染色-流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在人心脏干细胞中,转染siRNA后Rbl-2 mRNA表达水平与阴性对照组相比显著降低(P<0.01),同时DNMT-3B mRNA和蛋白表达水平与阴性对照组相比均显著升高(P<0.01),差异显著。与阴性对照组相比,转染Rbl-2 siRNA的人心脏干细胞caspase-3激活,表现为caspase-3活性片段与caspase-3前体的比值显著增高(P<0.01),annexin V阳性细胞凋亡率上升(P<0.05)。结论:Rbl-2基因在心脏干细胞的生存中具有正性调控作用,抑制其表达能促进心脏干细胞的凋亡,其调控机制与表观遗传学的修饰密切相关。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤样蛋白2 dna甲基化转移 心脏干细胞 细胞凋亡
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人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2基因的克隆与鉴定 被引量:2
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作者 陈政良 张丽芸 +1 位作者 乔贵林 卢晓 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期248-250,共3页
目的 获得人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)编码区基因。方法采用 RT-巢式 PCR技术从 人胎肝组织总RNA扩增目的cDNA片段,克隆人pGEM-T载体,酶切图谱分析和测序鉴定。结果获得了编码合信号... 目的 获得人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)编码区基因。方法采用 RT-巢式 PCR技术从 人胎肝组织总RNA扩增目的cDNA片段,克隆人pGEM-T载体,酶切图谱分析和测序鉴定。结果获得了编码合信号 顺序的MASP-2肽链全长cDNA,将其与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TG1,建立了MASP-2的重组克隆。酶切图 谱与微机分析结果无异;序列分析表明,与报道的人 MASP-2cDNA序列一致。结论成功克隆了人 MASP-2基因,为深 入研究补体凝集素途径的激活机制和甘露聚糖结合凝集素基因突变引起免疫缺损的发病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 甘露聚糖结合凝集素 相关丝氨酸蛋白-2 聚合链反应 基因克隆 MBL MASP-2
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高温DNA聚合酶I的Klenow片段在乙醇中变性的AFM研究 被引量:1
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作者 陈圣福 徐磊 +3 位作者 欧阳振乾 张益 李民乾 洪国藩 《电子显微学报》 CAS CSCD 1997年第6期703-705,共3页
本文利用原子力显微镜(AFM),对高温DNA聚合酶I和普通E.coli的DNA聚合酶I的Klenow片段在乙醇中变性的对比研究,发现在两种DNA聚合酶中都存在结构较紧密的“核”。通过对吸附在云母上的两种酶进行1—10... 本文利用原子力显微镜(AFM),对高温DNA聚合酶I和普通E.coli的DNA聚合酶I的Klenow片段在乙醇中变性的对比研究,发现在两种DNA聚合酶中都存在结构较紧密的“核”。通过对吸附在云母上的两种酶进行1—10个小时的处理发现高温聚合酶大多由3块“核”组成,而普通的DNA聚合酶由2块“核”组成。这些“核”可能与蛋白的折叠过程中存在的相对稳定的结构区域有关,这对直观了解蛋白折叠过程有一定意义。 展开更多
关键词 AFM 乙醇 蛋白变性 dna聚合I Klenow片断
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