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产D-氨基酰化酶菌株的筛选及活性菌株A55的初步研究
被引量：
1
1
作者
倪孟祥
席焕鸽
《化学与生物工程》
CAS
2014年第5期44-48,共5页
从氨基酸类化工厂附近土样中筛选产D-氨基酰化酶的菌株,并对活性较高的菌株进行了菌种鉴定及培养条件的初步优化。利用N-乙酰基甲硫氨酸作为分离培养基中的唯一碳氮源,从8份土样中筛选了约500株菌,其中菌株A55酶活力及稳定性均较高。通...
从氨基酸类化工厂附近土样中筛选产D-氨基酰化酶的菌株,并对活性较高的菌株进行了菌种鉴定及培养条件的初步优化。利用N-乙酰基甲硫氨酸作为分离培养基中的唯一碳氮源,从8份土样中筛选了约500株菌,其中菌株A55酶活力及稳定性均较高。通过形态学观察、生理生化特征测定及16SrDNA系统发育分析对菌株A55进行菌种鉴定,并采用单因素法考察了影响D-氨基酰化酶合成的因素。结果表明,菌株A55属于耐寒短杆菌,其最佳产酶发酵条件为:培养温度30℃,培养基初始pH值7,摇床转速200r·min-1,摇瓶装样量15%,培养时间48h。另外,碳氮源的添加虽然有利于菌体的生长,但是不利于D-氨基酰化酶的合成。
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关键词
d-氨基酰化酶
菌株筛选
菌株鉴定
发酵优化
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职称材料
来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因的合成与融合表达
2
作者
侯欣彤
董媛
+5 位作者
林瑞东
于梁
任媛媛
李剑光
高朝辉
滕利荣
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期1670-1674,共5页
将来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因用大肠杆菌中的丰沛密码子替换,利用化学和基于聚合酶链反应(PCR)技术的酶促方法进行基因全合成,利用pET-32a构建重组表达载体pET-dan,转化进E.coil BL21(DE3)中进行融合表达.经SDS-PAGE电泳...
将来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因用大肠杆菌中的丰沛密码子替换,利用化学和基于聚合酶链反应(PCR)技术的酶促方法进行基因全合成,利用pET-32a构建重组表达载体pET-dan,转化进E.coil BL21(DE3)中进行融合表达.经SDS-PAGE电泳、Western-blot检测和活性测定发现,D-ANase可在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白可达到菌体总蛋白的69.2%,密码子优化后基因构建的工程菌发酵活性为96 U/mL,重组蛋白经超声细胞破碎及Ni2+柱亲和层析纯化,比活可达1692.3 U/mg,纯度可达95%以上.
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关键词
d-氨基酰化酶
产碱杆菌
基因合成
融合表达
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职称材料
粪产碱杆菌D-氨基酰化酶的分离纯化及发酵条件优化
被引量：
1
3
作者
陶金
倪孟祥
《化学与生物工程》
CAS
2016年第4期55-58,共4页
采用热激法将含粪产碱杆菌D-氨基酰化酶基因载体的质粒导入大肠杆菌,筛选重组子,对该工程菌产生的D-氨基酰化酶用Ni 2+柱进行分离纯化;通过单因素实验优化D-氨基酰化酶的发酵条件。结果表明,纯化后的D-氨基酰化酶比活力为456.71U·m...
采用热激法将含粪产碱杆菌D-氨基酰化酶基因载体的质粒导入大肠杆菌,筛选重组子,对该工程菌产生的D-氨基酰化酶用Ni 2+柱进行分离纯化;通过单因素实验优化D-氨基酰化酶的发酵条件。结果表明,纯化后的D-氨基酰化酶比活力为456.71U·mg-1,纯化回收率为50%,纯化倍数为12.4倍;最佳发酵条件为:37℃通气培养至菌体浓度OD600值为0.6时,加入0.5mmol·L-1诱导剂IPTG诱导5h,在此条件下,D-氨基酰化酶酶活力为90.9U·mL-1。
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关键词
d-氨基酰化酶
粪产碱杆菌
分离纯化
发酵条件
优化
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职称材料
题名
产D-氨基酰化酶菌株的筛选及活性菌株A55的初步研究
被引量：
1
1
作者
倪孟祥
席焕鸽
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
出处
《化学与生物工程》
CAS
2014年第5期44-48,共5页
文摘
从氨基酸类化工厂附近土样中筛选产D-氨基酰化酶的菌株,并对活性较高的菌株进行了菌种鉴定及培养条件的初步优化。利用N-乙酰基甲硫氨酸作为分离培养基中的唯一碳氮源,从8份土样中筛选了约500株菌,其中菌株A55酶活力及稳定性均较高。通过形态学观察、生理生化特征测定及16SrDNA系统发育分析对菌株A55进行菌种鉴定,并采用单因素法考察了影响D-氨基酰化酶合成的因素。结果表明,菌株A55属于耐寒短杆菌,其最佳产酶发酵条件为:培养温度30℃,培养基初始pH值7,摇床转速200r·min-1,摇瓶装样量15%,培养时间48h。另外,碳氮源的添加虽然有利于菌体的生长,但是不利于D-氨基酰化酶的合成。
关键词
d-氨基酰化酶
菌株筛选
菌株鉴定
发酵优化
Keywords
d-
aminoacylase
strain screening
strain identification
fermentation optimization
分类号
TQ927 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因的合成与融合表达
2
作者
侯欣彤
董媛
林瑞东
于梁
任媛媛
李剑光
高朝辉
滕利荣
机构
吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室
艾滋病疫苗国家工程实验室
生命科学学院
出处
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期1670-1674,共5页
基金
高等学校博士学科点专项科研基金新教师项目(批准号:20100061120076)
中央高校基本科研业务费专项
林业公益性行业科研专项经费项目(批准号:201204614)资助~~
文摘
将来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因用大肠杆菌中的丰沛密码子替换,利用化学和基于聚合酶链反应(PCR)技术的酶促方法进行基因全合成,利用pET-32a构建重组表达载体pET-dan,转化进E.coil BL21(DE3)中进行融合表达.经SDS-PAGE电泳、Western-blot检测和活性测定发现,D-ANase可在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白可达到菌体总蛋白的69.2%,密码子优化后基因构建的工程菌发酵活性为96 U/mL,重组蛋白经超声细胞破碎及Ni2+柱亲和层析纯化,比活可达1692.3 U/mg,纯度可达95%以上.
关键词
d-氨基酰化酶
产碱杆菌
基因合成
融合表达
Keywords
d-
Aminoacylase
Alcaligenes A-6
Gene synthesis
Fusion expression
分类号
O629.74 [理学—有机化学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
粪产碱杆菌D-氨基酰化酶的分离纯化及发酵条件优化
被引量：
1
3
作者
陶金
倪孟祥
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
出处
《化学与生物工程》
CAS
2016年第4期55-58,共4页
文摘
采用热激法将含粪产碱杆菌D-氨基酰化酶基因载体的质粒导入大肠杆菌,筛选重组子,对该工程菌产生的D-氨基酰化酶用Ni 2+柱进行分离纯化;通过单因素实验优化D-氨基酰化酶的发酵条件。结果表明,纯化后的D-氨基酰化酶比活力为456.71U·mg-1,纯化回收率为50%,纯化倍数为12.4倍;最佳发酵条件为:37℃通气培养至菌体浓度OD600值为0.6时,加入0.5mmol·L-1诱导剂IPTG诱导5h,在此条件下,D-氨基酰化酶酶活力为90.9U·mL-1。
关键词
d-氨基酰化酶
粪产碱杆菌
分离纯化
发酵条件
优化
Keywords
d-
aminoacylase
Alcaligenes faecalis
isolation and purification
fermentation condition
optimization
分类号
TQ920 [轻工技术与工程—发酵工程]
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
产D-氨基酰化酶菌株的筛选及活性菌株A55的初步研究
倪孟祥
席焕鸽
《化学与生物工程》
CAS
2014
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因的合成与融合表达
侯欣彤
董媛
林瑞东
于梁
任媛媛
李剑光
高朝辉
滕利荣
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
粪产碱杆菌D-氨基酰化酶的分离纯化及发酵条件优化
陶金
倪孟祥
《化学与生物工程》
CAS
2016
1
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