乳痛软坚片通过调控DLL4/Notch1/Hes1通路对乳腺癌前病变肝郁血瘀证大鼠血管新生的影响

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作者 杨华 龙俊瑶 +6 位作者 龚婕 陆冰冰 邹茜 伍玉蓉 刘丽芳 刘慧 陈其华 《中成药》 北大核心 2025年第3期774-781,共8页

目的研究乳痛软坚片对乳腺癌前病变(PBC)大鼠癌组织血管新生的影响。方法60只雌性SD大鼠随机分为空白组(10只)和造模组(50只),采用7,12-二甲基苯并蒽(DMBA)灌胃结合颈部戴枷法建立PBC肝郁血瘀证模型,持续9周。造模成功后,将模型大鼠随... 目的研究乳痛软坚片对乳腺癌前病变(PBC)大鼠癌组织血管新生的影响。方法60只雌性SD大鼠随机分为空白组(10只)和造模组(50只),采用7,12-二甲基苯并蒽(DMBA)灌胃结合颈部戴枷法建立PBC肝郁血瘀证模型,持续9周。造模成功后,将模型大鼠随机分为模型组、他莫昔芬组(3.2 mg/kg)、乳痛软坚片组(128 mg/kg)、3,5-二氟苯乙酰基(DAPT,5 mg/kg)组和乳痛软坚片+DAPT组(128 mg/kg灌胃+5 mg/kg腹腔注射),每组10只,予以相应药物干预1个月。观察各组大鼠癌变进展情况及证候积分;采用微血管密度(MVD)评估血管新生情况,免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)表达;RT-qPCR法、免疫组化法及Western blot法分别检测DLL4/Notch1/Hes1通路相关指标mRNA和蛋白表达。结果DMBA诱导大鼠乳腺组织癌变过程中,E-cadherin表达逐渐消失,HE染色符合PBC进展过程,证明造模成功。与空白组比较,模型组MVD值、Notch1、Hes1 mRNA和VEGF、DLL4、Notch1、Hes1蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,乳痛软坚片组MVD值、Notch1、Hes1 mRNA和VEGF、DLL4、Notch1、Hes1蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。乳痛软坚片+DAPT组Notch1、Hes1 mRNA和DLL4、Notch1、Hes1蛋白表达较乳痛软坚片组降低(P<0.05,P<0.01)。结论乳痛软坚片可抑制血管新生,减缓PBC肝郁血瘀证大鼠癌变进展,其作用机制可能与下调DLL4/Notch1/Hes1通路相关蛋白表达相关。 展开更多

关键词 乳痛软坚片 乳腺癌前病变 肝郁血瘀证 血管新生 dll4/Notch1/Hes1通路

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DLL4、VEGF在肺腺癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系 被引量：12

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作者 李晓平 张清富 +4 位作者 陆斌 邱雪杉 罗阳 张卫东 许顺 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第2期117-121,共5页

背景与目的血管发生(angiogenesis)依赖于多种促进血管发生因子和抑制血管发生因子的综合交互作用调控。血管内皮生长因子(VEGF)和Notch信号传递途径(Notch signaling pathway)参与了此过程。本研究旨在探讨肺腺癌组织中Notch配体DLL4、... 背景与目的血管发生(angiogenesis)依赖于多种促进血管发生因子和抑制血管发生因子的综合交互作用调控。血管内皮生长因子(VEGF)和Notch信号传递途径(Notch signaling pathway)参与了此过程。本研究旨在探讨肺腺癌组织中Notch配体DLL4、VEGF的表达及其与肺腺癌血管生成的关系及临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测80例肺腺癌(包括细支气管肺泡癌和普通肺腺癌)石蜡切片组织中DLL4、VEGF和CD34的表达。结果DLL4、VEGF的表达与肺腺癌患者的肿瘤直径、临床分期、组织学分级、淋巴结转移密切相关,DLL4阳性表达病例中VEGF表达率明显比DLL4阴性表达病例高,DLL4、VEGF共表达时与微血管密度的相关性比DLL4单独表达更明显。DLL4的表达在普通肺腺癌中明显高于细支气管肺泡癌。结论肺腺癌的预后与血管生成明显相关,DLL4的高表达与肺腺癌转移预后密切相关。 展开更多

关键词 dll4 VEGF CD34 肺肿瘤 免疫组织化学

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Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达 被引量：7

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作者 赵先兰 陶雅 +2 位作者 王永红 刘传 杜莹莹 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2017年第3期359-362,共4页

目的:探讨Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法:选取轻度子痫前期患者30例(轻度组)、重度子痫前期患者30例(重度组)、正常妊娠孕妇30例(对照组),采用免疫组化法检测其胎盘组织中Jagged1、Dll4的定位... 目的:探讨Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法:选取轻度子痫前期患者30例(轻度组)、重度子痫前期患者30例(重度组)、正常妊娠孕妇30例(对照组),采用免疫组化法检测其胎盘组织中Jagged1、Dll4的定位表达,采用荧光定量PCR技术和Western blot法分别检测胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达。结果:Jagged1主要表达于血管内皮细胞和绒毛滋养层细胞,Dll4主要表达于血管内皮细胞。轻、重度组胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),且重度组低于轻度组(P<0.05);对照组胎盘组织中Jagged1与Dll4在mRNA和蛋白水平上的表达均呈正相关(r=0.806和0.808,P<0.05),轻度组中两者表达的相关性减弱(r=0.675和0.560,P<0.05),而在重度组中未发现两者的相关性。结论:Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中表达失衡,与子痫前期的发病关系密切。 展开更多

关键词 子痫前期 NOTCH信号通路 JAGGED1 dll4 胎盘

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重组人内皮抑素通过激活Dll4/Notch通路抑制大鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生 被引量：8

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作者 蔡宏文 朱敏 +3 位作者 周鑫斌 缪静 邱原刚 毛威 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1700-1703,共4页

目的:观察重组人内皮抑素(rh ES)对大鼠动脉粥样硬化(AS)斑块内新生血管的抑制作用,探讨Dll4/Notch信号通路在其中的调控机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、AS组和AS+rh ES组,每组10只。N组始终喂基础饲料,其余2组采... 目的:观察重组人内皮抑素(rh ES)对大鼠动脉粥样硬化(AS)斑块内新生血管的抑制作用,探讨Dll4/Notch信号通路在其中的调控机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、AS组和AS+rh ES组,每组10只。N组始终喂基础饲料,其余2组采用高脂喂养、维生素D3负荷及球囊损伤动脉内膜建立大鼠AS模型。AS+rh ES组以10 mg·kg^(-1)·d^(-1)的rh ES腹腔注射4周,另2组注射等量生理盐水。采血检测各组的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-1(IL-1)和肌钙蛋白I(Tn I)等;免疫组化CD31染色观察新生血管密度;Western blot法检测主动脉内Dll4、Notch1蛋白表达。结果:与N组比较,AS组和AS+rh ES组的TC、TG、LDL-C、CRP和L-1水平均显著升高(P<0.05),但上述指标在AS组和AS+rh ES组之间差异无统计学显著性。CD31染色结果显示,AS组的新生血管表达最丰富;与AS组比较,AS+rh ES组的新生血管密度显著下降(P<0.05)。AS组的Dll4和Notch1蛋白水平显著低于N组(P<0.05);相比AS组,AS+rh ES组的Dll4和Notch1蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:rh ES能够抑制大鼠AS斑块内血管新生,Dll4/Notch通路的激活可能是rh ES抑制斑块内的血管新生的信号机制。 展开更多

关键词 重组人内皮抑素 动脉粥样硬化 dll4/Notch通路 新生血管

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上皮性卵巢癌中八聚体结合转录因子4、Notch1及DLL4的表达及其临床意义 被引量：5

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作者 俞岚 焦云杰 +3 位作者 周蕾 宋文庆 武世伍 王丹娜 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期444-450,共7页

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)中八聚体结合转录因子4(OCT4)、Notch1及DLL4蛋白表达之间的关系及其功能意义。方法收集207例EOC术后标本和65例卵巢良性上皮性肿瘤标本,应用免疫组化学法检测EOC和卵巢良性上皮性肿瘤组织中OCT4、Notch1以及D... 目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)中八聚体结合转录因子4(OCT4)、Notch1及DLL4蛋白表达之间的关系及其功能意义。方法收集207例EOC术后标本和65例卵巢良性上皮性肿瘤标本,应用免疫组化学法检测EOC和卵巢良性上皮性肿瘤组织中OCT4、Notch1以及DLL4蛋白的表达情况。结果 EOC组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织中,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的阳性表达率分别为60.0%、61.8%、60.9%和9.2%、6.2%、0,差异均有统计学意义(P<0.05);OCT4、Notch1和DLL4的表达与EOC的组织学分化、FIGO分期、盆腔淋巴结转移有关(P<0.05);DLL4蛋白的表达分别与OCT4和Notch1的表达呈正相关关系(r值分别为0.758和0.704,P均<0.001),同时,OCT4与Notch1蛋白的表达亦呈正相关(r=0.645,P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析表明,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的过表达均与患者的生存率有关,3种蛋白表达阳性组患者生存率均明显低于蛋白表达阴性组患者(P<0.05)。多因素分析:OCT4、DLL4蛋白的表达和FIGO分期是影响EOC根治术后患者预后的独立因素(P<0.05)。结论OCT4、Notch1及DLL4的过表达与EOC的组织学分化程度、转移和预后等因素密切相关,联合检测这些指标可能对于EOC患者的病情进展和预后判断给予重要提示。 展开更多

关键词 上皮性卵巢癌 八聚体结合转录因子4 NOTCH1 dll4 预后

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消肿止痛合剂对大鼠缺血皮瓣血管再生及VEGF-Dll4/Notch信号通路的影响 被引量：16

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作者 姚兴璋 刘涛 +7 位作者 何志军 李兴勇 宋渊 李岩 李金鹏 陈文 王海刚 何元旭 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期164-171,共8页

目的:观察消肿止痛合剂对大鼠缺血皮瓣血管再生及VEGF-Dll4/Notch信号通路的影响.方法:将240只SD大鼠随机分为6组,分别为空白组、假手术组、模型组、消肿止痛合剂组(消肿组)、消肿止痛合剂+Notch阻断剂MK-0752组(消肿+MK组)、消肿止痛合... 目的:观察消肿止痛合剂对大鼠缺血皮瓣血管再生及VEGF-Dll4/Notch信号通路的影响.方法:将240只SD大鼠随机分为6组,分别为空白组、假手术组、模型组、消肿止痛合剂组(消肿组)、消肿止痛合剂+Notch阻断剂MK-0752组(消肿+MK组)、消肿止痛合剂+VEGF阻断剂Axitinib组(消肿+AXI组).用透明硫酸纸准确描绘各组皮瓣形态,分析皮瓣成活率;用免疫组化法测定皮瓣组织中VEGFA的蛋白表达,Western blot法检测大鼠皮瓣组织中VEGFA、Notch和Dll4蛋白的表达.结果:(1)第5、10、15、20天消肿组皮瓣成活情况显著高于模型组(P<0.05),加入VEGF阻断剂后,消肿+AXI组皮瓣成活率下降(P<0.05),当加入Notch阻断剂后,消肿+MK组皮瓣成活率上升(P<0.05);(2)与模型组相比,消肿止痛合剂干预后,VEGFA、Notch和Dll4蛋白表达量显著升高(P<0.05).与消肿组相比,VEGF阻断剂干预后,VEGFA、Notch和Dll4蛋白表达量降低(P<0.05).Notch阻断剂干预后,VEGFA蛋白表达水平增加,Notch、Dll4蛋白表达增加的趋势被有效抑制(P<0.05).结论:消肿止痛合剂能够促进皮瓣的成活率,可能与影响VEGF-Dll4/Notch信号转导通路有关. 展开更多

关键词 消肿止痛合剂 血管再生 VEGF-dll4/Notch信号通路 大鼠

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IL-17及其受体调控DLL4-Notch信号通路影响甲状腺乳头状癌新生血管生成 被引量：5

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作者 宋杨 杨见明 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第7期1146-1152,共7页

目的研究白介素-17(IL-17)/白介素-17受体(IL-17R)调控DLL4-Notch信号通路影响甲状腺乳头状癌血管生成的机制。方法建立甲状腺乳头状癌细胞(TPC-1)-内皮细胞共培养体系,检测50 ng/ml IL-17刺激剂对共培养系统中人脐静脉内皮细胞(HUVECs... 目的研究白介素-17(IL-17)/白介素-17受体(IL-17R)调控DLL4-Notch信号通路影响甲状腺乳头状癌血管生成的机制。方法建立甲状腺乳头状癌细胞(TPC-1)-内皮细胞共培养体系,检测50 ng/ml IL-17刺激剂对共培养系统中人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、成管能力的影响。Western blot法检测共培养体系中HUVECs DLL4-Notch信号通路和血管新生蛋白表达水平。结果50 ng/ml重组人IL-17A干预可显著促进共培养体系中HUVECs的增殖、迁移和成管能力(P<0.01)。pLKO.1-EGFP-Puro-IL-17R转染的TPC-1细胞共培养HUVECs经50 ng/ml重组人IL-17A干预6 h后,细胞中DLL4、Notch、HES、HEY和血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的表达水平得到不同程度的上调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。DLL4-Notch通路抑制剂DAPT干预可显著抑制IL-17刺激剂对共培养体系细胞中HES、HEY、VEGFR-1、VEGFR-2蛋白表达增加作用(P<0.01)。结论IL-17/IL-17R可能通过DLL4-Notch信号通路促进甲状腺乳头状癌血管生成。 展开更多

关键词 IL-17/IL-17R dll4-Notch信号通路 血管生成 甲状腺乳头状癌

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Dll4和VEGFR在氧诱导视网膜病小鼠模型中的表达及意义 被引量：1

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作者 刘王凯 苏毅华 +4 位作者 李晓瑜 李易娟 黄越芳 余慕雪 庄思齐 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期857-863,共7页

【目的】为了分析Dll4、VEGFR-1、VEGFR-2在视网膜新生血管中的表达,探讨Notch1-Dll4信号通路在氧诱导视网膜病小鼠新生血管形成中的作用。【方法】选用鼠龄7 d的C57BL/6J新生鼠30只,分成实验组和对照组。实验组15只,在氧浓度为(75±... 【目的】为了分析Dll4、VEGFR-1、VEGFR-2在视网膜新生血管中的表达,探讨Notch1-Dll4信号通路在氧诱导视网膜病小鼠新生血管形成中的作用。【方法】选用鼠龄7 d的C57BL/6J新生鼠30只,分成实验组和对照组。实验组15只,在氧浓度为(75±2)%的密闭容器中生长5 d,回到室内正常空气中;对照组15只,在室内正常空气中生长。两组各取产后7 d(7 d post-partum,p7)、p12、p17新生鼠5只,摘除眼球,取视网膜提取RNA,以RT-PCR方法检测Dll4、VEGFR-1、VEGFR-2在视网膜中m RNA的表达。【结果】RT-PCR结果显示,在p7和p12时间点时,两组间VEGFR-1表达差异无统计学意义(P>0.05);在p17时间点时,两组间VEGFR-1表达差异有统计学意义(P<0.05),实验组表达量低于对照组;VEGFR-2在各时间位点两组间表达差异无统计学意义(P>0.05);在p7时间点时,两组间Dll4表达差异无统计学意义(P>0.05);在p12和p17时间点时,两组间Dll4表达差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05),实验组表达量低于对照组;实验组不同时间点VEGFR-1、Dll4的表达,随着时间的延长而下降(P<0.05,P<0.05);VEGFR-2的表达,随着时间的延长而升高(P<0.05);对照组不同时间点的VEGFR-2表达随着时间延长而增加(P<0.05),而VEGFR-1和Dll4的表达均不随时间变化而变化(P>0.05,P>0.05);Dll4的表达与VEGFR-1的表达呈正相关关系,相关系数r=0.905,P<0.001;而Dll4与VEGFR-2、VEGFR-1与VEGFR-2之间不存在相关关系。【结论】Notch1-Dll4信号通路可能参与了VEGF调控视网膜新生血管生成的过程,Dll4在氧诱导视网膜病小鼠新生血管的形成中表达受到抑制,对VEGF未能进行有效负反馈调控;VEGFR-1的表达受到抑制,且与Dll4表达存在正相关关系;VEGFR-2可能不是视网膜新生血管形成过程中VEGF表达的主要受体。 展开更多

关键词 dll4 VEGFR 早产儿视网膜病 新生血管 动物模型

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乳腺浸润性导管癌中DLL4的表达及其与血管生成的关系 被引量：1

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作者 郎志强 吴艳秋 +3 位作者 蔡莉 姚卫东 郝俊梅 于国华 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期93-95,共3页

目的探讨浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中DLL4的表达及其与血管生成的关系。方法采用免疫组化BenchMark(R)XT一步法检测122例IDC中DLL4、CD34/D2-40的表达,分析其表达与临床病理特征的关系,探讨DLL4与血管生成的关系。... 目的探讨浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中DLL4的表达及其与血管生成的关系。方法采用免疫组化BenchMark(R)XT一步法检测122例IDC中DLL4、CD34/D2-40的表达,分析其表达与临床病理特征的关系,探讨DLL4与血管生成的关系。同时应用半定量RT-PCR技术检测IDCⅠ～Ⅲ级中DLL4的mRNA含量。结果122例IDC中DLL4的阳性率为74.6%(91/122),在IDCⅠ～Ⅲ级中的阳性率分别为48.5%(16/33)、75%(30/40)、91.8%(45/49),三者间表达差异有统计学意义(P均<0.05)。DLL4的表达与IDC患者肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移呈正相关(P均<0.05),与患者年龄、ER、PR及HER-2表达无相关性(P均>0.05)。DLL4阳性肿瘤的微血管密度(microvessel density,MVD)值为(28.395 6±11.8480)个/HPF,阴性者MVD值则为(14.129 0±8.857 2)个/HPF,两者表达差异有统计学意义(t=6.139,P=0.000)。结论 DLL4的表达与乳腺癌的恶性程度及预后密切相关,在肿瘤血管生成过程中起重要作用。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 微血管密度 dll4 PCR 免疫组织化学

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DLL4/Notch1配体过表达抑制K562细胞生长机制研究 被引量：1

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作者 芮红兵 张汉花 +1 位作者 石丽芳 马智勇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1256-1260,共5页

本研究旨在探讨Notch1信号通路的配体delta-like ligand 4(DLL4)基因过表达对K562细胞增殖的影响及其可能的作用机制。采用脂质体介导将含配体DLL4基因的质粒pBudCE4.1-DLL4转染K562细胞,通过RTPCR和Western blot检测转染48 h后DLL4基因... 本研究旨在探讨Notch1信号通路的配体delta-like ligand 4(DLL4)基因过表达对K562细胞增殖的影响及其可能的作用机制。采用脂质体介导将含配体DLL4基因的质粒pBudCE4.1-DLL4转染K562细胞,通过RTPCR和Western blot检测转染48 h后DLL4基因的mRNA及蛋白表达,同样检测转染后Notch1受体胞内区(NICD)、下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表达;通过Western blot检测与Notch信号通路相关的细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达水平;用CCK-8法检测转染后细胞的增殖情况;用流式细胞术检测转染质粒48 h后各组细胞的凋亡情况。结果表明,DLL4基因转染后的K562细胞中DLL4、NICD及下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表达量比对照组明显增多(P<0.05),说明DLL4的过表达激活了Notch1信号通路;Western blot方法检测显示,DLL4的转染增加了细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达,从而抑制了K562细胞的生长,诱导细胞周期停滞于G1期及细胞凋亡的增加。结论:外源性DLL4基因过表达可有效活化K562细胞内Notch1信号通路,可能通过YY1、C-MYC及Rb等Notch信号通路相关基因的高表达诱导K562细胞的生长减慢及细胞凋亡。 展开更多

关键词 dll4/Notch1配体 K562细胞 基因转染

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DLL4在抗肿瘤新生血管治疗中作用的研究进展 被引量：2

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作者 张煜辉 岳志健 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第6期588-590,共3页

抗新生血管治疗是实体肿瘤治疗中的有效策略,近年来抗VEGF-A和VEGF-R2受体治疗出现了耐药现象。Notch信号转导是一种细胞间信号通路,在肿瘤新生血管生成中起重要作用。在Notch通路中,Delta样配体4(Delta-like ligand 4, DLL4)在影响肿... 抗新生血管治疗是实体肿瘤治疗中的有效策略,近年来抗VEGF-A和VEGF-R2受体治疗出现了耐药现象。Notch信号转导是一种细胞间信号通路,在肿瘤新生血管生成中起重要作用。在Notch通路中,Delta样配体4(Delta-like ligand 4, DLL4)在影响肿瘤新生血管生成方面起着重要的作用,它能抑制新生血管分支形成,促进新生血管的成熟;阻断DLL4能增加无功能新生血管数量,加剧恶性肿瘤缺血缺氧,抑制肿瘤的生长。对DLL4蛋白的深入研究为肿瘤新生血管分子靶向治疗提供新的策略和新的靶标,DLL4有可能成为继VEGF后肿瘤血管分子靶向治疗的重要靶点。 展开更多

关键词 Delta样配体4(dll4) 血管生成 肿瘤 靶向治疗

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DLL4蛋白真核表达及多克隆抗体制备

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作者 金巧 甘志凯 +1 位作者 周鹏 刘霞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期175-180,共6页

该研究旨为克隆、表达和纯化出人源DLL4蛋白,并制备出相对应的多克隆抗体。采用搭桥PCR,构建带有t PA信号肽的DLL4基因,并克隆到p GZX表达载体上,经过酶切和测序鉴定后,瞬时转染到HEK293F细胞中,转染48 h后对发酵上清液进行镍柱亲和纯... 该研究旨为克隆、表达和纯化出人源DLL4蛋白,并制备出相对应的多克隆抗体。采用搭桥PCR,构建带有t PA信号肽的DLL4基因,并克隆到p GZX表达载体上,经过酶切和测序鉴定后,瞬时转染到HEK293F细胞中,转染48 h后对发酵上清液进行镍柱亲和纯化。利用Dot blotting、Western blotting和Fortebio大分子互作仪检测DLL4的生物活性;免疫兔子制备DLL4多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价,Western blotting检测抗体特异性。PCR扩增出1.6 kb的t PA-DLL4-6His目的片段,测序结果表明,与NCBI数据库中的DLL4序列(NM_019074.3)相同。一步亲和纯化后,得到纯度为95%的DLL4蛋白,Dot blotting和Western blotting检测到发酵上清液中含有DLL4蛋白,DLL4蛋白和DLL4抗体之间的亲和力在1.848E-10,R2=0.999,ELISA法获得DDL4抗体效价为1∶12 800,Western blotting检测DLL4抗体具有良好的特异性。成功制备出具有免疫原性的DLL4蛋白及其多克隆抗体。 展开更多

关键词 dll4 真核表达 亲和纯化 多克隆抗体 大分子互作仪

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非小细胞肺癌中DLL4蛋白的表达及其临床意义

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作者 陈梅莉 钱震东 +1 位作者 叶元滋 张妍蓓 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1368-1370,1374,共4页

目的探讨DLL4蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其与临床病理参数、患者生存预后之间的关系。方法采用免疫组化法检测DLL4蛋白在89例NSCLC组织和癌旁正常肺组织中的表达。结果 89例NSCLC中,52例DLL4蛋白... 目的探讨DLL4蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其与临床病理参数、患者生存预后之间的关系。方法采用免疫组化法检测DLL4蛋白在89例NSCLC组织和癌旁正常肺组织中的表达。结果 89例NSCLC中,52例DLL4蛋白高表达,高表达的阳性率为58.4%,明显高于癌旁正常肺组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,DLL4蛋白高表达与TNM分期(P=0.010 78)显著相关。Kaplan-Meier生存分析显示,DLL4蛋白在NSCLC组织中表达水平越高其总生存时间越短。结论 DLL4蛋白高表达与NSCLC进展和不良预后显著相关,因此,DLL4蛋白的表达水平可作为预测NSCLC患者预后的临床指标。 展开更多

关键词 肺肿瘤 dll4 预后 免疫组织化学

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消肿止痛合剂通过VEGF-Dll4/Notch信号通路减轻大鼠血管内皮细胞缺氧损伤 被引量：21

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作者 刘涛 何志军 +4 位作者 宋渊 李岩 陈文 李金鹏 姚兴璋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1736-1742,共7页

目的:研究消肿止痛合剂对大鼠皮瓣血管内皮细胞功能及VEGF-Dll4/Notch信号通路中相关蛋白表达的影响。方法:体外分离并培养大鼠皮瓣血管内皮细胞,将细胞分为对照组、缺氧组、缺氧+消肿止痛剂组(缺氧+消肿组)、缺氧+消肿止痛剂+axitinib(... 目的:研究消肿止痛合剂对大鼠皮瓣血管内皮细胞功能及VEGF-Dll4/Notch信号通路中相关蛋白表达的影响。方法:体外分离并培养大鼠皮瓣血管内皮细胞,将细胞分为对照组、缺氧组、缺氧+消肿止痛剂组(缺氧+消肿组)、缺氧+消肿止痛剂+axitinib(VEGF受体抑制剂)组及缺氧+消肿止痛剂+MK-0752(Notch通路阻断剂)组。采用ELISA法测定血清中VEGF含量,采用细胞calcein-AM和PI双染色法判断缺氧后1 d、2 d和3 d死活细胞数量,Western blot检测了24 h和48 h细胞内VEGF-A、Notch和Dll4蛋白的表达量。结果:与对照组相比,缺氧24 h和48 h后VEGF含量显著增加,细胞死亡率显著增加,且VEGF-A、Notch和Dll4的蛋白表达量显著增加(P<0.05);与缺氧组细胞相比,消肿止痛合剂干预后,VEGF的含量显著增加,细胞死亡率显著降低,且VEGF-A、Notch和Dll4的蛋白表达量显著升高(P<0.05)。与消肿止痛合剂组相比,VEGF受体抑制剂干预细胞后,消肿止痛合剂对缺氧损伤的血管内皮细胞的保护作用减弱,细胞死亡率明显增加,VEGF的含量降低,且VEGF-A、Notch和Dll4的蛋白表达量降低(P<0.05)。Notch通路阻断剂干预细胞后,细胞存活率不变,VEGF-A的蛋白表达水平增加,Notch和Dll4蛋白表达增加的趋势被有效抑制(P<0.01)。结论:消肿止痛合剂可改善大鼠皮瓣血管内皮细胞的功能,其机制与影响VEGF-Dll4/Notch信号转导通路有关。 展开更多

关键词 消肿止痛合剂 血管内皮细胞 VEGF-dll4/Notch信号通路 皮瓣坏死

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结直肠癌中DLL4的表达与预后及肥胖的关系 被引量：3

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作者 李潇 罗玉梅 +4 位作者 张娜 和水祥 朱琨 党诚学 初大可 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期225-229,共5页

目的探讨Delta-like ligand 4(DLL4)的表达与结直肠癌进展、预后及肥胖的关系。方法选取西安交通大学第一附属医院于2012年1月至2013年12月行手术切除的结直肠癌组织265例,应用免疫组织化学法检测肿瘤组织及其癌旁组织中的DLL4表达情况... 目的探讨Delta-like ligand 4(DLL4)的表达与结直肠癌进展、预后及肥胖的关系。方法选取西安交通大学第一附属医院于2012年1月至2013年12月行手术切除的结直肠癌组织265例,应用免疫组织化学法检测肿瘤组织及其癌旁组织中的DLL4表达情况,分析DLL4表达与肿瘤临床病理特征、预后及肥胖的关系,采用Kaplan-Meier法及Cox比例风险回归模型分析生存数据。结果结直肠癌组织中DLL4的阳性表达率明显高于癌旁组织(77.4%vs.17.7%,P<0.05),DLL4高表达的患者肿瘤分化程度低,且浸润深度、淋巴结转移率、TNM分期均升高(P<0.05)。DLL4阳性表达组无病生存期和总体生存期均较阴性组缩短(P<0.001)。Cox多元回归分析显示,DLL4表达上调是结直肠癌预后不良的独立危险因素。超重和肥胖患者的DLL4阳性表达率明显高于正常体重的患者,体质指数与DLL4表达水平呈正相关(r s=0.578,P<0.05)。结论DLL4在结直肠癌组织中表达上调,DLL4的高表达与患者预后不良密切相关,提示DLL4-Notch信号通路参与结直肠癌进展,并且与肥胖促进结直肠癌发生发展相关。 展开更多

关键词 结直肠癌 dll4 肥胖 总体生存期 预后

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rno-miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch1和Dll4基因表达的调控作用 被引量：3

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作者 殷学伟 刘滨 +3 位作者 魏慧霞 唐凯 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第1期12-16,共5页

目的探讨rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法应用双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用。6～8周龄健康... 目的探讨rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法应用双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用。6～8周龄健康Lewis大鼠12只,随机分为对照组和EAU模型组,EAU模型组大鼠建立EAU模型。于免疫后12 d分离大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测rno-miR-30b-5p、Notch1和Dll4基因的表达水平,ELISA检测Notch1和Dll4蛋白的表达变化;流式细胞仪检测两组大鼠脾脏和淋巴结中Th17和Treg细胞的表达水平。结果双荧光素酶检测结果表明,Notch1和Dll4为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。Q-PCR分析结果显示,相比于正常对照组(1. 00),免疫后12 d,rno-miR-30b-5p基因在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中的相对表达水平分别为0. 41±0. 12、0. 37±0. 09和0. 25±0. 07,均呈显著下调表达,而Notch1和Dll4基因呈显著上调表达,且差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。ELISA检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达水平均明显高于对照组(均为P <0. 05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞因子的表达水平明显升高,而Treg细胞因子的表达水平明显降低。结论 rno-miR-30b-5p可负调控Notch1和Dll4基因的表达。在EAU模型大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织中,rno-miR-30b-5p的下调表达可使Notch1和Dll4基因的表达水平显著升高,并使Th17/Treg比例发生紊乱,从而影响葡萄膜炎的发生发展。 展开更多

关键词 rno-miR-30b-5p NOTCH1 dll4 实验性自身免疫性葡萄膜炎

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全反式维甲酸对食管癌KYSE70细胞增殖、迁移及Notch1、DLL4、VEGF-C表达的影响 被引量：6

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作者 桑露倩 李娜 +3 位作者 王映 都小晗 路颜娟 路太英 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2018年第4期405-409,共5页

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)单独及联合维甲酸受体β(RARβ)激动剂CD2314或抑制剂LE135对食管癌KYSE70细胞增殖、迁移的影响以及可能机制。方法:将KYSE70细胞分为ATRA组、ATRA+CD2314组、ATRA+LE135组和对照组,采用CCK-8法检测各组细... 目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)单独及联合维甲酸受体β(RARβ)激动剂CD2314或抑制剂LE135对食管癌KYSE70细胞增殖、迁移的影响以及可能机制。方法:将KYSE70细胞分为ATRA组、ATRA+CD2314组、ATRA+LE135组和对照组,采用CCK-8法检测各组细胞分别处理24、48、72 h的增殖情况,通过划痕实验测定处理24 h后的迁移能力,采用Western blot方法检测处理48 h后各组细胞Notch1、DLL4和VEGF-C蛋白的表达情况。结果:处理24、48和72 h后,ATRA+CD2314组细胞增殖抑制率高于ATRA组,ATRA+LE135组低于ATRA组(P<0.05);处理24 h后,ATRA组细胞的迁移能力低于对照组,ATRA+CD2314组细胞的迁移能力低于ATRA组(P<0.05),而ATRA+LE135组高于ATRA组(P<0.05);处理48 h后,ATRA组细胞Notch1蛋白表达量高于对照组,DLL4和VEGF-C蛋白表达量低于对照组,ATRA+CD2314组细胞Notch1蛋白表达量高于ATRA组,而DLL4和VEGF-C蛋白的表达量低于ATRA组;ATRA+LE135组细胞Notch1蛋白表达量低于ATRA组,DLL4和VEGF-C蛋白表达量高于ATRA组(P<0.05)。结论:ATRA可能通过上调Notch1蛋白,下调DLL4、VEGF-C蛋白的表达抑制KYSE70细胞增殖和迁移,增强RARβ的表达可进一步增强这一作用。 展开更多

关键词 全反式维甲酸 增殖 迁移 NOTCH1 dll4 血管内皮生长因子-C 食管癌

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DLL4基因对白血病细胞株K562细胞中YY1和c-Myc蛋白表达及细胞增殖的影响 被引量：3

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作者 石丽芳 芮红兵 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期1399-1403,共5页

本研究旨在探讨Notch的配体DLL4基因在白血病细胞株K562中对转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白表达及细胞生长的影响。实验分正常对照组、阴性对照组(转染质粒pBudCE4.1)和实验组(转染质粒pBudCE4.1-DLL4)。转染后48小时,用免疫印迹法和... 本研究旨在探讨Notch的配体DLL4基因在白血病细胞株K562中对转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白表达及细胞生长的影响。实验分正常对照组、阴性对照组(转染质粒pBudCE4.1)和实验组(转染质粒pBudCE4.1-DLL4)。转染后48小时,用免疫印迹法和免疫细胞化学法检测外源性DLL4瞬时转染表达水平及YY1和c-Myc蛋白的表达水平;用细胞计数试剂盒-8法检测各组细胞的增殖;转染后48小时用流式细胞仪检测各组细胞的周期分布和凋亡。结果表明,在各组K562细胞中均检测到DLL4、YY1和c-Myc蛋白的表达,实验组的DLL4、YY1和c-Myc蛋白表达量比两个对照组显著增多(p<0.05);实验组K562细胞的生长速度明显低于对照组;实验组较对照组G0/G1期细胞增多(p<0.001),凋亡率增加(p<0.001)。结论:DLL4基因能增加细胞转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白的表达,诱导细胞生长速度减慢、细胞周期停滞于G0/G1期,并能增高凋亡率增加。 展开更多

关键词 dll4基因 K562细胞 YY1蛋白 -Myc蛋白 白血病

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Dll4、Notch1在大鼠氧诱导性视网膜病变模型中的表达 被引量：2

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作者 史少阳 张媛 +2 位作者 李迅 裴存文 陈晓隆 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第10期938-941,共4页

目的观察Dll4、Notch1在大鼠氧诱导性视网膜病变(oxygen induced retinopathy,OIR)模型中的表达情况,探讨其在视网膜新生血管形成过程中的作用。方法取70只出生5 d的SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组大鼠35只置于体积分数80%高氧环... 目的观察Dll4、Notch1在大鼠氧诱导性视网膜病变(oxygen induced retinopathy,OIR)模型中的表达情况,探讨其在视网膜新生血管形成过程中的作用。方法取70只出生5 d的SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组大鼠35只置于体积分数80%高氧环境7 d建立OIR模型,对照组35只大鼠置于正常空气中。两组大鼠分别于生后第12天和第17天取材,通过ADP酶视网膜铺片、HE染色视网膜切片观察实验组与对照组视网膜血管形态及新生血管生长情况,应用Western blot和RTPCR的方法检测Dll4、Notch1蛋白及其mRNA的表达水平。结果苏木精-伊红染色视网膜切片可见,实验组大鼠视网膜新生血管数量及突破内界膜的血管内皮细胞数量较对照组显著增多;对照组每眼突破内界膜的血管内皮细胞核数为0.10±0.32,实验组为32.30±4.85,两组差异有统计学意义(P=0.000)。ADP酶视网膜铺片显示,在OIR造模后12 d中,大鼠视网膜血管普遍收缩闭塞,视网膜后极部及中周部出现大片无血管区;17 d时,后极部视网膜血管扩张、迂曲,在视网膜周边部存在无血管区,在有血管区和无血管区的交界处可见新生血管簇形成。实验组Dll4、Notch1蛋白及其mRNA在造模后12 d大鼠视网膜中表达降低,而在17 d时表达增高,实验组12 d与17 d之间,以及实验组与对照组同时间点之间比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 Dll4-Notch1信号途径在视网膜新生血管形成的过程中可能具有潜在功能。 展开更多

关键词 D114 NOTCH1 氧诱导性视网膜病变 视网膜新生血管 大鼠

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丁苯酞通过激活VEGF/VEGFR2-Notch1/Dll4信号促进HUVECs形成血管 被引量：5

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作者 杨毅 官俏兵 +2 位作者 郭丽 张晓玲 韩晨阳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1002-1007,共6页

目的:探索缺血缺氧(H/I)条件下丁苯酞(NBP)通过激活血管内皮生长因子(VEGF)/VEGF受体2(VEGFR2)-Notch1/Delta样配体4(Dll4)信号促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成的机制。方法:利用无血清培养基和缺氧罐模拟H/I条件,HUVECs传代培养... 目的:探索缺血缺氧(H/I)条件下丁苯酞(NBP)通过激活血管内皮生长因子(VEGF)/VEGF受体2(VEGFR2)-Notch1/Delta样配体4(Dll4)信号促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成的机制。方法:利用无血清培养基和缺氧罐模拟H/I条件,HUVECs传代培养后设置正常对照(control)组、H/I组、NBP高剂量(H/I+NBP_(high))组和NBP低剂量(H/I+NBP_(low))组,其中control组为常规培养的HUVECs,H/I组为H/I条件下培养的HUVECs,H/I+NBP_(high)组为在H/I环境下使用20μmol/L丁苯酞干预的HUVECs,H/I+NBP_(low)组为在H/I环境下使用5μmol/L丁苯酞干预的HUVECs。CCK-8法检测各组细胞的细胞活力,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力,体外血管形成实验检测各组细胞成管能力,Western blot法检测VEGFR2、Notch1和Dll4的表达,ELISA法检测培养基中VEGF的表达,qPCR检测VEGF、VEGFR2、Notch1和Dll4的mRNA表达水平。结果:丁苯酞可以提高H/I条件下HUVECs的存活率,促进细胞的迁移和体外血管的形成能力,且H/I+NBP_(high)组比H/I+NBP_(low)组更加显著。丁苯酞可以提高VEGF、VEGFR2、Notch1和Dll4的mRNA及蛋白表达。结论:丁苯酞可以在H/I条件下促进HUVECs形成血管,其机制可能与VEGF/VEGFR2-Notch1/Dll4信号的激活有关。 展开更多

关键词 丁苯酞 血管形成 缺血 缺氧 血管内皮生长因子 Notch1/dll4信号通路

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