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靶向沉默DNMT3A对小鼠肺成纤维细胞胶原沉积、增殖及迁移活性的影响
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作者 汪先晨 尤峻柏 +4 位作者 凌辉 范家好 陈齐 陶辉 沙纪名 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第1期66-72,共7页
目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml T... 目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml TGF-β_(1)作用24 h诱导PFs细胞活化,并用小干扰RNA构建DNMT3A沉默模型;实验分为Control组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+siRNA-NC组和TGF-β_(1)+siRNA-DNMT3A组。应用Western blot方法检测DNMT3A、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白表达变化;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测DNMT3A、α-SMA、CollagenⅠ的mRNA表达变化;CCK-8与EdU染色检测PFs增殖能力;划痕实验与Transwell迁移实验检测PFs迁移能力。结果与Control组相比,TGF-β_(1)诱导活化的PFs细胞组中DNMT3A升高(P<0.01),纤维化与增殖相关指标α-SMA、CollagenⅠ的蛋白及mRNA水平也升高(均P<0.05),同时PFs的增殖与迁移能力升高(均P<0.0001)。而与siRNA-NC组相比,在DNMT3A沉默组中通过Western blot法检测DNMT3A(P<0.0001)及相关指标α-SMA(P<0.01)、CollagenⅠ(P<0.01)的蛋白表达水平均降低,同时通过RT-qPCR法检测DNMT3A、α-SMA及CollagenⅠ的mRNA水平也均降低(P<0.001),并且PFs细胞的增殖(P<0.01)和迁移能力(P<0.05)较对照组下降。结论沉默DNMT3A能够抑制胶原的沉积及PFs的增殖,DNMT3A可以促进PFs的增殖和迁移能力,进而促进PFs的活化以及肺纤维化的发展,这一过程可能受到DNA甲基化修饰的调控。 展开更多
关键词 dnmt3a dna甲基化 肺成纤维细胞 增殖 迁移 肺纤维化
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乙型肝炎病毒X蛋白通过DNMT3A诱导肝癌细胞RUNX3基因高甲基化 被引量:5
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作者 林万松 林洁 +3 位作者 林巧燕 周智锋 李洁羽 叶韵斌 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期717-721,727,共6页
目的研究肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)表达的影响及相关作用机制,探讨乙肝病毒促肝癌发生的表观遗传调控。方法HBx重组表达载体转染5-aza-CdR处理或未处理的Huh7、HepG2肝癌细胞,Western Blot及... 目的研究肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)表达的影响及相关作用机制,探讨乙肝病毒促肝癌发生的表观遗传调控。方法HBx重组表达载体转染5-aza-CdR处理或未处理的Huh7、HepG2肝癌细胞,Western Blot及RT-qPCR检测RUNX3的表达,分析RUNX3基因启动子CpG岛甲基化水平。合成DNA甲基转移酶3A的小干扰RNA(siRNA_3A)单独转染或与HBx共转染,检测RUNX3的表达。PCR检测21例手术切除的肝细胞癌新鲜组织标本HBx表达情况,比较HBx阴性与HBx阳性组织样本间RUNX3的表达差异以及启动子甲基化程度。结果过表达HBx可导致肝癌细胞内RUNX3表达下调,且甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR可完全阻断HBx对RUNX3的抑制作用。HBx诱导RUNX3基因启动子CpG岛发生高甲基化,但不影响DNA甲基转移酶的表达。siRNA_3A转染肝癌细胞后,RUNX3 mRNA与蛋白表达均显著上调;其与HBx共转染后,逆转了单独HBx对RUNX3的抑制作用。HBx阳性的肝癌组织中RUNX3mRNA表达水平较HBx阴性组低,且RUNX3启动子甲基化程度也相对较高。结论 HBx通过促进RUNX3启动子区域发生高甲基化而抑制其表达,且这一过程是由DNMT3A所介导的。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒X蛋白 肝细胞癌 RUNT相关转录因子3 dna甲基转移酶3a 甲基化
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急性髓系白血病中的DNMT3A基因突变研究 被引量:2
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作者 陈亚玫 鹿全意 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期1556-1560,共5页
表观遗传学改变,包括DNA甲基化水平异常在肿瘤的发生、发展阶段起着重要作用。近期,多位研究者在急性髓系白血病(AML)患者中发现了DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)基因突变可能与DNA甲基化水平异常有关。该基因突变比例为20%左右,形式多种多样... 表观遗传学改变,包括DNA甲基化水平异常在肿瘤的发生、发展阶段起着重要作用。近期,多位研究者在急性髓系白血病(AML)患者中发现了DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)基因突变可能与DNA甲基化水平异常有关。该基因突变比例为20%左右,形式多种多样,以点突变为主,热点突变位于882位精氨酸。DNMT3A突变主要发生在大于60周岁的AML-M4、M5亚型中的危核型患者,预后均较差。有学者在骨髓异常增生综合症(MDS)和原发性骨髓纤维化(PMF)的患者中也发现有该基因突变,表明DNMT3A突变已先于白血病阶段存在,并提出从表观遗传学改变研究白血病发病机制的观点。然而,目前尚缺大样本调查以明确DNMT3A突变能否成为微小残留病(MRD)检测的分子标记物及能否成为药物作用的新靶点,因此对上述问题尚需进一步探讨。本文总结了近年来DNMT3A基因突变的研究进展,并作一综述。 展开更多
关键词 dnmt3a基因 表现遗传学 dna甲基化 急性髓系白血病
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DNMT3a通过提升基因内部甲基化介导紫杉醇诱导的LINE-1异常表达 被引量:7
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作者 王昕源 张雨 +2 位作者 杨楠 程禾 孙玉洁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期100-111,共12页
药物诱导的长散在重复序列LINE-1异常激活可促进细胞基因组不稳定,而基因组不稳定是促进肿瘤发生发展和耐药表型形成的重要因素。因此,探索LINE-1异常激活的分子机制具有重要的理论和临床意义。DNA甲基化是调控基因表达的重要方式,已知... 药物诱导的长散在重复序列LINE-1异常激活可促进细胞基因组不稳定,而基因组不稳定是促进肿瘤发生发展和耐药表型形成的重要因素。因此,探索LINE-1异常激活的分子机制具有重要的理论和临床意义。DNA甲基化是调控基因表达的重要方式,已知DNA甲基转移酶家族成员DNMT3a不仅能通过促进基因启动子甲基化抑制基因表达,还可通过增强基因内部甲基化上调基因表达。本实验室前期研究发现,将乳腺癌细胞暴露于化疗药物可诱导LINE-1异常高表达,但LINE-1启动子甲基化水平并无显著改变。本研究进一步探讨了在化疗药物压力下DNMT3a是否可通过增强LINE-1基因内部甲基化水平促进LINE-1在乳腺癌细胞中的异常高表达。ChIP实验和甲基分析结果显示,用化疗药物紫杉醇(PTX)处理乳腺癌细胞,不仅可以诱导DNMT3a表达,而且可以促进DNMT3a与LINE-1基因内部区域的结合,提升其基因内部甲基化水平,进而上调LINE-1的表达水平。利用表达载体增加细胞内DNMT3a的表达水平,可显著上调LINE-1基因内部的甲基化及基因的表达水平,而下调DNMT3a的表达可有效抑制LINE-1表达。上述研究结果表明,DNMT3a介导的基因非启动子区甲基化在药物诱导的LINE-1异常激活中发挥重要作用,为认识LINE-1在乳腺癌化疗耐药性形成过程中异常激活的机制提供了新思路。 展开更多
关键词 乳腺癌 LINE-1异常激活 基因内部dna甲基化 dnmt3a
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不明原因复发性流产患者绒毛组织中DNA低甲基化及机制 被引量:11
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作者 李静 于学文 +2 位作者 杨洋 王立芹 张永爱 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期351-356,共6页
目的探究不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织全基因组甲基化水平和甲基化相关酶基因表达情况。方法选取URSA患者31例(URSA组)及同期正常早孕放弃妊娠行人工流产的妇女30例(对照组)。取绒毛组织,采用ELISA测定绒毛组织中总DNA的甲基... 目的探究不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织全基因组甲基化水平和甲基化相关酶基因表达情况。方法选取URSA患者31例(URSA组)及同期正常早孕放弃妊娠行人工流产的妇女30例(对照组)。取绒毛组织,采用ELISA测定绒毛组织中总DNA的甲基化水平,实时定量PCR检测DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、DNMT3a、DNMT3b、去甲基化酶10-11转位酶1(TET1)、TET2、TET3的mRNA水平,Western blot法检测DNMT1、DNMT2、DNMT3、TET1、TET2、TET3蛋白水平。免疫化学染色检测绒毛组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的表达和分布。结果与对照组相比,URSA组的全基因组甲基化水平显著降低,URSA组绒毛组织中DNMT1、DNMT3b的mRNA和蛋白水平显著降低,TET1、TET2的mRNA和蛋白水平显著增加。结论URSA妇女的流产绒毛组织呈现出低甲基化水平的状态,可能与DNMT1、DNMT3b上调,TET1、TET2下调有关。 展开更多
关键词 复发性流产 DNMT3B dna甲基化转移酶1(DNMT1) 10-11转位酶1(TET1) TET2 甲基化
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DNA甲基转移酶3B异构体研究进展
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作者 田小莉 杨洁 +1 位作者 闫少春 邵国 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期105-108,共4页
DNA甲基化是表观遗传修饰的重要组成部分,它是在DNA甲基转移酶(DNMTs)的作用下将甲基加到二核苷酸CpG岛中胞嘧啶的第五位碳原子上。DNMT3B是真核生物细胞中一种非常重要的转移酶,有近40种异构体,本文主要对DNMT3B的异构体的构成、表达... DNA甲基化是表观遗传修饰的重要组成部分,它是在DNA甲基转移酶(DNMTs)的作用下将甲基加到二核苷酸CpG岛中胞嘧啶的第五位碳原子上。DNMT3B是真核生物细胞中一种非常重要的转移酶,有近40种异构体,本文主要对DNMT3B的异构体的构成、表达及在疾病中的作用等进行综述。 展开更多
关键词 dna甲基化 DNMT3B 异构体
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DNA甲基化转移酶3B在脑胶质母细胞瘤中的差异表达
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作者 白宇 陈彦 +6 位作者 国添柱 刘庆阳 杨雪 冯颖 闫卓红 王丽佳 张权庚 《首都医科大学学报》 CAS 2013年第3期380-384,共5页
目的脑胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中存在广泛的基因组低甲基化,本研究检查了DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DMNT3B)是否在这种肿瘤中的表达和突变情况,以期寻找肿瘤基因组低甲基化发生的原因。方法用RNA抽提试剂盒... 目的脑胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中存在广泛的基因组低甲基化,本研究检查了DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DMNT3B)是否在这种肿瘤中的表达和突变情况,以期寻找肿瘤基因组低甲基化发生的原因。方法用RNA抽提试剂盒从25例人脑胶质母细胞瘤组织中提取总RNA,用反转录聚合酶链反应方法扩增DNMT3B的cDNA,然后测序,所得序列经DNASTAR软件与NCBI发表的正常序列进行比对。结果从25例脑胶质母细胞瘤样本中的成功扩增了全长DNMT3B cDNA,测序分析结果显示DNMT3B基因在该肿瘤样本中差异性存在多种剪接变异体,以DNMT3B-V1、DNMT3B-V3、DNMT3B-V7为主。没有发现改变氨基酸序列的点突变。结论 DNMT3B基因在脑胶质母细胞瘤中没有点突变,但存在多种剪接变异体(以DNMT3B-V3、DNMT3B-V7为主),其是否为脑胶质母细胞瘤的广泛基因组低甲基化的原因尚有待进一步研究。 展开更多
关键词 脑胶质母细胞瘤 基因组低甲基化 dna甲基化转移酶3B
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METTL3通过m6A修饰β-catenin影响顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤的修复 被引量:1
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作者 徐建群 周利君 +4 位作者 程津津 方思 王红娟 郭红荣 戴芹 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期482-488,共7页
目的基于顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤细胞模型,探讨甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)介导的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰β-catenin在肺癌中的作用机制。方法通过顺铂诱导,建立A549细胞DNA损伤模型,再接受合成M... 目的基于顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤细胞模型,探讨甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)介导的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰β-catenin在肺癌中的作用机制。方法通过顺铂诱导,建立A549细胞DNA损伤模型,再接受合成METTL3 siRNA和siRNA空载质粒(NC)转染。将细胞分成对照组、顺铂诱导组、顺铂诱导+siRNA组、顺铂诱导+NC组,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,qRT-PCR和Western blot检测METTL3 mRNA和蛋白表达,Western blot检测各组细胞中β-catenin、H2AX、ERCC1、NDRG_(1)和ATM的蛋白表达,m6A RNA甲基化定量试剂盒测定RNA中m6A的水平。结果成功转染METTL3 siRNA后,A549细胞中METTL3 mRNA表达降低(P<0.01)。与对照组相比,顺铂诱导组细胞增殖能力下降(P<0.01),凋亡率上升(P<0.01),细胞周期G_(0)~G_(1)期延长,S期和G_(2)~M期均缩短(均P<0.01),METTL3 mRNA和蛋白表达水平下调(均P<0.01),H2AX、ERCC1、NDRG_(1)蛋白表达上升(均P<0.01),ATM和β-catenin蛋白表达下降(均P<0.01),m6A水平显著下调(P<0.01);与顺铂诱导组相比,顺铂诱导+siRNA组上述趋势更加显著;而顺铂诱导+NC组细胞与其差异无统计学意义。结论METTL3敲低通过m6A修饰β-catenin抑制顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤的修复。 展开更多
关键词 肺癌 顺铂 甲基转移酶样3 N6-甲基腺苷 dna损伤
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DNMT3B基因在肝细胞癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭迁移的影响 被引量:2
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作者 李雅睿 王梦瑶 +5 位作者 卢桂芳 任牡丹 卢新兰 张丹 赵艳 和水祥 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期380-385,共6页
目的探讨DNA甲基转移酶3b(DNMT3B)基因在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及机制。方法收集46例肝癌患者的癌组织与对应癌旁组织,qRT-PCR法检测DNMT3B在肝癌组织及对应癌旁组织中的表达,并分析其与临床病... 目的探讨DNA甲基转移酶3b(DNMT3B)基因在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及机制。方法收集46例肝癌患者的癌组织与对应癌旁组织,qRT-PCR法检测DNMT3B在肝癌组织及对应癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系;应用RNA干扰(RNAi)技术合成针对DNMT3B的siRNA并转染MHCC97-H细胞,qRT-PCR和Western blot检测相关基因mRNA和蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果 46例肝癌患者中,DNMT3B基因在肝癌组织中的表达较对应癌旁组织升高者占73.91%,其高表达与肝癌的病理分化类型和肿瘤大小有关(P均<0.05);在细胞水平,抑制DNMT3B基因表达使MHCC97-H细胞增殖及侵袭迁移能力降低;干扰DNMT3B基因可以增加抑癌相关基因RASSFA1、APC、MTSS1mRNA和蛋白表达水平。结论 DNMT3B与肝癌的进展密切相关,它可能通过调控下游抑癌基因甲基化水平影响其表达,从而抑制肝癌细胞的增殖及侵袭迁移能力。 展开更多
关键词 肝细胞癌 dna甲基转移酶3b(DNMT3B) 增殖 侵袭 迁移
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反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响
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作者 左石 邹声泉 +4 位作者 刘民锋 董泾青 郭伟 罗剑 徐立宁 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期5-9,共5页
目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑... 目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。 展开更多
关键词 DNMT1基因 DNMT3b基因 反义RNA 胆管癌 dna甲基化 细胞凋亡
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透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B异构体表达及其整体甲基化的分析
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作者 高永胜 杨洁 +5 位作者 尹树慧 崔钧贺 贾晓娥 谢伟 闫少春 邵国 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1361-1364,共4页
目的检测透明细胞肾细胞癌组织中DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)异构体表达及其整体甲基化的变化,探讨这些变化与透明细胞肾细胞癌的关系。方法选取15例透明细胞肾细胞癌及其癌旁组织,应用Real-time PCR技术检测DNMT... 目的检测透明细胞肾细胞癌组织中DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)异构体表达及其整体甲基化的变化,探讨这些变化与透明细胞肾细胞癌的关系。方法选取15例透明细胞肾细胞癌及其癌旁组织,应用Real-time PCR技术检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3B六种主要异构体的mRNA表达,应用Western blot法检验DNMT3B4蛋白表达;应用联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法(COBRA)分析重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平。结果透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B4 mRNA和蛋白表达水平比癌旁组织高;重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平在透明细胞肾细胞癌组织中比癌旁组织低。结论 DNMT3B4表达增加可能与整体甲基化降低及透明细胞肾细胞癌的发生有密切关系。 展开更多
关键词 肾肿瘤 透明细胞肾细胞癌 dna甲基转移酶3B 整体甲基化
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东方蜜蜂DNA甲基转移酶3的分子特征、系统进化和基因表达模式
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作者 郭思佳 刘小玉 +9 位作者 王梦怡 臧贺 范小雪 吴陶 张天泽 严提珍 骆庆明 陈大福 邱剑丰 郭睿 《昆虫学报》 2025年第8期1040-1049,共10页
【目的】解析东方蜜蜂Apis cerana DNA甲基转移酶3(DNA methyltransferase 3,DNMT3)AcDNMT3的分子特征、系统进化及基因表达谱,为深入开展AcDNMT 3的功能研究提供参考和基础。【方法】利用相关生物信息学软件预测和分析东方蜜蜂AcDNMT3... 【目的】解析东方蜜蜂Apis cerana DNA甲基转移酶3(DNA methyltransferase 3,DNMT3)AcDNMT3的分子特征、系统进化及基因表达谱,为深入开展AcDNMT 3的功能研究提供参考和基础。【方法】利用相关生物信息学软件预测和分析东方蜜蜂AcDNMT3的理化性质、分子特征、结构域、保守基序和系统进化。采用RT-qPCR检测AcDNMT 3在东方蜜蜂工蜂不同发育阶段(卵、3日龄幼虫、1日龄预蛹、2日龄预蛹、4日龄蛹以及1,2,6,12,15和18日龄成虫)和工蜂成虫组织(触角、咽下腺、脑、表皮、中肠、脂肪体和毒腺)及蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis接种东方蜜蜂3日龄工蜂幼虫后4-6日龄幼虫肠道和东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae接种东方蜜蜂1日龄工蜂成虫后2-5日龄成虫中肠中的相对表达量。【结果】AcDNMT3含758个氨基酸,分子量约为88.24 kD,分子式为C 3945 H 6182 N 1076 O 1134 S 44,理论等电点为8.32,平均亲水指数为-0.454。AcDNMT3与腺苷同型半胱氨酸酶(A0A2A3ECJ8)等10个蛋白具有潜在的互作关系。东方蜜蜂、西方蜜蜂Ap.mellifera、大蜜蜂Ap.dorsata、黑大蜜蜂Ap.laboriosa、欧洲熊蜂Bombus terrestris、巴西无刺蜂Frieseomelitta varia、果树壁蜂Osmia lignaria、大分舌蜂Colletes gigas、行军蚁Eciton burchellii、黄褐尼氏蚁Nylanderia fulva、阿根廷蚁Linepithema humile、红火蚁Solenopsis invicta、小黄家蚁Monomorium pharaonis和埃氏扁胸切叶蚁Vollenhovia emeryi的DNMT3含有4个相同的结构域(PWWP_DNMT3,ADDz_Dnmt3,Dcm domain和PWWP domain)及5个相同的保守基序(Motif1,Motif2,Motif3,Motif4和Motif5)。AcDNMT3与西方蜜蜂的DNMT3在进化树上聚为一支。AcDNMT 3在东方蜜蜂工蜂卵、幼虫、预蛹和蛹中差异表达,在2日龄预蛹中的表达量最高且显著高于卵、3日龄幼虫、1日龄预蛹和4日龄蛹中的表达量。AcDNMT 3在东方蜜蜂1,2,6,12,15和18日龄工蜂成虫体内差异表达,在1日龄成虫体内的表达量最高且显著高于2,6,12,15和18日龄成虫体内的表达量。AcDNMT 3在东方蜜蜂工蜂成虫触角、毒腺、脑、中肠、脂肪体、表皮和咽下腺中差异表达,在触角中的表达量最高,而在中肠中的表达量最低。蜜蜂球囊菌接种东方蜜蜂3日龄工蜂幼虫后4日龄工蜂幼虫肠道中AcDNMT 3的表达量比对照显著下调。东方蜜蜂微孢子虫接种东方蜜蜂1日龄工蜂成虫后2,4和5日龄工蜂成虫中肠中AcDNMT 3的表达量比对照显著上调,而3日龄工蜂成虫中肠中AcDNMT 3的表达量比对照极显著下调。【结论】AcDNMT3可能是亲水性蛋白、胞内蛋白和非跨膜蛋白;DNMT3在东方蜜蜂和上述其他昆虫中高度保守;东方蜜蜂与西方蜜蜂的DNMT3同源性最高;AcDNMT 3潜在参与东方蜜蜂工蜂发育、幼虫应答蜜蜂球囊菌侵染和成虫应答东方蜜蜂微孢子虫侵染。 展开更多
关键词 东方蜜蜂 dna甲基转移酶3 生物信息学 分子特征 系统进化 发育 宿主应答
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高糖促进小鼠肾小管上皮细胞DNMT3B表达并通过激活β-catenin信号通路促进纤维化相关蛋白分泌 被引量:2
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作者 屈玲玲 邹琴 +5 位作者 李清璇 李晓颖 刘忠强 周宇霞 郭兵 石明隽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期608-615,共8页
目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转... 目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转染DNMT3B短发夹RNA(sh-DNMT3B)及DNMT3B过表达(DNMT3B-OE)质粒后,反转录PCR检测RTEC的DNMT3B、 SFRP1、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)、纤连蛋白(FN)mRNA表达,Western blot法检测DNMT3B、 SFRP1、糖原合成酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin、 Col4、 FN的蛋白表达。免疫荧光细胞化学染色检测DNMT3B和SFRP1在RTEC的表达和定位。结果与NG组相比,HG组RTEC中DNMT3B、β-catenin、 p-GSK3β、 Col4、 FN蛋白表达增加,SFRP1表达降低。与空载体组比较,敲低DNMT3B后,HG条件下RTEC的SFRP1 mRNA及蛋白表达均增加,β-catenin、 p-GSK3β、 Col4蛋白表达降低,FN的mRNA和蛋白表达均降低,而β-catenin mRNA表达无明显改变;过表达DNMT3B后,各指标表达情况与上述结果相反。DNMT3B及SFRP1在RTEC的细胞核及细胞质中均有表达,与NG组相比,HG组的细胞可见DNMT3B在细胞核内聚集,且与SFRP1的共定位增加。结论 HG刺激增加RTEC的DNMT3B表达,下调SFRP1表达,激活Wnt/β-catenin信号通路促进细胞外基质形成。 展开更多
关键词 肾脏纤维化 小鼠肾小管上皮细胞(RTEC) dna甲基转移酶3B(DNMT3B) 分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1) Wnt β联蛋白(β-catenin)
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LncRNA-FKBP1C通过顺式调控DNMT3B影响鸡骨骼肌生长 被引量:3
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作者 余家奥 黎镇晖 +1 位作者 王芷筠 聂庆华 《中国家禽》 北大核心 2020年第11期5-10,共6页
为研究lncRNA对鸡骨骼肌生长的影响,在UCSC上预测lncRNA-FKBP1C顺式调控的靶基因为DNMT3B,随后采用qPCR检测DNMT3B在隐性白羽洛克鸡和杏花鸡中的表达量,并在鸡原代成肌细胞中过表达和干扰lnc RNA-FKBP1C,同时对IGF1R基因启动子活性和甲... 为研究lncRNA对鸡骨骼肌生长的影响,在UCSC上预测lncRNA-FKBP1C顺式调控的靶基因为DNMT3B,随后采用qPCR检测DNMT3B在隐性白羽洛克鸡和杏花鸡中的表达量,并在鸡原代成肌细胞中过表达和干扰lnc RNA-FKBP1C,同时对IGF1R基因启动子活性和甲基化进行分析。结果显示,DNMT3B在杏花鸡中差异上调;在鸡原代成肌细胞中发现lncRNA-FKBP1C能抑制DNMT3B、促进IGF1R、FGF12、FGF14、FGF18、FGFR2基因的表达;而DNMT3B可能通过影响IGF1R启动子活性区域的非CpG甲基化来抑制其表达。研究结果提示lncRNA-FKBP1C可能通过顺式调控作用抑制DNMT3B基因的表达,从而影响鸡生长相关基因的表达。 展开更多
关键词 LncRNA-FKBP1C DNMT3B 骨骼肌生长 品种表达差异 dna甲基化
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DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖 被引量:1
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作者 高亚莉 罗小玲 +3 位作者 孟婷 朱敏娟 田渼雯 陆晓和 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1239-1245,共7页
目的探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT... 目的探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量;用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力;用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化;干扰DNMT1表达后,用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化。结果视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高(P<0.05)。转染了pcDNA-DNMT1的HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达增加,细胞增殖能力增加,MEG3表达量降低;转染了siRNADNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少,细胞增殖能力降低,MEG3表达量增加(P<0.05)。干扰DNMT1蛋白表达后,MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低(P<0.05)。逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后,DNMT1蛋白调控RB细胞增殖的能力减弱(P<0.05)。结论在视网膜母细胞瘤细胞中,DNMT1蛋白表达的上调,诱导了MEG3基因启动子DNA甲基化失活,最终导致细胞异常增殖。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤 DNMT1蛋白 MEG3基因 dna甲基化
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利用CRISPR/Cas9技术实现快速、经济的大鼠条件基因敲除技术 被引量:2
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作者 马元武 张连峰 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第3期66-66,共1页
在2014年第1期的Cell Research杂志上发表了一篇利用CRISPR/Cas9技术进行大鼠条件基因敲除技术的技术性论文(Ma,et al.,Generating rats with conditional alleles using CRISPR/Cas9, Cell Research (2014)24:122-125.),... 在2014年第1期的Cell Research杂志上发表了一篇利用CRISPR/Cas9技术进行大鼠条件基因敲除技术的技术性论文(Ma,et al.,Generating rats with conditional alleles using CRISPR/Cas9, Cell Research (2014)24:122-125.),这篇论文利用CRISPR/Cas9在靶基因的特定外显子产生DNA双链断裂,同时提供一个环形质粒模板,该质粒包含两端被loxP位点标记的、且与被打断外显子相同的DNA片段。在受精卵内同源重组修复系统( homologous recombination repair pathway )的作用下,可实现高效率的靶基因loxP位点标记,从而用于大鼠的条件性基因敲除。论文中利用该技术实现了三个甲基化酶基因(Dnmt1, Dnmt3a, Dnmt3b)loxP位点标记,效率高达30%,使得制备一个含loxP位点标记大鼠的周期仅2~3个月,成为目前为止最经济、快速的大鼠条件基因敲除技术。 展开更多
关键词 基因敲除技术 大鼠 dna双链断裂 条件性基因敲除 LOXP DNMT3B CELL 质粒模板
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