吉富罗非鱼CypA蛋白的表达与纯化

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作者 吴秋 崔智昊 +2 位作者 孔秀东 韦信贤 韦友传 《当代水产》 2025年第7期63-66,共4页

1引言罗非鱼(Oreochromis)是丽鱼科(Cichlidae)下的一个重要属,现已被广泛引种至全球热带和亚热带140多个国家和地区进行养殖,总养殖量在水产养殖业中是仅次于鲤科的第二大淡水鱼类。中国于1958年开始引进罗非鱼,目前中国罗非鱼主要养... 1引言罗非鱼(Oreochromis)是丽鱼科(Cichlidae)下的一个重要属,现已被广泛引种至全球热带和亚热带140多个国家和地区进行养殖,总养殖量在水产养殖业中是仅次于鲤科的第二大淡水鱼类。中国于1958年开始引进罗非鱼,目前中国罗非鱼主要养殖品种为吉富罗非鱼,2023年总养殖量达到181.68万t。亲环蛋白A(CypA)能够催化脯氨酰亚胺肽键的顺-反异构化,以此促进细胞蛋白的折叠和转运,并对蛋白质活性进行调节,维持细胞正常功能。 展开更多

关键词 折叠 细胞蛋白 cypa蛋白 亲环蛋白A 纯化

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SARS-CoV-2靶向CypA/CD147受体途径诱导心肌细胞凋亡

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作者 马明仁 马凌 +1 位作者 刘燕 王菲 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期734-740,共7页

目的探究SARS-CoV-2靶向亲环素A(CypA)/细胞外金属蛋白酶诱导剂(CD147)受体途径诱导心肌细胞凋亡的可能机制。方法构建pEncmv-SARS-CoV-2 S-3xflag重组载体质粒转染H9c2细胞,TUNEL实验、流式细胞术和DNA ladder分析细胞凋亡,免疫共沉淀(... 目的探究SARS-CoV-2靶向亲环素A(CypA)/细胞外金属蛋白酶诱导剂(CD147)受体途径诱导心肌细胞凋亡的可能机制。方法构建pEncmv-SARS-CoV-2 S-3xflag重组载体质粒转染H9c2细胞,TUNEL实验、流式细胞术和DNA ladder分析细胞凋亡,免疫共沉淀(CoIP)验证CD147与SARS-CoV-2 S蛋白之间相互作用,Western blotting法检测细胞凋亡信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,TUNEL实验和流式细胞术结果显示转染组细胞凋亡显著增加(P<0.05),DNA ladder分析发现DNA降解明显。Western blotting法检测显示Caspase12、DR3表达显著升高(P<0.001),FAS表达升高(P<0.01),TRF1、DR4表达降低(P<0.01)。结论SARS-CoV-2 S蛋白靶向CypA/CD147受体入侵宿主细胞,激活内质网通路(Caspase12)和死亡受体通路(DR3、FAS),以内源性和外源性凋亡途径诱导心肌细胞凋亡。 展开更多

关键词 新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 新型冠状病毒肺炎(COVID-19) 亲环素A(cypa)/细胞外金属蛋白酶诱导剂(CD147) 心肌细胞 信号通路 凋亡

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三角帆蚌CypA基因的克隆及其在嗜水气单胞菌感染后的表达分析

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作者 夏虎 雷婷 +7 位作者 杨品红 刘良国 余嘉 张运生 邓以国 陈福艳 陈秀荔 贺欢乐 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期859-866,共8页

为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742)。三角帆蚌CypA基因cDNA序列全长1237 bp,其5′非编码区(U... 为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742)。三角帆蚌CypA基因cDNA序列全长1237 bp,其5′非编码区(UTR)长度为57 bp,3′非编码区长度为688 bp,三角帆蚌CypA基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长度为492 bp,编码164个氨基酸,CypA蛋白质理论等电点为8.9,相对分子量为17.29 kD。在GenBank中进行同源序列检索,三角帆蚌CypA氨基酸序列与其他贝类CypA的相似性依次为池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)(99.39%)、青蛤(Cyclina sinensis)(77.44%)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)(78.05%)、近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)(78.66%)和大竹蛏(Solen grandis)(75.05%)。通过SWISS-MODEL预测三角帆蚌CypA含有8个β折叠和2个α螺旋,可能形成CypA的活性中心区域。利用MEGA 5.1软件将三角帆蚌CypA与其他物种CypA基因进行序列比对并构建系统进化树,分析发现三角帆蚌CypA与池蝶蚌的CypA聚为一支,其与池蝶蚌CypA具有最近的亲源关系。通过qRT-PCR检测CypA基因在三角帆蚌不同组织中表达,发现三角帆蚌性腺中CypA基因的表达量最高,肝脏、肾和鳃中的表达量次之。对三角帆蚌浸泡感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),CypA基因在肝脏、性腺、肠和鳃中的表达水平在感染72h先升高后降低,其表达量在性腺和鳃中6h最高,肝脏中12h达到峰值,肠中24h达到最高值,表明三角帆蚌感染嗜水气单胞菌后,可显著诱导CypA基因的表达。CypA基因在性腺中的表达量到达峰值的时间要早于肠与肝脏,且到达峰值时的相对表达量(14.91)也显著高于肝脏(9.89)、肠(9.78)和鳃(7.53),推测CypA在三角帆蚌性腺中具有防御细菌感染的重要作用,三角帆蚌性腺可能不仅具有生殖的功能,同时在免疫防御系统中也发挥着重要的作用。 展开更多

关键词 亲环蛋白A 嗜水气单胞菌 免疫应答 三角帆蚌

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克氏原螯虾(Procambarus clarkii)CypA基因应答WSSV侵染的表达研究

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作者 朱俊杰 林锋 +1 位作者 王岩 张海琪 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期910-918,共9页

克氏原螯虾亲环素蛋白A(Procambarus clarkii Cyclopllilin A,简称PcCypA)是一种存在于克氏原螯虾(P.clarkii)中高度保守的重要蛋白,具有多种生物学功能。为了初步阐明CypA在病毒侵染克氏原螯虾过程中的免疫应答机制,本研究利用qRT-PCR... 克氏原螯虾亲环素蛋白A(Procambarus clarkii Cyclopllilin A,简称PcCypA)是一种存在于克氏原螯虾(P.clarkii)中高度保守的重要蛋白,具有多种生物学功能。为了初步阐明CypA在病毒侵染克氏原螯虾过程中的免疫应答机制,本研究利用qRT-PCR等技术分析了克氏原螯虾在WSSV病毒感染后,PcCypA在不同组织中的转录表达情况。研究结果表明克氏原螯虾在感染WSSV后,心脏和肌肉组织中都出现了肌纤维断裂溶解的情况,在肝胰腺组织中出现了脂肪颗粒脱落、细胞空泡化和细胞膜溶解现象。同时,不同组织中的PcCypA基因表达存在明显的时序差异,以24hpi为界,0—24hpi为注射应激期,在此期间,肝胰腺、心脏等组织中的PcCypA转录表达量均有上调;24—36hpi为应激恢复期,绝大多数的组织中PcCypA转录表达均出现了回落,但在心脏、肌肉、血淋巴组织中出现了上调,说明这三个组织对WSSV感染的响应可能早于其他组织;48hpi之后为病毒感染响应阶段,在此期间鳃和肌肉组织中PcCypA表达量显著提升,而在肝胰腺和精巢组织中却出现表达下调;96—120hpi为感染响应后期阶段,肝胰腺和肠组织的PcCypA转录水平再次上调。因而,可以初步推断PcCypA在病毒WSSV侵染克氏原螯虾过程中参与了机体的免疫应答,且在不同的组织中PcCypA的转录表达水平存在显著差异。 展开更多

关键词 克氏原螯虾 cypa QRT-PCR WSSV

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检测CyPA自身抗体滴金免疫测定法的建立

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作者 陈英剑 李芳秋 +1 位作者 虞伟 武建国 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1999年第2期200-203,共4页

建立一更快速、简便的检测人血清抗ＣｙＰＡ自身抗体的方法．用重组人ＣｙＰＡ和胶体金标记的蛋白Ａ建立了检测抗ＣｙＰＡ自身抗体的滴金免疫测定法．将ｒｈＣｙＰＡ点样包被于硝酸纤维素膜，抗体在血清渗滤过程中与膜上抗原反应而固定... 建立一更快速、简便的检测人血清抗ＣｙＰＡ自身抗体的方法．用重组人ＣｙＰＡ和胶体金标记的蛋白Ａ建立了检测抗ＣｙＰＡ自身抗体的滴金免疫测定法．将ｒｈＣｙＰＡ点样包被于硝酸纤维素膜，抗体在血清渗滤过程中与膜上抗原反应而固定，通过胶体金标记的蛋白Ａ直接显色，阳性结果在膜中央出现一红色斑点．整个测定过程在５ｍｉｎ内完成．与ＥＬＩＳＡ法对比检测了４５份ＳＬＥ病人血清，两法均阳性２０份，均阴性２３份，总符合率为９５．６％．本法简便易行，耗时短，试剂安全、灵敏、特异。 展开更多

关键词 滴金免疫测定法 抗cypa自身抗体 检测

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小鼠抗人亲环蛋白A(CypA)单克隆抗体的制备和应用 被引量：1

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作者 乔璐 洪欣 +3 位作者 李时孟 何成彦 高申 王海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期746-751,共6页

目的原核表达人亲环蛋白A (CypA)、制备抗人亲环蛋白A (CypA)单克隆抗体(mAb)并初步探索其在结肠癌发生发展中的作用。方法根据CypA基因序列,以原核表达系统表达CypA重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,免疫小鼠,杂交瘤法制备mAb;采用免疫组... 目的原核表达人亲环蛋白A (CypA)、制备抗人亲环蛋白A (CypA)单克隆抗体(mAb)并初步探索其在结肠癌发生发展中的作用。方法根据CypA基因序列,以原核表达系统表达CypA重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,免疫小鼠,杂交瘤法制备mAb;采用免疫组织化学染色法检测CypA在结直肠癌与癌旁组织中的差异表达,并分析与临床病理参数的相关性。结果成功构建了CypA原核表达载体,获得纯化的目的蛋白;获得1株稳定分泌抗人CypA mAb的杂交瘤细胞株;研究表明,结直肠癌组织CypA阳性染色率显著增高并与肿瘤分化程度及淋巴结转移相关。结论成功制备了小鼠抗人CypA mAb,并发现CypA在结直肠癌组织中高表达,与低分化和淋巴结转移呈正相关。 展开更多

关键词 亲环蛋白A 结直肠癌 单克隆抗体(mAb)

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环孢素A抑制博来霉素诱导的小鼠肺间质病变 被引量：2

7

作者 任英 杨慧 +4 位作者 朱平 樊春梅 王彦宏 李嘉 刘慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期232-236,共5页

目的:观察环孢素A(CsA)对博来霉素(BLM)所致肺间质病变的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:将120只C57BL/6小鼠随机分为5组,模型组、模型对照组、CsA30mg治疗组、CsA50 mg治疗组和治疗对照组,每组24只;模型组及治疗组小鼠均经气管滴入BL... 目的:观察环孢素A(CsA)对博来霉素(BLM)所致肺间质病变的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:将120只C57BL/6小鼠随机分为5组,模型组、模型对照组、CsA30mg治疗组、CsA50 mg治疗组和治疗对照组,每组24只;模型组及治疗组小鼠均经气管滴入BLM建立肺间质病变模型,模型对照组小鼠则经气管滴入同体积生理盐水。于造模当日起,治疗组经腹腔注射CsA,治疗对照组经腹腔注射等体积生理盐水,模型组及模型对照组不予治疗。在实验第4、7和14天分别抽取小鼠外周血,用细胞计数板计数白细胞总数,以流式细胞术检测CD4+T细胞、CD14+单核细胞和CD19+B细胞的数量比例;同步取支气管肺泡灌洗液(BLAF)细胞计数及细胞涂片Giemsa染色分析;并进行肺组织病理学研究。结果:模型组外周血白细胞总数明显升高,细胞分类显示CD14+单核细胞和CD19+B细胞在造模4 d、7 d、14 d均较模型对照组显著增高。CsA治疗后,CD14+细胞比例在4 d时下降最为明显,显著低于同一时间点模型组;7 d、14 d亦低于同一时间点模型组;治疗组CD19+B细胞比例在7 d、14 d时均显著低于同一时间点模型组,各组间CD4+T细胞比较均未见明显统计学差异;BALF细胞分析显示,模型组4 d、7 d、14 d时细胞总数及分类计数均明显高于同一时间点模型对照组,CsA治疗后均显著减少;肺组织病理学观察可见,在第4～14天,模型组及治疗对照组小鼠肺间质内浸润细胞逐渐增多,其中以淋巴细胞浸润为主,可见少量单核-巨噬细胞浸润,同时见间质内胶原纤维沉积逐渐增多。CsA治疗组小鼠肺间质炎症明显减轻,间质内及小支气管周围胶原纤维沉积减少;免疫组化研究显示,模型组小鼠和治疗对照组肺内组织内浸润的单核-巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均高表达CD147分子,治疗组肺内表达CD147的细胞减少。结论:环孢素A可能通过抑制CD147-CypA的相互作用,抑制炎性细胞向肺内的趋化聚集,减轻肺部炎症、减少胶原沉积。 展开更多

关键词 环孢素A 肺间质纤维化 博来霉素 CD147 cypa

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下调Cyclophilin A对喉鳞癌裸鼠移植瘤模型肿瘤生长和转移的影响 被引量：3

8

作者 柏露 周建荣 +1 位作者 王致娟 刘舟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期355-360,共6页

目的通过RNA干扰技术,研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)基因对喉鳞癌裸鼠移植瘤模型在肿瘤生长和肿瘤转移方面的影响。方法构建沉默CypA基因慢病毒颗粒,转染Hep2喉癌细胞,将15只裸鼠完全随机分为3组,分别为空白对照组、阴性对照组、... 目的通过RNA干扰技术,研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)基因对喉鳞癌裸鼠移植瘤模型在肿瘤生长和肿瘤转移方面的影响。方法构建沉默CypA基因慢病毒颗粒,转染Hep2喉癌细胞,将15只裸鼠完全随机分为3组,分别为空白对照组、阴性对照组、基因沉默组,每组5只,建立喉鳞癌裸鼠移植瘤转移模型,观察肿瘤生长情况及淋巴结转移情况。PV二步法免疫组化检测CypA、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN、CD147)、细胞外基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肿瘤组织的表达,RT-PCR检测CypA、CD147、MMP-9 m RNA的表达水平,Western blot法检测CypA、CD147、MMP-9蛋白的表达水平。结果基因沉默组肿瘤体积较空白对照组、阴性对照组小,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化观察肿瘤为中分化鳞状细胞癌,CypA主要表达在细胞质,CD147主要表达在细胞膜,MMP-9主要表达在肿瘤间质;在m RNA水平和蛋白水平基因沉默组CypA、CD147、MMP-9的表达都明显降低(P<0.05)。结论下调CypA可以通过调节CD147、MMP-9的表达水平抑制喉癌的生长,延缓肿瘤转移。 展开更多

关键词 cypa 慢病毒 RNA干扰 喉癌 裸鼠

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亲环素A在动脉粥样硬化形成和发展中的作用 被引量：4

9

作者 李蓉 蔡辉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第11期2093-2095,共3页

亲环素A（cyclophilin A，CyPA）是一种在生物界广泛存在、高度保守的蛋白质．最初作为环孢素A（cyclosporinA．CsA）的细胞受体被发现。CyPA具有肽酰脯氨酰顺反异构酶（PPlase），在细胞内与CsA结合，介导免疫抑制；参与胆固醇转运，... 亲环素A（cyclophilin A，CyPA）是一种在生物界广泛存在、高度保守的蛋白质．最初作为环孢素A（cyclosporinA．CsA）的细胞受体被发现。CyPA具有肽酰脯氨酰顺反异构酶（PPlase），在细胞内与CsA结合，介导免疫抑制；参与胆固醇转运，维持细胞内胆固醇的动态平衡；诱导炎性细胞聚集，发挥前炎性因子功能：刺激血管平滑肌细胞增殖参与血管损伤后重塑等多种病理过程，促进动脉粥样硬化（atherosclerosis．AS）的发生发展。本文就CyPA在AS形成中的病理作用机制作一综述。 展开更多

关键词 动脉粥样硬化形成 亲环素A 血管平滑肌细胞增殖 胆固醇转运 前炎性因子 cypa 细胞受体 免疫抑制

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细胞亲环素A促单核细胞THP-1钙离子的运动及细胞黏附能力

10

作者 杨勇 朱平 +3 位作者 丁进 樊春梅 王彦宏 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期471-472,共2页

目的观察细胞亲环素A(CypA)对单核细胞THP-1细胞胞内钙离子运动及细胞与细胞外基质黏附能力的影响。方法乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)诱导分化THP-1细胞,通过激光共聚焦及结晶紫染色法检测CypA刺激THP-1细胞后细胞内游离钙离子浓度的变化及细... 目的观察细胞亲环素A(CypA)对单核细胞THP-1细胞胞内钙离子运动及细胞与细胞外基质黏附能力的影响。方法乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)诱导分化THP-1细胞,通过激光共聚焦及结晶紫染色法检测CypA刺激THP-1细胞后细胞内游离钙离子浓度的变化及细胞与细胞外基质黏附能力的变化,同时使用CsA、CD147分子拮抗剂AP-9作用细胞,观察CD147分子是否参与了CypA这一调节作用。结果CypA显著促进分化前及分化后的THP-1细胞胞内游离钙离子的运动,同时增强了细胞与细胞外基质的黏附能力(P<0.05),CsA、CD147分子拮抗剂AP-9则可以阻断CypA对细胞钙离子及黏附能力的调节作用。结论CypA通过CD147分子促进细胞钙离子的运动及细胞黏附能力,提示在类风湿关节炎(RA)中CypA可以增强单核/巨噬细胞与滑膜及软骨面的结合及侵袭能力,促进了关节炎的发生发展。 展开更多

关键词 细胞亲环素A cypa CD147 单核细胞 黏附

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环亲和素A的重组表达及其促进肝癌细胞侵袭转移的体外研究 被引量：3

11

作者 杨红 李郁 +4 位作者 杨勇 王德胜 陈江浩 杨向民 廖成功 《科学技术与工程》 2006年第23期4672-4675,共4页

为研究环亲和素A(CyclophilinA,CyPA)与肝癌转移的关系,用原核重组表达并纯化了CyPA。在不同浓度的CyPA刺激下,利用凝胶酶谱检测人肝癌细胞FHCC-98分泌基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)的能力。选择合适的刺激浓度,用Bord... 为研究环亲和素A(CyclophilinA,CyPA)与肝癌转移的关系,用原核重组表达并纯化了CyPA。在不同浓度的CyPA刺激下,利用凝胶酶谱检测人肝癌细胞FHCC-98分泌基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)的能力。选择合适的刺激浓度,用BordenChamber检测肝癌细胞的侵袭能力。同时用抗CD147的抗体阻断CyPA与其受体CD147的结合,检测阻断后FHCC-98在CyPA刺激下分泌MMPs及转移的能力。结果表明重组表达的CyPA能促进FHCC-98分泌激活或非激活形式的MMP-2并能促进FHCC-98的转移,而抗CD147的抗体能阻断其作用。实验结果表明:环亲和素A能与肝癌细胞表面的受体分子CD147结合,促进肝癌细胞的转移,提示其在“炎-癌”链中起到一定的作用。 展开更多

关键词 环亲和素A MMPS 肝癌 转移

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亲环素A和CD147在皮肤衰老过程中表达的研究(英文) 被引量：1

12

作者 李吉 谢红付 +4 位作者 易梅 彭乐芳 雷丹 陈翔 简丹 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期203-211,共9页

目的:检测不同年龄组正常人避光部位及曝光部位表皮组织中亲环素A(CyPA)和CD147的表达,初步探讨CyPA和CD147在皮肤衰老过程中的意义。方法:收集少年组(<15岁)、中年组(30-40岁)和老年组(>65岁)避光部位和曝光部位正常皮肤各20例,... 目的:检测不同年龄组正常人避光部位及曝光部位表皮组织中亲环素A(CyPA)和CD147的表达,初步探讨CyPA和CD147在皮肤衰老过程中的意义。方法:收集少年组(<15岁)、中年组(30-40岁)和老年组(>65岁)避光部位和曝光部位正常皮肤各20例,运用免疫组织化学及原位杂交2种方法检测表皮中CyPA和CD147蛋白和mRNA的表达水平,并分析各年龄组CyPA和CD147的表达水平的差异及相关性。结果:免疫组织化学结果显示CyPA和CD147 2种蛋白在曝光和避光部位都为老年组最高,中年组次之,少年组最低,各组间差异具有统计学意义(均P<0.05),且各组中CyPA和CD147表达呈正相关(避光部位r=0.899,曝光部位r=0.945)。组织原位杂交结果显示CyPA和CD147 mRNA在曝光和避光部位都为老年组最高,中年组次之,少年组最低,各组间差异具有统计学意义(均P<0.05),且各组中CyPA和CD147表达呈正相关(避光部位r=0.792,曝光部位r=0.782)。结论:CyPA和CD147相互作用可能在皮肤衰老过程中起重要作用。 展开更多

关键词 亲环素A CD147 皮肤衰老

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青蛤(Cyclina sinensis)亲环素A基因的克隆与鳗弧菌刺激后的表达分析

13

作者 张海静 魏星 潘宝平 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第3期80-83,95,共5页

采用SMART-cDNA文库和高通量测序方法,筛选出青蛤亲环素A基因(CypA)的全长cDNA.采用荧光定量PCR法分析该基因在鳗弧菌刺激后的表达情况,并对青蛤Cyp A基因进行原核表达与蛋白纯化.结果表明,青蛤CypA基因全长共962 bp,其中5′UTR为87 bp,... 采用SMART-cDNA文库和高通量测序方法,筛选出青蛤亲环素A基因(CypA)的全长cDNA.采用荧光定量PCR法分析该基因在鳗弧菌刺激后的表达情况,并对青蛤Cyp A基因进行原核表达与蛋白纯化.结果表明,青蛤CypA基因全长共962 bp,其中5′UTR为87 bp,3′UTR为346 bp,开放阅读框长度为495 bp,可以编码164个氨基酸,理论相对分子质量约为19.39 kDa,等电点约为5.25.在菌液侵染刺激条件下,刺激3 h后表达量即达到峰值,随后表达量逐渐降为正常水平.本研究成功表达了重组CypA蛋白,并运用镍离子交换柱法分离纯化出该蛋白,其相对分子质量约为19 kDa. 展开更多

关键词 青蛤 CDNA文库 亲环素A(cypa) 定量PCR

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