-
题名彗星实验方法的优化及影响因素的分析
被引量：1
- 1
-
-
作者
范南英
张鹏
-
机构
贵州医科大学基础医学院生物学教研室
贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室
-
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2024年第2期219-223,共5页
-
基金
国家自然科学基金(编号:81960036)
贵州省科技计划项目(编号:黔科合基础-ZK[2021]重点005)
贵州省教育厅高校科技创新团队(编号:黔教技[2023]068)。
-
文摘
目的为了更有效地检测细胞DNA损伤,对彗星实验的影响因素进行优化并建立阳性对照。方法以传统碱性彗星实验为基础,对制胶方法、凝胶浓度、琼脂糖溶剂、裂解时间、细胞密度和电泳电压加以优化。以过氧化氢(H_(2)O_(2))作为DNA损伤诱导剂诱导HL-60细胞作为该实验的阳性对照。结果优化后的实验结果显示,制胶方法由三步法进步为两步法,以PBS为琼脂糖溶剂,0.8%正常熔点琼脂糖制备底层胶,0.7%低熔点琼脂糖与细胞悬液混合作为第二层胶,制胶效果好,操作更简单省时,较好地解决了脱胶问题。裂解1 h,1 V/cm电压电泳,获得了具有代表性的彗星图像,结果易于判读,能有效避免假阳性结果。并对不同浓度H_(2)O_(2)诱导的HL-60细胞DNA损伤情况进行比较,成功建立了彗星实验的阳性对照。结论与传统方法相比,优化后的彗星实验方法成本更低,更简单、快速、准确,重复性也更好,能够快速检测细胞中的DNA损伤。
-
关键词
彗星实验
HL-60
dna损伤模型
-
Keywords
comet assay
HL-60
dna damage model
-
分类号
Q2-33
[生物学—细胞生物学]
-
