DHPLC系统工作原理及其应用 被引量：15

1

作者 李莉 王翀 陈瑶生 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第C00期120-124,共5页

变性高效液相色谱(DHPLC)是一种高通量筛选DNA序列变异的新技术,从该仪器设备的组成、工作原理、基本操作方法、主要技术特点等作一综述,并对其在基因组领域的应用如SNP分析、双链DNA片段分析、微卫星分析、mRNA定量分析、引物纯度检测... 变性高效液相色谱(DHPLC)是一种高通量筛选DNA序列变异的新技术,从该仪器设备的组成、工作原理、基本操作方法、主要技术特点等作一综述,并对其在基因组领域的应用如SNP分析、双链DNA片段分析、微卫星分析、mRNA定量分析、引物纯度检测等方面及在医学、遗传学方面的应用作了较详细的综述。 展开更多

关键词 dhplc 原理 应用 变性高效液相色谱

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DHPLC检测胃癌微卫星不稳定性 被引量：5

2

作者 吕炳建 来茂德 +1 位作者 程蕾 张宇伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期574-578,共5页

为探讨一种快速、简便、可靠的胃癌微卫星不稳定性(MSI)检测方法,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 银染法检测28例胃癌12个微卫星位点(D1S548、D1S552、D5S346、TP53、IGFⅡR(G)8、IGFⅡR(CT)5、TGFβRⅡ(GT)3、TGFβRⅡ(A)10、hMSH3(A)8、hMS... 为探讨一种快速、简便、可靠的胃癌微卫星不稳定性(MSI)检测方法,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 银染法检测28例胃癌12个微卫星位点(D1S548、D1S552、D5S346、TP53、IGFⅡR(G)8、IGFⅡR(CT)5、TGFβRⅡ(GT)3、TGFβRⅡ(A)10、hMSH3(A)8、hMSH6(G)8、BAX(G)8和Bat26),DHPLC柱温50℃检测Bat26位点。凝胶电泳发现MSI H2例(7 14%),MSI L胃癌15例(53 6%),Bat26+2例均为MSI H,Bat26改变和MSI H表型一致(P<0 01,Fisher's确切概率法)。DHPLC亦证实2例Bat26+胃癌,结果和凝胶电泳完全一致。结果表明,DHPLC检测Bat26位点是研究胃癌MSI H的较好方法,有一定的临床应用价值。 展开更多

关键词 微卫星不稳定性 Bat26 dhplc 胃癌

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食品中3种致病李氏菌MPCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：10

3

作者 王耀 曹际娟 +1 位作者 闫平平 曹远银 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期158-162,共5页

应用复合PCR(multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的快速高通量检测方法。根据单核细胞增生李斯特... 应用复合PCR(multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的快速高通量检测方法。根据单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的特异基因序列分别设计引物,MPCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以94株参考菌株做特异性实验,并开展了重现性检测实验。MPCR-DHPLC方法同步检测到单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的特异性阳性吸收峰,未检测到李斯特菌属其他近源种和非近源种参考菌株的阳性吸收峰,且重现性良好。该方法具有很好的特异性,可以快速、准确、高通量地检测食品中单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌,是食品微生物快速检测的新技术。 展开更多

关键词 复合PCR-变性高效液相色谱法(MPCR-dhplc) 单核细胞增生李斯特菌 绵羊李斯特菌 英诺克李斯特菌 检测

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应用DHPLC筛查人类mtDNA高变区I的异质性 被引量：5

4

作者 蒋琼橙 伍新尧 +1 位作者 区雪玲 孙宏钰 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期93-96,共4页

[目的]检测人类mtDNA HVI区的异质性,建立有效的筛查低水平异质性DNA的技术。[方法]扩增人mtDNA 的 HVI区内269 bp的片段,以不同比例混合相差一个碱基的2种DNA片段的PCR扩增产物,配制异质性DNA模型,用变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测,... [目的]检测人类mtDNA HVI区的异质性,建立有效的筛查低水平异质性DNA的技术。[方法]扩增人mtDNA 的 HVI区内269 bp的片段,以不同比例混合相差一个碱基的2种DNA片段的PCR扩增产物,配制异质性DNA模型,用变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测,确定最佳检测条件。[结果]应用DHPLC检测HVI区的片段(269 bp),最低可检测出含量为5％的异质性样本。在80例无关个体的mtDNA样本中,共检测到15例具有异质性。[结论]所建立的PCR-DHPLC方法可用于检测mtDNA的异质性。 展开更多

关键词 dhplc 筛查 线粒体DNA 异质性 变性高效液相色谱

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DHPLC在X-连锁肾上腺脑白质营养不良分子诊断中的应用(附12例报告) 被引量：2

5

作者 柯龙凤 王志红 +4 位作者 黄梁浒 严爱贞 杨渤生 朱忠勇 兰风华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期299-301,共3页

目的探讨DHPLC在X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD)分子诊断中的应用。方法提取12个X-ALD家系及成员的外周血基因组DNA,分15个片段扩增ABCD1基因的10个外显子,应用DHPLC技术对其进行突变筛查,并对出现异常洗脱峰的PCR产物进行DNA序列测... 目的探讨DHPLC在X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD)分子诊断中的应用。方法提取12个X-ALD家系及成员的外周血基因组DNA,分15个片段扩增ABCD1基因的10个外显子,应用DHPLC技术对其进行突变筛查,并对出现异常洗脱峰的PCR产物进行DNA序列测定,证实突变位点的存在。结果12个X-ALD家系存在12种不同的ABCD1基因突变,包括8个错义突变、2个移码突变和2个无义突变,即P534R、G343V、R259W、A141T、R401Q、K276E、Y174C、A314P、fs E471、fs A247、S108X和Q177X。结论DHPLC筛查结合DNA序列测定能快速有效检测出ABCD1基因突变。不同的X-ALD家系有不同的ABCD1基因突变位点,突变类型和表型之间无特殊相关关系。 展开更多

关键词 肾上腺脑白质营养不良 dhplc ABCD1基因 分子诊断技术

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DHPLC与ABI377系统的微卫星检测效果比较 被引量：1

6

作者 王翀 李加琪 +2 位作者 凌飞 张豪 陈瑶生 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期96-99,共4页

利用猪SCAU-LL资源群,根据猪USDA-MARC2.0连锁图谱,选取4号染色体上微卫星标记SW 1678,用变性高效液相色谱(DHPLC)系统和AB I377系统分析了F2代64个个体的微卫星多态性,比较了这2个分析系统在进行微卫星分型中的效率和利弊.2个系统检测... 利用猪SCAU-LL资源群,根据猪USDA-MARC2.0连锁图谱,选取4号染色体上微卫星标记SW 1678,用变性高效液相色谱(DHPLC)系统和AB I377系统分析了F2代64个个体的微卫星多态性,比较了这2个分析系统在进行微卫星分型中的效率和利弊.2个系统检测到57个样品的基因型相同,有相同的2个样品未检测到产物.另外有3个样品,DHPLC检测出基因型,AB I377未检测到,有2个样品AB I377检测出基因型,而DHPLC未检测到.2个系统检测微卫星多态性的相同率达92.2%,DHPLC未检出率6.3%,AB I377未检出率7.8%,2个系统检测的灵敏度和准确度基本接近,但是DHPLC的检测成本低于AB I377的检测成本. 展开更多

关键词 猪 微卫星标记 变性高效液相色谱(dhplc) ABI377

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应用MPCR-DHPLC技术检测转基因大豆及其食品 被引量：3

7

作者 陶然 郭顺堂 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期976-979,共4页

利用多重PCR结合DHPLC技术,建立了高通量快速筛选检测转基因大豆及其食品的方法,确立了转基因大豆品系鉴定方法。该筛选方法的检测灵敏度为0.078 ng.μL-1,质粒检测灵敏度为1×103拷贝.μL-1。利用该方法对转基因大豆GT-40-3-2、Mon... 利用多重PCR结合DHPLC技术,建立了高通量快速筛选检测转基因大豆及其食品的方法,确立了转基因大豆品系鉴定方法。该筛选方法的检测灵敏度为0.078 ng.μL-1,质粒检测灵敏度为1×103拷贝.μL-1。利用该方法对转基因大豆GT-40-3-2、Mon89788、A5704-12和大豆食品曲奇饼干、含大豆的调味粉、干豆腐及非转基因黑大豆进行验证,效果良好。所建立的PCR-DHPLC检测方法能同时快速准确的检测大豆及加工食品中转基因成分。 展开更多

关键词 多重PCR dhplc 转基因大豆

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乳粉中普通变形杆菌和奇异变形杆菌复合PCR-DHPLC检测技术的建立 被引量：1

8

作者 曹际娟 徐君怡 +4 位作者 孙哲平 于珂 郑秋月 郑慧芳 王秋艳 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期420-424,共5页

应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,建立乳粉中普通变形杆菌和奇异变形杆菌的高通量检测方法。根据普通变形杆菌的blaA和blaB基因及奇异变形杆菌的ureR基因序列分别设计特异性引物,复合PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测... 应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,建立乳粉中普通变形杆菌和奇异变形杆菌的高通量检测方法。根据普通变形杆菌的blaA和blaB基因及奇异变形杆菌的ureR基因序列分别设计特异性引物,复合PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测,并以37株参考菌株做特异性试验。试验结果表明,该方法具有很好的特异性,经复合PCR-DHPLC可同时检测乳粉中普通变形杆菌和奇异变形杆菌。该方法可以快速、准确、高通量检测普通变形杆菌和奇异变形杆菌,是乳粉中致病菌高通量检测的新技术。 展开更多

关键词 复合PCR-dhplc 乳粉 普通变形杆菌 奇异变形杆菌

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鹅细小病毒PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：1

9

作者 饶桂波 邵洪泽 +1 位作者 胡桂学 吴健敏 《家畜生态学报》 北大核心 2014年第5期64-67,共4页

为建立一种敏感、自动化,高通量的检测病料中鹅细小病毒(GPV)的PCR-DHPLC检测方法,本研究首先根据GenBank上GPV标准毒株VP3基因序列设计一对引物,建立检测GPV的PCR方法,然后将PCR检测方法与DHPLC法进行有机结合,建立了GPV PCR-DHPLC检... 为建立一种敏感、自动化,高通量的检测病料中鹅细小病毒(GPV)的PCR-DHPLC检测方法,本研究首先根据GenBank上GPV标准毒株VP3基因序列设计一对引物,建立检测GPV的PCR方法,然后将PCR检测方法与DHPLC法进行有机结合,建立了GPV PCR-DHPLC检测方法。以GPV、鹅副粘病毒、鸭瘟病毒及正常番鸭胚尿囊液进行特异性试验,结果无交叉反应,表明该检测方法具有较高的特异性。对GPV阳性样品检测结果表明该方法的敏感性较高,是常规PCR电泳法的100倍,且具有较好的重复性。对临床上采集的100份疑似病料,分别应用PCR电泳法和本试验建立的PCR-DHPLC方法进行检测,结果阳性符合率为100%。表明该方法具有特异、敏感、快速、重复性好、可高通量检测等优点,可用于临床样品的大批量检测。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 PCR-dhplc 检测

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小鹅瘟病毒和鹅沙门氏菌PCR-DHPLC检测方法 被引量：2

10

作者 许尧 董航 +3 位作者 张兴菊 毛文智 邵洪泽 胡桂学 《吉林畜牧兽医》 2017年第2期8-11,共4页

小鹅瘟和沙门氏菌感染是严重危害养鹅业发展的常见病,为了快速、准确地对小鹅瘟、鹅沙门氏菌感染进行诊断,减少这两种病的危害,本试验将这两种病原体的PCR-DHPLC检测方法结合起来,建立一种可以同时检测小鹅瘟和鹅沙门氏菌的方法,并进行... 小鹅瘟和沙门氏菌感染是严重危害养鹅业发展的常见病,为了快速、准确地对小鹅瘟、鹅沙门氏菌感染进行诊断,减少这两种病的危害,本试验将这两种病原体的PCR-DHPLC检测方法结合起来,建立一种可以同时检测小鹅瘟和鹅沙门氏菌的方法,并进行了初步应用。结果表明这种新的PCR-DHPLC方法稳定、敏感、特异性强,适合专业检测使用。 展开更多

关键词 小鹅瘟 沙门氏菌 PCR—dhplc 检测

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PCR-DHPLC检测方法在病毒性出血性败血病诊断中的应用 被引量：1

11

作者 吴斌 苏立明 +2 位作者 肇慧君 蔡晓萍 关鹏 《水产养殖》 CAS 2018年第7期34-38,共5页

运用RT-PCR与变性高效液相色谱技术(DHPLC)相结合,建立了对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)快速检测方法,根据对VHSV病毒N基因保守序列的分析,设计一对特异性引物,将RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。同时运用荧光RT-PCR方... 运用RT-PCR与变性高效液相色谱技术(DHPLC)相结合,建立了对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)快速检测方法,根据对VHSV病毒N基因保守序列的分析,设计一对特异性引物,将RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。同时运用荧光RT-PCR方法进行平行检测。结果表明,该方法与荧光RT-PCR检测结果相同,其特异性强,灵敏度较高,检测限为3 pg的病毒核酸模板,PCR-DHPLC技术具有高通量、自动化程度高等优势,是一种快速有效的检测方法。 展开更多

关键词 病毒性出血性败血症病毒 PCR-dhplc法 实时荧光PCR 诊断

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DHPLC-mtDNA控制区多态性分析系统的建立

12

作者 孙宏钰 蔡贵庆 +4 位作者 陆惠玲 刘超 陈丽娴 李向阳 伍新尧 《法医学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期265-270,共6页

目的基于变性高效液相色谱技术,建立一种不需测序和杂交的新的mtDNA控制区多态性分析系统。方法mtDNA控制区序列(包括HVⅠ,HVⅡ和HVⅢ)被分为4个扩增片段,采用配对分析突变检测模式进行DHPLC分析。对DHPLC检测条件(包括柱温和洗脱梯度等... 目的基于变性高效液相色谱技术,建立一种不需测序和杂交的新的mtDNA控制区多态性分析系统。方法mtDNA控制区序列(包括HVⅠ,HVⅡ和HVⅢ)被分为4个扩增片段,采用配对分析突变检测模式进行DHPLC分析。对DHPLC检测条件(包括柱温和洗脱梯度等)进行优化。对100个不同类型差异序列的组合配对以检验该方法的检测效力。结果10组序列相同的样本配对DHPLC图谱均只显示1个样品峰。对序列相差1个碱基～7个碱基、插入(/缺失)1个碱基、插入(/缺失)2个碱基等类型的90个扩增片段组合,用DHPLC进行分析,均得到≥2个样本峰的DHPLC图谱,序列差异检出率达100%。该技术可检测的异质性DNA成分的最小百分含量为10%。结论DHPLC-mtDNA控制区多态性分析系统快速、经济和实用,在检测mtDNA异质性方面较直接测序更灵敏。 展开更多

关键词 线粒体DNA(mtDNA) 变性高效液相色谱(dhplc) 多态性 异质性

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金黄色葡萄球菌五种肠毒素基因PCR-DHPLC检测方法的建立

13

作者 陈彬 王颖 +4 位作者 郑晶 黄晓蓉 林杰 彭华毅 邵碧英 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期172-177,共6页

本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR... 本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR-DHPLC检测方法的特异性很好,灵敏度可达到100cfu/m L。PCR-DHPLC方法具有快速、准确、高通量等优点,在进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测上有很好的应用价值。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 聚合酶链式反应(PCR) 变性高效液相色谱(dhplc)

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应用DHPLC检测多巴胺D_2受体基因在中国人群中的多态性

14

作者 凌代俊 冯雁 +2 位作者 张岩 黄爱群 徐希平 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期630-636,共7页

通过变性高效液相色谱 (DHPLC)和DNA测序在 4 1个中国汉族人DNA样本中检测DRD2基因编码区和拼接区的单核苷酸多态性 (SNP) ,结果发现 3个SNP :Intron5的 + 2 77G/A、Exon7的 + 4 2C/T和Exon7的 + 1 2 9T/C .Intron5+ 2 77G/A是在中国汉... 通过变性高效液相色谱 (DHPLC)和DNA测序在 4 1个中国汉族人DNA样本中检测DRD2基因编码区和拼接区的单核苷酸多态性 (SNP) ,结果发现 3个SNP :Intron5的 + 2 77G/A、Exon7的 + 4 2C/T和Exon7的 + 1 2 9T/C .Intron5+ 2 77G/A是在中国汉族人群中发现的新SNP ,Exon7+ 4 2C/T和 + 1 2 9T/C在NCBIdbSNP中已有相应记录 (分别为rs4 986 92 1和rs6 2 75) ,它们均导致DRD2基因的同义突变 ,其中Exon7+ 1 2 9C等位基因频率在研究样本中高达 4 3.9% .这些结果为在中国汉族人群中开展DRD2基因相关的群体遗传学研究提供了遗传标记 .另外 ,还探讨了DHPLC检测突变的干扰因素及控制措施 。 展开更多

关键词 变性高效液相色谱 dhplc 多巴胺D2受体 单核苷酸多态性

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单核细胞增生李斯特氏菌PCR-DHPLC检测新技术的建立

15

作者 曹际娟 闫平平 +3 位作者 徐君怡 郑秋月 马惠蕊 谢明杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期415-419,共5页

应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌fimY的快速检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌prfA和hlyA基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以单核细胞增生李斯特氏菌... 应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌fimY的快速检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌prfA和hlyA基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以单核细胞增生李斯特氏菌等61株参考菌株做特异性试验;单核细胞增生李斯特氏菌菌株稀释成不同梯度,进行灵敏度试验。试验结果表明该方法具有很好的特异性,灵敏度较高,检测低限可达到为181CFU/ml。可以快速、准确检测单核细胞增生李斯特氏菌,是食品中致病菌快速检测的新技术。 展开更多

关键词 dhplc 单核细胞增生李斯特氏菌 fimY基因

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输血传播病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及初步应用

16

作者 杨春华 廖芸 +3 位作者 罗秋红 孙思扬 夏彪 祝建新 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期979-983,990,共6页

目的应用聚合酶链式反应(PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测输血传播病毒。方法根据输血传播病毒的核酸序列特点设计特异性引物进行PCR,将扩增产物进行DHPLC检测分析,以验证方法的灵敏度、特异性、重复性,同时进行临床检测的初... 目的应用聚合酶链式反应(PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测输血传播病毒。方法根据输血传播病毒的核酸序列特点设计特异性引物进行PCR,将扩增产物进行DHPLC检测分析,以验证方法的灵敏度、特异性、重复性,同时进行临床检测的初步应用。结果以乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性;重复性良好;灵敏度可达1.0×10~1拷贝/反应。分别应用实时荧光PCR法、普通PCR法及本文所建立的PCR-DHPLC法同时检测32份血清样本,发现有17份样本实时荧光PCR阳性,17份样本PCR-DHPLC阳性,15份普通PCR阳性。结论本文建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、重复性好等优点,可用于输血传播病毒感染的分子流行病学调查。 展开更多

关键词 输血传播病毒 PCR-dhplc 实时荧光PCR

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利用DHPLC研究我国几个地方绵羊品种黑素细胞刺激素受体基因单核苷酸多态性(英文) 被引量：9

17

作者 李祥龙 巩元芳 +2 位作者 刘铮铸 张建文 Allessio Valentini 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期841-844,共4页

利用测序及变性高效液相色谱 (DHPLC)研究了蒙古羊、哈萨克羊、滩羊和藏绵羊黑素细胞刺激素受体(MSHR)基因单核苷酸多态性 (SNP)。结果表明 ,在扩增片断长度为 4 15bp范围内存在一个T317C突变 ,DHPLC可检测到该突变并被证明是一种高通... 利用测序及变性高效液相色谱 (DHPLC)研究了蒙古羊、哈萨克羊、滩羊和藏绵羊黑素细胞刺激素受体(MSHR)基因单核苷酸多态性 (SNP)。结果表明 ,在扩增片断长度为 4 15bp范围内存在一个T317C突变 ,DHPLC可检测到该突变并被证明是一种高通量且简便的筛选方法。通过两次DHPLC可确定两个杂合子和一个纯合子 ,第一次DHPLC可迅速检测出由于形成异源双链而呈肩峰的杂合子 (TC) ,但不能区分两个均呈单峰的纯合子 (TT或CC)。第二次DHPLC将未知纯合子与已知序列的纯合子混合后进行 ,通过判定单峰或肩峰即可推断未知纯合子的基因型。所研究的 4个绵羊群体在该突变位点均处于Hardy Weinberg平衡状态。 展开更多

关键词 黑素细胞刺激素受体基因 单核苷酸多态性 变性高效液相色谱 地方绵羊品种 遗传亲缘关系

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食品中A型肉毒梭菌PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：6

18

作者 杨大伟 刘云国 +5 位作者 谭乐义 周裔斌 祝素珍 王建广 贾俊涛 姜英辉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期398-400,共3页

目的:建立食品中A型肉毒梭菌的快速检测方法。方法:应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,以A型肉毒梭菌的A型肉毒神经毒素基因作为靶基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以非A型肉毒梭菌,产气荚膜梭菌等23... 目的:建立食品中A型肉毒梭菌的快速检测方法。方法:应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,以A型肉毒梭菌的A型肉毒神经毒素基因作为靶基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以非A型肉毒梭菌,产气荚膜梭菌等23株参考菌株做特异性实验;A型肉毒梭菌DNA稀释成不同梯度,做灵敏度实验。结果:与传统的检测方法相比,该方法具有很好的特异性,方法灵敏度较高,最低检出限可达到为111ng/tube。结论:该方法可以快速、准确检测A型肉毒梭菌,是食品中致病菌快速检测的新技术。 展开更多

关键词 变性高效液相色谱 A型肉毒梭菌 PCR 检测

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5种葡萄球菌肠毒素基因MPCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：4

19

作者 陈彬 郑晶 +4 位作者 王颖 黄晓蓉 林杰 彭华毅 邵碧英 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第24期243-248,共6页

设计合成5种葡萄球菌肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的特异性引物,对聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的反应体系进行优化后,建立5种葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR结合变性高效液相色谱(multiplex PCR-denaturing hi... 设计合成5种葡萄球菌肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的特异性引物,对聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的反应体系进行优化后,建立5种葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR结合变性高效液相色谱(multiplex PCR-denaturing high performance liquid chromatography,MPCR-DHPLC)检测方法,并进行MPCR-DHPLC检测特异性及灵敏度的测定,5重PCR-DHPLC检测灵敏度可达到100 CFU/m L。MPCR-DHPLC方法应用于食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测,具有快速、准确、高通量等优点。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 多重聚合酶链式反应 变性高效液相色谱

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猪细环病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及应用 被引量：4

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作者 杨春华 周延 +2 位作者 孙思扬 钟毅 王川庆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1422-1428,共7页

为了应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测猪细环病毒1型和2型,根据猪细环病毒的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。选择猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应。该检... 为了应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测猪细环病毒1型和2型,根据猪细环病毒的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。选择猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和重复性;用质粒标准品进行TTSuV1和TTSuV2的PCR-DHPLC检测,灵敏度可达1.0×101拷贝·μL-1。对80份血清样本分别应用实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法及本文所建立的PCR-DHPLC法与进行检测,发现TTSuV1有63份PCR-DHPLC阳性,63份实时荧光PCR阳性,54份PCR-凝胶电泳阳性;TTSuV2有69份PCR-DHPLC阳性,69份实时荧光PCR阳性,56份PCR-凝胶电泳阳性。本试验建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于TTSuV感染的分子流行病学调查。 展开更多

关键词 猪细环病毒 变性高效液相色谱 实时荧光PCR PCR

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