萝卜胞质雄性不育正常花蕾与败育花蕾DD-PCR及EST序列分析 被引量：4

1

作者 贾晋 张鲁刚 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期426-431,共6页

提取了萝卜雄性不育系BT-18败育花蕾和正常花蕾的DNA,并且采用DD-PCR技术研究了败育花蕾与正常花蕾的mRNA差异表达。败育花蕾DNA表现有规则的Ladder,而正常花蕾只有单一DNA条带,该结果为萝卜败蕾发生了细胞程序化死亡提供了生化证据;DD-... 提取了萝卜雄性不育系BT-18败育花蕾和正常花蕾的DNA,并且采用DD-PCR技术研究了败育花蕾与正常花蕾的mRNA差异表达。败育花蕾DNA表现有规则的Ladder,而正常花蕾只有单一DNA条带,该结果为萝卜败蕾发生了细胞程序化死亡提供了生化证据;DD-PCR得到107个差异表达片段,其中败育花蕾差异表达片段94个,正常花蕾差异表达片段13个。BLAST结果显示,与功能蛋白同源的差异序列50%以上来源于叶绿体,推测萝卜败蕾与叶绿体有很大关系;叶绿体Mat K在不同的引物组合扩增中出现3次,序列分析后发现长度为282bp和283bp的为同一片段,长度为396bp的片段与长度为282bp和283bp的片段无同源性,可能为编码Mat K的不同亚基。Mat K参与叶绿体中RNA转录本Ⅱ型内含子剪切,通过对内含子剪接的影响来调节基因的表达,推测Mat K等叶绿体基因上调表达使其蛋白质的合成发生变化,导致萝卜叶绿体代谢紊乱,最终导致败蕾;而甲基转移酶可能通过DNA甲基化调控萝卜发育,使其发育异常表现花蕾败育。对BLASTx比对分值小于80及无同源性的片段进行BLASTn分析,根据比对结果推测:细胞程序化死亡可能是萝卜败蕾、植物衰老和植物受逆境胁迫时普遍发生的一种生理生化现象。 展开更多

关键词 萝卜败蕾 dd-pcr EST序列分析 MATK DNA甲基转移酶 细胞程序化死亡

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DD-PCR技术在植物抗土壤逆境遗传研究中的应用 被引量：3

2

作者 吴平 张立平 祝金明 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 1999年第2期172-177,共6页

差示ＰＣＲ（ＤＤ－ＰＣＲ）技术是分离特异表达目的基因的重要手段，在环境逆境诱导表达基因的分离、克隆研究中已有报道。随着ＤＤ－ＰＣＲ技术的不断改进，它将在植物抗土壤逆境胁迫诱导表达基因的背景研究中显示出广泛的应用前景。... 差示ＰＣＲ（ＤＤ－ＰＣＲ）技术是分离特异表达目的基因的重要手段，在环境逆境诱导表达基因的分离、克隆研究中已有报道。随着ＤＤ－ＰＣＲ技术的不断改进，它将在植物抗土壤逆境胁迫诱导表达基因的背景研究中显示出广泛的应用前景。文章介绍了差示ＰＣＲ的方法原理与技术改进及其在分离土壤—植物营养胁迫诱导表达基因方面的初步应用。 展开更多

关键词 dd-pcr 植物 抗逆性 土壤逆境 植物营养

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mRNADD-PCR技术及其在植物抗病基因研究中的应用

3

作者 闫红飞 杨文香 +1 位作者 董立 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第z1期169-172,共4页

mRNA差异显示技术自 1992年建立以来 ,成为分子生物学领域的一个研究热点 ,并在许多领域得到了较为广泛的应用。阐述了mRNA差异显示技术的基本原理 ,综述了其现存的问题及近几年该技术的改进、完善与发展。如引物设计、PCR参数优化、假... mRNA差异显示技术自 1992年建立以来 ,成为分子生物学领域的一个研究热点 ,并在许多领域得到了较为广泛的应用。阐述了mRNA差异显示技术的基本原理 ,综述了其现存的问题及近几年该技术的改进、完善与发展。如引物设计、PCR参数优化、假阳性克服、cDNA片段克隆测序及完整基因的筛选。此外 。 展开更多

关键词 MRNA 差异显示 抗病基因 dd-pcr

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利用DD-PCR技术研究扬稻6号基因的差异表达 被引量：5

4

作者 张洪熙 戴正元 +4 位作者 陈建民 肖宁 李爱宏 刘广青 潘存红 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期745-750,共6页

利用DD-PCR技术对扬稻6号参与的强优势组合(扬两优6号和两优培九)、明恢63参与的弱优势组合、R13参与的中强优势组合以及亲本的基因表达进行了分析。根据基因在杂交组合和双亲中的表达情况分为8种类型,统计30个引物组合在11个参试材料... 利用DD-PCR技术对扬稻6号参与的强优势组合(扬两优6号和两优培九)、明恢63参与的弱优势组合、R13参与的中强优势组合以及亲本的基因表达进行了分析。根据基因在杂交组合和双亲中的表达情况分为8种类型,统计30个引物组合在11个参试材料中的表现,获得314组差异条带,大小在250 bp至1 000 bp之间,其中强优势组合的差异表达带型UNP1、UNF1和ABF1明显低于弱优势组合,而DMP2和MONO则明显高于弱优势组合。用8种类型所占的比例对各参试材料进行聚类分析,结果显示,扬稻6号参与的强优势组合和明恢63参与的弱势组合明显被分为两类,两者在基因表达模型上存在一定差异。此外,在基因表达水平上探讨了扬稻6号杂种优势的特殊分子基础。 展开更多

关键词 差异显示PCR 基因差异表达 杂种优势 扬稻6号

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中药“神经再生素”促神经生长过程中基因差异性表达的初步研究 被引量：24

5

作者 刘梅 顾晓松 +3 位作者 刘炎 崔学芝 彭聿平 张沛云 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期101-106,共6页

为了探索中药“神经再生素”促神经生长过程中基因水平的变化。本实验采用 dd-PCR方法 ,从体外培养背根神经节细胞加药组和不加药组中获得两者的差异表达片段 ,并经反杂交筛选、克隆测序、DNA序列检索分析、Northern验证。结果表明 ,差... 为了探索中药“神经再生素”促神经生长过程中基因水平的变化。本实验采用 dd-PCR方法 ,从体外培养背根神经节细胞加药组和不加药组中获得两者的差异表达片段 ,并经反杂交筛选、克隆测序、DNA序列检索分析、Northern验证。结果表明 ,差异显示共获得 8个差异条带 ,一个为下调基因 ,其余为上调基因 ,其中 2个 c DNA序列与 RRAJ5 16 1基因 (增殖相关基因 )、AF196 3 15基因 (锌指样蛋白 DDP2 ) 10 0 %同源 ,2个 c DNA序列与 AK0 0 175 7基因、STA5 SRR基因 (t RNA合成酶 )部分同源。结论是中药“神经再生素”在促神经生长过程中 ,对神经元基因的选择性表达起着重要的调控作用。 展开更多

关键词 神经再生素 神经生长 dd-pcr 基因表达 大鼠 中药药理

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mRNA差异显示技术在水稻遗传育种中的应用

6

作者 姜天瑞 王进宇 杜秀丽 《现代化农业》 2006年第10期10-13,共4页

关键词 MRNA差异显示技术 植物遗传育种 应用 水稻 DDRT-PCR 特异表达基因 display dd-pcr

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银染mRNA差异显示法的建立及其应用 被引量：4

7

作者 陈瑞川 蔡克瑕 +3 位作者 马胜平 陈福 付永贵 曾寰 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期1138-1144,共7页

以银染 m RNA差异显示方法对原发及转移灶胃癌标本总 RNA为研究对象进行银染差示分析和回收差异条带 ,从中获得系列差异表达片段 .随机选取 5个从原发性胃癌样品回收的表达条带 ,以取自体外培养胃癌细胞株的 RNA进行点杂交验证 ,均被证... 以银染 m RNA差异显示方法对原发及转移灶胃癌标本总 RNA为研究对象进行银染差示分析和回收差异条带 ,从中获得系列差异表达片段 .随机选取 5个从原发性胃癌样品回收的表达条带 ,以取自体外培养胃癌细胞株的 RNA进行点杂交验证 ,均被证实为真实带 .对 2个差异表达片段进行分析、测序和 Gen Bank同源比较结果表明 :MGD1片段与肿瘤转移相关基因 MTA1完全同源 ,属胃癌转移相关基因 ;PGD2与胃癌转移抑制相关 ,并与细胞周期抑制蛋白 p2 7/ Kip1具 99%的同源性 .结果表明 ,银染差异显示法具有快速、直观、假阳性率低等优点 。 展开更多

关键词 银染差示PCR 胃癌 转移相关基因 银染mRNA差异显示法 肿瘤转移 差异表达片段

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小鼠2-细胞胚胎ATP合成酶6基因特异表达分析及鉴定 被引量：6

8

作者 杨立新 郁卫东 陈清轩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期201-204,共4页

合子基因组活化是小鼠胚胎早期发育由细胞质调控向核调控转变的关键 .小鼠合子基因组活化发生在 2 细胞胚胎阶段 ,通过对 2 细胞胚胎阶段特异性表达基因的分析 ,可以从分子水平上揭示早期小鼠胚胎的发育机理 .用DD RTPCR技术 ,从单个... 合子基因组活化是小鼠胚胎早期发育由细胞质调控向核调控转变的关键 .小鼠合子基因组活化发生在 2 细胞胚胎阶段 ,通过对 2 细胞胚胎阶段特异性表达基因的分析 ,可以从分子水平上揭示早期小鼠胚胎的发育机理 .用DD RTPCR技术 ,从单个小鼠 2 细胞胚胎与成熟卵母细胞 (MII细胞 )中分离了 2个差异片段 ,片段 2同小鼠睾丸中表达的一个未知片段具有高度同源性 .经过cDNA文库构建、筛选 ,分离到其全长cDNA .序列分析结果表明 ,该基因为小鼠ATP合成酶亚单位 6基因 .ATP合成酶亚单位 6基因由线粒体DNA编码 ,与细胞内ATP的合成相关 .小鼠 2 细胞胚胎特异表达的ATP合成酶亚单位 展开更多

关键词 小鼠 胚胎发育 早期发育 ATP合成酶亚单位6基因 DD-RTPCR技术 合子基因组活化 2-细胞胚胎 特异表达 鉴定

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太空诱变玉米细胞核雄性可育和不育材料的遗传多态性分析 被引量：1

9

作者 刘福霞 曹墨菊 +2 位作者 荣廷昭 潘光堂 刘乃森 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第5期5-7,共3页

利用mRNA差异显示技术,对太空诱变玉米细胞核雄性不育和可育材料的mRNA进行了初步分析,用24对锚定引物和5对随机引物的不同组合对不育和可育RNA池进行DD-PCR扩增,1对引物组合BO308(锚定引物)/BO312(随机引物)扩增出了8条差异片段,其中50... 利用mRNA差异显示技术,对太空诱变玉米细胞核雄性不育和可育材料的mRNA进行了初步分析,用24对锚定引物和5对随机引物的不同组合对不育和可育RNA池进行DD-PCR扩增,1对引物组合BO308(锚定引物)/BO312(随机引物)扩增出了8条差异片段,其中500 bp和600 bp条带清晰,信号较强,而其他片段信号较弱。推断8条差异片段可能与细胞核雄性不育基因有关。 展开更多

关键词 太空诱变 玉米 核不育 mRNA差异显示 集团分离分析

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mRNA差异显示技术及其在植物抗寒基因研究中的应用 被引量：1

10

作者 张晓曼 赵泽新 +3 位作者 周欣 周怀军 孙晓光 左永忠 《河北林果研究》 2005年第3期224-227,233,共5页

mRNA差异显示技术自1992年建立以来,成为分子生物学领域的一个研究热点,并在许多领域得到了广泛应用。本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理,其存在的问题及近几年该技术的改进、完善与发展。如引物设计、PCR参数优化、假阳性克服c、DN... mRNA差异显示技术自1992年建立以来,成为分子生物学领域的一个研究热点,并在许多领域得到了广泛应用。本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理,其存在的问题及近几年该技术的改进、完善与发展。如引物设计、PCR参数优化、假阳性克服c、DNA片段克隆测序及完整基因的筛选。此外,对其在植物抗寒基因研究中的应用作了简要介绍。 展开更多

关键词 MRNA 差异显示 抗寒基因 DD—PCR

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约氏疟原虫红外期发育相关基因的研究

11

作者 宋蓓 张锡林 +2 位作者 段建华 陈继德 姚玉淑 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第17期1752-1755,共4页

目的寻找约氏疟原虫红外期发育相关基因,进行序列分析并推测其功能。方法分别提取约氏疟原虫感染大鼠(IL)和正常大鼠(UL)肝脏总RNA,根据疟原虫基因A+T含量高( >70%)的特点,设计可选择性扩增约氏疟原虫基因的G+C含量为40%的引物,采用... 目的寻找约氏疟原虫红外期发育相关基因,进行序列分析并推测其功能。方法分别提取约氏疟原虫感染大鼠(IL)和正常大鼠(UL)肝脏总RNA,根据疟原虫基因A+T含量高( >70%)的特点,设计可选择性扩增约氏疟原虫基因的G+C含量为40%的引物,采用差异显示PCR(differential display RT-PCR,DD-PCR)技术进行扩增,筛选差异片段,经TA克隆后测序并进行序列分析。结果找到6个与约氏疟原虫红外期发育相关基因(PyHs4、PyHs5、PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9);其中PyHs4与约氏疟原虫乙酰葡萄糖胺磷酸变位酶(phosphoacetylglucosamine mutase,AGM)具有相似性,PyHs5与约氏疟原虫红细胞膜蛋白3(erythrocyte membrance protein,PyHs5)具有同源性,PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9为功能未知基因。结论应用DD-PCR技术成功扩增了与约氏疟原虫红外期发育相关基因,为进一步的重组表达进功能和疫苗研究奠定基础。 展开更多

关键词 DD—PCR 红细胞外期 差异基因

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SD-PMA-ddPCR检测食品中沙门氏菌的研究 被引量：16

12

作者 王静 张慧敏 +3 位作者 魏玮 贾俊涛 李春喜 秦燕 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期67-71,共5页

研究将叠氮溴化丙锭(PMA)与微滴数字PCR(dd PCR)技术相结合,建立一种沙门氏菌活菌的检测方法。结果表明,PMA不能完全有效抑制108CFU/m L的沙门氏菌死菌DNA的PCR扩增,0.1%脱氧胆酸钠(SD)和40.0μg/m L PMA协同作用,可以有效抑制108CFU/m ... 研究将叠氮溴化丙锭(PMA)与微滴数字PCR(dd PCR)技术相结合,建立一种沙门氏菌活菌的检测方法。结果表明,PMA不能完全有效抑制108CFU/m L的沙门氏菌死菌DNA的PCR扩增,0.1%脱氧胆酸钠(SD)和40.0μg/m L PMA协同作用,可以有效抑制108CFU/m L的沙门氏菌死菌DNA的PCR扩增,不抑制沙门氏菌活菌DNA扩增的PMA最高浓度是40.0μg/m L。经过SD和PMA对样品预处理,在不同死、活菌比例下,PMA-dd PCR可以定量检测活菌,避免了死菌DNA的干扰。本方法的检出限为8.0 copy/20μL。利用PMA-dd PCR检测人工污染鸡肉样品,最低可检出102CFU/m L的沙门氏菌。实验结果证明PMA-dd PCR方法的特异性、精确度、稳定性良好。 展开更多

关键词 叠氮溴化丙锭 脱氧胆酸钠 数字PCR 活菌

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17β-雌二醇对牡蛎性腺发育中P450基因表达的影响

13

作者 柴迎 王春德 《水产科学》 CAS 北大核心 2012年第6期339-345,共7页

利用DD RT-PCR技术筛选出牡蛎中受雌激素调节的基因并对其进行测序,得到5条有注释的基因。采用RACE的方法获得了P450基因1400bp的cDNA序列,其中包含一个975bp的开放阅读框。序列比对表明,该基因属于CYP4V2家族。系统进化树分析表明所获... 利用DD RT-PCR技术筛选出牡蛎中受雌激素调节的基因并对其进行测序,得到5条有注释的基因。采用RACE的方法获得了P450基因1400bp的cDNA序列,其中包含一个975bp的开放阅读框。序列比对表明,该基因属于CYP4V2家族。系统进化树分析表明所获得的P450序列与袖扣海兔螺的CYP4V1和CYP4V2并到一起,与其他无脊椎动物的P450基因具有共同起源,但与脊椎动物的P450基因起源不同。应用Real-time PCR技术检测雌、雄长牡蛎在雌激素刺激后不同时间段P450的转录水平的变化。结果表明在17β-雌二醇刺激后,雌性牡蛎处理组性腺组织P450表现出具有显著的时间依赖性,在性腺被刺激后5d和10d时,P450基因的表达量达到最高,而雌激素对雄性牡蛎性腺组织P450的表达无显著影响。雌激素可能通过对P450的表达正反馈调控影响雌性牡蛎的性腺发育。 展开更多

关键词 长牡蛎 差异显示PCR 细胞色素P4504V2 实时荧光定量PCR

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松材线虫微滴式数字PCR检测体系的建立 被引量：1

14

作者 苏宇 于海英 +5 位作者 赵冰峰 蒋欢 唐贵婷 张勇 吴朝君 王旭祎 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第7期1582-1587,共6页

【目的】建立松材线虫微滴式数字PCR检测体系,验证该检测体系的有效性,为松材线虫检测提供一个更精确灵敏的定性检测方法。【方法】基于松材线虫16S rDNA基因序列,使用在线工具设计特异性引物和探针。优化PCR反应条件,明确微滴式数字PC... 【目的】建立松材线虫微滴式数字PCR检测体系,验证该检测体系的有效性,为松材线虫检测提供一个更精确灵敏的定性检测方法。【方法】基于松材线虫16S rDNA基因序列,使用在线工具设计特异性引物和探针。优化PCR反应条件,明确微滴式数字PCR的最佳反应条件。再以采集自不同地区的6株松材线虫和12株拟松材线虫、滑刃线虫、伞滑刃线虫、垫刃线虫的基因组DNA溶液为模板对该体系的特异性进行检测;以稀释10倍的标准DNA为模板,设置不同浓度梯度来验证该体系的灵敏度;以3个不同浓度的DNA标准品稀释模板检测微滴式数字PCR的可重复性。最后以人工模拟添加线虫样品和感病松木样品DNA提取液为模板对该体系的实用性进行验证。【结果】①设计了松材线虫特异性引物探针一组,引物:P1904-F、P2057-R;探针:Probe-1938。②PCR反应体系经优化,确定其最佳退火温度为55℃。③特异性验证表明,设计的引物探针可以将松材线虫与其他相近种的线虫区分开。④灵敏度检测结果发现,该检测体系的检出浓度在0.51~20000 copies/μL。⑤对3组不同浓度标准样品的可重复性检测发现,该检测体系的变异系数在9.12%~0.31%,并且样品浓度与变异系数呈负相关。⑥使用该检测体系检测林间感病松木样品和人工模拟加入松材线虫的样品发现,该检测体系能够特异地检测出样品中的松材线虫,且拷贝数与样品中的线虫量呈正向相关。【结论】本研究建立了松材线虫微滴式数字PCR检测体系,该方法特异性好,检测灵敏度高,变异系数小,可高效地检测出样品中的松材线虫。该体系的建立可为松材线虫病理学和生态学研究提供可靠的研究数据。 展开更多

关键词 微滴式数字PCR 松材线虫 检测体系 特异性 灵敏度 可重复性

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